Name: Morfometrische analyses van het netvlies secties (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2012-02-19T14:00:00.000+00:00
Duration: 14 min 33 s
Description: Leer morfometrische analyses van het netvlies, inclusief het meten van de dikte van de innerlijke kernlaag en het kwantificeren van retinale ganglioncellen. Deze methoden helpen bij het begrijpen van netvliespathologieën.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

playerTrialDesktop

Het werk op het oog onderzoek in dit laboratorium wordt ondersteund door de Amerikaanse Health Assistant Foundation, Azalea (1972) Endowment Fund, en HKU fonds voor kleinschalige projecten (20097176185).

1. Gereedschap Microscoop, Nikon Stereo Investigator, MBF bio - MicroBrightField, Inc 2. Voorbereiding <ol><li> Bij werkzaamheden aan een morfometrische analyse, elk netvlies monster doorsnede van 4 micron dikte en ondergaat de H &amp; E kleuring. </li><li> Het netvlies sectie is verdeeld in 4 regio's - de bovenste perifere regio, de bovenste centrale regio, de lagere perifere regio, en de lagere centrale regio. </li><li> Na het definiëren van de regio's, wordt een beeld van elke regio verworven 10x40 vergrotingen onder de heldere straal microscoop van Nikon. </li><li> Nu zijn we klaar om morfometrie van het netvlies te analyseren. </li></ol> 3. Het meten van de dikte INL <ol><li> Vier metingen van INL dikte in elk gebied werden gemeten. Vier lijnen loodrecht worden getrokken uit de contour baseline tot de buitenste grens van het INL. </li><li>Open de software met de naam Stereo Investigator en kies de 40x lens van de Main Toolbar. </li><li> Selecteer "Image Open" onder het tabblad "Bestand". Kies een afbeelding van een gewenste netvlies regio die u wilt analyseren. </li><li> Kies het type van de contourlijn van het uitklapmenu van de hoofdwerkbalk en druk op de "Auto Move" knop. </li><li> Klik met de rechtermuisknop in het opsporen venster, en selecteer "Simpele Klik Tracing". </li><li> Teken de contour lijn langs de binnenkant van het INL. </li><li> Als de tekening klaar is, klik met de rechtermuisknop in het opsporen en kies "End Open Contour". </li><li> Selecteer een marker op de marker werkbalk en voeg markeringen op de kruising punten. </li><li> Na het toevoegen van alle markers, schakelt u de marker icoon aan de Marker Toolbar. </li><li> Plaats een cursor in het midden van een van de markers. </li></ol><img src="/files/ftp_upload/3377/3377fig1.jpg" alt="Figuur 1" data-altupdatedat="1788238805000" data-alt="Figuur 1"><ol start="11"><li> Selecteer "QuickMeet Angle "onder het tabblad" Tools ". </li></ol><img src="/files/ftp_upload/3377/3377fig2.jpg" alt="Figuur 2" data-altupdatedat="1788238805000" data-alt="Figuur 2"><ol start="12"><li> Klik met de rechtermuisknop in het opsporen venster en deselecteer de "Continue" optie. </li><li> Meet een hoek door eerst op in het midden van een markering, die grenst aan de marker gekozen voor een uiteinde van het lijnsegment. </li></ol><img src="/files/ftp_upload/3377/3377fig3.jpg" alt="Figuur 3" data-altupdatedat="1788238805000" data-alt="Figuur 3"><ol start="14"><li> Vervolgens verplaatst u de muis naar het midden van de betreffende marker en klik nogmaals. </li><li> Uitbreiding van de rubberen band lijn naar de buitenste rand van het INL. </li><li> Pas de hoek tot 90 ° is bereikt. </li></ol><img src="/files/ftp_upload/3377/3377fig4.jpg" alt="Figuur 4" data-altupdatedat="1788238805000" data-alt="Figuur 4"><ol start="17"><li> Links klik op de gewenste positie. Er verschijnt een dialoogvenster met een hoek meting juiste pop-up na de klik. </li><li> Druk op de"Enter" toets terwijl