Name: Electric Field-gecontroleerde Directed migratie van neurale stamcellen in 2D-en 3D-omgevingen (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2012-02-16T12:00:00.000+00:00
Duration: 11 min 15 s
Description: Leer hoe elektrische velden de migratie van neurale stamcellen sturen in 2D- en 3D-omgevingen met behulp van tijdopnamen. Deze methode volgt individuele cellen in organotypische modellen voor onderzoek naar neurale ontwikkeling.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

playerTrialDesktop

Dit werk werd ondersteund door de Royal Society URF subsidie ​​UF051616, Verenigd Koninkrijk en de European Research Council StG subsidie ​​243.261 tot BS. Het werk in MZ lab wordt ook ondersteund door een Californische Instituut voor Regeneratieve Geneeskunde subsidie ​​RB1-01417.

1. Neurale voorlopercellen celisolatie <ol><li> Ontleden hele hersenen van E14-16 muizen en plaats in de koude DMEM/F12 basale medium. Verwijder alle hersenvliezen op grond van een anatomische microscoop en de overdracht hersenen in een 35 mm petrischaal. </li><li> Gebruik fijne tang om mechanisch hersenen distantiëren in het weefsel fragmenten en overbrengen naar een 15 ml buis en centrifugeer monsters bij 800 rpm gedurende 3 minuten om vuil te verwijderen. </li><li> Voeg DMEM/F12 met bFGF en EGF en fijnstampen met een 1 ml pipet. </li><li> Laat de celsuspensie met een cel zeef een enkele celsuspensie te verkrijgen. </li><li> Plaat cellen in kolven bij 2-5 x 10 4 cellen / ml, dan is een volledige medium te veranderen om de 3 dagen en passage van de cellen om de 6 dagen. </li><li> Na tenminste 5 passages digest neurospheres om afzonderlijke cellen met trypsine en EDTA en groeien op poly-D-lysine/laminin-coated electrotactic kamers (bereid zoals hieronder beschreven in 2). Gebruik de groeiende medium met N2-supplement,bFGF en EGF te allen tijde eigendom van NPC's te behouden. </li></ol> 2. Voorbereiding van de electrotactic kamer <ol><li> Bereid 22 x 11 mm stroken van glas door te delen geautoclaveerd 22 x 22 mm dikte no.1 dekglaasjes in de helft van het gebruik van een diamant pen. </li><li> Maak een vrijstaande glazen en van het interieur afmetingen 22 x 10 mm door het verlijmen van vier verticaal staan ​​22 x 11 mm stroken met high-vacuüm siliconenvet. Laat de putten volledig drogen en uitharden 's nachts. </li><li> De volgende dag hechten twee 22 x 11 mm glasstrips, evenwijdig aan elkaar met een afstand van 10 mm, met de basis van een 100 mm kweekschaal met siliconenvet. Afdichten het gebied tussen deze strippen door een 22 x 22 mm dekglas aan elk uiteinde aan de bodem van de schaal met vet aan drie zijden, maar dat het dichtst bij het centrum. </li><li> Plaats het glas goed voorbereid in stap 2.2 op de dekglaasjes, zodat de binnenmuren een afgesloten ruimte te creëren voor het zaaiende cellen op de bodem van de plaat. Water-proof alle verbindingen met siliconenvet. Coat deze kleiner gebied opeenvolgend met poly-D-lysine dan laminine: 1 ml poly-D-lysine in de kamer en laat gedurende 5 minuten om de poly-D-lysine te binden aan de onderzijde van de plaat, wassen kamer met steriele PBS tweemaal verdun laminine in steriele PBS 20 mg / ml te verkrijgen en de bodem van de plaat