Name: Inductie van Graft-versus-host ziekte en In Vivo T-cel monitoren door gebruik van een MHC-matched muizenmodel (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2012-08-29T12:00:00.000+00:00
Duration: 10 min 29 s
Description: Leer T-celtrafficking en accumulatiepatronen tijdens graft-versus-host ziekte bestuderen met behulp van een MHC-gematcht muizenmodel. Bioluminescentiebeeldvorming maakt real-time monitoring van immuuncelgedrag mogelijk.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

playerTrialDesktop

We zijn dank verschuldigd aan Alice Gaughan en Jiao-Jing Wang waarvan de uitstekende technische ondersteuning, intellectuele inbreng, en morele steun waren instrumentaal in het verplaatsen van deze studies vooruit. Deze studies werden ondersteund door de NIH subsidie ​​AI036532 te GAH.

1. Lethal Bestraling <ol><li> Plaats maximaal 10 ontvangende muizen in een kooi microisolator verenigbaar met de bestraler te gebruiken. </li><li> Bestralen in 2 gelijke doses opsomming totale dosis (totale dosis = 9 cGy voor BALB.B ontvangers). Tweede doorstraling 3 uur na eerste. Injectie moet plaatsvinden tussen 4-6 uur na de laatste bestraling. Bestralen in muizen ofwel Cs 137 bron en RS2 000, bestraler. </li><li> Na de tweede stralingsdosis store muizen in microisolator kooien met aangezuurd water tot het tijdstip van transplantatie. </li></ol> 2. Splenocyten Voorbereiding <ol><li> Euthanaseren een donor muis volgens de institutionele richtlijnen. Elke donor levert over het algemeen 75x10 6 - 125x10 6 splenocyten. Met CD8 zuivering kits, levert elke muis algemeen 6x10 6 - 12x10 6 CD8 T cellen. </li><li> Verwijder de milt door eerst een verticale insnijding 2 cm 2 cm rechts van de middellijn rechtstreeksonder de ribbenkast. Knip de vacht, huid en viscerale membraan. </li><li> Verwijder milt en met enkelvoudige celsuspensie door het plaatsen milt in 40 ul mesh scherm in een petrischaal met RPMI 1640 met 5% FBS. Gebruik een zuiger van de spuit te breken behalve de milt totdat de gehele milt is gepasseerd mesh scherm. </li><li> Herhaal dit proces voor elke WT en L2G85.B6 donor. Verzamel alle WT enkele cel suspensies in 1 tot 50 ml conische buis, en het verzamelen van alle L2G85.B6 enkele cel suspensies in een aparte 50 ml conische buis. </li><li> Centrifugeer cellen bij 1200 rpm gedurende 10 min bij 4 ° C. Resuspendeer pellets in RPMI 1640 met 5% FBS en count cellen. </li></ol> 3. Bone Marrow Voorbereiding <ol><li> Verwijder het vel van een achterpoot onderdeel van een donor muis. </li><li> Voorzichtig weggesneden zo veel spierweefsel mogelijk van femur en de tibia / fibula. </li><li> Verwijder de achterste ledematen door het snijden van femur weg bij het heupgewricht. Weggesneden achter poot net onder tibia / fibula kruising. Alle botten bezuinigingen moeten worden uitgevoerd met stevige schaar. </li><li> Verwijder voorzichtig het resterende spierweefsel. Snijd fibula-relatief weinig beenmerg wordt gevonden in kuitbeen en niet de moeite waard. </li><li> Plaats achterste ledematen in koud RPMI 1640 5% FBS en herhaal het proces met de tweede achterste ledematen. Elke muis moet opleveren tussen 20x10 6 - 40x10 6 beenmergcellen. </li></ol> 4. Bone Marrow verwijderen <ol><li> Verwijder een achterpoot van media en in grote petrischaal met een kleine hoeveelheid koude media (~ 1 ml). </li><li> Knip het kniegewricht. Met behulp van een injectiespuit (volume&gt; 5 ml), insert subcutane naald in het scheenbeen en druk spuit totdat alle rode materiaal wordt verwijderd uit het interieur van de tibia. Herhaal de procedure met dijbeen. Gooi overgebleven botten ontdaan van het beenmerg. Herhaal de procedure met de tweede achterste ledematen. </li><li> Met