Name: Snelle bepaling van de thermische Nociceptieve drempel in diabetische ratten (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2012-05-17T13:00:00.000+00:00
Duration: 5 min 45 s
Description: Leer een betrouwbare methode om de thermische nociceptieve drempel te bepalen bij ratten met diabetes. Deze techniek gebruikt een incrementele warme plaat voor nauwkeurige pijnmeting met minimale stress.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Dit werk werd gefinancierd door de American Diabetes Association (ADA), Grant JF1-10-14 (MDiF). We willen het personeel van het Laboratorium van Animal Resources bedanken WSU. Auteurs dankbaar erkennen hulp bij de statistische analyse van gegevens van Neil Paton, Ph.D.

TNTs van muizen en ratten worden bepaald met behulp van de incrementele kookplaat analgesie meter [iHPAM, IITC Inc Life Science (Woodland Hills, CA)]. De apparatuur bestaat uit verschillende componenten: een aluminium plaat (10 x 20 cm) met de verwarming eronder en een plexiglas observatie kamer boven, een warmte-controle-eenheid, software voor data-acquisitie (IITC Part # Soft Series 8), een PC (personal computer) en een voetschakelaar voor het op afstand starten, stoppen of opnieuw de controle van het toestel. Het verwarmingssysteem kan ook het starten / stoppen / uitschakelen van de verwarmings handmatig via een bedieningspaneel voor de apparatuur. De iHPAM kan worden ingesteld op verschillende verwarming prijzen, standby / cutoff temperaturen. 1. Apparatuur Set-up <ol><li> Voordat proeven dieren visueel op het apparaat te bevestigen de gekozen verwarming tarieven (bijvoorbeeld 6 ° C / min), de eerste stand-by en Final Cut-off temperaturen (bv 28 ° C en 55 ° C, respectievelijk). </li><li> Controleer alle aansluitingen. Om elektronische kopie van de resultaten te houden, moet het apparaat worden aangesloten op een computer met software-serie 8. Als alternatief kan papieren exemplaren van de resultaten worden afgedrukt via de seriële poort van het toestel. </li><li> Test de apparatuur. Druk eenmaal op de voetschakelaar om te controleren of de software Series 8 registreert de gegevens: de eerste stand-by, laatste cutoff temperaturen en de tijd in seconden nodig is om de cut-off temperatuur te bereiken. </li><li> Een verdere vergelijkingsproef, kan de onderzoekers bij de experimenten moeten de toestel ervaren op zichzelf. Intrekking van de hand van de metalen plaat op het moment van pijnperceptie (46-48 ° C) mogen niet leiden tot schade aan de huid evenmin voor de productie een latere ongemak. </li><li> Zodra het apparaat is ingesteld en de resultaten van stap 1.3 en 1.4 opgenomen kunnen worden vergeleken. Dit is handig om potentiële problemen die het gebruik van het apparaat zou kunnen vervallen op te sporen. Zo verschillen tussen de eerste stand-by / final cut-off temperatures en de actuele meting van de eenheid en / of verschillen tussen temperaturen weergegeven door het apparaat en de werkelijke plaat vereiste temperatuur voor de hand nemen. </li></ol> 2. Het testen van normale dieren Ofwel jonge of volwassen Wistar ratten [postnatale (p) leeftijd 21-25 dagen], of muizen (p21-25) van een genetische achtergrond of geslacht kunnen worden gebruikt. De muizen die in onze experimenten zijn de stam C57BL/6J. <ol><li> De nacht voor de experimenten uit te voeren, wennen de dieren door het plaatsen van hun kooien op de bank waar de iHPAM wordt geplaatst. Twee uur voor het uitvoeren van de tests, zet de iHPAM om de dieren vertrouwd te maken met het achtergrondgeluid van het apparaat. Op dit punt kan de iHPAM worden opgezet en getest om een goede werking te controleren (zie stap 1). Voedsel en water ad libitum verstrekt gedurende de gehele proef, behalve wanneer het dier in de observatie kamer (zie stap 2.1). Opmerking: Het is important niet aan te nemen dat het laboratorium omstandigheden in gedragsexperimenten worden gecontroleerd door standaard. Speciale aandacht moet worden besteed aan genetische en omgevingsfactoren die de uitkomst van de gedrags-studies (overzicht in 7) kunnen beïnvloeden. </li><li> Plaats voorzichtig een normale muis / rat in het plexiglas waarneming kamer boven