bedekken. Laat op kamertemperatuur gedurende de nacht. </li><li> De volgende dag, de oogst cellen en voor te bereiden 1 ml suspensie met 1 x 104 cellen. Verwijder laminine het glas goed, zodat het volledig lucht drogen en met 1 ml celsuspensie vervangen. Zet de schaal in de incubator bij 37 ° C gedurende ten minste 4 uur om voor bevestiging. </li><li> Zodra de cellen voldoende confluent verwijder medium uit de kamer. Voorzichtig en verwijder het glas. Vorm een ​​dak boven de cellen door zorgvuldig bevestigen, met siliconenvet, een autoclaaf 22 x 22 mm glas dekglaasjeoverbruggen tussen de 22 x 11 mm strips. Bedek de cellen met een paar druppels medium om uitdroging te voorkomen. </li><li> Vorm een ​​op zichzelf staand medium reservoir aan elk uiteinde van de kamer door het creëren van twee waterdichte siliconenvet barrières die worden uitgevoerd van de ene rand van de schotel naar de andere, over de kamer dak. Vul de kamer met vers medium, waardoor een doorstroom van het ene medium reservoir naar de andere. Zet de schotel naar de incubator gedurende 12 uur mogelijk te maken cel herstel. </li></ol> 3. Toepassing van een elektrisch veld aan de kamer electrotactic <ol><li> Bereid een deksel op de schotel te dekken door het boren van twee gaten, een zich over elk reservoir van de migratie kamer. </li><li> Vervang alle medium in de kamer met kweekmedium dat 25 mM HEPES buffer en breng de schotel naar de temperatuur-gecontroleerde imaging systeem. Stel de experimentele parameters voor time-lapse en multi-positie opname. Lijn de kamer zodat de kathode en anode zijnlinks en rechts, zodat de EF vector horizontaal loopt zoals gezien beneden de microscoop en in het afbeeldingssysteem. </li><li> Vul twee bekers met de oplossing Steinberg (58 mM NaCl, 0,67 mM KCl, 0,44 mM Ca (NO3) 2 0,4 H 2 0, 1,3 mM MgSÛ4 0,7 H 2 0 en 4,6 mM Trizma base, pH 7,4). Sluit een andere beker elk medium reservoir met bereide glas bruggen (glazen buisjes ~ 13 cm lang en ~ 3 mm in diameter, en gebogen in een U-vorm door verhitting in een bunsenvlam), gevuld met 2% (w / v) Steinberg's-agar oplossing, die door de gaten in het deksel. Vul het elektrische circuit door het plaatsen van Ag / AgCl elektroden aangesloten op een DC-voeding in elk bekerglas van Steinberg's oplossing. </li><li> Stel de spanning knop op de voeding op 0 en in te schakelen. Meet de spanning over de electrotactic kamer draaien, de spanning wijzerplaat met een voltmeter en pas de experimentele eisen. </li><li> Start time-lapse opname. Voer een medium verandering en stel de spanning, zoals vereist, elk uur. Vers medium, drugs of chemische middelen worden toegevoegd om de reservoirs zoals vereist. Bij het uitvoeren van medium veranderen, kunnen twee opties worden beschouwd als hieronder: <ol><li> Optie No.1 - Om te pauzeren van de time-lapse-opname tijdelijk, zorgvuldig glazen bruggen te verwijderen uit de kamer om te voorkomen dat verstoren deksel, een gesteriliseerde Pasteur pipet voorzichtig gebruik maken van de plaats van alle medium met vers medium en zet de glazen bruggen terug, hervat dan de opname. </li><li> Option No.2 - Als alternatief maat deksel met 4 gaten (twee boven elkaar bevindende reservoir van de migratie kamer) kunnen