Name: Cornea donorweefsel Voorbereiding voor endothelial keratoplasty (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2012-06-12T12:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 37 s
Description: Leer lamellaire hoornvliesweefselvoorbereiding voor endotheliale keratoplastiek met behulp van een microkeratoom. Deze techniek zorgt voor dunner, symmetrischer donorweefsel met minder endotheelcelverlies en betere chirurgische resultaten.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Mede ondersteund door NIH / NEI EY017885 (RMS).

1. Setup: aseptische techniek 11 <ol><li> Zet Laminar Flow Hood (LFH). </li><li> Zet de stikstof gas regeleenheid. Zorg ervoor dat de slang is aangesloten tussen de unit en stikstof tank. Schakel gas op. Gas-instelling moet worden ingesteld tot 50-60 PSI op de regelaar tank. Turbine druk op de eenheid zou moeten lezen 3,3 tot 3,4 Bars. </li><li> Druk op de knop Test. Atmosferische druk in de 700s en pompen 1 en 2 dient beneden 200. Het apparaat piept als het testen is voltooid. Don masker met oogbescherming, voor zover van toepassing, en de dop. Was uw handen en Don niet-steriele handschoenen. Leg steriele kits binnen LFH en open wraps tot steriele veld vast te stellen. </li><li> Plaats een steriele medicijnen beker en een steriele plastic bak met een steriel gaasje naast de gevestigde steriele veld. Giet steriele isopropylalcohol in de geneeskunde kop. Veeg pachymetrie sonde met alcoholdoekje / pad en plaats sonde, punt naar beneden, in de geneeskunde beker. De sonde moet weken in isopropylalcohol voor 10 minuten. Na pachymetrie sonde heeft geweekt gedurende 10 minuten, spoel de sonde met steriel water uit de voorgevulde spuit aan alcohol en plaats sonde te verwijderen in de plastic bak. </li><li> Met behulp van aseptische techniek, open en steriele voorwerpen (messen, steriele handschoenen, en cornea bekijken van kamers) te laten vallen op steriele veld, tenzij al deel uit van de pre-en-klare pakket. </li><li> Haal het hoornvlies weefsel in het behoud media en plaats in LFH (figuur 2). </li><li> Open flacon (s) en gooi het deksel (s) in een geschikt biologisch gevaarlijk stopcontact. Gooi niet-steriele handschoenen. </li><li> Don steriele handschoenen. Plaats voorverpakte plastic bak aan de zijkant van het veld waar Pachymeter bevindt. Sluit de infuuslijn aan kraan en plaats spike einde van de infusie lijn buiten de kap het veiligstellen van de lijn op een zodanige wijze dat de lijn te voorkomen buitenkant van de kap van opnieuw invoeren van de kap en het aanraken van de steriele veld. </li><li> Voer hoornvliesweefsel overdracht. Giet het weefsel en medium in een single beweging, van de bestaande flacon naar een steriele kamer bekijken. Zorg ervoor dat de endotheliale kant te houden. Plaats de dop op de kamer. Houd kamers die weefsel en media op steriele veld. Verwijder de flacon (s) van LFH. Verwijder en gooi steriele handschoenen. </li><li> Spike gebalanceerde zoutoplossing (BSS) fles met infuuslijn. Hang fles steriel BSS ongeveer vier meter van de werkplek oppervlak. </li><li> Open twee paar steriele handschoenen en steriele jurk met een handdoek. </li><li> Voer zes minuten chirurgische scrub en droge handen. </li><li> Trek steriele schort, dan beide paren van steriele handschoenen. </li><li> Open instrument dozen en plaats de inhoud op het steriele veld. </li><li> Doseer 10 tot 20 cc van BSS oplossing in metalen bak of medicijnen beker. Vul steriele pipet met BSS oplossing. Sluit de kraan en infuuslijn aan infusie-poort van de voorste kamer en zo spoelen met BSS dat een kleine hoeveelheid zichtbaar is op de top van de zuiger. </li><li> Positie kunstmatige kamer in LFH optop van gaas. Lagere zuiger door te draaien graft aanscherping ring tegen de klok in. </li></ol> 2. Procedure <ol><li> Met behulp van een tang voorzichtig te vatten hoornvlies door sclerale rand. Open kraan van het systeem spoelen met BSS terwijl zorgvuldig centreren van het hoornvlies op de top van de zuiger met de endotheliale naar beneden. Als er luchtbelletjes zichtbaar zijn onder het hoornvlies, de infusie met de BSS en iets verplaatsen van het hoornvlies om ze te verwijderen. Stop infusie eenmaal luchtbellen worden verwijderd. Controleer of de cornea gecentreerd op de zuiger (figuur 3a). </li><li> Positie voorste kamer deksel op de basis vergrendeling ring zo dat de lipjes van het deksel passen in de open ruimtes op de basis. Slotplaatje in de basis door te draaien met de klok mee deksel 15 °. Hef zuiger omhoog en draai volledig (figuur 3b). </li><li> Met een steriel gehandschoende vinger, aan te raken top van het