Morfometrische analyses van het netvlies secties
February 19th, 2012
Deze video toont drie soorten morfometrische analyses van het netvlies, waaronder het meten van de binnenste nucleaire laag dikte, het kwantificeren van het aantal retinale ganglioncellen (RGC) en het meten van de afmetingen van RGC. De techniek kan bieden een eenvoudige, maar wetenschappelijk platform voor morfometrische analyses.
Hallo, ik ben Regina van het laboratorium van de Neuro Degeneratieve Ziekte in de Afdeling Anatomie van de Universiteit van Hong Kong. Vandaag laat ik je zien hoe je de progressieanalyse van de Retinal-sessie kunt doen. Laten we beginnen. Voordat je een analyse uitvoert, ondergaat een retina-monster recessie en vier MyFitness en de h en e-kleuring.
Daarna wordt de retinale sessie verdeeld in vier regio's. Dit zijn de bovenste perifere regio, de bovenste centrale regio, de onderste centrale regio en de onderste perifere regio. Na het definiëren van de regio's wordt een afbeelding van elke regio verkregen met een 10 maal 40 vergroting onder de heldere straalmicroscoop van decor.
Nu zijn we klaar om de retinale morfinformatie te analyseren. Deze sessie zal laten zien hoe je de retinale dikte van de innerlijke nucleaire laag kunt meten. Open de software genaamd Through Investigator.
Kies de 40-typen, dan selecteer in de hoofdbalk het openen van het afbeelding. Kies onder het tabblad bestand een afbeelding van een gewenste retinale regio die u wilt analyseren. Kies het type contourlijn uit het vervolgkeuzemenu van de hoofdbalk.
Zorg ervoor dat de automatische beweging is ingeschakeld. U kunt het beeld vergroten door op de knop inzoomen te klikken. U kunt de knop uitzoomen gebruiken om de zijkant van het beeld weer te geven te verkleinen.
Zowel het tracerings- als het specimen kunnen in vier verschillende richtingen worden verplaatst door op de bewegingsknoppen te klikken. Klik met de rechtermuisknop in het traceringsvenster en selecteer eenvoudige crack-tracerings. Teken de contourlijn langs de binnenrand van de binnenste laag.
Als er een fout wordt gemaakt, breek deze in het traceringsvenster en druk op de ongedaan maken-knop om het laatste tekenpunt te wissen. Ga door met het traceren tot het laatste punt van de lijn. Wanneer het tekenen klaar is, breek deze in het traceringsvenster en kies een open contour en start het beeld door op inzoomen te klikken.
Klik met de linkermuisknop in het traceringsvenster. Om het beeld te vergroten, selecteert u een marker op de markerbalk bij Marcus. Bij het knooppunt.
Nadat alle markers zijn toegevoegd, selecteert u het markerpictogram op de markerbalkpositie en cursor. In het midden van een van de markers, selecteert u snelle meethoeken onder het tabblad twee. Klik met de rechtermuisknop in het traceringsvenster en selecteer de continue optie. Meet hoek door eerst te klikken op het centrum van een marker, die grenzend is aan de geselecteerde marker.
Voor een einde van het lijnsegment, verplaats de meest naar het centrum van de zorg. Marker en crack. Uitbreiden de rubberbandlijn opnieuw naar de buitenrand van de inia-laag bij aanpassen van de hoek tot 90 graden.
Links naar crack aan de gewenste. Een dialoogvenster waarin de hoekmeting wordt weergegeven, verschijnt direct na het klikken. Druk op de enter-toets terwijl u de muis links houdt.
Klik op het traceringsvenster zodat de lijn van het ene einde naar het nieuw geselecteerde einde wordt getekend. Breek deze in het traceringsvenster en kies een open besturing. We moeten vier metingen van de binnenste nucleaire laagvingers in elke regio nemen, waar vier lijnen worden getekend.
Loodrecht van de controlebasis nacht naar de buitenrand van de India-nucleaire laag En start het beeld zodat u de rand duidelijk kunt zien. Als het punt van de lijn niet aan de buitenkant van de binnenste nucleaire laag is, kunnen we ze koppelen of de lijn verkorten in de bewerkingsmodus. Selecteer de bewerkingsmodus en kies de lijn.