ook worden gebruikt voor medium verandering doel. Twee voor glas bruggen verbinding, de andere twee voor het veranderen medium. Optie 2 kan continu opnemen zonder inmenging tijdens het medium veranderen. </li></ol></li></ol> 4. Voorbereiding van de organotypische ruggenmerg slice <ol><li> Ontleden LumbAR ruggenmerg van 2 weken oude C57 BL / 6 muizen. </li><li> Snijd het ruggenmerg in 500 urn dikke secties met een McIlwain weefsel chopper. </li><li> Aparte plakken onder een anatomische microscoop en selecteer plakken met intacte sagittale / axiale ruggenmerg structuur. </li><li> Plaat plakken in een 35 mm Petri schaal die 30 pl Matrigel en plaatst deze in de buurt van het centrum mogelijk te houden in een 5% CO2 incubator bij 37 ° C gedurende ten minste 30 minuten tot Matrigel eiwitten zichzelf assembleren produceren een dunne laag die het oppervlak van het ruggenmerg segment omvat. Het is belangrijk ervoor te zorgen dat Matrigel is samengesteld volledig de petrischaal incuberen bij 37 ° C gedurende 30 min indien nodig. </li><li> Voeg 4-6 ml DMEM/F-12 medium dat 25 mM HEPES buffer en 15-20% foetaal kalfsserum zachtjes om mediumstroom rechtstreeks te op het schijfje. Zorg ervoor dat het schijfje niet helemaal ondergedompeld in medium, waardoor het oppervlak van explantaten goed blootgesteld aande lucht. Wijzig medium tweemaal per week. </li></ol> 5. Injectie van Hoechst 33342 label NPC's in de organotypische ruggenmerg slice <ol><li> Bereid de NPC schorsing op 1 × 10 6 cellen / ul. </li><li> Pre-incubeer de celsuspensie in medium met 5 pM Hoechst 33342 gedurende 30 minuten. </li><li> Gebruik capillaire glazen buis tot en met 2 pl suspensie langzaam microinject in het ruggenmerg slice onder een microscoop. Zorg ervoor dat capillaire glazen buis gaat door de Matrigel (roze gedeelte onder de microscoop) en te bereiken aan de binnenkant van het ruggenmerg slice (grijs weefsel onder de microscoop), blijven in het ruggenmerg slice gedurende minstens 30 seconden om celsuspensie overreden te voorkomen. Zet de petrischaaltje met het ruggenmerg slice in incubator (37 ° C 5% CO 2) en laat een nacht staan. </li><li> De volgende dag, pas een EF van 500 mV / mm aan het ruggenmerg slice met Hoechst 33342-gelabelde NPC's in de electrotactic kamer (met behulp van de methoden beschreven in3). </li></ol> 6. Representatieve resultaten Bij NPC's werden blootgesteld aan een reeks fysiologische EF toonden ze zeer gericht cel migratie naar de kathode (figuur 1). Hetzelfde is ook een enkele cel niveau op de organotypische ruggenmerg slice ex vivo model een 3D milieu nabootsend in vivo omstandigheden (figuur 2). <img alt="Figuur 1" src="/files/ftp_upload/3453/3453fig1.jpg" data-altupdatedat="1788238805000" data-alt="Figuur 1"> Figuur 1. NPC's tonen gericht migratie in EFS. PC heeft zeer gericht migratie naar de kathode bij blootstelling aan EF, rode en blauwe lijnen pijlen trajecten en richting van celverplaatsing (A). B toont de migratieroutes van NPCs. Bar: 50 urn. <img alt="Figuur 2" src="/files/ftp_upload/3453/3453fig2.jpg" data-altupdatedat="1788238805000" data-alt="Figuur 2"> Figuur 2. Getransplanteerde NPC's tonen gericht migratie naar de kathode in de organotypische ruggenmerg slice