u de muis nog steeds. </li></ol><img src="/files/ftp_upload/3377/3377fig5.jpg" alt="Figuur 5" data-altupdatedat="1788238805000" data-alt="Figuur 5"><ol start="19"><li> Klik links op de tracing venster zodat een lijn getrokken van het ene eind naar het nieuwe geselecteerde einde. </li><li> Klik met de rechtermuisknop in het opsporen en kies "End Open Contour". </li></ol><img src="/files/ftp_upload/3377/3377fig6.jpg" alt="Figuur 6" data-altupdatedat="1788238805000" data-alt="Figuur 6"><ol start="21"><li> Trek de andere lijnen op verschillende posities op dezelfde wijze als hiervoor beschreven. </li><li> Na het tekenen van alle lijnen, selecteert u de bewerken modus en dus de naam van de vier lijnstukken. </li><li> Vier metingen kan worden verkregen door op de "Contour Measurement" knop. </li><li> Selecteer deze 4 metingen en plakken in een spreadsheet door te klikken op "Kopiëren naar klembord". </li><li> Selecteer "Opslaan als" onder het tabblad "Bestand". Het opsporen van gegevens kunnen worden opgeslagen als een bestand. </li></ol><ol><li> Selecteer "Image Open" onder het tabblad "Bestand". Kies een afbeelding van een gewenste netvlies regio die u wilt analyseren. </li><li> Kies het type van de contourlijn van het uitklapmenu van de Main Toolbar. </li><li> Teken een contourlijn langs de grens van zenuwvezellaag (NFL). </li><li> Beëindig het traceren met de optie "End Open Contour". </li><li> Aan elk uiteinde, dient een marker op de punt van de lijn en een aan de positie bij de top. </li><li> Schakel de marker icoon aan de marker werkbalk. </li><li> Plaats een cursor in het midden van de markeringen op het uiteinde. </li><li> Selecteer "Direct Meten Angle" onder het tabblad "Tools". </li><li> Klik met de rechtermuisknop in het opsporen venster en deselecteer de "Continue" optie. </li><li> Pas de rubber band lijnen en meet een hoek van 90 °. </li><li> Druk op de "Enter" toets na een dialoogvenster is uitgeklapt. </li><li> Klik met de linkermuisknop thij tracing venster zodat een nieuwe lijn kan loodrecht worden uitgebreid van de tip. </li><li> Teken nog een nieuwe regel in precies dezelfde manier op een ander einde. </li><li> Twee grenzen gecreëerd waarin het aantal RGC geteld. </li><li> Kies een grens als een uitsluiting lijn die de cel raakt niet wordt geteld. </li><li> Selecteer een type marker en daaraan een aan elke levende cel. </li><li> Selecteer een ander type marker voor de dode cellen. </li><li> Het aantal van elk type van de geplaatste markers wordt weergegeven naast de marker icoon hiervan bij de marker werkbalk. </li><li> Selecteer de bewerkingsmodus en pak de contour baseline. Klik met de rechtermuisknop in het venster en het opsporen van de naam van de lijn. </li><li> De lengte van de contour basislijn kan worden verkregen door op de "Contour Measurement" knop. </li><li> Het aantal cellen kunnen daarna worden uitgedrukt per mm van de lengte. </li><li> Selecteer "Opslaan als" onder het tabblad "Bestand". Detracering en de markering van gegevens kan worden opgeslagen als een gegevensbestand. </li></ol> 5. Het meten van de cel grootte van een RGC cel <ol><li> Selecteer "Image Open" onder het tabblad "Bestand". Kies een afbeelding van een gewenste netvlies regio die u wilt analyseren. </li><li> Zoom in een levende cel en kies het type van de contourlijn van het uitklapmenu van de Main Toolbar. </li><li> Teken een contourlijn langs de omtrek van de cel. </li><li> Rond het einde met de rechtermuisknop op het opsporen en selecteer "End dicht contour". </li><li> De oppervlakte van de cel wordt weergegeven onder de post van Area in de Contour Meting dialoogvenster. </li></ol>

