Name: Methoden om Assay Drosophila Gedrag (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2012-03-07T13:00:00.000+00:00
Duration: 9 min 14 s
Description: Leer methoden om Drosophila motorische en coördinatiegedragingen te onderzoeken met crawling-, ring- en courtship-assays. Deze technieken helpen bij het detecteren van vroege locomotieve defecten en neurodegeneratieve ziekten.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

playerTrialDesktop

We willen Astha Maltare bedanken voor het genereren van de larven kruipen gegevens. We willen graag Dr Nicholas Lanson Jr bedanken voor het geven van zijn commentaar op het manuscript. Dit werk werd ondersteund door het Robert Packard Center voor ALS aan de Johns Hopkins (tot UBP) en de Amyotrofische Lateraal Sclerose Vereniging (UBP) en R01MH083689 van de National Institutes of Mental Health (CDN).

A. larven kruipen Assay 1. Larven Collectie <ol><li> Opzetten van een 8 ounce fles vliegen (10-15 mannen + 10-15 vrouwtjes). </li><li> Laten we vliegen eitjes leggen gedurende 24 uur, dan is duidelijk fles vliegen. (Breng de volwassenen in een nieuwe fles en indien nodig herhalen). </li><li> Incubeer fles voor 3-4 dagen of tot de derde instar larven zichtbaar zijn. </li><li> Voeg 50 - 100 ml van 20% sucrose aan de fles met larven en laat zitten voor 20 minuten. Larven zal drijven naar de top. </li><li> Verzamel larven met behulp van een 25 ml serologische pipet met de punt afgesneden, en plaats in een maas mand. </li><li> Was larven in de gaasmand twee maal met gedeïoniseerd H2O De larven zijn nu klaar voor de experimenten. </li></ol> 2. De larven te behandelen met geneesmiddelen <ol><li> Gebruik een borstel om het gewenste aantal larven te vervoeren naar een 5 ml bekerglas met een oplossing van 5% sacharose + drug. </li><li> Laat larven ten minste 15 minuten.</li><li> Giet drugs behandelde larven in een maas mand en spoelen. Ze zijn nu klaar voor gebruik. </li></ol> 3. Beweegwijzer Assay (meten van het totale afgelegde afstand of het lichaam muur contracties) <ol><li> Gebruik een borstel om de individuele larve te vervoeren naar een: <ol><li> 15 cm Petri schaal die 2% agarose (eerder gestort en uitharden) over grafiek in een 0,2 cm 2 raster. <ol><li> Tel het aantal rasterlijnen gekruist in 1 minuut. </li></ol></li><li> Wel van een glazen dissectie schotel met een verdunde gist pasta oplossing. <ol><li> Tel peristaltiek samentrekkingen (full anterior naar posterior beweging = 1 contractie) in een minuut met inachtneming van onder een dissectie microscoop. </li></ol></li></ol></li><li> Herhaal dit tot het gewenste aantal larven zijn geteld. </li></ol> B. Snelle iteratieve negatieve geotaxis (RING) Protocol Deze test werd oorspronkelijk gedebeschreven door Gargano et al. 5. <ol><li> Verzamel nieuw opgedoken volwassen mannelijke vliegen onder lichte CO 2 verdoving en plaats in een standaard flesje met voeding (of food + drugs). </li><li> Houd vliegen bij kamertemperatuur (op het tafelblad. ~ 22 ° C) gedurende 2-3 dagen te zorgen voor herstel van CO 2 (en de accumulatie van steady-state concentraties indien van toepassing). </li><li> Zet ongeveer 25 vliegen zonder verlamming aan geprepareerde polystyreen flacons. </li><li> Monteer injectieflacons met vliegen in de ring apparaat (figuur 1). </li><li> Laat vliegen te wennen aan het milieu, ongestoord, gedurende 15-20 minuten. </li><li> Gedurende deze tijd plaats digitale camera ~ 1 m in de voorkant van het apparaat (op een platform, indien nodig naar het midden van de lens af te stemmen op halve hoogte van de injectieflacons), focus en zoom van de camera op het apparaat, en een timer instellen zodat 3,0 seconde. </li><li> Voorzichtig pak de RING apparaat met uw linkerhand, zodat er geen disturb de vliegen, en houd de timer met uw rechterhand. </li><li> Sterk tik de inrichting op het oppervlak van de bank driemaal, zodat de kraan hard genoeg is om neerslaan alle vliegen de bodem van de flesjes. </li><li> Tegelijk met voltooiing van de derde kraan, start de 3 seconden countdown timer. </li><li> Op drie seconden een foto maken. </li><li> Stel de timer voor 1 minuut en te starten. Gedurende deze tijd opnieuw in te stellen van de camera en de focus op het apparaat, en stel een ander kanaal van de timer voor drie seconden. </li><li> Na 1 minuut, herhaalt u stap 1.7-1.10 </li><li> Na een totaal van 5-6 proeven, afbeeldingen uploaden naar een computer en je favoriete image viewer te openen, en scoor de gemiddelde hoogte geklommen voor elke flacon. </li><li> Uitvoeren van statistische analyses op de verschillende groepen het vergelijken van de gemiddelde hoogte klom. </li></ol> C. hofmakerij en Mating Assay <ol><li> Het eerste wat in de ochtend, duidelijke goed-producerende flessen van FLIes worden gebruikt. </li><li> In de loop van de dag (om de 3-4 uur), het verzamelen van nieuw opgedoken seksueel naïeve mannen en vrouwen: <ol><li> Individueel Plaats mannen in flesjes of tubes met een medium. </li><li> Samen Plaats 5-6 vrouwen per flacon / tube. </li><li> Isoleer verzameld vliegen bij 25 ° C tot 12 uur licht / donker gedurende 5 dagen. </li><li> Breng een vrouwtje in de kamer van een paring wiel. </li><li> Breng een mannetje in de kamer van een paring wiel. </li><li> Let paar onder een dissectie microscoop voor de volgende gedragingen: <ol><li> Oriëntatie (de mannelijke oriënteert de richting van de vrouw) </li><li> Tappen (de mannelijke tikt de vrouw) </li><li> Wing song (de mannelijke verlengt en trilt een vleugel) </li><li> Likken (de man likt de vrouwelijke geslachtsorganen) </li><li> Curling (het mannetje krult haar buik, onder zich) </li><li> Geslachtsdaad poging (Curling activiteit tijdens een poging om het vrouwelijke te monteren) </li></ol></li></ol></li><li> Neem voor 10 minuten of tot succes paring merkt het tijdstip waarop elke probleem treedt (latentie), de totale tijd aan baltsgedrag tot paring (de courtship index te berekenen) en het aantal paren die goed uitvoeren van een bepaalde gedrag ( frequentie). 100% van de wild-type paren zullen over het algemeen paren binnen 5 minuten. </li><li> Berekenen een verkering index (CI) door de tijd doorgebracht in hofmakerij gedeeld door de totale tijd tot copulatie. Voor de wild-type paren dit varieert meestal tussen de 0.6-0.8. </li></ol> D. representatieve resultaten Crawling test Normaal wild-type larve zal dwalen ~ 3 cm / minuut en een tentoonstellingsruimte ~ 40-50 lichaamswand contracties in een minuut. We hebben onlangs een Drosophila model van FUS / TLS-gerelateerde amyotrofe laterale sclerose die larven kruipen gebrek, verminderde levensduur en volwassen klimmen impairment 6 toont. We gerichte expressie of wild type en mutante vormen van FUS / TLS aan de motorische neuronen (OK-371-GAL4 driver) en voerde een larvale kruipen test. Zoals hieronder wordt weergegeven, wild-type larven kruipen tot 12 cm, terwijl de expressie van wild-type FUS een daling van de larven kruipen mogelijkheid om ongeveer 6 cm. Dieren de uiting van de ALS-veroorzakende mutatie R521C in FUS / TLS aantonen dat er een zeer ernstige verslechtering van hun trillende beweging (figuur 1), kruipen slechts ongeveer 1 cm / minuut. Negatieve geotaxis RING-test Young wild-type volwassen vliegen dient een gemiddelde klimhoogte van 4-5 cm ~ in een 3 tweede periode (de tijd kan worden ingesteld van 3 seconden tot verschillende stammen of activiteit geschikt een bepaalde gemiddelde grootte definiëren voor een bepaalde stam / behandeling). Vliegen die nog op de bodem krijgen een waarde van 0. Het is niet aangeraden om meer dan 25 vliegen per flacon te gebruiken omdat het dan wordt het moeilijk om de locatie van elke individuele fly om de hoogte te meten te bepalen. No desensibilisatie is waargenomen bij tot aan de 6 opeenvolgende proeven afstand van elkaar een minuut van elkaar die we hebben toegepast. Het is kritisch NIET het polystyreen testen flesjes in deze test opnieuw na de eerste reeksen van gegevens worden verzameld door nieuwe vliegen geplaatst in gebruik flacons niet in dezelfde mate klimmen in vers flesjes. <img alt="Figuur 1" src="/files/ftp_upload/3795/3795fig1.jpg" /> Figuur 1. Setup voor de RING Assay. De digitale camera wordt geplaatst ~ 1 m in de voorkant van het apparaat met vliegen in de polystyreen flacons, focus en zoom van de camera op het apparaat, en een timer instellen tot 3,0 seconden. <img alt="Figuur 2" src="/files/ftp_upload/3795/3795fig2.jpg" /> Figuur 2. Vertegenwoordiger van de gegevens van de larven kruipen test met behulp van vliegen ectopisch tot expressie UAS-FUS WT, en UAS-FUS R521C onder de controle van een motor neuron driver (OK371-GAL4). <pclass = &quot;jove_content&quot;&gt;