Klik heel op het traceringsvenster en kies in zoekpunt in elektrische besturing, voeg een punt toe aan de buitenrand terwijl het puntbewerken langs dezelfde lijn moet zijn. Verwijder het oorspronkelijke punt. Uitlijnen met een nieuwe lift kan dan worden verkregen.
Verklein de zijkant van het beeld door op de uitzoomknop te klikken. Deselecteer de bewerkingsmodus en teken de laatste lijnsegment. Nadat u de volgordelijnen hebt getekend, selecteert u de bewerkingsmodus.
Klik met de rechtermuisknop op het traceringsvenster en we landen de vier lijnsegmenten dienovereenkomstig. We kunnen nu de vier metingen verkrijgen door op de CONT-metingsknop te drukken. Selecteer deze vier metingen en plak ze naar een specialist door op kopiëren te klikken.
Om te klikken bal selecteer opslaan als onder het tabblad bestand. De traceringsgegevens kunnen worden opgeslagen als een databestand. In dit deel zullen we het aantal rode staart gagan-cellen selecteren om afbeelding te openen.
Onder het tabblad bestand, kies een afbeelding van een gewenste retinale regio die u wilt analyseren. Allereerst moeten we identificeren welke zijn levensstijl en welke zijn doodcellen. Die cellen in een globaal runvorm met subtiele en duidelijk waargenomen nucleus worden beschouwd als levens retinale gangcellen.
Die vergelijken kleine en gecondenseerde cellen worden beschouwd als die cel. Kies het type contourlijn uit het vervolgkeuzemenu van de hoofdbalk. Teken een lijn langs de rand van de linkervezellaag en traceer met de optie en open contour.
Voeg elke eind toe, voeg een marker toe aan de punt van de lijn en een andere in de positie dichtbij het team. U selecteert het markerpictogram op de markerbalk. Plaats de cursor in het midden van de markers.
Op de punt, selecteer snelle meethoeken onder het tabblad. Twee. Klik met de rechtermuisknop in het traceringsvenster en u selecteert een continue optie en gewoon de rubberbandlijnen en meet een hoek van 19 graden. Druk op de enter-toets direct nadat een dollarbox is opgepikt.
Maar onthoud dat de muis nog steeds links is. Breek het traceringsvenster zodat een nieuwe lijn kan worden uitgebreid vanaf de punt. Breek in het traceringsvenster en kies een open besturing.
Teken op precies dezelfde manier een andere nieuwe lijn als een ander eind. We hebben twee grenzen gecreëerd waarbinnen het aantal ratin gagan-cellen wordt geteld. Selecteer een type marker en bevestig er een aan elke vijf cellen.
Kies een grens als een uitsluitingslijn, waarvan
View the full transcript and gain access to thousands of scientific videos
Overzicht
Deze video demonstreert drie soorten morfometrische analyses van het netvlies, inclusief het meten van de dikte van de inner nuclear layer, het kwantificeren van het aantal retinale ganglioncellen (RGCs) en het meten van de grootte van RGCs. De techniek biedt een wetenschappelijk platform voor deze analyses.
Belangrijkste onderdelen van het onderzoek
Wetenschapsgebied
- Neurowetenschappen
- Netvliesmorfometrie
- Cellenkwantificering
Achtergrond
- Gezondheid van het netvlies is cruciaal voor het zicht.
- Morfometrische analyses helpen bij het begrijpen van netvliesziekten.
- Retinale ganglioncellen zijn vitaal voor het overbrengen van visuele informatie.
- Het meten van RGCs kan inzicht geven in neurodegeneratieve aandoeningen.
Doel van het onderzoek
- Om morfometrische technieken voor retinale analyse te demonstreren.
- Om retinale ganglioncellen en hun grootte te kwantificeren.
- Om de dikte van de inner nuclear layer te meten.
Gebruikte methoden
- Voorbereiding van netvliesmonsters.
- Hematoxylinen en eosine (H&E) kleuring.