de verwarmingsplaat van het apparaat. Laat het dier wennen aan het verwarmde oppervlak (vastgesteld op 28 ° C) tot het dier toont een comfortabele gedrag. Opmerking: Onder deze omstandigheden normale volwassen ratten tonen een eerste verkennende gedrag, af en toe te staan ​​naar de deksel van de observatie kamer tijdens het snuiven. Na een paar minuten, kan ratten toevallige aanvallen van verzorging en een ontspannen gedrag. Soms, ratten lag met een ontspannen lichaamshouding (die gemakkelijk extensie), terwijl terloops snuiven de omgeving. Normale muizen zijn meestal actiever zijn dan ratten. Echter, muizen tonen een ontspannen verkennend gedrag na een paar minuten in waarneming kamer. Het is zeldzaam om te zien of ontsnappen gedrag (bijvoorbeeld, springen, in een poging om te ontsnappen aan de observatie kamer) of defensieve houding (bijvoorbeeld piepen). Het is ook belangrijk op te merken dat muizen kunnen de pijn communiceren van de ene muis naar de andere 8. Daarom kan het belangrijk zijn om proef muizen ondergebracht in afzonderlijke kooien. </li><li> Plaats weerspiegelt in de rug van de observatie kamer, om de observaties mogelijk te maken alle hoeken. Een statief met een digitale videocamera kan zijn hulp nodig om het exacte moment waarop nocifensive (pijn te vermijden) gedrag had plaatsgevonden vast te stellen. </li><li> Zodra het dier is comfortabel in de observatie kamer opwarmen van de plaat door te drukken op de voetschakelaar. Wanneer de plaat temperatuur verwarmt met een snelheid van 6 ° C / minuut, normale dieren vertonen nocifensive gedrag waarbij het ​​gaat om achterste poot * meestal temperaturen woedt 46 tot 48 ° C 3,5,9,10. Zo is het dier typische verwijderd vormen de waarneembareatie kamer na ongeveer 3 minuten. Let op: Het observeren van de typische nocifensive reactie van een rat of muis wil zeggen, achterste poot likken, terwijl schudden en / of tillen, is genoeg om de thermische stimulus te beëindigen. Dit wordt bereikt door het indrukken van de voetschakelaar. Op dit moment de software registreert de plaat de temperatuur en de plaat direct afkoelt tot stand-by temperatuur (28 ° C) bereikt (~ 0,5 min). Deze temperatuur wil zeggen, is degene die elke nocifensive reactie oproept beschouwd als de schadelijke warmte-drempel (TNT) van de normale (controle) dier. * Soms, met name bij muizen, kan nocifensive gedrag om schadelijke temperatuur eerst worden waargenomen in een of beide voorpoten (bijv. likken terwijl u zit), enkele seconden voordat achterste poten. Echter, voor-poot likken is een normaal onderdeel van het poetsgedrag. Vandaar dat alleen achterste poot reacties beoordeeld. In gevallen muizen kunnen verzorgen hun achterste poten ook. Echter, de normale verzorging te doen not laatste meer dan een paar seconden, niet gepaard gaat met intensieve likken en meestal eindigt na het schoonmaken van zijn klauwen. </li><li> Verwijder voorzichtig het dier uit de plaat en plaats deze in de desbetreffende kooi. De warmte drempel meting wordt vervolgens herhaald voor de andere controle (normaal) dier. Opmerking: TNTs kan worden bepaald in een dier met intervallen van 1-2 minuten zonder de dieren vanuit de observatie kamer. TNT bepalingen bij ratten of muizen kunnen meerdere keren worden herhaald gedurende een aantal dagen. Dit is bijzonder nuttig gemiddelde TNT van een individueel dier en de variatie met de leeftijd bepalen. </li><li> De TNT controledieren wordt uitgedrukt als het gemiddelde van drie of meer drempelwaarden ± SEM. </li><li> Statistische analyse van de verkregen gegevens uitgevoerd om verschillende behandeling groepen muizen of ratten vergelijken. Parametrische procedures, waaronder Variantie-analyse het best kunnen worden gebruikt wanneer de gegevens normaal verdeeld zijn en waar behandelingsgroepen zijn homoskedastic, wanneer aan deze voorwaarden is voldaan aan de volgende methoden worden toegepast. Variantie-analyse, gevolgd door de Newman-Keuls test om verschillen in meerdere metingen dat wil zeggen, herhaalde individuele TNTs met / zonder behandeling of op verschillende tijdstippen (bijvoorbeeld gegevens in figuur 3) op te sporen. De gepaarde Student&#39;s