Name: Formuleringen voor Vriesdrogen van bacteriën en hun invloed op de overleving van de cel (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2013-08-03T14:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 55 s
Description: Ontdek hoe vriesdrogingsformuleringen de overleving van bacteriële cellen beïnvloeden. Deze methode optimaliseert celbehoud door fysische eigenschappen te analyseren voor microbiologisch onderzoek.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

playerTrialDesktop

Het werk werd ondersteund door de Zweedse Stichting voor Strategisch Milieuonderzoek (MISTRA) via het DOM-programma en Grant 211684 (BACSIN) van de Europese Unie Gemeenschap FP7 kaderprogramma. Wij danken J. Engstrand voor hulp bij het filmen van de X-stralen analyse en L. Tang voor het helpen met het conceptuele verhaal.

1. Teelt en oogst van P. putida <ol><li> Bereid een starter cultuur van Pseudomonas putida door het enten van 100 ml tryptische soja bouillon (TSB) met een kolonie van P. putida cellen gekweekt op agar gesupplementeerd met tryptische soja bouillon (TSA). Houd de cultuur bij 30 ° C op een schudden plank ingesteld op 130 tpm. </li><li> Na 7 uur dragen een hoeveelheid van de startercultuur gelijk aan 1/10 van het uiteindelijke volume van de belangrijkste cultuur om verse TSB-medium. Laat de cellen bij 30 ° C op een schuddend boord 130 rpm gedurende 16 uur. </li><li> Na 16 uur groei worden de cellen geoogst door het draaien van de celkweek bij 1500 xg gedurende 20 minuten bij kamertemperatuur. Giet het supernatant en was de cellen door resuspenderen de celpellet in een NaCl-oplossing die isotonisch aan het groeimedium. In dit geval werd een 150 mM NaCl-oplossing gebruikt. De cellen worden dan opnieuw gecentrifugeerd en de supernatant wordt gedecanteerd voor resuspenderen van de cellen in het preparaat medium,zie stap 3.2. </li></ol> 2. Teelt van andere soorten <ol><li> Om het protocol aan te passen aan andere bacteriesoorten de teelt en oogst procedures moeten worden aangepast aan de eisen van die soort. Om osmotische shock te vermijden bij behandeling van de cellen tijdens de oogst en de wasstap (s), de osmolaliteit van de oplossingen moet overeenkomen met dat van het groeimedium bij de oogst. </li></ol> 3. Formulering van cellen <ol><li> Bereid de formulering oplossingen door weging van de respectieve matrix componenten en los ze in water. Om isotone voorwaarden te bereiken, hetzij het bedrag aanpassen van de hulpstof of voeg NaCl of een andere cel compatibele opgeloste stof aan de gewenste osmolaliteit te bereiken. Voor stoffen met laag molecuulgewicht zoals disachariden bedragen gemakkelijk kan worden aangepast aan isotone omstandigheden te bereiken. Voor stoffen zoals polymeren die een hoog molecuulgewicht, de toniciteit ingesteld moet worden met een mobiele compatibele zoluiten, bijvoorbeeld NaCl of disacchariden. Merk op dat toevoeging van een stof de fysische eigenschappen van de formulering, waardoor het vriesdrogen gedrag en celoverleving kan beïnvloeden beïnvloeden. </li><li> Decanteer de wasvloeistof (in dit geval NaCl) en resuspendeer