<ol><li>Lam, T. T., Abler, A. S., Tso, M. O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((N-Methyl-D-Aspartate+%28NMDA%29%C3%A2%E2%82%AC%E2%80%9CInduced+Apoptosis+in+Rat+Retina%5BTitle%5D)+AND+%22Investigative+Ophthalmology+%26+Visual+Science%22%5BJournal%5D)">N-Methyl-D-Aspartate (NMDA)â€“Induced Apoptosis in Rat Retina.</a> Investigative Ophthalmology & Visual Science. 40, 2391-2397 (1999).</li>
<li>Lam, T. T., Abler, A. S., Tso, M. O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Apoptosis+and+caspases+after+ischemia-reperfusion+injury+in+rat+retina%5BTitle%5D)+AND+%22Invest.+Ophthalmol.+Vis.+Sci%22%5BJournal%5D)">Apoptosis and caspases after ischemia-reperfusion injury in rat retina.</a> Invest. Ophthalmol. Vis. Sci. 40, 967-975 (1999).</li>
<li>Luo, X. G., Chiu, K., Lau, H. S., Lee, V. W. H., Yung, K. K. L., So, K. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+Selective+Vulnerability+of+Retinal+Ganglion+Cells+in+Rat+Chronic+Ocular+Hypertension+Model+at+Early+Phase%5BTitle%5D)+AND+%22Cellular+and+Molecular+Neurobiology%22%5BJournal%5D)">The Selective Vulnerability of Retinal Ganglion Cells in Rat Chronic Ocular Hypertension Model at Early Phase.</a> Cellular and Molecular Neurobiology. 29 (8), 1143-1151 (2009).</li>
<li>Han, Y. S., Chung, I. Y., Park, J. M., Yu, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neuroprotective+effect+of+citicoline+on+retinal+cell+damage+induced+by+kainic+acid+in+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Korean+J.+Ophthalmol%22%5BJournal%5D)">Neuroprotective effect of citicoline on retinal cell damage induced by kainic acid in rats.</a> Korean J. Ophthalmol. 19, 219-226 (2005).</li>
<li>Hernandez, M., Urcola, J. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Retinal+ganglion+cell+neuroprotection+in+a+rat+model+of+glaucoma+following+brimonidine%2C+latanoprost+or+combined+treatments%5BTitle%5D)+AND+%22Exp.+Eye+Res%22%5BJournal%5D)">Retinal ganglion cell neuroprotection in a rat model of glaucoma following brimonidine, latanoprost or combined treatments.</a> Exp. Eye Res. 86, 798-806 (2008).</li>
<li>Chan, H. C., Chang, R. C. C., Ip, A. K. C., Chiu, K., Yuen, W. H., Zee, S. Y., So, K. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neuroprotective+effects+of+Lycium+barbarum+Lynn+on+protecting+retinal+ganglion+cells+in+an+ocular+hypertension+model+of+glaucoma%5BTitle%5D)+AND+%22Experimental+Neurology%22%5BJournal%5D)">Neuroprotective effects of Lycium barbarum Lynn on protecting retinal ganglion cells in an ocular hypertension model of glaucoma.</a> Experimental Neurology. 203, 269-273 (2007).</li>
</ol>