t-test kan worden gebruikt om twee gegevensgroepen dat wil zeggen, TNTs vergelijken voor vs na de behandeling met geneesmiddelen, de ongepaarde t-test kan worden gebruikt om verschillen in TNT veranderingen in het bepalen drugs behandeld versus placebo-behandelde dieren (bijvoorbeeld Gegevens in figuur 4). </li></ol> 3. Het testen van diabetische dieren De streptozotocine (STZ) geïnduceerde diabetische rat de meest gebruikte proefdier mechanismen PDN bestuderen en analgetica en therapieën 11,12 beoordelen. Ratten die diabetische door een intraperitoneale dosis STZ (60 mg / kg) kunnen be getest voor thermische hyperalgesie in de 3 e week na het begin van diabetes 11. Het is belangrijk op te merken dat niet alle diabetische ratten PDN te ontwikkelen. Maar kunnen dieren die wel ontwikkelen hyperalgesie (~ 50%) gemakkelijk worden geïdentificeerd. Sterker nog, hun TNTs zijn lager dan normaal *. * U TNTs van STZ diabetes ratten bepalen uitgangspunt plaat temperatuur van 15 ° C in plaats van 28 ° C toegepast. De reden voor deze verandering is dat de meeste diabetische dieren PDN naar verwachting hyperalgetische 2,11. Daarom zullen ze lager dan normaal schadelijke warmte drempels (bijv. &lt;45 ° C). <ol><li> Een diabetische rat wordt in de waarneming kamer boven de testapparatuur. Het dier mag wennen aan het plaatoppervlak tot het dier toont een comfortabele gedrag. Opmerking: Typisch, een diabetische rat toont niet veel van het normaal gedrag. Diabetische ratten zijn meestal hypoactieve, lusteloos, vaak metbeperkte bewegingen en langzame verzorging. Het is zeldzaam om te observeren klassement naar de deksel van de observatie kamer. Na enkele minuten, kan diabetische ratten rustig te blijven in een hoek van de kamer met casual snuiven van de omgeving. </li><li> Zodra de diabetische dier is comfortabel in de observatie kamer, wordt de plaat opgewarmd als in stap 2.3 de diabetische rat kan nocifensive gedrag waarbij het gaat om achterpoten / voor-poot vertonen. Dit gebeurt meestal op niet-schadelijke plaat temperaturen (bijv. &lt;45 ° C), of na het niet meer dan 5 minuten in de kamer met de 6 ° C / min temperatuurstijging. Opmerking: De nocifensive reactie van een jonge volwassene diabetische rat verschilt niet van dat van een normale rat. Echter, de laagste temperatuur doet denken aan dergelijk gedrag aanzienlijk verlaagd. </li><li> Zie Stap 2.4 </li><li> Het gemiddelde van meer dan drie drempelwaarden in de dag van het experiment, uitgedrukt in ° C ± SEM wordt beschouwd schadelijke warmte drempel van de diabetic dier. Opmerking: Een vergelijkbaar paradigma aan die verklaarde voor de normale of diabetische ratten kunnen worden gevolgd om de thermische anti-nocifensive effect van analgetica op warmte drempelwaarden vast te stellen. </li></ol> 4. Testen Analgesie De anti-nociceptieve eigenschappen van geneesmiddelen (bijvoorbeeld analgetica) alsmede de bepaling van farmacologische parameters zoals de minimale effectieve dosis kunnen gemakkelijk worden verkregen door de stappen hierboven. Het is voorspeld dat de juiste dosis van een pijnstiller toegediend aan ratten / muizen aanzienlijk zou hun TNTs toenemen. Dit is vooral gevoelig bij dieren met een thermische hyperalgesie 3. Echter, vertekening van de interpretatie van de resultaten te voorkomen moet de onderzoekers bij de gedragsobservatie van een dier groep niet bekend of de hoogte als de dieren waren behandeld of niet. Verder kan drugs worden geïnjecteerd door de waarnemer worden bereid door een onderzoeker en gelabeldA, B, C, enz. Dosering voorzien in een afdruk, waarin dosis per geïdentificeerd dier. Afhankelijk van het geneesmiddel dat wordt getest, kan verschillende doses van een mogelijke pijnstillende worden toegediend aan normale of diabetische dieren 5-15 minuten voor gedragstesten. Goede controles moeten worden opgenomen (dat wil zeggen, met dezelfde leeftijd dieren ingespoten met het voertuig alleen en / of diabetische ratten zonder PDN) en getest met behulp van identieke omstandigheden (bijvoorbeeld dezelfde begintemperatuur van de plaat). Chronische effecten van geneesmiddelen kunnen ook worden getest. 