<ol><li>Pandey, U. B., Nichols, C. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Human+disease+models+in+Drosophila+melanogaster+and+the+role+of+the+fly+in+therapeutic+drug+discovery%5BTitle%5D)+AND+%22Pharmacol.+Rev%22%5BJournal%5D)">Human disease models in Drosophila melanogaster and the role of the fly in therapeutic drug discovery.</a> Pharmacol. Rev. 63 (2), 411-436 (2011).</li>
<li>Feany, M. B., Bender, W. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+Drosophila+model+of+Parkinson%27s+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Mar%22%5BJournal%5D)">A Drosophila model of Parkinson's disease.</a> Nature Mar. 23 (6776), 394-398 (2000).</li>
<li>Auluck, P. K., Bonini, N. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pharmacological+prevention+of+Parkinson+disease+in+Drosophila%5BTitle%5D)+AND+%22Nat.+Med%22%5BJournal%5D)">Pharmacological prevention of Parkinson disease in Drosophila.</a> Nat. Med. 8 (11), 1185-1186 (2000).</li>
<li>Whitworth, A. J., Theodore, D. A., Greene, J. C., Benes, H., Wes, P. D., Pallanck, L. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Increased+glutathione+Stransferase+activity+rescues+dopaminergic+neuron+loss+in+a+Drosophila+model+of+Parkinson%27s+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Proc.+Natl.+Acad.+Sci.+U.S.A%22%5BJournal%5D)">Increased glutathione Stransferase activity rescues dopaminergic neuron loss in a Drosophila model of Parkinson's disease.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 102 (22), 8024-8029 (2005).</li>
<li>Gargano, J. W., Martin, I., Bhandari, P., Grotewiel, M. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Rapid+iterative+negative+geotaxis+%28RING%29%3A+a+new+method+for+assessing+age-related+locomotor+decline+in+Drosophila%5BTitle%5D)+AND+%22Exp.+Gerontol%22%5BJournal%5D)">Rapid iterative negative geotaxis (RING): a new method for assessing age-related locomotor decline in Drosophila.</a> Exp. Gerontol. 40 (5), 386-395 (2005).</li>
<li>Lanson, N. A., Maltare, A., King, H., Smith, R., Kim, J. H., Taylor, J. P., Lloyd, T. E., Pandey, U. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+Drosophila+model+of+FUS-related+neurodegeneration+reveals+genetic+interaction+between+FUS+and+TDP-43%5BTitle%5D)+AND+%22Hum.+Mol.+Genet%22%5BJournal%5D)">A Drosophila model of FUS-related neurodegeneration reveals genetic interaction between FUS and TDP-43.</a> Hum. Mol. Genet. 20 (13), 2510-2523 (2011).</li>
<li>Batlevi, Y., Martin, D. N., Pandey, U. B., Simon, C. R., Powers, C. M., Taylor, J. P., Baehrecke, E. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dynein+light+chain+1+is+required+for+autophagy%2C+protein+clearance%2C+and+cell+death+in+Drosophila%5BTitle%5D)+AND+%22Proc.+Natl.+Acad.+Sci.+U.S.A%22%5BJournal%5D)">Dynein light chain 1 is required for autophagy, protein clearance, and cell death in Drosophila.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 107 (2), 742-747 (2010).</li>