<ol><li>Huttenlocher, A., Horwitz, A. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Wound+healing+with+electric+potential%5BTitle%5D)+AND+%22N.+Engl.+J.+Med%22%5BJournal%5D)">Wound healing with electric potential.</a> N. Engl. J. Med. 356, 303-303 (2007).</li>
<li>McCaig, C. D., Rajnicek, A. M., Song, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Controlling+cell+behavior+electrically%3A+current+views+and+future+potential%5BTitle%5D)+AND+%22Physiol.+Rev%22%5BJournal%5D)">Controlling cell behavior electrically: current views and future potential.</a> Physiol. Rev. 85, 943-943 (2005).</li>
<li>Borgens, R. B., Jaffe, L. F., Cohen, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Large+and+persistent+electrical+currents+enter+the+transected+lamprey+spinal+cord%5BTitle%5D)+AND+%22PNAS%22%5BJournal%5D)">Large and persistent electrical currents enter the transected lamprey spinal cord.</a> PNAS. 77, 1209-1209 (1980).</li>
<li>Shapiro, S., Borgens, R., Pascuzzi, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Oscillating+field+stimulation+for+complete+spinal+cord+injury+in+humans%3A+a+phase+1+trial%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Neurosurg.+Spine%22%5BJournal%5D)">Oscillating field stimulation for complete spinal cord injury in humans: a phase 1 trial.</a> J. Neurosurg. Spine. 2, 3-3 (2005).</li>
<li>Zhao, M., Song, B., Pu, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Electrical+signals+control+wound+healing+through+phosphatidylinositol-3-OH+kinase-gamma+and+PTEN%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Electrical signals control wound healing through phosphatidylinositol-3-OH kinase-gamma and PTEN.</a> Nature. 442, 457-457 (2006).</li>
<li>Yao, L., Shanley, L., McCaig, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Small+applied+electric+fields+guide+migration+of+hippocampal+neurons%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Cell.+Physiol%22%5BJournal%5D)">Small applied electric fields guide migration of hippocampal neurons.</a> J. Cell. Physiol. 216, 527-527 (2008).</li>
<li>Li, L., El-Hayek, Y. H., Liu, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Direct-current+electrical+field+guides+neuronal+stem%2Fprogenitor+cell+migration%5BTitle%5D)+AND+%22Stem+Cells%22%5BJournal%5D)">Direct-current electrical field guides neuronal stem/progenitor cell migration.</a> Stem Cells. 26, 2193-2193 (2008).</li>
<li>Meng, X., Arocena, M., Penninger, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((PI3K+mediated+electrotaxis+of+embryonic+and+adult+neural+progenitor+cells+in+the+presence+of+growth+factors%5BTitle%5D)+AND+%22Exp.+Neurol%22%5BJournal%5D)">PI3K mediated electrotaxis of embryonic and adult neural progenitor cells in the presence of growth factors.</a> Exp. Neurol. 227, 210-210 (2011).</li>
<li>Bonnici, B., Kapfhammer, J. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Bone+marrow+stromal+cells+promote+neurite+extension+in+organotypic+spinal+cord+slice%3A+significance+for+cell+transplantation+therapy%5BTitle%5D)+AND+%22Neurorehabil.+Neural+Repair%22%5BJournal%5D)">Bone marrow stromal cells promote neurite extension in organotypic spinal cord slice: significance for cell transplantation therapy.</a> Neurorehabil. Neural Repair. 22, 447-447 (2008).</li>
<li>Shichinohe, H., Kuroda, S., Tsuji, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Bone+marrow+stromal+cells+promote+neurite+extension+in+organotypic+spinal+cord+slice%3A+significance+for+cell+transplantation+therapy%5BTitle%5D)+AND+%22Neurorehabil.+Neural+Repair%22%5BJournal%5D)">Bone marrow stromal cells promote neurite extension in organotypic spinal cord slice: significance for cell transplantation therapy.</a> Neurorehabil. Neural Repair. 22, 447-447 (2008).</li>
<li>Song, B., Gu, Y., Pu, j <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Application+of+direct+current+electric+fields+to+cells+and+tissues+in+vitro+and+modulation+of+wound+electric+field+in+vivo%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Protocol%22%5BJournal%5D)">Application of direct current electric fields to cells and tissues in vitro and modulation of wound electric field in vivo.</a> Nature Protocol. 2, 1479-1479 (2007).</li>
</ol>