5. Representatieve resultaten De laagste temperatuur plaat oproept nocifensive reacties in een van beide achterste poot van jonge volwassen normale niet-behandelde ratten of muizen werden bepaald volgende stappen 2-1 tot 2-6. Zoals getoond in figuur 1 TNT normale jongvolwassen ratten en muizen 47,2 ± 0,2 ° C en 47,5 ± 0,5 ° C, respectievelijk. We hebben obseGraco behoudt geen significante dagelijkse variatie van individu TNTs (figuur 2A), noch significante veranderingen van TNTs tussen individuen van dezelfde leeftijd (Figuur 2B). TNT verschillen door geslacht werden niet waargenomen (niet afgebeeld). TNTs van jonge volwassen STZ-diabetische ratten werden bepaald op een vergelijkbare manier als voor normale ratten (Stappen 3,1 tot 3,3). Nochtans, werd het uitgangspunt plaat de temperatuur ingesteld op 15 ° C in plaats van 28 ° C. De nocifensive gedrag van STZ diabetes ratten worden ten minste drie keer individueel en in een dagelijkse wijze vanaf elf dagen na STZ injectie. Zoals getoond in figuur 3 is een aanzienlijke daling (p &lt;0,01) TNT van STZ-diabetische ratten wordt duidelijk twee weken na STZ injectie. De gemiddelde TNT van de STZ-diabetische ratten was 45,6 ± 0,1 ° C (n = 16, gepoolde waarden van dag 14-23). Diabetische ratten vertonen significant lager TNT dan normal werden beschouwd als PDN te hebben. Deze ratten werden gebruikt om de acute anti-nociceptieve eigenschappen van een analgetisch (verbinding A) te testen. TNTs werden bepaald in normale en diabetische ratten geïnjecteerd met een enkelvoudige dosis van de verbinding of vehikel vijf minuten voor de proef. Zoals getoond in figuur 4, een intraperitoneale toediening van de verbinding aanzienlijk verhoogd TNTs van diabetische ratten opzichte van ratten behandeld met vehiculum (45,6 ° C vs 47,6 ° C, respectievelijk). De anti-nocifensive effect van verbinding A werd ook waargenomen bij normale ratten, hoewel significant (p &lt;0,01), was het minder uitgesproken (47,4 ° C vs 48,0 ° C, respectievelijk). <img alt="Figuur 1" src="/files/ftp_upload/3785/3785fig1.jpg" /> Figuur 1. Bepaling van de TNTs van normale jonge volwassen ratten of muizen: De TNTs van jonge volwassen ratten (p21-24) of muizen (P20-21) werden getest in het iHPAM de volgende stappen beschreven above. Een totaal van 12 ratten en 25 muizen werden getest. De metingen werden uitgevoerd gedurende verscheidene dagen de resultaten werden samengevoegd. Resultaten worden uitgedrukt als gemiddelde ± SEM. De minimale en maximale waarden TNT opgenomen in deze ratten 46,2 ° C en 48,6 ° C respectievelijk. In het geval van muizen, de maximum en minimum TNT waarden 48,8 ° C en 44,9 ° C, respectievelijk. <img alt="Figuur 2" src="/files/ftp_upload/3785/3785fig2.jpg" /> Figuur 2. Leeftijd afhankelijkheid van TNTs bij ratten en muizen: A) uitgezet de TNTs vier normale ratten (n = 4) van 21 dagen oud bepaald ten minste driemaal daags gedurende 5 dagen B) TNTs muizen nestgenoten eenmaal bepaald op de aangegeven. leeftijden. Het aantal op elkaar bepaling punt is het aantal gebruikte nestgenoten. <img alt="Figuur 3" src="/files/ftp_upload/3785/3785fig3.jpg" /> Figuur 3. Diabetische ratten geworden hyperalgetische 3 hebben weEKS na het ontstaan ​​van diabetes: TNTs van zes (n = 6) leeftijd afgestemd jong volwassene STZ-diabetische ratten werden bepaald elke dag vanaf 11 dagen na de inductie van diabetes. Getoond worden dagelijks TNT gemiddelden (gemiddeld ± SEM). Diabetische TNTs bepaald tussen 11-13 dagen na de STZ injectie waren binnen het normale bereik (rode lijn). Twee weken na injectie STZ TNTs aanzienlijk verlaagd tot 45,1 ± 0,4 ° C (p &lt;0,05). <img alt="Figuur 4" src="/files/ftp_upload/3785/3785fig4.jpg" /> Figuur 4. Acute anti-nocifensive effecten van verbinding B in STZ-diabetische ratten. Jonge volwassen normale ratten (blauwe groep n = 12) en leeftijd afgestemd STZ-diabetische hyperalgetische ratten (groen groep n = 6) werden getest in het iHPAM na intraperitoneale injectie van het voertuig (donkere balken) of verbinding A (licht balken). De gemiddelde ± SEM TNT voor elke behandeling (vehiculumcontrolegroep of verbinding A behandelde) getoond. Sterretjes geven statistische verschillen(P &lt;0,05).