hoornvlies om ervoor te zorgen dat er voldoende druk om de procedure uit te voeren. </li><li> Controleer pachymetrie door het plaatsen op het oppervlak probe of hoornvlies om de dikte te verkrijgen (Figuur 4). De standaardafwijking moet kleiner zijn dan 10. Zo niet, heroveren meting. Met de steriele handschoen die niet werd gebruikt om de pachymetrie uit te voeren, langs de turbine slang aan op de hand die pachymetrie uitgevoerd en schroef de turbine slang in de controle-eenheid. Laat de assisterende monteur plaat pachymetrie lezen. </li><li> Verwijder verontreinigde handschoenen. </li><li> Met behulp van steriele markering pen, trek je een lijn van 4 mm limbus naar het midden van het hoornvlies (of niet markeren als chirurg geeft de voorkeur aan geen markering). Gebruik pipet vijf druppels BSS bovenop het hoornvlies. </li><li> Tenzij specifieke instructies door de chirurg de 300 pm snijkop worden gebruikt als de voorgesneden pachymetrie meting minder dan 600 um. Als meer dan 600 pm, 350 pm de snijkop worden gebruikt. </li><li> Met draad naar u en het aantal naar boven, laadt mes in rechterkant van microkeratoom hoofd, wees uiteinde eerst, het vermijden van contact wie het mes. </li><li> Houd het hoofd aan elke zijde, draai het hoofd naar turbine. Draai de kunstmatige kamer met de vingers. </li><li> Schroef de turbine op turbine slang. </li><li> Test het blad trilling door te drukken op het vacuüm pedaal een keer, kopje onder de snijkop in de steriel water en de polsslag van de turbine voor 5 seconden. </li><li> Draai zuiger. </li><li> Plaats microkeratoom op de basis met montage bericht en positie om vijf uur. Houd turbine pedaal mes (figuur 5a) oscilleren. </li><li> Met behulp van duim en wijsvinger, houdt microkeratoom halverwege tussen de onderkant en de bovenkant van de turbine. Draai de pols om een ​​glad, zelfs dwars door en over het hoornvlies te maken. Release turbine pedaal en til microkeratoom recht af eenheid. Druk vacuüm pedaal uit te schakelen vacuüm (figuur 5b). </li><li> Don een steriele handschoen en controleer pachymetrie lezing na het hoornvlies is verwijderd door het plaatsen van sonde op de corneale oppervlak van de tweede dikte lezen zijn te verkrijgenzich ervan bewust dat het weefsel is zeer dun en kan gemakkelijk beschadigd raken. Verontreinigde handschoen. Heb helpen technicus record tweede pachymetrie lezen. </li><li> Met behulp van steriele stift plaats een merk op verzoek van de chirurg, op het midden van de perifere rand van het resterende stromale bed in de kunstmatige kamer. Plaats een paar druppels steriel BSS op resterende stromale bed. </li><li> Verwijder de voorste cornea dop van de microkeratoom (Figuur 6) en vervang hem op het hoornvlies voordat u het hoornvlies van kunstmatige voorste kamer. Cap moet worden gericht op het hoornvlies behulp van een perifeer-markering op de kap af te stemmen correct indien van toepassing. Gebruik wattenstaafje speer om de dop voorzichtig te herpositioneren op het hoornvlies. Gebruik verse speer aan een BSS te absorberen onder voorste kap. </li><li> Open kraan, draai kamer ondersteboven en onderste zuiger langzaam genoeg om het hoornvlies te voorkomen vervormen. Unlock basis en laat de druk van de BSS stroom naar de kunstmatige kamer beker te duwen van de basis. Met een pincet, trek eent de cornea rand 9, 12 en drie posities te los van de beker. Eenmaal los, een tang op de 12 uur positie om het hoornvlies te verwijderen. Plaats het hoornvlies in het weergavegebied kamer, endotheliale kant naar boven (figuur 7). Plaats het deksel op de bezichtiging kamer. Verwijder de steriele handschoen. </li><li> Draai het bekijken van kamer deksel. </li><li> Post-cut spleetlamp de evaluatie en de spiegelende microscopie van hoornvlies en registreer uw bevindingen. </li><li> Plaats kamer (s) in de juiste sectie van koelkast. </li><li> Pakket voor het vervoer naar chirurg (figuur 8). </li></ol> 3. Representatieve resultaten Een goede mechanische microkeratoom dissectie van de donor hoornvlies leidt tot een soepele, gelijkmatige lamellaire hoornvlies donorweefsel. Dit blijkt uit een optische coherentie tomografie (OCT) beeld van het hoornvlies in doorsnede (Figuur 9). De laatste achterste hoornvliesweefsel moet zijn van voldoende dikte zoals gemeten door pachymetry. In de afgelopen 6 maanden op de Michigan Eye Bank, de gemiddelde pre-processing dikte van het hoornvlies is 558 micron, en post-processing dikte van de achterste hoornvliesweefsel was 158 micron. Zevenentachtig procent van de microkeratoom-ontleed donorweefsel gemeten tussen 100-200 micron, 10,9% gemeten&gt; 200 