Collectie Protocol for Human Pancreas
May 23rd, 2012
Deze video toont een dissectie procedure voor de verwerking van de menselijke pancreas in meerdere opslagformaten. Anatomische oriëntatie wordt gedurende de gehele pancreas regio's definitie van regionale eilandje samenstelling en dichtheid mogelijk te maken.
Het algemene doel van deze procedure is om het menselijke pancreas op een manier te disseceren die de anatomische oriëntatie behoudt. Dit wordt bereikt door het verwijderen van het duodenum en de milt uit het pancreas, en vervolgens het verwijderen van overtollig vet en bloedvaten van het pancreas. De tweede stap is om de voorste oppervlakte met blauwe inkt en de achterste oppervlakte met zwarte inkt te beschilderen.
Vervolgens wordt het pancreas in drie regio's verdeeld. Elke regio wordt dan dwars in gelijke plakken gesneden en op paraffine cassettes geplaatst, OCT mallen of verder gehakt en in flesjes geplaatst. Uiteindelijk worden monsters verzameld uit alle drie de regio's van het pancreas, terwijl de juiste anatomische oriëntatie voor toekomstige analyse wordt gehandhaafd.
Deze methode kan helpen bij het beantwoorden van belangrijke vragen in type één diabetes onderzoek, zoals de mechanismen die ten grondslag liggen aan verlies van bètacellenmassa of -functie, en de aard van immuuncelaanval. Visuele demonstratie van de pancreasverwerkingsmethode is cruciaal, aangezien het behouden van de in vivo oriëntatie van het pancreas aandacht voor detail vereist. De procedure wordt gedemonstreerd door Linda Snyder, histotechnoloog en Emily Montgomery, biologisch wetenschapper in mijn laboratorium.
Begin met het voorbereiden van alle materialen die nodig zijn voor de procedure. Eerst, label de cassettes die de paraffineblokken zullen bevatten met een donoridentificator, monstertype, aliquotnummer en alle aanvullende informatie. Vervolgens, label de OCT mallen op dezelfde manier.
Snij genoeg stukken aluminiumfolie om elke OCT-blok in te wikkelen en zet ze opzij voor later gebruik. Bereid alle flesjes voor die nodig zijn om de verse en bevroren monsters op te slaan. Voeg RNA later en RPMI media toe wanneer dat gepast is.
Bereid vervolgens de werkgebieden voor, plaats dissectieborden, gesteriliseerde instrumenten en alle andere benodigde materialen voor de procedure zowel in een bioveiligheidskast als op een aanrecht. Zorg ervoor dat alle cassettes en OCT mallen geordend zijn volgens het gebruik.Nabij. Maak een vriesbad door genoeg iso pentaan toe te voegen om het droogijs in de bodem van een styrofoam doos te bedekken.
Om met de dissectie te beginnen, verwijder het duodenum en de milt. Begin met het scheiden van het duodenum en pancreas aan één uiteinde, en ga door totdat ze volledig losgekoppeld zijn. De milt is losjes bevestigd en kan gemakkelijk van het vet en pancreas worden verwijderd.
Vervolgens, reinig het pancreas van overtollig vet, bloedvaten en zenuwen met behulp van een combinatie van stompe en scherpe dissectie. Zet het vet en de lymfeklieren opzij om later te worden verwerkt. Eenmaal gereinigd, plaats het pancreas op een dissectiebord bedekt met papieren handdoeken.
Het behouden van de juiste oriëntatie van het pancreas is het moeilijkste aspect van deze procedure. Om succes te garanderen, worden de voorste en achterste oppervlakken met verschillende gekleurde inkten beschilderd. Doop een wattenstaafje in blauwe inkt, spreid de inkt op het voorste oppervlak van het pancreas en dep het overtollige af.
Doop vervolgens een nieuw staafje in zwarte inkt en spreid het op het achterste oppervlak van het pancreas. Breng het pancreas terug in zijn normale oriëntatie. Met het voorste oppervlak naar boven, is het pancreas nu klaar om in drie secties te worden gesneden.