<ol><li>Baron, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Peripheral+neuropathic+pain%3A+From+mechanisms+to+symptoms%5BTitle%5D)+AND+%22Clin.+J.+Pain%22%5BJournal%5D)">Peripheral neuropathic pain: From mechanisms to symptoms.</a> Clin. J. Pain. 16, S12-S20 (2000).</li>
<li>Calcutt, N. A., Jorge, M. C., Yaksh, T. L., Chaplan, S. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tactile+allodynia+and+formalin+hyperalgesia+in+streptozotocin-diabetic+rats%3A+Effects+of+insulin%2C+aldose+reductase+inhibition+and+lidocaine%5BTitle%5D)+AND+%22Pain%22%5BJournal%5D)">Tactile allodynia and formalin hyperalgesia in streptozotocin-diabetic rats: Effects of insulin, aldose reductase inhibition and lidocaine.</a> Pain. 68, 293-299 (1996).</li>
<li>Bolcskei, K., Petho, G., Szolcsanyi, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Noxious+heat+threshold+measured+with+slowly+increasing+temperatures%3A+Novel+rat+thermal+hyperalgesia+models%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+Mol.+Biol%22%5BJournal%5D)">Noxious heat threshold measured with slowly increasing temperatures: Novel rat thermal hyperalgesia models.</a> Methods Mol. Biol. 617, 57-66 (2010).</li>
<li>Ankier, S. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((New+hot+plate+tests+to+quantify+antinociceptive+and+narcotic+antagonist+activities%5BTitle%5D)+AND+%22Eur.+J.+Pharmacol%22%5BJournal%5D)">New hot plate tests to quantify antinociceptive and narcotic antagonist activities.</a> Eur. J. Pharmacol. 27, 1-4 (1974).</li>
<li>Almasi, R., Petho, G., Bolcskei, K., Szolcsanyi, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effect+of+resiniferatoxin+on+the+noxious+heat+threshold+temperature+in+the+rat%3A+A+novel+heat+allodynia+model+sensitive+to+analgesics%5BTitle%5D)+AND+%22Br.+J.+Pharmacol%22%5BJournal%5D)">Effect of resiniferatoxin on the noxious heat threshold temperature in the rat: A novel heat allodynia model sensitive to analgesics.</a> Br. J. Pharmacol. 139, 49-58 (2003).</li>
<li>Bolcskei, K., Horvath, D., Szolcsanyi, J., Petho, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Heat+injury-induced+drop+of+the+noxious+heat+threshold+measured+with+an+increasing-temperature+water+bath%3A+A+novel+rat+thermal+hyperalgesia+model%5BTitle%5D)+AND+%22Eur.+J.+Pharmacol%22%5BJournal%5D)">Heat injury-induced drop of the noxious heat threshold measured with an increasing-temperature water bath: A novel rat thermal hyperalgesia model.</a> Eur. J. Pharmacol. 564, 80-87 (2007).</li>
<li>Chesler, E. J., Wilson, S. G., Lariviere, W. R., Rodriguez-Zas, S. L., Mogil, J. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Identification+and+ranking+of+genetic+and+laboratory+environment+factors+influencing+a+behavioral+trait%2C+thermal+nociception%2C+via+computational+analysis+of+a+large+data+archive%5BTitle%5D)+AND+%22Neurosci.+Biobehav.+Rev%22%5BJournal%5D)">Identification and ranking of genetic and laboratory environment factors influencing a behavioral trait, thermal nociception, via computational analysis of a large data archive.</a> Neurosci. Biobehav. Rev. 26, 907-923 (2002).</li>
<li>Langford, D. J., Crager, S. E., Shehzad, Z., Smith, S. B., Sotocinal, S. G., Levenstadt, J. S., Chanda, M. L., Levitin, D. J., Mogil, J. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Social+modulation+of+pain+as+evidence+for+empathy+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Social modulation of pain as evidence for empathy in mice.</a> Science. 312, 1967-1970 (2006).</li>
<li>Hunt, S. P., Koltzenburg, M. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aHunt%2C+SP+%22The+neurobiology+of+pain%22">The neurobiology of pain</a>. , Oxford University Press. New York. (2005).</li>
<li>Willis, W. D. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aWillis%2C+WD+%22The+pain+system+%3A+The+neural+basis+of+nociceptive+transmission+in+the+mammalian+nervous+system%22">The pain system : The neural basis of nociceptive transmission in the mammalian nervous system</a>. , Basel, New York, Karger. (1985).</li>
<li>Calcutt, N. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aCalcutt%2C+N+%22Modeling+diabetic+sensory+neuropathy+in+rats.+In%3A+Methods+in+molecular+medicine.+Pain+research%3A+Methods+and+protocols%22">Modeling diabetic sensory neuropathy in rats. In: Methods in molecular medicine. Pain research: Methods and protocols</a>. , Humana Press. Totowa, N.J. (2004).</li>
<li>Bars, D. L. e, Gozariu, M., Cadden, S. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Animal+models+of+nociception%5BTitle%5D)+AND+%22Pharmacol.+Rev%22%5BJournal%5D)">Animal models of nociception.</a> Pharmacol. Rev. 53, 597-652 (2001).</li>
<li>Shaikh, A. S., Somani, R. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Animal+models+and+biomarkers+of+neuropathy+in+diabetic+rodents%5BTitle%5D)+AND+%22Indian+J.+Pharmacol%22%5BJournal%5D)">Animal models and biomarkers of neuropathy in diabetic rodents.</a> Indian J. Pharmacol. 42, 129-134 (2010).</li>
<li>Hargreaves, K., Dubner, R., Brown, F., Flores, C., Joris, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+new+and+sensitive+method+for+measuring+thermal+nociception+in+cutaneous+hyperalgesia%5BTitle%5D)+AND+%22Pain%22%5BJournal%5D)">A new and sensitive method for measuring thermal nociception in cutaneous hyperalgesia.</a> Pain. 32, 77-88 (1988).</li>
<li>Hardy, J. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Method+for+the+rapid+measurement+of+skin+temperature+during+exposure+to+intense+thermal+radiation%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Appl.+Physiol%22%5BJournal%5D)">Method for the rapid measurement of skin temperature during exposure to intense thermal radiation.</a> J. Appl. Physiol. 5, 559-566 (1953).</li>
<li>Sumino, R., Dubner, R., Starkman, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Responses+of+small+myelinated+%26quot%3Bwarm%26quot%3B+fibers+to+noxious+heat+stimuli+applied+to+the+monkey%27s+face%5BTitle%5D)+AND+%22Brain+Res%22%5BJournal%5D)">Responses of small myelinated &quot;warm&quot; fibers to noxious heat stimuli applied to the monkey's face.</a> Brain Res. 62, 260-263 (1973).</li>
<li>Hammond, D. L., Ruda, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Developmental+alterations+in+thermal+nociceptive+threshold+and+the+distribution+of+immunoreactive+calcitonin+gene-related+peptide+and+substance+p+after+neonatal+administration+of+capsaicin+in+the+rat%5BTitle%5D)+AND+%22Neurosci.+Lett%22%5BJournal%5D)">Developmental alterations in thermal nociceptive threshold and the distribution of immunoreactive calcitonin gene-related peptide and substance p after neonatal administration of capsaicin in the rat.</a> Neurosci. Lett. 97, 57-62 (1989).</li>
</ol>