micron, en 2,1% gemeten &lt;100 micron. De achterste hoornvliesweefsel moeten behouden hoge endotheelcellen dichtheid (ECD) tot een verbeterde werking van het endotheel te verstrekken aan de transplantatie ontvanger. Specular microscopie wordt gebruikt om ECD te meten. In de afgelopen 6 maanden, alle van de hoornvliesweefsel geacht in aanmerking komen voor endotheliale keratoplasty van de Michigan Eye Bank had een ECD van&gt; 2200 cellen / mm 2. Negenennegentig procent van de voorgesneden DSAEK weefsel had een post-processing ECD&gt; 2400 cellen / mm 2, en 19% had een ECD&gt; 3000 cellen / mm 2. De gemiddelde verandering in pre-tot post-processing ECD was te verwaarlozen met 1,2% (p = 0,0003, twee gepaarde-tailed t-test).Complicaties die kunnen optreden tijdens de procedure zijn: verlies van druk, asymmetrische dissectie, en belangrijke weefsel inspringen (resulterend in corneale endotheelcellen verlies). Onjuiste ontleding kan ook leiden tot weefsel perforatie. <img alt="Figuur 1" src="/files/ftp_upload/3847/3847fig1.jpg" /> Figuur 1. Algemene regeling van hoornvliesweefsel Voorbereiding voor endothelial keratoplasty figuren 1a naar 1e zijn doorsnede representaties van de donor hoornvlies voorbereiding. Figuren 1F aan 1i zijn doorsnede voorstellingen van het hoornvlies de transplantatie ontvanger tijdens DSAEK operatie. <ol class="lalpha"><li> De donor hoornvlies is gemonteerd op een kunstmatige voorste kamer en ontleed met de microkeratoom hoofd. </li><li> Na het weefsel dissectie, de twee lamellen zijn gescheiden, maar de voorste lamellen (cap) wordt geplaatst terug op het bed bleef het hoornvlies voor het transport naar de chirurg. </li><li> In dede operatiekamer, de chirurg maakt gebruik van een trephine naar de centrale hoornvliesweefsel verticaal doorgesneden zowel anterieure en posterieure lamel. </li><li> Na trephine snijden, wordt de perifere donor hoornvlies verwijderd uit het veld. </li><li> De achterste lamel wordt voorzichtig verwijderd uit de voorste lamel met een spatel. De donor achterste lamellen (DSAEK weefsel) vervangt de zieke gedeelte van de ontvanger hoornvlies (1i). </li><li> De patiënt een zieke achterste hoornvlies worden verwijderd. </li><li> De zieke achterste hoornvlies wordt gescoord met een intra-oculaire instrument (reverse Sinsky haak) in een grote cirkel met een diameter. </li><li> Na het scoren van het zieke hoornvlies, wordt de achterste hoornvlies membraan verwijderd. </li><li> De donor achterste lamellen (DSAEK weefsel) wordt geplaatst in het oog van de ontvanger. </li></ol><img alt="Figuur 2" src="/files/ftp_upload/3847/3847fig2.jpg" /> Figuur 2. Hoornvliesweefsel in Media. Hoornvliesweefsel is in het behoud media na harvesting van donor. <img alt="Figuur 3" src="/files/ftp_upload/3847/3847fig3.jpg" /> Figuur 3. Hoornvliesweefsel op Artificial voorste kamer. <ol class="lalpha"><li> Hoornvliesweefsel wordt gemonteerd op de kunstmatige voorste kamer voorafgaande basis borgring of weefsel dissectie. </li><li> Hoornvliesweefsel wordt gemonteerd op kunstmatige voorste kamer met voet borgring afgesloten over het weefsel. </li></ol><img alt="Figuur 4" src="/files/ftp_upload/3847/3847fig4.jpg" /> Figuur 4. Hoornvliesweefsel Dikte te controleren. De dikte van het hoornvlies wordt gecontroleerd met behulp van echografie pachymetrie sonde op het oppervlak van het hoornvlies. <img alt="Figuur 5" src="/files/ftp_upload/3847/3847fig5.jpg" /> Figuur 5. Hoornvliesweefsel Dissection. <ol class="lalpha"><li> Microkeratoom blad wordt geplaatst op de basis met montage bericht en positie om vijf uur. </li><li> Microkeratoomwordt door de cornea lamellaire ontleding maken. </li></ol><img alt="Figuur 6" src="/files/ftp_upload/3847/3847fig6.jpg" /> Figuur 6. Anterior Cap van het hoornvlies na de sectie. De voorste hoornvlies dop is gratis na microkeratoom dissectie is voltooid. <img alt="Figuur 7" src="/files/ftp_upload/3847/3847fig7.jpg" /> Figuur 7. Ontleed Cornea in Weergavevoorkeuren Kamer. Na de sectie is voltooid, het hoornvlies wordt teruggegeven aan de weergave kamer voor transport. <img alt="Figuur 8" src="/files/ftp_upload/3847/3847fig8.jpg" /> Figuur 8. Cornea in verpakkingen voor transport. Het hoornvlies in het weergavegebied kamer wordt vervolgens veilig verpakt voor transport naar de chirurg. <img alt="Figuur 9" src="/files/ftp_upload/3847/3847fig9.jpg" /> Figuur 9. Oktober Verschijning van het hoornvlies. De LGO in hetuiteindelijke ontleed hoornvlies (in doorsnede) blijkt dat de cornea in twee helften verdeeld. De interface is intenser reflecterend dan het omringende weefsel zoals aangegeven door de pijl.