<li>Sang, T. K., Chang, H. Y., Lawless, G. M., Ratnaparkhi, A., Mee, L., Ackerson, L. C., Maidment, N. T., Krantz, D. E., Jackson, G. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+Drosophila+model+of+mutant+human+parkin-induced+toxicity+demonstrates+selective+loss+of+dopaminergic+neurons+and+dependence+on+cellular+dopamine%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Neurosci%22%5BJournal%5D)">A Drosophila model of mutant human parkin-induced toxicity demonstrates selective loss of dopaminergic neurons and dependence on cellular dopamine.</a> J. Neurosci. 27 (5), 981-992 (2007).</li>
<li>Stacey, S. M., Muraro, N. I., Peco, E., Labbé, A., Thomas, G. B., Baines, R. A., van Meyel, D. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Drosophila+glial+glutamate+transporter+Eaat1+is+regulated+by+fringe-mediated+notch+signaling+and+is+essential+for+larval+locomotion%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Drosophila glial glutamate transporter Eaat1 is regulated by fringe-mediated notch signaling and is essential for larval locomotion.</a> J. Neurosci. 30 (43), 14446-14457 (2010).</li>
<li>Repnikova, E., Koles, K., Nakamura, M., Pitts, J., Li, H., Ambavane, A., Zoran, M. J., Panin, V. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Sialyltransferase+regulates+nervous+system+function+in+Drosophila%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Sialyltransferase regulates nervous system function in Drosophila.</a> J. Neurosci. 30 (18), 6466-6476 (2010).</li>
<li>Repnikova, E., Koles, K., Nakamura, M., Pitts, J., Li, H., Ambavane, A., Zoran, M. J., Panin, V. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Sialyltransferase+regulates+nervous+system+function+in+Drosophila%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Sialyltransferase regulates nervous system function in Drosophila.</a> J. Neurosci. 30 (18), 6466-6476 (2010).</li>
<li>Nedelsky, N. B., Pennuto, M., Smith, R. B., Palazzolo, I., Moore, J., Nie, Z., Neale, G., Taylor, J. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Native+functions+of+the+androgen+receptor+are+essential+to+pathogenesis+in+a+Drosophila+model+of+spinobulbar+muscular+atrophy%5BTitle%5D)+AND+%22Neuron%22%5BJournal%5D)">Native functions of the androgen receptor are essential to pathogenesis in a Drosophila model of spinobulbar muscular atrophy.</a> Neuron. 67 (6), 936-952 (2010).</li>
<li>Lorenzo, D. N., Li, M. G., Mische, S. E., Armbrust, K. R., Ranum, L. P., Hays, T. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Spectrin+mutations+that+cause+spinocerebellar+ataxia+type+5+impair+axonal+transport+and+induce+neurodegeneration+in+Drosophila%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">Spectrin mutations that cause spinocerebellar ataxia type 5 impair axonal transport and induce neurodegeneration in Drosophila.</a> J. Cell Biol. 189 (1), 143-158 (2010).</li>
<li>Wang, J. W., Brent, J. R., Tomlinson, A., Shneider, N. A., McCabe, B. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+ALS-associated+proteins+FUS+and+TDP-43+function+together+to+affect+Drosophila+locomotion+and+life+span%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Clin.+Invest%22%5BJournal%5D)">The ALS-associated proteins FUS and TDP-43 function together to affect Drosophila locomotion and life span.</a> J. Clin. Invest. , (2011).</li>