enkelvoudige celsuspensie door het pipetteren van medium met beenmerg in grote petrischaal en het gebruik zuiger en 40 plmesh scherm. Pipet enkele celsuspensie in 50 ml conische buis en op ijs bewaren. </li></ol> 5. CD3 Uitputting Er zijn verschillende manieren om CD3 + cellen van het beenmerg afbreken. Ons laboratorium gebruikt een kit door Miltenyi Biotec (CD3-biotine - 130-093-021). Afbrekende CD3 + cellen van het beenmerg volgens het protocol van de fabrikant. De buffer voor Miltenyi kits voortaan genoemd MACS buffer (2 mM EDTA, 0,5% BSA in PBS, pH 7,2). <ol><li> Was de cellen door centrifugeren splenocyten en beenmergcellen bij 1200 rpm gedurende 10 min bij 4 ° C en aantal cellen. </li><li> Verwijder ALLE supernatant. Resuspendeer beenmergcellen in 100 ul per 10 miljoen beenmergcellen in MACS buffer. </li><li> Ga verder met CD3 uitputting gebruik produceert &#39;protocol. </li><li> Was CD3 verarmd beenmergcellen 3 keer in steriele PBS. Aantal CD3 uitgeputte beenmergcellen en resuspendeer in een geschikt volume 10 7 cellen injecteren. </li></ol> Er zijn verschillende manieren om CD8 T-cellen te zuiveren van L2G85.B6 muizen. Ook zijn er verschillende manieren om CD8 T cel depletie van WT splenocyten donors. Ons laboratorium maakt gebruik van kits van Miltenyi Biotec (CD8 uitputting - 130-049-401, CD8 zuivering - 130-095-236). <ol><li> Resuspendeer de WT pellet in 90 ul MACS buffer per 10 7 cellen. Ga verder met CD8 T-cel depletie volgens produceert &#39;protocol (CD8 uitputting - 130-049-401). </li><li> Resuspendeer de L2G85.B6 pellet in 40 ul MACS buffer per 10 7 cellen. Ga verder met CD8 T-cel zuivering volgens produceert &#39;protocol (CD8 zuivering - 130-095-236). </li><li> Tel elke celpopulatie en was elke populatie 3 maal met steriele PBS. Resuspendeer elke populatie in de juiste hoeveelheid op 18x10 6 WT (CD8 verarmd) splenocyten en 2x10 6 L2G85.B6 gezuiverd CD8 T-cellen te injecteren. </li></ol>7. Injectiepreparaat <ol><li> Combineer 10 7 CD3 uitgeputte beenmergcellen, 18x10 6 WT (CD8 verarmd) splenocyten en 2x10 6 L2G85.B6 gezuiverde CD8 T cellen in een microcentrifugebuis. Wassen met steriele PBS en resuspendeer in 300 ul. </li><li> Injecteer celpreparaat in de staartader van ontvangende muizen. Injecties moeten worden gedaan met behulp van 28 gauge naalden. </li><li> Bewaren muizen in microisolator kooi met aangezuurd water. Score muizen dagelijks gebruik scoresysteem GVHD scoresysteem ontwikkeld door Cooke et al. 1. </li></ol> 8. Bioluminescent Imaging <ol><li> Zes dagen na de transplantatie, injecteren ontvangende muizen met 4 mg D-luciferine. Toestaan ​​5 min voor luciferine te reageren met luciferase. </li><li> Verdoof muis in isofluraan kamer van bioluminescentie imager en beeld ontvangers voor 5 min met kleine binning. Dit zal leiden tot een hoge resolutie afbeelding, terwijl het verzamelen van zo veel evenementen mogelijk te maken. </li><li> Analyseer gegevens met behulp van LivingBeeld software. De omvang van de pseudo-color beeld kan worden veranderd om de beste resultaten. Het is echter noodzakelijk dat dezelfde schaal worden gebruikt in experimenten. </li><li> Regio&#39;s van belang kan worden gemaakt met behulp van Living Image software en licht emittance kunnen worden gekwantificeerd door het berekenen van de flux (fotonen / sec) wordt uitgezonden door elk gebied van belang. </li></ol> 9. Representatieve resultaten Ongeveer 7-10 dagen na de transplantatie, muizen beginnen met klinische symptomen van GVHD. Muizen lijken smerig door gebrek aan verzorging. Ontvangers zal ook beginnen om gewicht te verliezen tussen de 7-10 dagen na de transplantatie. Activiteit en houding van de ontvangende muizen zullen relatief