<ol><li>Melles, G. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+surgical+technique+for+posterior+lamellar+keratoplasty%5BTitle%5D)+AND+%22Cornea%22%5BJournal%5D)">A surgical technique for posterior lamellar keratoplasty.</a> Cornea. 17, 618-626 (1998).</li>
<li>Melles, G. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Preliminary+clinical+results+of+posterior+lamellar+keratoplasty+through+a+sclerocorneal+pocket+incision%5BTitle%5D)+AND+%22Ophthal%22%5BJournal%5D)">Preliminary clinical results of posterior lamellar keratoplasty through a sclerocorneal pocket incision.</a> Ophthal. 107, 1850-1856 (2000).</li>
<li>Terry, M. A., Ousley, P. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Replacing+the+endothelium+without+corneal+surface+incisions+or+sutures%3A+the+first+United+States+clinical+series+using+the+deep+lamellar+endothelial+keratoplasty+procedure%5BTitle%5D)+AND+%22Ophthal%22%5BJournal%5D)">Replacing the endothelium without corneal surface incisions or sutures: the first United States clinical series using the deep lamellar endothelial keratoplasty procedure.</a> Ophthal. 110, 755-764 (2003).</li>
<li>Price, F. W., Price, M. O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Descemet%27s+stripping+with+endothelial+keratoplasty+in+50+eyes%3A+a+refractive+neutral+corneal+transplant%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Refract+Surg%22%5BJournal%5D)">Descemet's stripping with endothelial keratoplasty in 50 eyes: a refractive neutral corneal transplant.</a> J. Refract Surg. 21, 339-345 (2005).</li>
<li>Price, M. O., Price, F. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Descemet%27s+stripping+with+endothelial+keratoplasty%3A+comparative+outcomes+with+microkeratome-dissected+and+manually+dissected+donor+tissue%5BTitle%5D)+AND+%22Ophthal%22%5BJournal%5D)">Descemet's stripping with endothelial keratoplasty: comparative outcomes with microkeratome-dissected and manually dissected donor tissue.</a> Ophthal. 113, 1936-1942 (2006).</li>
<li>Bahar, I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Retrospective+contralateral+study+comparing+descemet+stripping+automated+endothelial+keratoplasty+with+penetrating+keratoplasty%5BTitle%5D)+AND+%22Cornea%22%5BJournal%5D)">Retrospective contralateral study comparing descemet stripping automated endothelial keratoplasty with penetrating keratoplasty.</a> Cornea. 28, 485-488 (2009).</li>
<li>Rose, L., Briceno, C. A., Stark, W. J., Gloria, D. G., Jun, A. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Assessment+of+Eye+Bank-Prepared+Posterior+Lamellar+Corneal+Tissue+for+Endothelial+Keratoplasty%5BTitle%5D)+AND+%22Ophthal%22%5BJournal%5D)">Assessment of Eye Bank-Prepared Posterior Lamellar Corneal Tissue for Endothelial Keratoplasty.</a> Ophthal. 115, 279-286 (2008).</li>
<li>Price, M. O., Baig, K. M., Brubaker, J. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((prospective+comparison+of+precut+versus+surgeon-dissected+grafts+for+Descemet+stripping+automated+endothelial+keratoplasty%5BTitle%5D)+AND+%22Am.+J.+Ophthalmol%22%5BJournal%5D)">prospective comparison of precut versus surgeon-dissected grafts for Descemet stripping automated endothelial keratoplasty.</a> Am. J. Ophthalmol. 146, 36-41 (2008).</li>
<li>Chen, E. S., Terry, M. A., Shamie, N., Hoar, K. L., Friend, D. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Precut+tissue+in+Descemet%27s+stripping+automated+endothelial+keratoplasty+donor+characteristics+and+early+postoperative+complications%5BTitle%5D)+AND+%22Ophthalmology%22%5BJournal%5D)">Precut tissue in Descemet's stripping automated endothelial keratoplasty donor characteristics and early postoperative complications.</a> Ophthalmology. 115, 497-502 (2008).</li>
<li>Terry, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Endothelial+Keratoplasty%3A+A+Comparision+of+Complication+Rates+and+Endothelial+Survival+between+Precut+Tissue+and+Surgeon-cut+Tissue+by+a+Single+DSAEK+Surgeon%5BTitle%5D)+AND+%22Trans.+Am.+Ophthalmol.+Soc%22%5BJournal%5D)">Endothelial Keratoplasty: A Comparision of Complication Rates and Endothelial Survival between Precut Tissue and Surgeon-cut Tissue by a Single DSAEK Surgeon.</a> Trans. Am. Ophthalmol. Soc. 107, 184-193 (2009).</li>
<li><a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=%22Reference+document+E1.710+Corneal+Tissue+Preparation+for+Lamellar+Procedures%22">Reference document E1.710 Corneal Tissue Preparation for Lamellar Procedures</a>. , MidWest Eye Banks. 1-5 (2010).</li>
<li><a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=%22Eye+Banking+Statistical+Report%22">Eye Banking Statistical Report</a>. , Bank Association of America. Washington, DC., Eye. 1-5 (2009).</li>
<li>Glasser, D. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tissue+complications+during+endothelial+keratoplasty%5BTitle%5D)+AND+%22Cornea%22%5BJournal%5D)">Tissue complications during endothelial keratoplasty.</a> Cornea. 29, 1428-1429 (2010).</li>
<li>Kelliher, C., Engler, C., Speck, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+comprehensive+analysis+of+eye+bank-prepared+posterior+lamellar+corneal+tissue+for+use+in+endothelial+keratoplasty%5BTitle%5D)+AND+%22Cornea%22%5BJournal%5D)">A comprehensive analysis of eye bank-prepared posterior lamellar corneal tissue for use in endothelial keratoplasty.</a> Cornea. 28, 966-970 (2009).</li>
<li>Price, F. W. Jr <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Precut+tissue+for+Descemet+stripping+automated+endothelial+keratoplasty%5BTitle%5D)+AND+%22Cornea%22%5BJournal%5D)">Precut tissue for Descemet stripping automated endothelial keratoplasty.</a> Cornea. 27, 630-631 (2008).</li>
</ol>