We hebben besloten de identiteit van het analgeticum gebruikt in deze experimenten onthullen. Een deel van de resultaten hier is gepresenteerd in de 71 ste Scientific Sessions van de American Diabetes Association (San Diego, CA) en de 47 e jaarvergadering van de Europese Vereniging voor de Studie van Diabetes (Lissabon, Portugal).

Net zoals bij de klassieke hete plaat test om thermische hyperalgesie 4,13 kwantificeren, de bepaling van nociceptie hier beschreven staat een snelle en betrouwbare manier om nocifensive gedrag in ratten en muizen te kwantificeren. In tegenstelling tot klassieke test, de incrementele kookplaat methode is niet-invasief en vrijwel zonder stress. Hoewel weerhouden een aantal is nodig om de test uit te voeren (dat wil zeggen, moet het dier in de observatie kamer), zijn ratten of muizen gewend zijn aan ve...

<table border="1"><tbody><tr><td> Naam </td><td> Vennootschap </td><td> Catalogusnummer </td></tr><tr><td> Incremental Hot-Plate Analgesie Meter </td><td> IITC Inc Life Science </td><td> Part # PE34 </td></tr><tr><td> Soft Series 8 </td><td> IITC Inc Life Science </td><td> Part # Series8 </td></tr><tr><td> Streptozotocine </td><td> Calbiochem </td><td> 572201 </td></tr></tbody></table>

snelle bepaling van de thermische nociceptieve drempel in diabetische ratten

Rapid Determination of the Thermal Nociceptive Threshold in Diabetic Rats

Pijnlijke diabetische neuropathie (PDN) wordt gekenmerkt door hyperalgesie dat wil zeggen, een verhoogde gevoeligheid voor schadelijke stimulus, en allodynie dat wil zeggen, overgevoeligheid voor normaal onschadelijke stimuli 1. Hyperalgesie en allodynie zijn onderzocht in verschillende diermodellen van diabetes mellitus 2. Echter, zoals door Bölcskei et al., bepaling van de &quot;pijn&quot; in diermodellen uitdagend vanwege de subjectieve aard 3. Bovendien is de traditionele methoden gebruikt om gedragsreacties aan schadelijke thermische stimuli te bepalen meestal ontbreekt de reproduceerbaarheid en de farmacologische gevoeligheid 3. Bijvoorbeeld door het gebruik van de hot-plate methode van Ankier 4, krimp, is de handel nemen en / of likken van een van beide achterpoten en / of voorpoten gekwantificeerd als reflex latency bij constante hoge thermische stimuli (52-55 ° C). Echter, dieren die hyperalgesisch aan thermische stimulus niet reproduceerbaar verschil te bestaan ​​in herflex latencies het gebruik van deze supra-drempel temperaturen 3,5. Aangezien de recent beschreven werkwijze Bölcskei et al.. 6 de hier beschreven maakt een snelle, gevoelige en reproduceerbare bepaling van thermische nociceptieve drempelwaarden (TNTs) bij muizen en ratten. De methode gebruikt langzaam toenemende thermische stimulus meestal op de huid van de muis / rat voetzool. De methode is bijzonder gevoelig voor anti-nociceptie bestuderen tijdens hyperalgetische staten zoals PDN. De procedures balg beschreven zijn gebaseerd op die welke gepubliceerd in detail Almasi et al. 5 en Bölcskei et al. 3. De hier beschreven procedures zijn goedgekeurd het Laboratory Animal Care en gebruik Comite (LACUC), Wright State University.

Hier wordt beschreven snel betrouwbare en eenvoudige procedure om de laagste temperatuur waarbij ratten of muizen tonen nocifensive gedrag bepalen,<em&gt; Dat wil zeggen</em&gt; De<em&gt; Thermische nociceptieve drempel</em&gt; (TNT). Deze methode is een langzaam toenemende thermische stimulus zodat een nauwkeurige en reproduceerbare schatting van TNTs minimale eventuele stress bij de dieren.

Snelle bepaling van de thermische Nociceptieve drempel in diabetische ratten

Pijnlijke diabetische neuropathie (PDN) wordt gekenmerkt door hyperalgesie, oftewel een verhoogde gevoeligheid voor nociceptieve prikkels, en allodynie, oftewel overgevoeligheid ...