de cellen in de respectieve formulering media. </li><li> Zorg ervoor dat de cellen homogeen verspreid zijn. Formuleringen van lage viscositeit worden gewerveld terwijl formuleringen van hogere viscositeit worden gemengd met behulp van door het toevoegen, bijvoorbeeld., Een roerstaaf en schudden van de container tot homogene menging wordt bereikt. </li><li> Verdeel de formuleringen in de vriesdroger flesjes. Het vaccin dient leeg gewogen, met monster voor en na vriesdrogen de hoeveelheid verwijderd water tijdens vriesdrogen berekenen. </li><li> Voeg rubberen stoppen aan de flacons als de flacon worden verzegeld in de vriesdroger, zie stap 4.3. </li><li> Inventariseer de cellen in elke formulering voor vriesdrogen, zie stap 6. </li> &lt;/ Ol&gt; 4. Vriesdrogen <ol><li> Het vriesdrogen voorwaarden worden aangepast aan de fysische eigenschappen van de formulering. De belangrijkste parameter in dit geval de glasovergangstemperatuur, Tg, van de formulering, aangeduid Tg &quot;voor de freeze-geconcentreerde monster aan te geven dat het water nog aanwezig. De Tg &#39;van de freeze-geconcentreerde formulering gemakkelijk gemeten met differentiële scanning calorimetrie (DSC), zie stap 7. </li><li> Pas de parameters van de vries-droogproces zodat de temperatuur van het monster steeds beneden de Tg van het monster en de kamerdruk maakt een snelle sublimatie van ijs, dat wil zeggen primair drogen en restwater in de formulering, dat wil zeggen secundaire drogen. Indien de monstertemperatuur boven Tg &#39;tijdens het droogproces er een groot gevaar voor instorting van het monster die de cellulaire overleving significant kan verminderen. </li><li> Om de droge producten te beschermen na freeze drogen het monster atmosfeer worden gecontroleerd. Indien mogelijk, sluit de monsters in de vriesdroger voordat het vacuüm wordt vrijgegeven op het einde van de vriesdrogen cyclus. Ook de flesjes gevuld kan worden met een gewenste atmosfeer. Het is belangrijk om blootstelling van de monsters aan de omgevingsomstandigheden voor vocht of zuurstof in de bewaaratmosfeer de overleving van cellen beïnvloeden. </li><li> Weeg de flesjes. </li></ol> 5. Rehydratie <ol><li> Hydrateren de monsters met gedeïoniseerd en steriel water. De hoeveelheid water die moet worden toegevoegd dat dient met het bedrag verwijdert tijdens vriesdrogen en wordt berekend uit het gewicht van de lege flacon, hetzelfde flesje met monster voor en na vriesdrogen zijn. Vortex de monsters nu en dan weer tot de oplossingen verschijnen homogeen. </li></ol> 6. Opsomming <ol><li> Trekken 100 pi van elk monster en maak 10-voudige seriële verdunningen. Uit de verdunningen van inteoverige 100 ul wordt uitgeplaat op TSA-platen. De platen worden geïncubeerd bij de temperatuur en tijd vereist. </li></ol> 7. Karakterisering van Formulering van Freezing Gedrag <ol><li> Neem een ​​kleine hoeveelheid, 5-10 mg, van het monster en het insluiten in een DSC-aluminium pan met deksel. Bereid een lege pan als referentie. </li><li> Stel de DSC temperatuur scanprogramma. De koel-programma is ingesteld op de bevriezing stap in het vriesdrogen