Drs. Woodward en Shtein hebben niets te onthullen. De heer Mavin en de heer Titus zijn medewerkers van Midwest Eye Banken.

De diepste laag van het hoornvlies, het endotheel, houdt de optische helderheid van het hoornvlies door het onderhouden van het hoornvlies uitdroging. Talrijke ziektetoestanden specifiek invloed op de gezondheid en levensvatbaarheid van de cornea-endotheel waaronder dystrofieën, infecties, inflammatoire processen en degeneratie. Tot voor kort hoornvliestransplantatie zieke corneale endothelium vervangen moet volledige dikte transplantatie van het hoornvlies. In het afgelopen decennium, heeft het gemunt op de vervanging van de achterste hoornvlies door een gedeeltelijke dikte hoornvliestransplantatie, zoals DSAEK chirurgie, in staat geweest om hetzelfde doel met een kortere hersteltijd te bereiken. Ongeacht techniek moet getransplanteerde weefsels steeds een gezonde corneale endothelium aan optische helderheid in de getransplanteerde cornea handhaven, daardoor alle weefsel technieken moeten extra maatregelen om het corneale endothelium beschermen. Geautomatiseerde microkeratoom dissectie is op dit moment ee standaard voor hoornvliesweefsel voorbereiding op de endotheliale keratoplasty. Gebruik van de microkeratoom bleek donorweefsel perforatie afnemen en visueel herstel te versnellen ten opzichte van handmatige dissectie 5. Toen DSAEK in eerste instantie werd ingevoerd, sommige chirurgen gekocht microkeratoom apparatuur en uitgevoerd donor lamellaire dissectie in de operatiekamer aan het begin van de operatie. Als het prepareren van weefsels is mislukt, dan zou de operatie moeten geannuleerd worden veroorzaakt ongemak en de kosten voor de patiënt en de chirurg. In 2006 eye banken begonnen met het uitvoeren van microkeratoom dissectie &quot;off site&quot; onder gecontroleerde omstandigheden in het oog bank laboratorium een dag voorafgaand aan de operatie 12. Als het prepareren van weefsels niet in deze setting, is er tijd om een ​​andere dissectie met verse weefsel uit te voeren. Microkeratoom dissectie van donor posterieure lamellaire hoornvlies vereist zacht en nauwkeurige techniek om complicaties te minimaliseren. Het hoornvlies wordt geplaatst Gently de kunstmatige voorkamer (AAC) om schade aan de delicate endotheelcellen te voorkomen. Als het hoornvlies is gemonteerd en uitgelijnd op de AAC, moet de borgring worden geplaatst en aangepast voor een goede afdichting te hoge druk in de kamer te houden en verminderen de kans op weefsel instorting tijdens de microkeratoom dissectie. Om tot een uniforme dissectie te garanderen, moet de microkeratoom kop gedraaid worden in een constante, vloeiende manier. Na dissectie, moet het weefsel weer voorzichtig worden behandeld om endotheelcellen schade te minimaliseren. Verder is het essentieel te bevestigen dat de lamellaire snede gecentreerd en volledig om te waarborgen dat het achterste lamellen zijn geschikt voor gebruik in de chirurgie 13. Hoornvlies donor perforatie is een gevreesde complicatie van deze procedure, het wordt minder vaak met ervaring. Als meerdere perforaties tijdens microkeratome passen, is het belangrijk om meerdere stappen in de procedure. De maïsEA moet goed worden gemonteerd en uitgelijnd op de AAC. Een goede afdichting en hoge druk moet vooraf toestemming te vragen aan microkeratoom pas en gedurende de gehele procedure. Bij gelegenheid resterende bindvlies bestaat op de sclera velg en moet worden ontleed af voorafgaand aan de montage. De microkeratoom mes moet scherp zijn en zonder inkepingen. De juiste microkeratoom hoofd dikte moet worden geselecteerd op basis van de geschatte dikte van het hoornvlies. De microkeratoom hoofd moet goed worden oscillerende voorafgaand aan de pas. Met nog meer problemen met deze techniek, raadpleeg dan de microkeratoom provider om te controleren of alle apparatuur goed werkt. Zelfs als perfect uitgevoerd, zijn er enkele beperkingen aan deze techniek. Microkeratoom hoofden zijn beschikbaar om het hoornvlies weefsel te snijden op verschillende diktes, maar de relatie van microkeratoom hoofd tot de uiteindelijke weefsel dikte is onnauwkeurig met dezelfde kop die een breed scala van de uiteindelijke weefsel diktes7. Daarnaast is een belangrijke leercurve bestaat en complicaties in voorbereiding zijn vaker voor nieuwe gebruikers. Het uitvoeren van de lamellaire dissectie in het oog bank instelling maakt het mogelijk opgeleide technici die deze procedure vele malen per dag om hun techniek te optimaliseren, om zo complicaties als gevolg van onervarenheid. Wijzigingen van de techniek voor microkeratoom-assisted hoornvlies dissectie voor endotheliale keratoplasty bestaan. Sommigen geven de voorkeur aan visco-elastisch materiaal of de cornea opslagmedia in plaats van gebalanceerde zoutoplossing te gebruiken onder het hoornvlies knop op de kunstmatige voorste kamer met de bedoeling van het verstrekken van een betere bescherming van de cornea-endotheel. Er zijn ook variaties in de werkwijze voor het bepalen van de plaats waar de microkeratome insnijding worden gestart. Verschillende oog banken en andere hoornvlies chirurgen kunnen eigen voorkeur hebben over hoe het hoornvlies is gemarkeerd voor de identificatie vande voorste cornea-pet of posterieure lamellaire oriëntatie. Opgemerkt dat de fabrikanten soortgelijke apparatuur aan te brengen die in dit protocol. De bijzondere fabrikant worden gevolgd welke apparatuur wordt gebruikt. Betrouwbare oog bank voorbereiding van ontleed hoornvliesweefsel voor DSAEK operatie is gunstig voor de wijdverspreide acceptatie van deze relatief nieuwe chirurgische techniek. Zodra chirurgen werd vol vertrouwen in het oog van de banken het uitvoeren van de &quot;eerste stap&quot; in hoornvliestransplantatie - namelijk het prepareren van weefsels, tal van praktische beperkingen aan DSAEK werden verlicht. Eye banken in staat zijn geweest om een ​​betrouwbare tred te houden met de vraag naar verwerkte weefsel met veilige, effectieve en tijdige levering van donorweefsel. Hoge kwaliteit DSAEK weefsel kan nu worden besteld en operatiekamer tijd en het prepareren van weefsels complicaties daalde met 9, 14-15. Dit protocol beschrijft de preparatieen van DSAEK enten vanuit het perspectief van het oog van de bank de verwerking van het hoornvlies donorweefsel, maar deze techniek is rechtstreeks van toepassing op chirurgen geïnteresseerd in de voorbereiding van hun eigen lamellaire hoornvlies donorweefsel als die geïnteresseerd is in het uitvoeren van laboratorium-based of klinische studies over lamellaire hoornvlies transplantatie. Toekomstige koers voor het hoornvlies lamellaire voorbereiding zijn onder andere het gebruik van de femtoseconde laser voor tissue verwerking, het creëren van &quot;ultra-dunne&quot; DSAEK hoornvliesweefsel, of de voorbereiding van het hoornvlies endotheel rollen voor de membraan van Descemet endothelial keratoplasty (DMEK) chirurgie. Endothelial keratoplasty is een chirurgische veld in evolutie en de symbiotische relatie tussen het oog bank en het hoornvlies chirurg zal blijven veranderen als chirurgische technieken worden geoptimaliseerd.