<li>Choi, J. K., Jeon, Y. C., Lee, D. W., Oh, J. M., Lee, H. P., Jeong, B. H., Carp, R. I., Koh, Y. H., Kim, Y. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+Drosophila+model+of+GSS+syndrome+suggests+defects+in+active+zones+are+responsible+for+pathogenesis+of+GSS+syndrome%5BTitle%5D)+AND+%22Hum.+Mol.+Genet%22%5BJournal%5D)">A Drosophila model of GSS syndrome suggests defects in active zones are responsible for pathogenesis of GSS syndrome.</a> Hum. Mol. Genet. 19 (22), 4474-4489 (2010).</li>
<li>Ruan, H., Wu, C. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Social+interaction-mediated+lifespan+extension+of+Drosophila+Cu%2FZn+superoxide+dismutase+mutants%5BTitle%5D)+AND+%22Proc.+Natl.+Acad.+Sci.+U.S.A%22%5BJournal%5D)">Social interaction-mediated lifespan extension of Drosophila Cu/Zn superoxide dismutase mutants.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 105 (21), (2008).</li>
<li>Slawson, J. B., Kim, E. Z., Griffith, L. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((High-resolution+video+tracking+of+locomotion+in+adult+Drosophila+melanogaster%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Vis.+Exp%22%5BJournal%5D)">High-resolution video tracking of locomotion in adult Drosophila melanogaster.</a> J. Vis. Exp. (24), (2009).</li>
<li>Becnel, J., Johnson, O., Luo, J., Nässel, D. R., Nichols, C. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+serotonin+5-HT7+Dro+receptor+is+expressed+in+the+brain+of+Drosophila%2C+and+is+essential+for+normal+courtship+and+mating%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">The serotonin 5-HT7 Dro receptor is expressed in the brain of Drosophila, and is essential for normal courtship and mating.</a> PLoS One. 6 (6), e20800(2011).</li>
<li>Johnson, O., Becnel, J., Nichols, C. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Serotonin+5-HT%282%29+and+5-HT%281A%29-like+receptors+differentially+modulate+aggressive+behaviors+in+Drosophila+melanoga-+ster%5BTitle%5D)+AND+%22Neuroscience%22%5BJournal%5D)">Serotonin 5-HT(2) and 5-HT(1A)-like receptors differentially modulate aggressive behaviors in Drosophila melanoga- ster.</a> Neuroscience. 158 (2), 1292-1300 (2009).</li>
<li>Bastock, M., Manning, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+Courtship+of+Drosophila+Melanogaster%5BTitle%5D)+AND+%22Behaviour%22%5BJournal%5D)">The Courtship of Drosophila Melanogaster.</a> Behaviour. , 85-111 (1955).</li>
<li>Greenspan, R. J., Ferveur, J. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Courtship+in+Drosophila%5BTitle%5D)+AND+%22Annu.+Rev.+Genet%22%5BJournal%5D)">Courtship in Drosophila.</a> Annu. Rev. Genet. 34, 205-232 (2000).</li>
<li>Villella, A., Hall, J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neurogenetics+of+courtship+and+mating+in+Drosophila%5BTitle%5D)+AND+%22Adv.+Genet%22%5BJournal%5D)">Neurogenetics of courtship and mating in Drosophila.</a> Adv. Genet. 62, 67-184 (2008).</li>
</ol>