De auteurs hebben niets te onthullen.

1. Hoe maak je een meer nauwkeurige dikte meting te verkrijgen? U kunt het beeld vergroten door te klikken op "Zoom in" knop en de linker muisknop in het opsporen venster. De INL grens is duidelijk te zien. Als de tip van de lijn is niet aan de buitenste rand van het INL, kunnen we de lijn aan te passen onder de bewerkingsmodus. Na het plukken van de betrokken lijn met de rechtermuisknop op het opsporen en kies "Plaats Point in geselecteerde contour". Een punt kan worden toegevoegd aan de buite...

A correction was made to <a href="http://www.jove.com/video/3377">Morphometric Analyses of Retinal Sections</a>. There was an error with an author's name.

Erratum: Morphometric Analyses of Retinal Sections

<table border="1"><tbody><tr><td> Naam van het serum </td><td> Type </td><td> Vennootschap </td><td> Catalogusnummer </td></tr><tr><td> Stereo Investigator </td><td> MBF bio-Analyse Software </td><td> MicroBright Veld </td><td></td></tr><tr><td> Microscoop </td><td> Olympus BX51 </td><td> Olympus Corporation </td><td> BX51 </td></tr></tbody></table>

morfometrische analyses van het netvlies secties

Morphometric Analyses of Retinal Sections

Morfometrische analyses van het netvlies onderdelen zijn gebruikt bij de behandeling van retinale aandoeningen. Voor voorbeelden werden neuronale cellen significant verlies in de retinale ganglion cellaag (RGCL) in ratmodellen met N-methyl-D-aspartaat-(NMDA)-geïnduceerde excitotoxiciteit 1 retinale ischemie-reperfusie 2 en glaucoom 3. Vermindering van INL en innerlijke plexiform laag (IPL) diktes werden teruggedraaid met Citicoline behandeling in ratten de ogen blootgesteld aan kainic zuur-gemedieerde glutamaat excitotoxiciteit 4. Wijziging van RGC dichtheid en soma maten werden waargenomen met verschillende behandelingen met medicijnen in de ogen met een verhoogde intra-oculaire druk 3,5,6. Daarom kan met objectieve methoden van het analyseren van de retinale morphometries van grote betekenis zijn bij de evaluatie van retinale aandoeningen en de effectiviteit van therapeutische strategieën. Het netvlies structuur is multi-lagen en verschillende soorten neuronen Exist in het netvlies. De morfometrische parameters van het netvlies, zoals het aantal cellen, celgrootte en de dikte van de verschillende lagen zijn complexer dan de celcultuur. Vroeg op, kunnen deze parameters worden gedetecteerd met behulp van andere commerciële imaging software. De waarden zijn gewoonlijk van relatieve waarde, en de overgang naar de juiste waarde kan verder nauwkeurige berekening nodig. Ook kan het traceren van de celgrootte en morfologie niet nauwkeurig en gevoelig genoeg statistische analyse van met name de chronische glaucoom model. De metingen die in dit protocol voorzien in een meer nauwkeurige en eenvoudige manier. En de absolute lengte van de lijn en de grootte van de cel direct gemakkelijk worden gekopieerd naar andere bestanden worden gerapporteerd. Zo volgden we de rand van de binnenste en buitenste de meeste kernen in de INL en vormden een lijn dan met behulp van de software om een ​​hoek van 90 graden te vestigen op de dikte te meten. Terwijl zonder de hulp van de software, de lijn misschien schuin en het veranderen van retinale dikte kanniet herhaalbaar zijn bij individuele waarnemers. Bovendien kan het aantal en de dichtheid van RGC worden gekwantificeerd. Dit protocol vermindert met succes de variabiliteit in kwantificeren van kenmerken van het netvlies, verhoogt de gevoeligheid bij het opsporen van minimale veranderingen. Deze video tonen drie soorten morfometrische analyse van het netvlies secties. Zij omvatten meten INL dikte, dat het aantal RGC en meting van de grootte van RGC in absolute waarde. Deze drie analyses worden uitgevoerd met Stereo Investigator (MBF bio - MicroBrightField, Inc.) De techniek kan bieden een eenvoudige, maar wetenschappelijk platform voor morfometrische analyses.

Deze video toont drie soorten morfometrische analyses van het netvlies, waaronder het meten van de binnenste nucleaire laag dikte, het kwantificeren van het aantal retinale ganglioncellen (RGC) en het meten van de afmetingen van RGC. De techniek kan bieden een eenvoudige, maar wetenschappelijk platform voor morfometrische analyses.

Morfometrische analyses van het netvlies secties

Morfometrische analyses van retina-secties zijn gebruikt bij het onderzoeken van retina-ziekten. Zo was er bijvoorbeeld sprake van een significant verlies van neuronen in de ...

Hallo, ik ben Regina van het laboratorium voor Neurodegeneratieve Ziekten van de afdeling Anatomie aan de Universiteit van Hong Kong. Vandaag ga ik u laten zien hoe u de progressieanalyse van de retinale sectie uitvoert. Laten we beginnen. Voordat we enige analyse uitvoeren, ondergaan een retinale monstersectie en vier MyFitness de H&E-kleuring.Daarna wordt de retinale sessie onderverdeeld in vier regio's. Dit zijn de bovenste perifere regio, de bovenste centrale regio, de onderste centrale regio en de onderste perifere regio. Na het definiëren van de regio's wordt van elke regio een afbeelding gemaakt bij een vergroting van 10 keer 40 onder de bright beam microscoop van decor.Nu zijn we klaar om de retinale morfologische informatie te analyseren. Deze sessie zal laten zien hoe de retinale dikte van de binnenste kernlaag kan worden gemeten. Open de software genaamd thorough investigator.Kies de 40 types en selecteer vervolgens 'image open' in de hoofdwerkbalk. Kies onder het tabblad 'file' een afbeelding van het gewenste netvliesgebied dat u wilt analyseren. Kies het type contourlijn uit het vervolgkeuzemenu van de hoofdwerkbalk.Zorg ervoor dat de automatische verschuiving is inges

morphometric-analyses-of-retinal-sections

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Neurowetenschap

De niet-menselijke primaat is een belangrijk translationeel soort voor ons begrip van de ontwikkeling en veroudering. De anatomische organisatie van het primaat netvlies kan leveren belangrijke inzichten in normale en pathologische omstandigheden bij de mens.