- Het verdelen van het netvlies in gedefinieerde regio's voor analyse.
- Beeldverwerving bij verschillende vergrotingsniveaus.
Belangrijkste resultaten
- Succesvolle meting van de dikte van de inner nuclear layer.
- Kwantificering van retinale ganglioncellen.
- Beoordeling van RGC groottes in verschillende netvliesregio's.
- Demonstratie van een systematische aanpak voor retinale morfometrie.
Conclusies
- De gepresenteerde technieken zijn effectief voor retinale analyse.
- Deze methoden kunnen helpen bij het begrijpen van retinale pathologieën.
- Toekomstig onderzoek kan voortbouwen op dit kader voor verder onderzoek.
Veelgestelde vragen
Executive Industry Relevance
Objective morphometric analysis of retinal sections enables precise quantification of neuronal loss and structural changes, supporting target validation in neurodegenerative disease models. By reducing measurement variability and increasing sensitivity to minimal changes, this approach enhances predictive confidence in evaluating therapeutic efficacy. It provides a translatable platform for assessing retinal pathologies across drug discovery stages.
Strategic Applications in Biopharma R&D
Early Discovery & Target Validation
- Scientific Value: Enables interrogation of therapeutic hypotheses by quantifying retinal ganglion cell density and soma size alterations in disease models.
- Operational Value: Supports biological de-risking through reproducible measurement of inner nuclear layer thickness and cell layer morphometrics.
- Predictive Value: Facilitates portfolio triage by delivering absolute, copyable morphometric data for cross-study comparison.
Screening & Assay Development
- Assay Readiness: Prepares validated biological systems for downstream workflows via standardized region-based image acquisition and tracing protocols.
- Quantitative Output: Generates absolute length and size measurements directly exportable to analytical files, improving data consistency.
- Scalability: Enables reliable compound evaluation through reduced observer variability and increased sensitivity in detecting minimal retinal changes.
Translational & Preclinical Research
- Disease Relevance: Aligns with translational biomarker strategies by linking RGC loss and layer thickness changes to therapeutic outcomes in glaucoma and excitotoxicity models.
- Preclinical Continuity: Supports risk-adjusted advancement decisions through objective, repeatable morphometric endpoints across retinal regions.
- Mechanistic De-risking: Focuses on predictive valuation by isolating structural changes independent of functional assays.
Pipeline & Workflow Integration
This method integrates into the discovery continuum from early target validation through lead identification to preclinical evaluation, providing structural readouts that complement functional assessments in retinal disease models.
- Discovery Biology: Supports hypothesis testing and pathway clarification by quantifying cell number, size, and layer thickness in defined retinal regions.
- Screening: Delivers assay readiness and reproducibility through standardized H&E-stained section analysis and software-guided tracing.
- Analytics: Provides quantitative dependent variable measurements (cell count, soma size, layer thickness) enabling statistical comparison across treatment groups.
- Translational Research: Connects to preclinical continuity via disease-relevant structural endpoints in NMDA-induced excitotoxicity, ischemia-reperfusion, and glaucoma models.
- Enterprise Reuse: Establishes a reusable capability for retinal morphometry across multiple disease models and therapeutic interventions.
Operational & Enterprise Impact
- Scientific Value: Predictive confidence in target validation through reduction of mechanistic ambiguity in retinal neurodegeneration.
- Operational Value: Standardization, reproducibility, and scalability of morphometric measurements across operators and sites.
- Strategic Value: Better go/no-go decisions, capital efficiency, and reduced late-stage biological risk via early structural biomarker detection.
- Portfolio Impact: Risk-adjusted prioritization and advancement decisions based on quantifiable retinal structural changes.
Implementation Considerations
- Required expertise in histology, microscopy, and morphometric software operation (Stereo Investigator).
- Instrumentation needs include brightfield microscope, computerized tracing system, and image analysis software.
- Cross-team standardization requires protocol adherence for region definition, tracing technique, and measurement replication.
- Adaptation considerations across model systems involve adjusting magnification, region sampling, and cell identification criteria.
- Practical limitations include dependency on tissue section quality and staining consistency for accurate border delineation.