normaal blijven tot ongeveer dag 12 tot 14 na de transplantatie. Cumulatieve GVHD scores zal gestaag toenemen door de eerste 2-3 weken na de transplantatie (Figuur 1A). Ziekteverloop is zeer variabel tussen muizen, maar de ontvangers moeten uniform bezwijken voor GVHD met 30-40 degen na transplantatie (Figuur 1B). Figuur 2 ontvangende muizen die zijn afgebeeld 6 dagen na transplantatie. Pseudo-gekleurde schaal toont wisselende licht emittance door het lichaam met de hoogste lichtintensiteit wordt uitgezonden in de milt en de darmen. CD8 T cel accumulatie in de darm is consistent met eerdere bevindingen 6. Ontvangende muizen kunnen worden geplaatst in microisolator kooi af te beelden op een later tijdstip of gedood voor ex vivo imaging. <table border="1"><tbody><tr><td> Criteria </td><td> Graad 0 </td><td> Graad 1 </td><td> Grade 2 </td></tr><tr><td> Gewichtsverlies (wkly.) </td><td> &lt;10% </td><td> &gt; 10% - &lt;25% </td><td> &gt; 25% </td></tr><tr><td> Houding </td><td> Normaal </td><td> Hunching alleen in rust </td><td> Verschillende hunching; schaadt VERKEERnt </td></tr><tr><td> Activiteit </td><td> Normaal </td><td> Milde tot afname van de activiteit matige </td><td> Stationaire tenzij gestimuleerd </td></tr><tr><td> Textuur van de vacht </td><td> Normaal </td><td> Lichte tot matige ruffling </td><td> Ernstige roffelende / slechte verzorging </td></tr><tr><td> Huidstructuur </td><td> Normaal </td><td> Het schalen van poten / staart </td><td> Voor de hand liggende gebieden van de open huid </td></tr></tbody></table> Tabel 1. Cooke et al. ontwikkelde dit scoresysteem in 1996 1. Muizen moet dagelijks worden gescoord op elk van de criteria aan de linkerkant. Elke muis krijgt een score van 0-2 voor elk criterium en de totale score is de som van alle individuele scores. <img alt="Figuur 1" src="/files/ftp_upload/3697/3697fig1.jpg" /> Figuur 1. Lethaal bestraalde BALB.B werden getransplanteerd met 10 7 botbeenmergcellen alleen of met 18x10 6 CD8 T cellen ontdane WT splenocyten en 2x10 6 gezuiverd L2G85.B6 CD8 T-cellen. A) klinische score gegevens van de ontvangers van beenmerg alleen of met CD8 T cel depletie WT splenocyten en gezuiverd L2G85.B6 CD8 T-cellen. B) Survival gegevens van de ontvangers van beenmerg alleen of met CD8 T cel depletie WT splenocyten en gezuiverd L2G85.B6 CD8 T-cellen. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/3697/3697fig1large.jpg" target="_blank">Klik hier om een grotere afbeelding te bekijken</a> . <img alt="Figuur 2" src="/files/ftp_upload/3697/3697fig2.jpg" /> Figuur 2. Lethaal bestraalde BALB.B muizen getransplanteerd met 10 7 beenmergcellen alleen of met 18x10 6 CD8 T cellen ontdane WT splenocyten en 2x10 6 gezuiverd L2G85.B6 CD8 T-cellen. Ontvangers werden geïnjecteerd met 4 mg D-luciferine via intraperitoneale injectie en werden afgebeeld met Xenogen IVIS 5 min bij kleine binning. Pseudo-gekleurde beelden worden getoond waar paars staat voor lage intensiteit en rood staat voor hoge intensiteit Regio&#39;s van belang werden getekend rond de gehele muis en de totale flux (fotonen / sec) werden gekwantificeerd. <img alt="Figuur 3" src="/files/ftp_upload/3697/3697fig3.jpg" /> Figuur 3. Lethaal bestraalde BALB.B muizen getransplanteerd met 10 7 beenmergcellen alleen of met 18x10 6 CD8 T cellen ontdane WT splenocyten en 2x10 6 gezuiverd L2G85.B6 CD8 T-cellen. Ontvangers werden geïnjecteerd met 4 mg D-luciferine via intraperitoneale injectie en werden afgebeeld met Xenogen IVIS 5 min bij kleine binning. Pseudo-gekleurde beelden worden getoond waar paars staat voor lage intensiteit en rood staat voor een hoge intensiteit. Ontvangers werden afgebeeld op A) dag 4, B) dag 6, en C) dag 8 na de overdracht.