<table border="1"><tbody><tr><td> Naam van de Apparatuur </td><td> Vennootschap </td><td> Catalogusnummer </td></tr><tr><td> Microkeratoom </td><td> Moria </td><td> 1021174 </td></tr><tr><td> Kunstmatige voorkamer basis </td><td> Moria </td><td> 19161-562 </td></tr><tr><td> Kunstmatige voorste kamer cap </td><td> Moria </td><td> 19172-220 </td></tr><tr><td> Microkeratoom Head 300 </td><td> Moria </td><td> O304 </td></tr><tr><td> Microkeratoom Head 350 </td><td> Moria </td><td> N791 </td></tr><tr><td> Console </td><td> Moria </td><td> 19360-3482 </td></tr></tbody></table>

cornea donorweefsel voorbereiding voor endothelial keratoplasty

Corneal Donor Tissue Preparation for Endothelial Keratoplasty

In de afgelopen tien jaar hebben hoornvliestransplantatie chirurgische technieken ondergaan revolutionaire veranderingen 1,2. Sinds haar oprichting heeft de traditionele volledige dikte hoornvliestransplantatie is de behandeling uit het oog te herstellen in die beperkt door ziekte van het hoornvlies. Een aantal nadelen aan deze aanpak zijn een hoge mate van postoperatieve astigmatisme, gebrek aan voorspelbare refractieve resultaat, en verstoring van het oogoppervlak. De ontwikkeling van strippen endothelial keratoplasty Descemet (DSEK), het transplanteren van alleen de achterste corneale stroma, Descemet membraan en endotheel, is drastisch veranderd behandeling van het hoornvlies endotheel-en vaatziekten. DSEK wordt uitgevoerd via een kleinere incisie, deze techniek vermijdt &#39;open sky&#39; operatie met zijn kans op bloeding of uitzetting, vermindert de incidentie van postoperatieve wonddehiscentie, vermindert de onvoorspelbare refractieve uitkomsten, en kan verminderen de snelheid van afstoting van getransplanteerde 3-6. ove_content &quot;&gt; In eerste instantie werd het hoornvlies donor posterieure lamellaire dissectie voor DSEK handmatig uitgevoerd 1 resulteert in variabele graft dikte en schade aan het delicate hoornvlies endotheel weefsel tijdens weefsel verwerking. Automated lamellaire dissectie (stripping geautomatiseerde Descemet endothelial keratoplasty, DSAEK) is ontwikkeld om deze aan te pakken kwesties. Geautomatiseerde dissectie maakt gebruik van dezelfde technologie als LASIK hoornvliesflap creatie met een mechanische microkeratoom mes dat helpt om een ​​uniforme en dun weefseltransplantaten voor DSAEK operatie te creëren met een minimum aan het hoornvlies endotheelcellen verlies in weefsel verwerking. Eye banken zijn het verstrekken van volledige dikte van het hoornvlies voor chirurgische transplantatie voor vele jaren. In 2006, oog banken begonnen om methodologieën te ontwikkelen voor het leveren van voorgesneden hoornvliesweefsel voor endotheliale keratoplasty. Met de input van het hoornvlies chirurgen, hebben oog banken over uitgebreide protocollen veilig en effectief voor te bereiden posterieure lamellaire weefsel fof DSAEK operatie. Dit kan preoperatief worden uitgevoerd op het oog bank. Uit onderzoek blijkt er geen significant verschil in termen van de kwaliteit van het weefsel 7 of resultaten bij patiënten 8,9 met behulp van eye bank voorgesneden weefsel ten opzichte van chirurg-en-klare weefsel voor DSAEK chirurgie. Voor de meeste hoornvlies chirurgen, de beschikbaarheid van voorgesneden DSAEK hoornvliesweefsel bespaart tijd en geld 10, en vermindert de stress van het uitvoeren van de donor hoornvlies dissectie in de operatiekamer. Mede als gevolg van het vermogen van het oog banken van hoge kwaliteit posterior lamellaire hoornvlies in een tijdige wijze, is DSAEK uitgegroeid tot de standaard van zorg voor de chirurgische behandeling van het hoornvlies endotheel-en vaatziekten. De procedure die we beschrijven is de voorbereiding van de posterieure lamellaire hoornvlies op het oog bank voor transplantatie in DSAEK chirurgie (figuur 1).

Endotheliale hoornvliestransplantatie is een chirurgische techniek voor de behandeling van posterieure hoornvlies ziekten. Mechanische microkeratoom dissectie van het weefsel resultaten voor te bereiden in dunnere, meer symmetrische enten met minder endotheelcellen verlies en betere resultaten. Dissecties kunnen worden uitgevoerd op het oog bank voorafgaand aan de cornea transplantatie.

Cornea donorweefsel Voorbereiding voor endothelial keratoplasty

In de afgelopen tien jaar hebben chirurgische technieken voor hoornvliestransplantatie revolutionaire veranderingen ondergaan1,2. Sinds het begin van de traditionele volledige ...