Het algemene doel van deze procedure is om de thermische nociceptieve drempel van controle- en diabetische ratten te bepalen. De eerste stap is om een dier op de incrementele hitteplaat en analgesiemeter te plaatsen. Vervolgens wordt de temperatuur van de hitteplaat geleidelijk verhoogd terwijl het oppervlak opwarmt.Het dier wordt geobserveerd op tekenen van afwerend gedrag. Zodra dit gedrag wordt waargenomen, wordt de verhitting gestopt en wordt de temperatuur van de plaat op dat moment geregistreerd. Uiteindelijk kunnen resultaten worden verkregen die veranderingen in de thermische nociceptieve drempel laten zien bij dieren die behandeld zijn met analgetica of die lijden aan pijnlijke diabetische neuropathie.Het belangrijkste voordeel van deze techniek ten opzichte van bestaande methoden zoals de hitteplaat, die gewoonlijk op een temperatuur boven de drempelwaarde wordt ingesteld, is dat onze methode de temperatuur van de plaat geleidelijk verhoogt, waardoor een nauwkeurige bepaling van de thermische nociceptieve drempel mogelijk is. De thermische nociceptieve drempel of TNT wordt bepaald met de incremental hot plate analgesia meter, of IH pam. De componenten van dit systeem omvatten een observatiekamer van plexiglas, een temperatuurgecontroleerde aluminium plaat, een toetsenbord voor het programmeren en een voetschakelaar voor bediening van de eenheid op afstand.Gegevens worden verzameld met behulp van aangepaste software op een nabijgelegen computer. Alternatief kunnen hardcopy-versies worden afgedrukt via een seriële poort op de unit. Plaats een spiegel achter de plexiglas kamer om de zichtbaarheid van het gedrag van het dier te vergroten.Stel vervolgens de gewenste opwarmingssnelheden in, evenals de initiële stand-by- en uiteindelijke uitschakeltemperatuur. Bedien de voetpedaal om het systeem te starten en te stoppen. Bevestig dat de initiële stand-by- en uiteindelijke uitschakeltemperatuur zijn geregistreerd, evenals de tijd die nodig is om de eindtemperatuur te bereiken.Indien gewenst kan de experimentator het systeem op zichzelf testen door de hand terug te trekken van de metalen plaat op het moment dat pijn wordt waargenomen. De perceptie mag geen schade aan de huid veroorzaken, noch later enig ongemak veroorzaken.Begin de acclimatisatie de avond voorafgaand aan de test door de kooien op de bench te plaatsen waar het onderzoek zal plaatsvinden. Schakel twee uur voor aanvang van de test de IH-pan in om de dieren te laten wennen aan het achtergrondgeluid van de unit.Op dit punt kan het systeem worden opgezet en getest zoals eerder is aangetoond. Nadat de dieren aan de omgeving zijn gewend geraakt, plaatst u voorzichtig een rat in de plexiglaaskamer op het warme oppervlak. Laat het dier gedurende enkele minuten de kamer verkennen.Start de test. Zodra het dier comfortabel lijkt om aan de proef te beginnen, druk dan op de voetbediening om de plaat te gaan verwarmen. Observeer het gedrag van het dier terwijl de plaat opwarmt.Over het algemeen zullen personen die nieuw zijn met deze methode moeite hebben, omdat de identificatie van massaal offensief gedrag niet altijd eenvoudig is en oefening vereist. Geen enkel offensief gedrag wordt gekenmerkt door het likken, schudden of optillen van een van de achterste poriën. Het is nuttig om op te merken dat het eerste waargenomen gedrag het likken van de vier poriën kan zijn, gevolgd door een reactie van de achterste poriën.Wanneer een zeer storend gedrag wordt waargenomen, druk dan op de voetbediener om de proef te beëindigen en breng het dier terug naar zijn thuiskooi. De temperatuur die dit gedrag oproept, wordt beschouwd als de thermische nociceptieve drempelwaarde of TNT van het controledier. De unit wordt gereinigd en de test wordt herhaald voor het volgende dier.Hier zijn de thermische nociceptieve drempelwaarden van normale jonge volwassen ratten en muizen. De gegevens hier tonen aan dat de TNT van ratten niet varieerde wanneer ze over een periode van vier dagen werden getest. Op dezelfde manier was de TNT van muizen consistent tussen verschillende leeftijden.In dit voorbeeld werden de TN TS van jonge volwassen STZ-diabetische ratten herhaaldelijk gemeten. Er is een gestage afname van de thermische nociceptieve drempels zichtbaar vanaf twee weken na de inductie van diabetes. Hier werd de IH pam gebruikt om de acute antinociceptieve eigenschappen van de analgesicumverbinding te testen.A, de verbinding produceerde een mild analgetisch effect bij controledieren in vergelijking met dieren die het vehikel ontvingen. Echter, de analgesie was meer uitgesproken bij diabetische dieren die de verbinding ontvingen in vergelijking met de vehikelcontroles. Tijdens het uitvoeren van deze procedure is het zeer belangrijk om het gedrag van het dier continu te monitoren, met name de reacties die optreden nabij de cept T van het dier.

rapid-determination-thermal-nociceptive-threshold-diabetic

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Neurowetenschap

Algoritmes het beoordelen van warmte en mechanische pijn drempels in experimenteel ontstoken huid van de menselijke proefpersonen worden weergegeven. De twee pijn het testen van paradigma's onafhankelijk van elkaar nociceptieve verwerking van onderzoeken door de twee grote perifere zenuw fiber populaties verzenden van pijn, dat wil zeggen, niet-gemyeliniseerde C-vezels en kleine gemyeliniseerde A-delta vezels.