Snijd eerst de verbinding tussen de kop en het lichaam. Vervolgens, verdeel het resterende gedeelte in ongeveer gelijke porties om het lichaam en de staart te scheiden, noteer het gewicht van elke regio van het pancreas. Begin met de hoofdsectie.
Verdeel elke regio in ongeveer 0,5 centimeter secties door dwars te snijden, vergelijkbaar met het snijden van een brood. Zodra elke regio van het pancreas is gesneden, verwijder de laatste sectie van de hoofdsectie, die de kop-lichaamsverbindingssectie is, en plaats deze op een apart dissectiebord. Hak deze sectie in kleine stukjes en verdeel de stukken gelijkmatig tussen gelabelde cryo vlesjes met en zonder RNA.
Later worden de flesjes bevroren. Volgens standaardprocedures. Herhaal deze procedure voor de lichaam-staart verbindingssectie.
Zodra de gehakte monsters zijn verzameld, leun alle dwarssecties naar rechts. Wisselende secties van elke regio worden verwijderd. Voor paraffine en OCT blokken, verwijder de eerste sectie voor paraffine blokkering.
Als een sectie te groot is, snijd hem doormidden. Label de cassettes als A en B. Als het stuk nog steeds te groot is, snijd elke sectie loodrecht op de vorige snede en label vervolgens de cassettes A tot D in de wijzers van de klok. Zoals hier te zien is, plaats de cassette zodat het label naar links is.
Plaats vervolgens het weefsel in de cassette en sluit het deksel. Breng de cassette over naar een container met neutraal gebufferd formin. Nummer de blok sequentieel binnen elke regio, beginnend met de meest mediale sectie voor OCT blokken.
Giet een dunne laag OCT media in een vooraf gelabelde mal. Voordat het weefsel wordt geïntroduceerd, bedek het weefsel met OCT media en vries het monster snel in voor later gebruik. Keer terug naar het weefsel dat eerder opzij werd gezet. Isoleer de pancreaslymfeklieren door het vet en bindweefsel rond de kliercapsule weg te snijden. Plaats de klieren in een steriele schaal met DMEF, hak grote klieren in stukken van niet meer dan 0,5 centimeter.
Zodra de pancreaslymfeklieren zijn geïsoleerd, verdeel het weefsel tussen de voorbereide flesjes en cassettes voor verdere verwerking. Na het afwerken van de lymfeklieren wordt de milt gehakt en opgeslagen op een vergelijkbare manier. Om het duodenum te verwerken, gebruik een bevochtigd gaaspad om het slijmvlies schoon te vegen van slijm, knip het slijmvlies eraf en snijd het vervolgens in secties.
Verdeel de slijmvliesmonsters zoals eerder getoond. Met behulp van deze procedure worden representatieve monsters van elke regio van het pancreas verzameld, zoals hier te zien is. De gewichten van de kop-, lichaams- en staartregio waren ongeveer
View the full transcript and gain access to thousands of scientific videos
Overzicht
Deze video toont een dissectieprocedure voor het verwerken van menselijk pancreas in meerdere opslagformaten met behoud van anatomische oriëntatie. De methode maakt het mogelijk om de regionale eilandjessamenstelling en -dichtheid te definiëren.
Belangrijke studieonderdelen
Wetenschapsgebied
- Neurowetenschappen
- Biologie
- Menselijke anatomie
Achtergrond
- De pancreas is cruciaal voor metabole functies.
- Het begrijpen van de eilandjessamenstelling is belangrijk voor diabetesonderzoek.
- Behoud van anatomische oriëntatie is essentieel voor nauwkeurige analyse.
- Dissectietechnieken kunnen in effectiviteit variëren.
Doel van het onderzoek
- Om de menselijke pancreas te dissecteren met behoud van de anatomische structuur.