Het algemene doel van deze procedure is om consistent lamellaire corneaaltransplantaten te produceren die geschikt zijn voor transplantatie. Dit wordt bereikt door eerst een steriel veld in de laminaire flowkast in te richten. Vervolgens wordt het hoornvlies vastgezet in een kunstmatige voorste oogkamer.Vervolgens wordt een microkeratome gebruikt om een gelijkmatige snede door en over het hoornvlies te maken. De laatste stap is het zorgvuldig overbrengen van het hoornvlies vanuit de kunstmatige voorste oogkamer naar het bewaarmedium. Uiteindelijk wordt de succesvolle voorbereiding van het lamellaire transplantaat geverifieerd via spleetlamponderzoek van het hoornvlies en speculaire microscopie van de endotheelcellen.Het belangrijkste voordeel van deze techniek ten opzichte van bestaande methoden, zoals penetrerende keratoplastiek, is dat bij DSEC alleen het posterieure deel van het hoornvlies wordt vervangen, wat een operatieve ingreep via een kleine incisie mogelijk maakt met minder hechtingen, een sneller herstel en verbeterde refractieve resultaten. Een visuele demonstratie van deze methode is cruciaal. De stappen voor de lamellaire dissectie bij endotheliale keratoplastiek zijn moeilijk aan te leren.Precisie en zorg zijn vereist bij het snijden van het weefsel om gezond hoornvliesweefsel te behouden. Begin met het inschakelen van het stikstofgas in de laminaire flowkap op 50 tot 60 PSI. De turbinedruk op de eenheid moet 3,3 tot 3,4 bar aangeven.Zorg ervoor dat de druk op de Moria-console voor pomp één en twee in de zevenhonderden ligt. De druk moet onder de 200 PSI zijn. Bereid met behulp van aseptische techniek een steriel veld voor met geopende gesteriliseerde kits en het donorcorneaweefsel; zorg ervoor dat de pachymetrie-sonde is gesteriliseerd en is gereinigd met isopropanol.Verwijder vervolgens de inhoud uit de steriele tray, sluit de infusielijn aan op de stopkraan en leid het uiteinde met de spike buiten de zuurkast. Leg de infusielijn neer en verwijder de steriele tray. Spike daarna een fles gebalanceerde zoutoplossing en hang deze op ongeveer vier voet afstand van het werkgebied.Voer nu een chirurgische handdesinfectie van zes minuten uit en droog de handen af met een steriele handdoek. Trek in de steriele zone een steriele jas aan en trek twee paar steriele handschoenen aan. Open de instrumentendoosjes en plaats de inhoud op het steriele veld.Giet 10 tot 20 cc BSS in een metalen kom of medicijnbeker en vul een steriele pipet. Verbind met deze BSS de stopkraan en de infusielijn met de infusiepoort van de voorste kamer en spoel deze door met BSS. Stop met spoelen zodra de BSS bovenop de zuiger zichtbaar wordt.Plaats nu de kunstmatige kamer op steriel gaas en laat de zuiger zakken door de ring voor het vastzetten van het transplantaat met een pincet ongeveer vijf millimeter tegen de klok in te draaien. Centreer het hoornvlies bovenop de zuiger met de endotheelzijde naar beneden en spoel het systeem met BSS tot er geen luchtbellen meer onder het hoornvlies zitten. Verplaats het hoornvlies indien nodig voorzichtig.Plaats nu de afdekking van de voorste kamer in de open ruimtes op de vergrendelring van de basis en vergrendel deze met een kleine draai van 15 graden met de klok mee. Til vervolgens de zuiger op en draai de kamer met een steriele, handschoen-bedekte vinger volledig vast aan de basis. Raak de bovenkant van het hoornvlies aan om te controleren of er voldoende druk is om de procedure uit te voeren.Plaats nu de pachymetrie-probe op het oppervlak van het hoornvlies en laat een assistent de meting noteren. Als de standaarddeviatie meer dan 10 micron bedraagt, dient de meting opnieuw te worden uitgevoerd met een steriel gehandschoende hand. Geef de turbineslang door aan de andere hand en schroef de turbineslang in de besturingseenheid.Nadat de besmette handschoenen zijn weggegooid, plaatst u enkele druppels BSS op het hoornvlies, tenzij de chirurg anders aangeeft. Selecteer anders een snijblad op basis van de dikte van het hoornvlies, waarbij de draad naar u toe wijst en het nummer naar boven gericht is. Plaats het blad met de punt eerst in de rechterzijde van de microkeratomekop.Vermijd altijd contact met het blad dat de kop aan elke zijde vasthoudt. Schroef het op de turbine en schroef de turbine op de turbineslang. Test de oscillatie van het blad door eenmaal op het vacuümpedaal te drukken terwijl de snijkop zich in BSS bevindt, en laat de turbine vijf seconden pulseren.Draai de zuiger nu handvast aan. Monteer vervolgens de microkeratoom op de basis bij de paal en positioneer deze op vijf uur. Druk daarna op het turbinepedaal en houd dit ingedrukt om het mes te laten oscilleren.Houd de microkeratome met uw wijsvinger en duim vast, halverwege de basis en de bovenkant van de turbine. Maak met een draai van de pols een gelijkmatige, vloeiende snede door en over het hoornvlies. Zorg ervoor dat de passage van de microkeratome soepel en gelijkmatig verloopt door een constante snelheid aan te houden; als dit niet gebeurt, kan dit leiden tot een ongelijkmatige dikte van het transplantaat.Laat het turbinepedaal los en til de microkeratoom recht omhoog van de unit af. Schakel vervolgens de vacuümpomp uit. Trek een steriele handschoen aan en controleer met hulp van een assistent de pachymetrie-meting opnieuw, waarbij u er rekening mee houdt dat het weefsel zeer dun is en gemakkelijk beschadigd kan raken.Plaats vervolgens een paar druppels steriele BSS op het resterende stromale bed. Plaats daarna de anterieure kap in de kamer terug op het hoornvlies. Gebruik een wattenstaafje om de kap te centreren aan de hand van de beschikbare markeringen en om eventuele BSS onder de anterieure kap te absorberen.Open nu de stopkraan, draai de kamer zijwaarts en laat de zuiger langzaam genoeg zakken om te voorkomen dat het hoornvlies vervormt. Ontgrendel de basis en laat de druk van de BSS-stroom de kunstmatige kamercup aandrukken om het hoornvlies los te maken van de cup. Gebruik een pincet om voorzichtig aan de rand te trekken op de posities van negen, twaalf en drie uur.Zodra het hoornvlies is losgemaakt, pakt u de rand op de 12-uurpositie vast en brengt u het hoornvlies voorzichtig over naar de kijkkamer met de endotheliale zijde naar boven. Sluit vervolgens de kijkkamer. Laat de dop langzaam loskomen van de voorste kamer.Dit zorgt ervoor dat het hoornvlies niet inklapt, wat schade aan het endotheel zou kunnen veroorzaken. Voer tot slot een evaluatie met een spleetlamp en een speculaire microscopie-onderzoek van het hoornvlies uit. Koel vervolgens de kamers en verpak het hoornvlies voor transport naar de chirurg.Een correcte mechanische microkeratomdissectie van het donorhoornvlies resulteert in een glad, uniform lamellair donorhoornvlies; over zes maanden aan opnames was de gemiddelde dikte van het hoornvlies vóór de bewerking 558 microns en de dikte van het posterieure hoornvliesweefsel na de bewerking 158 microns. Het posterieure hoornvliesweefsel moet een hoge endotheelceldichtheid behouden om een verbeterde endotheelfunctie aan de transplantatieontvanger te bieden. Dit is in de afgelopen zes maanden gemeten met speculaire microscopie.Al het hoornvliesweefsel dat in aanmerking kwam voor endotheliale keratoplastiek had meer dan 2 200 endotheelcellen per vierkante millimeter. De gemiddelde verandering in ECD van vóór naar na de verwerking was verwaarloosbaar met 1,2%. Na het bekijken van deze video zou u een goed begrip moeten hebben van hoe u LAM-weefsel voor dacrycystorhinostomie voorbereidt. Eenmaal beheerst, kan deze techniek in 20 minuten worden uitgevoerd indien deze correct wordt toegepast.

corneal-donor-tissue-preparation-for-endothelial-keratoplasty

Research

JoVE Journal

Medicine

Geneeskunde

De paper beschrijft een vereenvoudigde techniek om accijnzen hoornvlies en het netvlies weefsels uithalen van de oculaire bol van de menselijke postmortale donoren. De techniek die hier beschreven zal helpen om accijnzen goede kwaliteit weefsels worden gebruikt voor transplantatie, chirurgisch of wetenschappelijke doeleinden zonder deze te beschadigen andere weefsels van het oculair wereld.