<ol><li>Cooke, K. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+experimental+model+of+idiopathic+pneumonia+syndrome+after+bone+marrow+transplantation%3A+The+roles+of+minor+H+antigens+and+endotoxin%5BTitle%5D)+AND+%22Blood%22%5BJournal%5D)">An experimental model of idiopathic pneumonia syndrome after bone marrow transplantation: The roles of minor H antigens and endotoxin.</a> Blood. 88, 3230-3239 (1996).</li>
<li>Berger, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((T+cell+subsets+involved+in+lethal+graft-versus-host+disease+directed+to+immunodominant+minor+histocompatibility+antigens%5BTitle%5D)+AND+%22Transplantation%22%5BJournal%5D)">T cell subsets involved in lethal graft-versus-host disease directed to immunodominant minor histocompatibility antigens.</a> Transplantation. 57, 1095-1102 (1994).</li>
<li>Nimer, S. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Selective+depletion+of+CD8%2B+cells+for+prevention+of+graft-versus-host+disease+after+bone+marrowtransplantation.+A+randomized+controlled+trial%5BTitle%5D)+AND+%22Transplantation%22%5BJournal%5D)">Selective depletion of CD8+ cells for prevention of graft-versus-host disease after bone marrowtransplantation. A randomized controlled trial.</a> Transplantation. 57, 82-87 (1994).</li>
<li>Korngold, R., Sprent, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Surface+markers+of+T+cells+causing+lethal+graft-vs-host+disease+to+class+I+vs+class+II+H-2+differences%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Immunology%22%5BJournal%5D)">Surface markers of T cells causing lethal graft-vs-host disease to class I vs class II H-2 differences.</a> Journal of Immunology. 135, 3004-3010 (1985).</li>
<li>Cao, Y. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Molecular+imaging+using+labeled+donor+tissues+reveals+patterns+of+engraftment%2C+rejection%2C+and+survival+in+transplantation%5BTitle%5D)+AND+%22Transplantation%22%5BJournal%5D)">Molecular imaging using labeled donor tissues reveals patterns of engraftment, rejection, and survival in transplantation.</a> Transplantation. 80, 134-139 (2005).</li>
<li>Asady, R. E. l <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((TGF-%7Bbeta%7D-dependent+CD103+expression+by+CD8%28%2B%29+T+cells+promotes+selective+destruction+of+the+host+intestinal+epithelium+during+graft-versus-host+disease%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Exp.+Med%22%5BJournal%5D)">TGF-{beta}-dependent CD103 expression by CD8(+) T cells promotes selective destruction of the host intestinal epithelium during graft-versus-host disease.</a> J. Exp. Med. 201, 1647-1657 (2005).</li>
<li>Larson, R. S., Springer, T. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Structure+and+function+of+leukocyte+integrins%5BTitle%5D)+AND+%22Immunol+Rev%22%5BJournal%5D)">Structure and function of leukocyte integrins.</a> Immunol Rev. 114, 181-217 (1990).</li>
<li>Karecla, P. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Recognition+of+E-cadherin+on+epithelial+cells+by+the+mucosal+T+cell+integrin+alpha+M290+beta+7+%28alpha+E+beta+7%29%5BTitle%5D)+AND+%22Eur.+J.+Immunol%22%5BJournal%5D)">Recognition of E-cadherin on epithelial cells by the mucosal T cell integrin alpha M290 beta 7 (alpha E beta 7).</a> Eur. J. Immunol. 25, 852-856 (1995).</li>
<li>Cepek, K. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Adhesion+between+epithelial+cells+and+T+lymphocytes+mediated+by+E-cadherin+and+the+alpha+E+beta+7+integrin%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Adhesion between epithelial cells and T lymphocytes mediated by E-cadherin and the alpha E beta 7 integrin.</a> Nature. 372, 190-193 (1994).</li>
<li>Malarkannan, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+molecular+and+functional+characterization+of+a+dominant+minor+H+antigen%2C+H60%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Immunol%22%5BJournal%5D)">The molecular and functional characterization of a dominant minor H antigen, H60.</a> J. Immunol. 161, 3501-3509 (1998).</li>
</ol>