Het bepalen van warmte en mechanische pijngrens in ontstoken huid van proefpersonen

Door de eenvoud van de ingreep en de robuuste gedrag dat eruit voortkomt, chronische vernauwing van de nervus ischiadicus is een van de vooraanstaande dierlijke modellen van neuropathische pijn. Binnen 24 uur na een operatie, wordt de pijn overgevoeligheid vastgesteld en kan kwantitatief gemeten worden met een von Frey aesthesiometer (mechanische test) en plantaire analgesie meter (thermische test).

Chronische Vernauwing van de nervus ischiadicus en Pijn Overgevoeligheid Testen bij ratten

We beschrijven een protocol bij de ontwikkeling van door opioïden veroorzaakte hyperalgesie en tolerantie in muizen te onderzoeken. Op basis van de meting van thermische en mechanische nociceptieve reacties van naïeve en morfine behandelde dieren, het mogelijk om de toename van gevoeligheid voor pijn (hyperalgesie) kwantificeren afname analgesie (tolerantie) geassocieerd met chronische opiaat toediening.

Beoordeling van de Morfine-geïnduceerde hyperalgesie en analgesietolerantie in Muizen middel van thermische en mechanische Nociceptieve modaliteiten

Dit werk presenteert de methodologie van de toepassing van hoge intensiteit gerichte echografie om te blokkeren van de mogelijkheden van de actie van diabetische neuropathische zenuwen.

Een ultrasone instrument voor de geleiding van de zenuwen blokkeren in diabetische Rat modellen

Verstrekt hier is een protocol dat details stappen om een diermodel van chronische post-ischemie pijn (CPIP) te vestigen. Dit is een goed herkend model nabootsen van humaan complex regionaal pijnsyndroom type-I. Mechanische en thermische overgevoeligheid worden verder geëvalueerd, evenals capsaïcine-geïnduceerde nocifensieve gedrag waargenomen in de CPIP rat model.

Chronische post-ischemie pijn model voor complexe regionale pijnsyndroom type-I bij ratten

De aangepaste chirurgie is een vereenvoudigde methode voor een model voor gespaard zenuwletsel bij muizen of ratten dat slechts één ligatie en één snede vereist om zowel de gemeenschappelijke peroneale als de surale zenuwen te verwonden.

Gemodificeerd model voor gespaard zenuwletselchirurgie van neuropathische pijn bij muizen

Om nieuwe therapeutische interventies te ontwikkelen voor de preventie en het beheer van rugpijn, zijn diermodellen nodig om de mechanismen en effectiviteit van deze therapieën vanuit een translationeel perspectief te onderzoeken. Het huidige protocol beschrijft de BMS-test, een gestandaardiseerde methode om de mechanische gevoeligheid van de rug bij de rat te beoordelen.

Beoordeling van de mechanische gevoeligheid van de rug bij de rat voor mechanistisch onderzoek naar chronische rugpijn

Dit protocol beschrijft de beoordeling van mechanische overgevoeligheid in een rattenmodel van neuropathische orofaciale pijn met behulp van een op operant gebaseerd orofaciaal pijnbeoordelingsapparaat.

Beoordeling van door zenuwletsel geïnduceerde mechanische overgevoeligheid bij ratten met behulp van een orofaciale operante pijntest

Partiële heupzenuwligatie induceert langdurige chronische neuropathische pijn, gekenmerkt door overdreven reacties op thermische en mechanische stimuli. Dit muismodel van neuropathische pijn wordt vaak gebruikt om innovatieve therapieën voor pijnbestrijding te bestuderen. Dit artikel beschrijft in detail de chirurgische procedure om de standaardisatie en reproduceerbaarheid te verbeteren.

Partiële heupzenuwligatie: een muismodel van chronische neuropathische pijn om het antinociceptieve effect van nieuwe therapieën te bestuderen

We presenteren een protocol met behulp van de tuina-manipulatiesimulator om de tuina-therapie "Three-Manipulation and Three-Acupoint" tuina-therapie uit te voeren voor ratten met kleine chronische vernauwingsletsels en evalueren de effectieve pijnstillende tijdstippen van tuina binnen 24 uur door pijnveranderingen te testen door middel van gedragsanalyse en veranderingen in ontstekingsfactorexpressie met behulp van enzymgekoppelde immunosorbenttest.

Kenmerken van pijnveranderingen bij ratten met zenuwbeschadiging binnen 24 uur na eenmalige Tuina-interventie

Recente ontwikkelingen in pijnonderzoek benadrukken het potentieel van fotoneuromodulatie met behulp van groene lichtgevende diodes (GLED) als niet-medicamenteuze behandeling. GLED moduleert pijnpaden en biedt effectieve pijnverlichting. Dit artikel heeft tot doel de GLED-blootstellingsprotocollen te standaardiseren en te verfijnen, de consistentie tussen onderzoeken te verbeteren en de klinische toepassing van deze therapie te bevorderen.

Optimalisatie van fotoneuromodulatietechnieken om de rol van groen lichtgevende diodes bij pijnbestrijding te evalueren

Leer een betrouwbare methode om de thermische nociceptieve drempel te bepalen bij ratten met diabetes. Deze techniek gebruikt een incrementele warme plaat voor nauwkeurige pijnmeting met minimale stress.

Snelle bepaling van de thermische Nociceptieve drempel in diabetische ratten

Meer video's verkennen