Wij hebben niets te onthullen.

Drosophila gedrag wordt strak gereguleerd door genetische en omgevingsfactoren. Wij, en anderen, in het verleden gebruikte de testen hier beschreven om gegevens te verzamelen om genen die verband houden met het gedrag en de menselijke neurodegeneratieve ziekten gemodelleerd in Drosophila 5-19 vliegen te onderzoeken. Voor de kruipende test, zorgvuldige selectie van de 3 e instar larven is een cruciale stap. Als de behandeling met een geneesmiddel, duurt 10-15 minuten (of meer afhan...

<table border="1"><tbody><tr><td> Naam van het serum </td><td> Vennootschap </td><td> Catalogusnummer </td></tr><tr><td> Sucrose </td><td> Fisher Scientific </td><td> S5-500 </td></tr><tr><td> Agarose </td><td> Invitrogen </td><td> 16500-500 </td></tr><tr><td> 6 oz Drosophila fles </td><td> Genesee Wetenschappelijk </td><td> 32-130 </td></tr><tr><td> Paint Brush (# 1) </td><td> Ted Pella, Inc </td><td> 11859 </td></tr><tr><td> Fly voedingsbestanddelen </td><td></td><td></td></tr><tr><td> Maïsmeel </td><td> Fisher Scientific </td><td> NC9109741 </td></tr><tr><td> Agar-agar </td><td> Genesee Wetenschappelijk </td><td> 66-104 </td></tr><tr><td> Melasse </td><td> Fisher Scientific </td><td> NC9349176 </td></tr><tr><td> Propionzuur </td><td> Acros </td><td> 14930-0010 </td></tr><tr><td> Tegosept </td><td> Top </td><td> 20-258 </td></tr><tr><td> Ethanol </td><td> VisserWetenschappelijk </td><td> BP2818-4 </td></tr><tr><td> Gist </td><td> Genesee Wetenschappelijk </td><td> 62-107 </td></tr></tbody></table>

methoden om assay drosophila gedrag

Methods to Assay Drosophila Behavior

Drosophila melanogaster, de fruitvlieg, is gebruikt om moleculaire mechanismen van een breed scala van menselijke ziekten zoals kanker, hart-en vaatziekten en diverse neurologische ziekten 1 te bestuderen. We hebben geoptimaliseerd eenvoudig en robuust gedrag assays voor het bepalen van larvale motoriek, volwassen klimvermogen (RING-test), en verkering gedrag van Drosophila. Deze gedrags-tests zijn breed toepasbaar voor het bestuderen van de rol van genetische en omgevingsfactoren op vlieg gedrag. Larven kruipen mogelijkheid betrouwbare wijze kan worden gebruikt voor het bepalen vroeg stadium veranderingen in de kruipende capaciteiten van Drosophila larven en ook voor de behandeling effect van geneesmiddelen of ziekte bij de mens genen (in transgene vliegen) op hun motoriek. De larven kruipen test wordt meer van toepassing als uitdrukking of afschaffing van een gen veroorzaakt letaliteit in pop of volwassen stadia, als deze vliegen niet overleven tot de volwassenheid, waar ze anders zouden kunnen worden beoordeeld. Deze fundamentele eenssay kan ook worden gebruikt in combinatie met licht en stress extra gedragsreacties onderzoeken Drosophila larven. Baltsgedrag is op grote schaal gebruikt om de genetische basis van seksueel gedrag te onderzoeken, en kan ook worden gebruikt om de activiteit en de coördinatie te onderzoeken, maar ook leren en geheugen. Drosophila baltsgedrag heeft betrekking op de uitwisseling van verschillende zintuiglijke prikkels visuele, auditieve en chemosensory signalen tussen mannen en vrouwen die leiden tot een complexe reeks goed gekarakteriseerde motor gedrag met als hoogtepunt in succesvolle copulatie. Traditionele volwassen klimmen assays (negatieve geotaxis) zijn vervelend, arbeidsintensief en tijdrovend, met aanzienlijke verschillen tussen de verschillende studies 2-4. De snelle iteratieve negatieve geotaxis (RING) test 5 heeft veel voordelen ten opzichte van meer op grote schaal gebruikt protocollen, die een reproduceerbaar, gevoelig, en hoge doorvoer benadering van volwassenen bewegingsapparaat en negatieve geotaxis b kwantificerenehaviors. In de RING-test kunnen verschillende genotypen of behandelingen met medicijnen worden getest gelijktijdig gebruik van grote aantal dieren, met de high-throughput benadering waardoor het meer vatbaar voor screening experimenten.