Geen belangenconflicten verklaard.

Het protocol voor het induceren van GVHD in muizen hier voorgesteld is een klinisch relevant model van murine GVHD. Oorspronkelijk opgericht door Berger et al.. In 1994, de C57Bl / 6 in BALB.B stam combinatie is MHC-afgestemd, met GVHD sterfte gemedieerd door CD4 afhankelijk, CD8 T effectoren 2, zeer vergelijkbaar met de meest voorkomende klinische scenario 3. Het is bekend dat transplantatie CD8 T cellen alleen geen GvHD in dit model, maar de ziekte is aanzienlijk slechter wanneer zowel C...

<table border="1"><tbody><tr><td> Naam van de Reagens </td><td> Vennootschap </td><td> Catalogus nummer </td><td> Reacties </td></tr><tr><td> RPMI 1640 </td><td> Invitrogen </td><td> 12633-012 </td><td></td></tr><tr><td> Foetaal kalfsserum </td><td> Invitrogen </td><td> 10439016 </td><td></td></tr><tr><td> 40 uM Cell Strainer </td><td> BD Biosciences </td><td> 352340 </td><td></td></tr><tr><td> CD3e-Biotin </td><td> Miltenyi Biotech </td><td> 130-093-021 </td><td></td></tr><tr><td> Anti-Biotin Microbeads </td><td> Miltenyi Biotech </td><td> 130-091-147 </td><td></td></tr><tr><td> CD8a Microbeads </td><td> Miltenyi Biotech </td><td> 130-049-401 </td><td> Gebruikt CD8 T-cellen uit milt afbreken. </td></tr><tr><td> CD8a Zuivering Antilichaam Cocktail </td><td> Miltenyi Biotech </td><td> 130-095-236 </td><td> Gebruikt voor het zuiverenCD8 T-cellen uit de milt. </td></tr><tr><td> D-Luciferin </td><td> Caliper Life Sciences </td><td> 122796 </td><td></td></tr></tbody></table>

inductie van graft-versus-host ziekte en<em&gt; in vivo</em&gt; t-cel monitoren door gebruik van een mhc-matched muizenmodel

Induction of Graft-versus-host Disease and In Vivo T Cell Monitoring Using an MHC-matched Murine Model

Graft-versus-host disease (GVHD) de beperkende belemmering voor het brede gebruik van beenmergtransplantatie als therapie voor verschillende hematologische tekortkomingen. GVHD wordt veroorzaakt door volwassen alloreactieve T-cellen in het beenmerg transplantaat die worden ingebracht in de ontvanger en schade aan organen gastheer. Echter in muizen T-cellen moeten worden toegevoegd aan het beenmerg inoculum aan GvHD. Hoewel er veel werk verricht om T cel responsen na transplantatie karakteriseren bioluminescent belichtingstechniek is een niet-invasieve methode om T cel handel patronen te meten in vivo. Na dodelijke bestraling, zijn ontvangende muizen getransplanteerd met beenmerg cellen en splenocyten van donor muizen. T-cel subsets van L2G85.B6 (transgene muizen die constitutief luciferase) zijn in het transplantaat. Door alleen transplanteren bepaalde T-cel subsets, men in staat om specifieke T cel subsets in vivo volgen,en op basis van hun locatie, het ontwikkelen van hypothesen over de rol van specifieke T-cel subsets in het bevorderen van GVHD op verschillende tijdstippen. Op vooraf bepaalde tijdstippen na transplantatie, ontvangende muizen afgebeeld met een Xenogen IVIS CCD camera. De lichtintensiteit kan worden gekwantificeerd met behulp van levende beeld software om een ​​pseudo-kleurenbeeld op basis van foton-intensiteit (rood = hoge intensiteit, violet = lage intensiteit) te genereren. Tussen 4-7 dagen na de transplantatie, ontvangende muizen beginnen om de klinische symptomen van GVHD vertonen. Cooke et al. 1. Ontwikkelde een scoringssysteem tot ziekteprogressie basis van de ontvangende muizen vacht textuur, integriteit van de huid activiteit, gewichtsverlies, en houding kwantificeren. Muizen worden dagelijks gescoord, en gedood wanneer ze ten dode opgeschreven. Ontvangende muizen worden over het algemeen ten dode opgeschreven 20-30 dagen na de transplantatie. Muismodellen zijn waardevolle instrumenten voor het bestuderen van de immunologie van GVHD. Selectief transplanteren het bijzonder T-cel subsets al.dieptepunten voor zorgvuldige identificatie van de rollen elke subset speelt. Niet-invasieve volgen van T cel responsen in vivo werkt als een extra waarde murine GVHD modellen.