programma na te bootsen. Dit gebeurt als koelmiddel kinetiek beïnvloeden de Tg &#39;van de gehydrateerde samenstellingen. Vóór de verwarmingsscan begint omlaag brengen van de temperatuur ruim onder de verwachte Tg &#39;van de onderzochte formuleringen, gewoonlijk -100 ° C. </li><li> Kies een geschikte opwarmsnelheid, normaal gesproken een opwarmsnelheid van 5 - 40 ° C / min wordt gebruikt. De opgenomen warmte stroomsignaal wordt uitgedrukt in watt en wordt beïnvloed door de verwarmingssnelheid. Een hogere verwarming tarief zal een groter signaal van Tg &#39;te geven. </li><li> Stel het temperatuurbereik, zodat ikt omvat zowel Tg en het smelten van de formulering. </li></ol> 8. Surface Tension Metingen van de gehydrateerde formuleringen <ol><li> De experimentele opstelling die in dit experiment wordt volgens de methode du Nouy oppervlak meten. </li><li> Reinig de platina ring en het meetvat zorgvuldig. Het vat wordt gespoeld met aceton, veegde met een niet-pluizende tissue, en vervolgens verbrand aan de binnenkant met een kleurloze vlam. De ring gloeit rood in een kleurloze vlam. </li><li> Vul het vat met de oplossing en laat het oppervlak af te wikkelen alvorens te meten. Voor oplossingen waarbij de evenwichtstoestand wordt pas na een lange tijd, bijvoorbeeld polymeren, de eenvoudige installatie Daarbij zal worden kwalitatieve gegevens. </li><li> Voor formuleringen met hoge viscositeiten, zoals oplossingen van 2% (w / w) HEC of HPMC, de oppervlaktespanning te meten aan oplossingen van lagere concentraties worden geëxtrapoleerd. Dit kan gedaan worden door te profiteren van het feit datde daling oppervlaktespanning afvlakt bij concentraties onder 0,5% (w / w). </li></ol> 9. X-ray analyse van de droge formuleringen <ol><li> Neem een ​​kleine hoeveelheid van de matrix / bacteriën en te laden op een monsterhouder. </li><li> Monteer de monsterhouder in de X-ray-diffractometer. </li><li> Om kristallijne fase in het monster analyseren de EVA programmapakket van Bruker worden gebruikt. </li></ol> 10. Electron Microscopy <ol><li> Neem een ​​kleine hoeveelheid van de matrix / bacteriën uit de flesjes en plaats deze op een SEM stomp. </li><li> Laad de SEM houder in het sputter-bekleder (Thermo VGScientific Polaron SC7640 gebruikt in het huidige werk) en de vacht van de steekproef met een paar nm van Au / Pd of Pt. In deze experimenten werden de sputteren parameters: 1900 V, 20 mA en 20 sec, voor een ~ 5-10 nm Au / Pd coating. De coating vermindert elektrische oplading tijdens beeldopname. Het wordt aanbevolen om te beginnen met een dunne laag en, indien opladen voortduren veroorzaakt imageartefacten, moet het monster opnieuw worden gecoat. </li><li> Laad de SEM houder in de SEM kamer. Selecteer de juiste beeldvorming parameters. Voor het instrument gebruikt in figuur 2 (FEI Strata DB235) gebruikten we 5 kV versnellingsspanning, spotsize 3, een werkafstand van 5 mm en de secundaire elektronen detector. </li><li> Eventueel is het mogelijk om de Focused Ion Beam dwarsdoorsneden van de bacteriën in het polymeer ingebedde voor verdere details onthullen snijden. </li></ol>