Drosophila melanogaster is een genetisch en gedragsmatig soepel model systeem dat is gebruikt om de moleculaire en cellulaire basis van een groot aantal belangrijke biologische processen meer dan een eeuw een begrip. Drosophila goed is benut om inzicht te krijgen in de genetische basis van vlieg gedrag.

Methoden om Assay Drosophila Gedrag

*Drosophila melanogaster*, de fruitvlieg, is gebruikt om de moleculaire mechanismen van een breed scala aan menselijke ziekten te bestuderen, zoals kanker, cardiovasculaire...

Het algemene doel van deze procedure is om methoden aan te tonen voor het onderzoeken van het motorisch-sensorisch gedrag en de coördinatie van drosophila. Dit wordt bereikt door eerst de motorische functie van larven te beoordelen met de kruiptest, de motorische functie van volwassenen te beoordelen met de ringtest, en de coördinatie en sensorische vermogens van volwassenen te beoordelen met de hofmakerijtest. Uiteindelijk kan dit panel van gedragstests aantonen hoe genetische en externe factoren, zoals medicijnbehandelingen, de activiteit en coördinatie kunnen beïnvloeden.Intra sophala. Het belangrijkste voordeel van deze assay ten opzichte van bestaande methoden zoals negative geo axis, is dat de ring-assay een hogere doorvoer heeft en gevoeliger is. Deze methode kan helpen bij het beantwoorden van kernvragen binnen het veld van neurodegeneratieve ziekten, zoals de vroege detectie van locomotiedefecten.Deze assay zal worden gedemonstreerd door Dr. Jamie Becknell, postdoc in mijn laboratorium. De larval crawling assay wordt gebruikt om het effect van genetische en omgevingsfactoren op de mobiliteit te meten. Om te beginnen wordt een kruising opgezet met 10 tot 15 mannetjes en 10

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Neurowetenschap

Gedrag assays voor het meten van motorische functies, leren en geheugen capaciteiten...

Het testen van Beweegwijzer, leren en geheugen Tekortkomingen in Drosophila Modellen van Neurodegeneratie

Agressie is een aangeboren gedrag en eerdere vechtervaring beïnvloedt de vechtstrategie en het resultaat van latere gevechten in vliegen. Deze video beschrijft een test die wordt gebruikt om het agressieve gedrag van Drosophilate bestuderen. Het voorbeeldprotocol bevat de test die wordt uitgevoerd in een opstelling die vliegbehandeling elimineert en daarom stress voor de dieren vermindert, wat anders de prestaties van de proefpersonen zou beïnvloeden.

Drosophila Agressietest: een methode om gedragsplasticiteit bij vliegen te testen

In deze video artikel beschrijven we een geautomatiseerde test om het effect van honger of verzadiging op olfactorische afhankelijke voedsel zoekgedrag meten de volwassen fruitvlieg Drosophila melanogaster.

A Single-fly test voor foerageergedrag in Drosophila

Hier beschrijven we een methode voor een snelle en nauwkeurige meting van vliegprestaties in Drosophila, waardoor high-throughput screening.