Wij hebben niets te onthullen.

De protocollen die we gebruiken zijn gebaseerd op eerdere studies 5,11. Met behulp van deze methoden, stabiele cultuur en elektrische huidige omstandigheden kan worden gehandhaafd, terwijl het aanbrengen van een EF via agar bruggen, Steinberg&#39;s oplossing en Ag / AgCl elektroden, om cellen of schijfjes gekweekt in speciaal ontworpen electrotactic kamers van gestandaardiseerde en nauwkeurige afmetingen. De diepte van kamers kan worden aangepast aan geschikt voor verschillende diktes monster 11 en...

<table border="1"><tbody><tr><td> Naam van het serum </td><td> Vennootschap </td><td> Catalogusnummer </td><td> Reacties </td></tr><tr><td> FGF-basic Recombinant Human </td><td> Invitrogen </td><td> PHG0026 </td><td> 20 ng / mL </td></tr><tr><td> EFG Recombinant Human </td><td> Invitrogen </td><td> PHG0311 </td><td> 20 ng / mL </td></tr><tr><td> N2-Supplement (100X) vloeibare </td><td> Invitrogen </td><td> 02048 </td><td></td></tr><tr><td> DMEM/F12 medium (hoog glucose) </td><td> Invitrogen </td><td> 31330-095 </td><td></td></tr><tr><td> Poly-D-lysine </td><td> Millipore </td><td> A-003-E </td><td></td></tr><tr><td> Natuurlijke muis Laminine </td><td> Invitrogen </td><td> 23017-015 </td><td></td></tr><tr><td> Groeifactor verminderd basaal membraan Matrix (Matrigel) </td><td> BD Biosciences </td&gt; <td> 354230 </td><td></td></tr><tr><td> HEPES buffer </td><td> Gibco </td><td> 15630 </td><td></td></tr><tr><td> McIlwain weefsel chopper </td><td> De Mickle Laboratory Engineering Co Ltd </td><td> TC752-PD </td><td></td></tr><tr><td> Dow Corning hoogvacuüm siliconenvet </td><td> Sigma-Aldrich </td><td> Z273554 </td><td></td></tr></tbody></table>

electric field-gecontroleerde directed migratie van neurale stamcellen in 2d-en 3d-omgevingen

Electric Field-controlled Directed Migration of Neural Progenitor Cells in 2D and 3D Environments

Endogene elektrische velden (EFS) komen van nature voor in vivo en spelen een cruciale rol tijdens het weefsel / orgaan ontwikkeling en regeneratie, waaronder die van het centrale zenuwstelsel 1,2. Deze endogene EF worden gegenereerd door cellulaire regulatie van ionentransport combinatie met de electrische weerstand van cellen en weefsel. Er werd gemeld dat de toegepaste EF behandeling kan functioneel herstel van ruggenmergletsels bij dieren en mensen 3,4 bevorderen. In het bijzonder heeft EF gerichte celmigratie aangetoond in een grote verscheidenheid aan celtypen 5,6, zoals neurale progenitorcellen (NPC) 7,8. De toepassing van gelijkstroom (DC) EF is niet een algemeen beschikbare techniek in de meeste laboratoria. We hebben beschreven gedetailleerde protocollen voor de toepassing van DC EF naar cel-en weefselculturen eerder 5,11. Hier presenteren we een video-demonstratie van standaard methoden op basis van een berekende veldsterkte op te zetten 2D eend 3D-omgevingen voor de NPC&#39;s, en cellulaire reacties onderzoeken EF stimulatie, zowel in single cell groeiomstandigheden in 2D, en de organotypische ruggenmerg slice in 3D. De spinale cordslice is een ideale ontvanger weefsel voor het bestuderen van NPC ex vivo gedrag, post-transplantatie, omdat de cytoarchitectonic weefsel organisatie is goed bewaard gebleven binnen deze culturen 9,10. Daarnaast biedt deze ex vivo model maakt het ook mogelijk procedures die niet technisch mogelijk is om cellen te volgen in vivo met behulp van time-lapse opname op de enkele cel niveau. Het is kritisch essentieel cel gedrag evalueren niet alleen een 2D milieu, maar ook in 3D organotypische aandoening die nabootst de in vivo omgeving. Dit systeem zal in hoge resolutie imaging met dekking van glas-gerechten op basis van in weefsel of orgaan cultuur met 3D-tracking van de cel migratie in vitro en ex vivo en kan een tussenstap alvorens op in vivo paradigma&#39;s.