<ol><li>Wessman, P., Mahlin, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Impact+of+matrix+properties+on+the+survival+of+freeze-dried+bacteria%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Sci.+Food+Agric%22%5BJournal%5D)">Impact of matrix properties on the survival of freeze-dried bacteria.</a> J. Sci. Food Agric. 91 (14), 2518-2528 (2011).</li>
<li>Ablett, S., Izzard, M. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Differential+Scanning+Calorimetric+Study+of+Frozen+Sucrose+and+Glycerol+Solutions%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+the+Chemical+Society-Faraday+Transactions%22%5BJournal%5D)">Differential Scanning Calorimetric Study of Frozen Sucrose and Glycerol Solutions.</a> Journal of the Chemical Society-Faraday Transactions. 88 (6), 789-794 (1992).</li>
<li>Knopp, S. A., Chongprasert, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+relationship+between+type+TMDSC+curve+of+frozen+sucrose+solutions+and+collapse+during+freeze-drying%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Thermal+Analysis+and+Calorimetry%22%5BJournal%5D)">The relationship between type TMDSC curve of frozen sucrose solutions and collapse during freeze-drying.</a> Journal of Thermal Analysis and Calorimetry. 54 (2), 659-672 (1998).</li>
<li>Crowe, J. H., Leslie, S. B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Is+Vitrification+Sufficient+to+Preserve+Liposomes+during+Freeze-Drying%5BTitle%5D)+AND+%22Cryobiology%22%5BJournal%5D)">Is Vitrification Sufficient to Preserve Liposomes during Freeze-Drying.</a> Cryobiology. 31 (4), 355-366 (1994).</li>
<li>Jain, P., Sen, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effect+of+glass-forming+biopreservatives+on+head+group+rotational+dynamics+in+freeze-dried+phospholipid+bilayers%3A+A+P-31+NMR+study%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Chemical+Physics%22%5BJournal%5D)">Effect of glass-forming biopreservatives on head group rotational dynamics in freeze-dried phospholipid bilayers: A P-31 NMR study.</a> Journal of Chemical Physics. 131 (2), (2009).</li>
<li>Stock, J. B., Rauch, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Periplasmic+Space+in+Salmonella-Typhimurium+and+Escherichia-Coli%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Biological+Chemistry%22%5BJournal%5D)">Periplasmic Space in Salmonella-Typhimurium and Escherichia-Coli.</a> Journal of Biological Chemistry. 252 (21), 7850-7861 (1977).</li>
<li>Crowe, J. H., Hoekstra, F. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Anhydrobiosis%5BTitle%5D)+AND+%22Annual+Review+of+Physiology%22%5BJournal%5D)">Anhydrobiosis.</a> Annual Review of Physiology. 54, 579-599 (1992).</li>
<li>Leslie, S. B., Israeli, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Trehalose+and+Sucrose+Protect+Both+Membranes+and+Proteins+in+Intact+Bacteria+during+Drying%5BTitle%5D)+AND+%22Applied+and+Environmental+Microbiology%22%5BJournal%5D)">Trehalose and Sucrose Protect Both Membranes and Proteins in Intact Bacteria during Drying.</a> Applied and Environmental Microbiology. 61 (10), 3592-3597 (1995).</li>
<li>Nesarikar, V. V., Nassar, M. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effect+of+cations+and+anions+on+glass+transition+temperatures+in+excipient+solutions%5BTitle%5D)+AND+%22Pharmaceutical+Development+and+Technology%22%5BJournal%5D)">Effect of cations and anions on glass transition temperatures in excipient solutions.</a> Pharmaceutical Development and Technology. 12 (3), 259-264 (2007).</li>
<li>You, Y., Ludescher, R. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+effect+of+sodium+chloride+on+molecular+mobility+in+amorphous+sucrose+detected+by+phosphorescence+from+the+triplet+probe+erythrosin+B%5BTitle%5D)+AND+%22Carbohydr.+Res%22%5BJournal%5D)">The effect of sodium chloride on molecular mobility in amorphous sucrose detected by phosphorescence from the triplet probe erythrosin B.</a> Carbohydr. Res. 343 (2), 350-363 (2008).</li>
<li>Crowe, J. H., Hoekstra, F. A., Nguyen, K. H. N., Crowe, L. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Is+vitrification+involved+in+depression+of+the+phase+transition+temperature+in+dry+phospholipids%5BTitle%5D)+AND+%22Biochim.+Biophys.+Acta+Biomembr%22%5BJournal%5D)">Is vitrification involved in depression of the phase transition temperature in dry phospholipids.</a> Biochim. Biophys. Acta Biomembr. 1280, 187-196 (1996).</li>
</ol>