Een vereenvoudigde methode voor<em&gt; In situ</em&gt; Excisie van het hoornvlies en het verwijderen van de ingewanden van retinaal weefsel van Human Ocular Globe

Muizen zijn gebruikt als een model voor het bestuderen van vele vormen van transplantatie, inclusief hoornvliestransplantatie.  We beschrijven in dit rapport een muismodel voor zowel acute als late-term hoornvliestransplantatie.

Muizen hoornvliestransplantatie: een model om de meest voorkomende vorm van een orgaantransplantatie Bestudeer

Endotheliale keratoplastiek is een chirurgische techniek die voortdurend evolueert als ontwikkelingen leiden tot transplantatie van dunnere transplantaten met elkaar successie 1. Hier presenteren we een techniek voor gecontroleerde handmatige weefsel dissectie om veilige en reproduceerbare scheiding van endotheel en Descemet membranen van donor corneoscleral knoppen voor transplantatie 2 mogelijk te maken.

Hoornvlies donorweefsel Voorbereiding voor Descemet Endothelial Keratoplastie

Er wordt een volledig laserprocedure voorgesteld in de endotheeltransplantatie. De chirurgische techniek is gebaseerd op het gebruik van een femtosecondelaser om het donorweefsel voor te bereiden. Vervolgens wordt de laserlastechniek gebruikt om het donorendotheel op de juiste positie te bevestigen.

Een &quot;All-laser&quot; Endothelial Transplant

Een voorbeeld van adenovirale gentherapie in humane diabetische orgaan-gecultiveerde hoornvliezen wordt gepresenteerd met als doel de normalisatie van vertraagde wondgenezing en een duidelijk verminderde expressie van epitheliale stamcelmarkers in deze hoornvliezen. Het beschrijft ook de optimalisering van dit proces in stamcel-verrijkte limbale epitheelculturen.

Adenovirale Gentherapie voor Diabetische keratopathie: Effecten op wondgenezing en Stem Cell Marker Expressie in Human Organ-gekweekte Corneas en Limbale epitheelcellen

Dit protocol beschrijft een nieuwe driedimensionale in vitro model, waar hoornvlies stromale cellen en gedifferentieerde neuronale cellen samen worden gekweekt om te helpen bij het onderzoek en het begrijpen van de interacties van de twee celtypes.

Hoornvlies weefselengineering: Een In Vitro Model van de interacties die stromale-zenuwen van het hoornvlies, menselijke

We beschrijven het gebruik van full-field optische coherentiemicroscopie als een methode voor een hoogwaardige beoordeling van corneadonorstroma. Dit protocol kan worden gebruikt om kenmerken te identificeren die wijzen op gezondheid of ziekte, en is gericht op het verbeteren van de screening en selectie van donorweefsels, en dus de resultaten van keratoplastiek.

Full-field optische coherentiemicroscopie voor histologie-achtige analyse van stromale kenmerken in hoornvliestransplantaten

Hier wordt een stap-voor-stap protocol voor de bereiding en de teelt van de corneale knoppen van het varkens gesplitst. Aangezien dit organo-typisch gecultiveerde orgel cultuur model de celsterfte binnen 15 dagen weergeeft, vergelijkbaar met de menselijke donor cornea's, vertegenwoordigt het het eerste model dat langdurige teelt van niet-humane cornea's toestaat zonder toxische dextran toe te voegen.

Een porcine Corneale endotheliale orgel cultuur model met behulp van splitsen Corneale knoppen

Hier presenteren we een protocol om hoornvliesendodelialcellen (CEC) los te koppelen van het membraan (DM) van Descemet met behulp van een neodymium:YAG (Nd:YAG) laser als ex vivo ziektemodel voor bullous keratopathie (BK).

Ontwikkeling van een niet-invasieve, laser-assisted experimenteel model van hoornvlies endotheel celverlies

Dit protocol beschrijft de kritieke stappen die nodig zijn om hoornvliesendotheliale celculturen uit explants van menselijk of schapenweefsel vast te stellen en te kweken. Er wordt ook een methode gepresenteerd voor het subculturen van hoornvliescellen op membranous biomaterialen.

Groei van menselijke en schapen hoornvlies endotheliale cellagen op biomateriële membranen

Descemet's Stripping Only is een experimentele procedure waarbij patiënten met centrale cornea guttae als gevolg van Fuchs Endothelial Corneal Dystrophy het membraan van Descemet laten strippen voor perifere cellen om de endotheellaag te regenereren. We presenteren een nieuwe methodologie die DSO simuleert in dystrofische menselijke hoornvliezen ex vivo met versnelde genezing gestimuleerd door eFGF1 (NM141).

Een menselijk hoornvliesorgaancultuurmodel van Descemet's strippen alleen met versnelde genezing gestimuleerd door gemanipuleerde fibroblastgroeifactor 1

Leer lamellaire hoornvliesweefselvoorbereiding voor endotheliale keratoplastiek met behulp van een microkeratoom. Deze techniek zorgt voor dunner, symmetrischer donorweefsel met minder endotheelcelverlies en betere chirurgische resultaten.

Cornea donorweefsel Voorbereiding voor endothelial keratoplasty

Meer video's verkennen