Dit protocol laat zien methoden die worden gebruikt om 2D-en 3D-omgevingen tot stand in de speciaal ontworpen electrotactic kabinet, kan volgen cellen<em&gt; In vivo / ex vivo</em&gt; Met behulp van time-lapse opname op de enkele cel niveau, met het oog op galvanotaxis / electrotaxis en andere cellulaire reacties te onderzoeken om de huidige (DC) elektrische velden (EFS) te sturen.

Electric Field-gecontroleerde Directed migratie van neurale stamcellen in 2D-en 3D-omgevingen

Endogene elektrische velden (EV's) komen van nature in vivo voor en spelen een cruciale rol bij de ontwikkeling en regeneratie van weefsels/organen, waaronder die van de ...

Het algemene doel van deze procedure is om het effect van aangelegde elektrische velden op de migratie van neurale progenitorcellen in 2D-culturen en 3D ex vivo-modellen vast te leggen. Dit wordt bereikt door eerst neurale progenitorcellen in vitro te isoleren en te expanderen. De tweede stap is het bereiden van een enkelcel-suspensie van neurale progenitorcellen.Vervolgens worden, voor de voorbereiding van de 2D-cultuur, neurale progenitorcellen geplaatst in speciaal ontworpen elektrotactische kamers. Alternatief worden, voor de voorbereiding van het 3D ex vivo-model, neurale progenitorcellen gelabeld met hooks 3, 3, 3, 4, 2 en geïnjecteerd in een organotypisch model van een dwarsdoorsnede van het ruggenmerg. Ten slotte wordt er een elektrisch veld aangelegd op de elektrokamers en wordt er een time-lapse-opname gemaakt om aan te tonen dat progenitorcellen in zowel 2D- als 3D-omgevingen migreren naar de kathode van het elektrische veld.Het belangrijkste voordeel van deze techniek is dat het een nieuwe methode biedt voor het live volgen van de door elektrische velden geïnduceerde migratie van individuele cellen na transplantatie in een 3D organotypisch model dat sterk lijkt op de na

electric-field-controlled-directed-migration-neural-progenitor-cells

Research

JoVE Journal

Bioengineering

Bio-engineering

We tonen aan dat de overexpressie van de epidermale groeifactor (EGFR) de beweeglijkheid van neurale stamcellen (NSCs) met behulp van een roman agarose gel op basis microfluïdische toestel verbetert. Deze technologie kan gemakkelijk aan te passen aan andere zoogdiercelsystemen waar mobiele bronnen zijn schaars, zoals menselijke neurale stamcellen, en de doorlooptijd is van cruciaal belang.

Het beoordelen van neurale stamcellen Motiliteit Met behulp van een agarosegel-based Microfluïdische Device

In dit protocol we zien hoe aangepaste kamers die de toepassing van een gelijkstroom elektrisch veld op time-lapse beeldvorming van volwassen hersenen afgeleide neurale voorlopercel translocatie in galvanotaxis schakelen mogelijk te construeren.

Een Galvanotaxis Assay voor Analyse van neurale precursoren celmigratie Kinetics in een extern aangelegd Direct Current Electric Field

This video demonstrates the use of an extracellular matrix-coated microfluidic chip to differentiate neural stem and progenitor cells or NPCs through electrical stimulation. After seeding and adhering to the coated region, NPCs grow, and the application of a direct current  triggers their differentiation into neurons, astrocytes, and oligodendrocytes.