Geen belangenconflicten verklaard.

De aanleiding voor dit onderzoek was om enkele formulering eigenschappen die van belang kunnen zijn voor de overleving van de cel tijdens vriesdrogen onderzoeken. Hoewel de intrinsieke drogen zekere tolerantie tussen verschillende soorten, zoals geïllustreerd in figuur 1A, de trend van hoe goed de verschillende formuleringen support celoverleving is vergelijkbaar. Het is informatief te beginnen met een vergelijking van sucrose en Ficoll. Er wordt aangenomen dat een belangrijke factor voor een formulerin...

<table><tbody><tr><td>Ficoll PM 400</td><td>GE-healthcare</td><td>17-0300-10</td><td></td></tr><tr><td>HEC (Natrosol-M Pharm Grade)</td><td>Ashland</td><td></td><td>Gift van Ashland</td></tr><tr><td>HPMC (Methocel F4M)</td><td>Dow</td><td></td><td>Gift van de Faculteit Farmacie, Uppsala Universiteit</td></tr><tr><td>Sucrose</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>S2395</td><td></td></tr><tr><td>NaCl</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>71376</td><td></td></tr><tr><td>Tryptic Soy broth</td><td>Merck</td><td>105459</td><td></td></tr><tr><td>Tryptic Soy Agar</td><td>Merck</td><td>105458</td><td></td></tr><tr><td>Lyostar II</td><td>FTS Kinetics</td><td>N.A.</td><td></td></tr><tr><td>Pyris Diamond DSC</td><td>Perkin-Elmer</td><td>N.A.</td><td></td></tr><tr><td>Bruker AXS SMART CCD 1k Diffractometer</td><td>Bruker</td><td>N.A</td><td></td></tr><tr><td>Dual-beam FEI Strata DB235 FIB/SEM</td><td>FEI</td><td>N.A</td><td></td></tr><tr><td>Kr&amp;#252;ss Educatieve Tensiometer</td><td>Kr&amp;#252;ss</td><td>N.A.</td><td></td></tr></tbody></table>

formuleringen voor vriesdrogen van bacteriën en hun invloed op de overleving van de cel

Formulations for Freeze-drying of Bacteria and Their Influence on Cell Survival

Cellular water kan worden verwijderd om reversibel inactiveren micro makkelijker opbergen. Een dergelijke methode van verwijdering is vriesdrogen, die als zachte uitdroging methode. Om celoverleving tijdens het drogen te vergemakkelijken, worden de cellen vaak vooraf geformuleerd. De samenstelling vormt een matrix die de cellen ingesloten en beschermt ze tegen diverse schadelijke stressfactoren waarmee de cellen tijdens invriezen en drogen. We stellen hier een algemene methode voor de overleving van cellen na vriesdrogen en evalueren we illustreren door de resultaten verkregen met vier verschillende formuleringen: de disaccharide sucrose, saccharose verkregen polymeer Ficoll PM400 en de respectieve Polysacchariden hydroxyethylcellulose (HEC ) en hydroxypropylmethylcellulose (HPMC), twee bacteriestammen, P. putida KT2440 en A. chlorophenolicus A6. In dit werk illustreren we hoe de formuleringen te bereiden op vriesdrogen en hoe de mechanismen te onderzoekenisms van celoverleving na rehydratatie Door die formulering gebruikt van differentiële scanning calorimetrie (DSC), oppervlaktespanning metingen röntgenanalyse en elektronenmicroscopie en betreffende de gegevens overlevingskansen. De polymeren werden gekozen om een ​​monomere structuur van elke polysaccharide lijkt sucrose naar een verschillende mate. Met deze methode opstelling we zien dat polymeren celoverleving als effectief ondersteunen disachariden of bepaalde fysische eigenschappen van de formulering worden gecontroleerd 1.

Tabel 1 toont gegevens formulering samenstelling, thermische gebeurtenissen DSC opgenomen tijdens het verwarmen van de bevroren samenstellingen, structuur van de droge monsters en de oppervlaktespanning van de formulering oplossingen. De Tg &#39;van sacharose is bepaald -40 ° C 2, 3 en kan moeilijk te detecteren sucrose concentraties beneden 20% w / w. De thermische gebeurtenis bij -35 ° C houdt waarschijnlijk verband met het ontstaan ​​van ijs oplossing 2. De k...

Vriesdrogen is vaak een eenvoudige en handige manier om droge producten van levensvatbare bacteriële cellen te verkrijgen. Een kwestie van het proces is overleving van de cel. We detail hier een procedure te onderzoeken hoe celoverleving gedurende vriesdrogen wordt beïnvloed door de eigenschappen van de formulering.

Formuleringen voor Vriesdrogen van bacteriën en hun invloed op de overleving van de cel

Cellulair water kan worden verwijderd om micro-organismen reversibel te inactiveren om opslag te vergemakkelijken. Een van zulke verwijderingsmethoden is vriesdrogen, wat ...