- Om de verzameling van monsters uit verschillende pancreasgebieden mogelijk te maken.
- Om toekomstige analyse van eilandjessamenstelling en -dichtheid mogelijk te maken.
Gebruikte methoden
- Verwijdering van de twaalfvingerige darm en milt van de pancreas.
- Verwijdering van overtollig vet en vaten van de pancreas.
- Verven van de voorste en achterste oppervlakken met inkt voor oriëntatie.
- De pancreas in drie regio's verdelen en in plakken snijden.
Belangrijkste resultaten
- Monsters werden met succes verzameld uit alle drie de pancreasregio's.
- Anatomische oriëntatie werd gedurende het hele proces gehandhaafd.
- De methode maakt gedetailleerde analyse van eilandjessamenstelling mogelijk.
- Meerdere opslagformaten werden gebruikt voor toekomstig onderzoek.
Conclusies
- De dissectieprocedure is effectief voor het behoud van de pancreasanatomie.
- Deze methode kan onderzoek naar pancreaseilandjes verbeteren.
- Toekomstige studies kunnen op deze techniek voortzetten voor metabole analyse.
Veelgestelde vragen
Executive Industry Relevance
Standardized human pancreas dissection and sampling protocols are critical for generating reproducible, anatomically precise biospecimens that underpin diabetes and metabolic disease research. This protocol enables consistent regional sampling, supporting high-confidence target validation and mechanistic studies across discovery and translational pipelines. Enterprise-wide adoption of such standardized workflows reduces biological ambiguity and enhances cross-study comparability for portfolio decision-making.
Strategic Applications in Biopharma R&D
Early Discovery & Target Validation
- Enables systematic interrogation of regional islet cell heterogeneity for mechanistic de-risking.
- Supports functional target validation by preserving anatomical context in biospecimens.
- Facilitates hypothesis-driven studies on beta cell loss and immune cell infiltration in type 1 diabetes.
Screening & Assay Development
- Provides validated, orientation-maintained tissue blocks for downstream histological and molecular assays.
- Ensures reproducibility and standardization in sample preparation for quantitative analysis.
- Enables scalable preparation of paraffin, OCT, and snap-frozen samples for multi-platform screening.
Translational & Preclinical Research
- Aligns biospecimen collection with disease-relevant anatomical regions for translational biomarker studies.
- Supports continuity from human tissue analysis to preclinical model validation.
- Reduces risk of sampling bias in studies linking human pathology to therapeutic hypotheses.
Pipeline & Workflow Integration
This protocol integrates at the interface of biospecimen acquisition and downstream molecular, cellular, and histological analyses, supporting workflows from early discovery through translational research.
- Discovery Biology: Enables robust hypothesis testing on islet cell composition and immune infiltration by region.
- Screening: Delivers reproducible, orientation-maintained samples for assay development and validation.
- Analytics: Supports quantitative comparison of regional differences in islet density and cell type distribution.
- Translational Research: Provides anatomically precise samples for biomarker alignment and preclinical model correlation.
- Enterprise Reuse: Establishes a reusable, standardized protocol for multi-study and multi-site biospecimen generation.
Operational & Enterprise Impact
- Scientific Value: Increases predictive confidence and reduces mechanistic ambiguity in diabetes research.
- Operational Value: Drives standardization, reproducibility, and scalability in human tissue processing.
- Strategic Value: Improves go/no-go decisions and capital efficiency by enabling high-quality, comparable datasets.
- Portfolio Impact: Supports risk-adjusted prioritization and advancement of diabetes and metabolic disease programs.
Implementation Considerations
- Requires expertise in anatomical dissection and biospecimen handling.
- Needs access to histology, cryopreservation, and molecular analysis infrastructure.
- Demands rigorous cross-team standardization for labeling, orientation, and sample tracking.
- Must be adaptable to variations in donor anatomy and tissue quality.
- Dependent on strict adherence to protocol to avoid loss of anatomical context.