Electrical Stimulation-Induced Differentiation of Neural Stem and Progenitor Cells

We presenteren een ex vivo celmigratie analyse die exacte kwantificering van enterische neurale celmigratie potentieel in aanwezigheid van verschillende groeifactoren maakt.

Een kwantitatieve cel-migratie test voor Muriene Enterisch neurale voorlopercellen

Neuroblast migratie is een cruciale stap in postnatale neurogenese. Het protocol hier beschreven kan worden gebruikt om de rol van de kandidaat regulatoren van neuroblast migratie door gebruik DNA / small hairpin RNA (shRNA) nucleofection en een 3D migratietestsysteem met neuroblasts geïsoleerd van het knaagdier postnatale rostrale migratiestroom onderzoeken.

Nucleofectie van knaagdieren neuroblasts om neuroblast Migratie Studie<em&gt; In vitro</em

We presenteren een methode om een fysiologisch elektrisch veld toe te passen op migrerende, geïmmortaliseerde prostaatcellen in een op maat gemaakte galvanotaxiekamer. Met behulp van deze methode, tonen we aan dat 2 lijnen van niet-tumorigene prostaatcellen verschillende graden van migratiedirectionaliteit in het veld vertonen.

Gebruik te maken van op maat ontworpen galvanotaxis Chambers naar Study Directional Migratie van Prostaat Cellen

Epitheliële naar mesenchymale overgang (EMT) maakt het mogelijk dat kankers invasief worden. Om EMT te onderzoeken, wordt een op neurale stamcellen (NSC) gebaseerd in vitro model beschreven dat vrij is van serum en enzymen. Dit gestandaardiseerde systeem maakt een kwantitatieve en kwalitatieve beoordeling van celmigratie, gen- en eiwitexpressie mogelijk. Het model is geschikt voor geneesmiddelontdekking.

Een enzym en Serum-free neurale stamcel Cultuur Model voor EMT Investigation Geschikt voor Drug Discovery

Wij demonstreren de ontwikkeling van zelf geassembleerde, driedimensionale bundels van lengterichting uitgelijnde astrocytic waarin en processen binnen het omhulsel van een roman biomaterial. Deze "levende steigers", het tentoonstellen van micron-schaal diameter nog uitbreiding centimeter lengte, kan dienen als proefnetwerken neurologische mechanismen bestuderen of vergemakkelijken van neuroregeneration door leiding neuronale migratie en/of axonale ontworpen vastloper.

Drie-dimensionale weefsel ontworpen uitgelijnd Astrocyt netwerken vergemakkelijken zenuwstelsel regeneratie te recapituleren Developmental mechanismen

In deze studie presenteren we een protocol voor de differentiatie van neurale stam- en voorlopercellen (NPC's) die uitsluitend worden geïnduceerd door gelijkstroom (DC) pulsstimulatie in een microfluïdisch systeem.

Elektrisch-veld-geïnduceerde neurale precursor celdifferentiatie in microfluïdische apparaten

Tijdens de ontwikkeling van de hersenschors ontstaan neuronen en gliacellen in de ventriculaire zone die het ventrikel bekleedt en migreren ze naar het hersenoppervlak. Bij dit proces zijn veel genen betrokken. Dit protocol introduceert de techniek voor de time-lapse beeldvorming van migrerende neuronen en glia-voorlopercellen.

Time-lapse beeldvorming van migrerende neuronen en glia-voorlopercellen in embryonale hersenplakjes van muizen

Leer hoe elektrische velden de migratie van neurale stamcellen sturen in 2D- en 3D-omgevingen met behulp van tijdopnamen. Deze methode volgt individuele cellen in organotypische modellen voor onderzoek naar neurale ontwikkeling.

Electric Field-gecontroleerde Directed migratie van neurale stamcellen in 2D-en 3D-omgevingen

Meer video's verkennen