Murine beenmergtransplantatie is een veel gebruikte techniek om immunologische mechanismen voor graft-versus-host ziekte bij mensen bestuderen. De mogelijkheid om T-cel mensenhandel patronen te volgen<em&gt; In vivo</em&gt; Kunnen gedetailleerde analyse van de ontwikkeling en de voortzetting van T cel responsen tijdens graft-versus-host ziekte.

Inductie van Graft-versus-host ziekte en<em&gt; In Vivo</em&gt; T-cel monitoren door gebruik van een MHC-matched muizenmodel

Graft-versus-hostziekte (GVHD) is de beperkende factor voor het brede gebruik van beenmergtransplantatie als curatieve therapie voor een verscheidenheid aan hematologische ...

Het doel van deze procedure is om de patronen van T-celmigratie en -accumulatie tijdens graft-versus-hostziekte te bestuderen. Dit wordt bereikt door eerst beenmerg en cellen te isoleren uit donormuizen. De tweede stap is het zuiveren van de relevante celpopulaties en het voorbereiden daarvan voor transplantatie.Vervolgens worden de gezuiverde celpopulaties gecombineerd en getransplanteerd in bestraalde recipientmuizen. De laatste stap is het visualiseren van de traffickings- en accumulatiepatronen van T-cellen in de recipientmuizen. Uiteindelijk wordt bioluminescentie-imaging gebruikt om de trafficking- en accumulatiepatronen van T-cellen tijdens GVHD aan te tonen.Het belangrijkste voordeel van bioluminescente beeldvorming ten opzichte van bestaande technologieën is dat het een methode biedt om lymfocyten in de gehele muis te detecteren, in tegenstelling tot op een specifieke locatie zoals bij bestaande technologieën. Recipienten moeten vóór de transplantatie van beenmerg en cellen worden behandeld met dodelijke bestraling. Plaats maximaal 10 recipientmuizen in een micro-isolatorkooi die compatibel is met de te gebruiken bestralingsinstallatie.Bestraal vervolgens de muizen met ofw

induction-graft-versus-host-disease-vivo-t-cell-monitoring-using-an

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Immunologie en Infectie

This video demonstrates the induction of intestinal graft-versus-host disease, GvHD, in a lethally-irradiated recipient mouse using allogeneic hematopoietic stem cells and GvHD-inducing splenic alloreactive T lymphocytes. This protocol helps establish a severe acute intestinal GvHD model to understand the mechanism of the disease and develop innovative therapeutic options.

Induction of Graft Versus Host Disease in Mouse Models via Allogeneic Bone Marrow and Splenic Cell Transplantation

Transplantatie van staarthuid is een krachtig model voor het bestuderen van T-cel-afhankelijke afstoting en tolerantie-inductie tijdens allogene immuunresponsen bij muizen. De voordelen van dit protocol zijn kleine invasieve chirurgie en gemakkelijke monitoring zonder dat de ontvangende muis hoeft te worden geofferd.