Een verbeterde methode voor nauwkeurige en snelle meting van Vliegprestaties in<em&gt; Drosophila</em

Hier presenteren we een protocol om de vermijding van gestreste individuen te kwantificeren. Dit paradigma is krachtig maar gebruiksvriendelijk en kan worden gebruikt om de invloed van genen en omgeving op een soort sociale interactie bij Drosophila melanogaster te beoordelen.

Ongecompliceerd Assay voor de kwantificering van Sociale Avoidance in Drosophila melanogaster

Om nieuwe mutaties die de mechanosensatie beïnvloeden te identificeren, ontwierpen we een test die de gedragsreactie op tactiele stimulatie van vliegborsten meet in mutante klonen die gegenereerd zijn door de MARCM-methode. De combinatie van technieken maakt het mogelijk om mechanogevoelige mutaties te identificeren die anders dodelijk zouden zijn.

Een Behavioral Assay voor Mechanosensation van MARCM-gebaseerde klonen in<em&gt; Drosophila melanogaster</em

We beschrijven hier een gedragsopstelling en methode voor gegevensanalyse voor het meten van reukresponsen van maximaal 100 azijnvliegen (Drosophila melanogaster). Dit systeem kan worden gebruikt met enkele of meerdere reukstimuli en is aanpasbaar voor optogenetische activering of het tot zwijgen brengen van neuronale subsetten.

Olfactorische gedrag getest door Computer Tracking Of<em&gt; Drosophila</em&gt; In een vier-kwadrant olfactometer

Het huidige protocol beoordeelt de locomotorische activiteit van Drosophila door de beweging van vliegen in een handgemaakte arena te volgen en te analyseren met behulp van open-source software Fiji, compatibel met plug-ins om pixels van elk frame te segmenteren op basis van high-definition video-opname om parameters van snelheid, afstand, enz. Te berekenen.

Een eenvoudige techniek om locomotorische activiteit in Drosophila te testen

Autisme Spectrum Stoornis (ASS) wordt geassocieerd met verminderd sociaal en communicatief gedrag en het ontstaan van repetitief gedrag. Voor het bestuderen van de onderlinge relatie tussen ASS-genen en gedragsstoornissen in het Drosophila-model , worden in dit artikel vijf gedragsparadigma's beschreven voor het bepalen van sociale afstand, agressie, verkering, verzorging en gewenningsgedrag.

Paradigma's voor gedragsbeoordeling in het Drosophila-model van autismespectrumstoornis

Het protocol presenteert een high-throughput, kosteneffectieve methode voor het beoordelen van neurotoxiciteit in de fruitvlieg door middel van de kwantificering van locomotorische disfunctie als alternatief voor traditionele zoogdiermodellen. Het heeft tot doel de neurotoxische effecten van farmaceutische verbindingen, milieuagentia of genetische modificaties te evalueren met behulp van een gevoelig, reproduceerbaar en ethisch gunstig model.

Gedragsanalyse van locomotorische disfunctie bij Drosophila melanogaster als uitlezing voor neurotoxiciteit

Dit protocol biedt een kader voor het beoordelen van door stress veroorzaakte gedragsveranderingen in Drosophila melanogaster. Door complementaire assays te combineren kunnen we activiteit, verkenning en besluitvorming voor individuele vliegen kwantificeren. De aanpak is flexibel en kan worden aangepast aan een breed scala aan studies die stressbiologie, metabolisme en neurogedragsfunctie onderzoeken.

Multimodale gedragsfenotypering van stress-geïnduceerde depressie-achtige toestanden bij Drosophila melanogaster

Leer methoden om Drosophila motorische en coördinatiegedragingen te onderzoeken met crawling-, ring- en courtship-assays. Deze technieken helpen bij het detecteren van vroege locomotieve defecten en neurodegeneratieve ziekten.

Methoden om Assay Drosophila Gedrag

Meer video's verkennen