De poort naar de hersenen: Ontrafeling van de Primate Eye

Het netvlies deelt opvallende gelijkenissen met de hersenen en vormt aldus een uniek venster te bestuderen van therapieën en neuronale structuur in de hersenen niet-gebeurt. Dit protocol beschrijft een methode om te studeren met behulp van retinale beeldvormingstechnieken dementie. Deze methode kan kunnen helpen bij de diagnose en risicobeoordeling van dementie.

Met behulp van retinale Imaging te bestuderen van dementie

Het menselijke netvlies is samengesteld uit functioneel en moleculair verschillende regio's, met inbegrip van de fovea, macula en perifere retina. Hier beschrijven we een methode met behulp van punch biopsieën en handmatig verwijderen van de lagen weefsel van een menselijk oog te ontleden en deze verschillende retinale regio's voor downstream Proteoom analyse te verzamelen.

Dissectie van menselijke netvlies en RPE-vaatvlies voor proteoom-analyse

Hier beschrijven we het gebruik van spectrale optische coherentietomografie (SD-OCT) om retinale en oculaire structuren in vivo te visualiseren in modellen van retinale degeneratie, glaucoom, diabetische retinopathie en bijziendheid.

In vivo structurele beoordelingen van oogziekten in knaagdiermodellen met behulp van optische coherentietomografie

Dit artikel beschrijft een gevestigde en reproduceerbare lectinevlekkentest voor de gehele retinale preparaten van mount en de protocollen die nodig zijn voor de kwantitatieve meting van vasculaire parameters die vaak worden gewijzigd in proliferatieve en niet-proliferatieve retinopathieën.

Kwantificering van vasculaire parameters in whole mount retinas van muizen met niet-proliferatieve en proliferatieve retinopathieën

Hier beschrijven we een in vivo beeldvormingstechniek met behulp van optische coherentietomografie om de diagnose en kwantitatieve meting van retinopathie bij muizen te vergemakkelijken.

Toepassing van optische coherentietomografie op een muismodel van retinopathie

We beschrijven een methode om retinaal pigmentepitheel (RPE) efficiënt te scheiden van het netvlies in menselijke ogen en hele RPE / choroïde flatmounts te genereren voor histologische en morfometrische analyses van de RPE.

Efficiënte en consistente generatie van retinale pigmentepitheel / choroïde flatmounts uit menselijke ogen voor histologische analyse

Muismodellen kunnen nuttige hulpmiddelen zijn voor het onderzoeken van de biologie van het retinale gepigmenteerde epitheel (RPE). Er is vastgesteld dat muizen een reeks RPE-pathologieën kunnen ontwikkelen. Hier beschrijven we een fenotyperingsprotocol om RPE-pathologieën bij muizen op te helderen en te kwantificeren met behulp van licht, transmissie-elektron en confocale microscopie.

Een protocol voor het evalueren en kwantificeren van retinale gepigmenteerde epitheelpathologieën in muismodellen van leeftijdsgebonden maculaire degeneratie

Dit manuscript presenteert een protocol voor de histologische voorbereiding van dia's van oogbollen van knaagdieren. Met de voorgestelde methode kan het binnenste netvlies eenvoudig worden gevisualiseerd en beoordeeld onder een lichtmicroscoop. De procedure wordt gepresenteerd voor de oogbollen van muizen en ratten.

Voorbereiding en analyse van histologische objectglaasjes van de oogbollen van ratten en muizen om het netvlies te evalueren

Het netvlies vertoont een complexe ruimtelijke organisatie over zijn laminaire structuur. Moderne ruimtelijke transcriptomics en sequencingtechnieken vereisen weefselcoupes &lt; 20 μm dik, waardoor hun toepasbaarheid voor retinaal onderzoek wordt beperkt. Deze vers ingevroren cryosectiemethode produceert dunne delen van het netvlies van de muis met behoud van vlakke ruimtelijke relaties, waardoor uitgebreide moleculaire kartering over laminae mogelijk is.

En gezicht Cryosectie van het netvlies van de muis voor hoogdimensionale ruimtelijke moleculaire analyse

Leer morfometrische analyses van het netvlies, inclusief het meten van de dikte van de innerlijke kernlaag en het kwantificeren van retinale ganglioncellen. Deze methoden helpen bij het begrijpen van netvliespathologieën.

Morfometrische analyses van het netvlies secties

Meer video's verkennen