Transplantatie van Tail Skin aan allogene CD4 T-cel responsen bij muizen

Hier presenteren we een protocol om colonontsteking bij muizen te induceren door adoptieve overdracht van syngeneïsche CD4+CD45RBhigh T-cellen naar ontvangers zonder T- en B-cellen. Klinische en histopathologische kenmerken bootsen inflammatoire darmziekten bij mensen na. Deze methode maakt de studie van de initiatie van colonontsteking en de progressie van de ziekte mogelijk.

Inductie van Muriene darmontsteking door adoptieve overdracht van effector CD4<sup&gt; +</sup&gt; CD45RB<sup&gt; Hoog</sup&gt; T cellen in immunodeficiënte muizen

We beschrijven een protocol voor aortische interpositie-grafting bij muizen. Het doel van het protocol is om een model te bieden waarmee pathologische processen en therapeutische strategieën kunnen worden bestudeerd die relevant zijn voor allo-immuunreacties in slagaders en de resulterende arteriële veranderingen die bijdragen aan falen van orgaantransplantatie.

Mouse Model van Allo-immuun geïnduceerde Vascular Afwijzing en Transplant Aderverkalking

Murine full-dikte van de huid transplantatie is een gevestigde model om afstoting te studeren in een alloimmuun setting. Hier bieden we een tutorial van elke stap die betrokken zijn bij het uitvoeren van een BALB / c -&gt; C57BL / 6 full-dikte van de huid transplantatie.

Murine volledige dikte van de huid Transplantation

Hier presenteren we een protocol waarin wordt beschreven van Allogene hematopoietische stamceltransplantatie en repetitieve mini-Endoscopische evaluaties van de distale dubbelpunt ter plaatse voor de aanwezigheid, de kenmerken en de ernst van Colon ontsteking binnen live kunt muizen intestinale graft - versus - host-ziekte lijden.

Inductie van intestinale Graft - versus host klauwzeer en haar Mini-Endoscopische beoordeling in levende muizen

Hier presenteren we een protocol voor het opwekken en scoren van ziekten in een Xenogenic graft-versus-hostziekte (xenoGVHD) model. xenoGVHD biedt een in vivo model om immunosuppressie van menselijke T-cellen te bestuderen. Daarnaast beschrijven we hoe we menselijke T-cellen in weefsels met digitale PCR kunnen detecteren als een hulpmiddel om immunosuppressie te kwantificeren.

Inductie en scoren van transplantaat-versus-gastheer ziekte in een xenogene Murine model en kwantificering van menselijke T cellen in muizen weefsels met behulp van digitale PCR

We beschrijven een humaan perifeer bloed mononucleaire cel (PBMC) — op basis van gehumaniseerd xenotransplantaatmodellen is muismodel voor translationeel immuno-oncologisch onderzoek. Dit protocol kan dienen als een algemene richtlijn voor het vaststellen en karakteriseren van vergelijkbare modellen voor I-O-therapie beoordeling.

Een humane perifere bloed mononucleaire cel (PBMC) Engrafted gehumaniseerd xenograft model voor translationele immuno-oncologie (I-O) onderzoek

Graft-versus-host ziekte is een belangrijke complicatie na allogene beenmergtransplantatie. Dendritische cellen spelen een cruciale rol in de pathogenese van graft-versus-host ziekte. Het huidige artikel beschrijft een nieuw beenmergtransplantatieplatform om de rol van dendritische cellen te onderzoeken bij de ontwikkeling van graft-versus-host ziekte en het graft-versus-leukemie-effect.

Beenmergtransplantatie Platform om de rol van dendritische cellen in graft-versus-host ziekte te onderzoeken

Dit protocol beschrijft een eenvoudige en minimaal invasieve methode voor het transplanteren en afbeelden van NIT-1-cellen in niet-obese diabetische (NOD) -ernstige gecombineerde immunodeficiënte muizen die worden uitgedaagd met splenocyten gezuiverd van spontaan diabetische NOD-muizen.

Bioluminescente monitoring van transplantaatoverleving in een adoptief transfermodel van auto-immuundiabetes bij muizen

Leer T-celtrafficking en accumulatiepatronen tijdens graft-versus-host ziekte bestuderen met behulp van een MHC-gematcht muizenmodel. Bioluminescentiebeeldvorming maakt real-time monitoring van immuuncelgedrag mogelijk.

Inductie van Graft-versus-host ziekte en

Meer video's verkennen