Het doel van het volgende experiment is om het effect van verschillende soorten lyofilisatieformuleringen op de celoverleving te observeren. Allereerst worden verschillende formuleringen voor het vriesdrogen van celculturen voorbereid. Vervolgens wordt elke formulering gemengd met de celcultuur, daarna gevriesdroogd en later gerehydrateerd, waarna de overlevingspercentages worden gemeten.De resultaten tonen verschillen in overlevingspercentages die kunnen worden gekoppeld aan de gekarakteriseerde eigenschappen. Deze methode kan u helpen begrijpen welke fysieke en structurele eigenschappen van een formulering van belang zijn voor de overleving van cellen tijdens dehydratatie. Om een startcultuur van Pseudomonas putida voor te bereiden, begint u met het inoculeren van 100 milliliters triptiek-sojabouillon, of TSB, met een kolonie cellen die zijn gekweekt op agar aangevuld met triptiek-sojabouillon of TSB; incubeer de cultuur bij 30 °C, schuddend bij 130 RPM gedurende zeven uur.Overbreng een aliquot van de cultuur naar vers TSB en laat dit 16 uur groeien. Oogst de cellen door centrifugatie bij 1.500 ×g gedurende 20 minuten bij kamertemperatuur. Was het celpellet door resuspensie in 15

formulations-for-freeze-drying-bacteria-their-influence-on-cell

Research

JoVE Journal

Biology

Biologie

Gekweekte zoogdiercellen worden op grote schaal gebruikt in de celbiologie studies. Deze video beschrijft de basisvaardigheden die nodig zijn om te bevriezen en op te slaan cellen en hoe om bevroren voorraden herstellen.

Invriezen, ontdooien, en verpakking Cellen van Verkeer

Illustreren we hier hoe u elektron cryotomography (ECT) te gebruiken om de ultrastructuur van bacteriële cellen in near-native staten studie, om "macromoleculaire" (~ 4 nm) resolutie.

Electron Cryotomography van bacteriële cellen

Source: Lea-Smith, D. J., et al. Generation of Marked and Markerless Mutants in Model Cyanobacterial Species. J. Vis. Exp. (2016)This video demonstrates the cryopreservation of cyanobacterial strains by combining concentrated cell suspensions with glycerol or DMSO and storing them at low temperatures, enabling long-term maintenance of viable cultures for photosynthesis and genetic studies.

Long-Term Cryopreservation of Cyanobacterial Strains Using Glycerol or Dimethyl Sulfoxide

Dit handschrift beschrijft een gemakkelijk te gebruiken en goedkope Cryofixatie werkwijze voor het zichtbaar suspensiecellen door transmissie- elektronenmicroscopie.

Plunge Invriezen: een instrument voor de Ultrastructureel en immunolokalisatiestudies van Suspension Cellen in Transmission Electron Microscopy

Een protocol voor de bepaling van de glasvezeldichtheden van micro- tot pico-liter-grootte druppels waterige mengsels bij cryogene temperaturen wordt beschreven.

Het meten van de dichtheden van waterige glazen bij cryogene temperaturen

Dit protocol illustreert de belangrijke opeenvolgende stappen die nodig zijn voor de beoordeling van de relevantie van het toezicht op de parameter van de vitaliteit en DNA-herstelsynthese in de heropleving van sporen van Bacillus subtilis na behandeling met lage druk plasma door tracking fluorescentie-gelabelde DNA repair eiwitten via time-resolved confocale microscopie en elektronenmicroscopie scannen.

Onderzoek naar de nadelige effecten van lage druk Plasma sterilisatie op het voortbestaan van Bacillus subtilis sporen met behulp van Live cel microscopie

We beschrijven een betrouwbare methode voor de bereiding van hele celextracten uit gist of andere cellen met behulp van een cryogene vriesmolen die afbraak en denaturatie van eiwitten minimaliseert. De celextracten zijn geschikt voor zuivering van functionele eiwitcomplexen, proteomische analyses, co-immunoprecipitatiestudies en detectie van labiele eiwitmodificaties.

Voorbereiding van celextracten door Cryogrinding in een geautomatiseerde vriesmolen

Hier laten we zien hoe het sandwich-vriesapparaat kan worden gebruikt voor het snel invriezen van biologische monsters, waaronder bacteriën, gist, gekweekte cellen, geïsoleerde cellen, dierlijke en menselijke weefsels en virussen. We laten ook zien hoe u monsters kunt voorbereiden op ultradunne secties na snelvriezen.

Snelvriezen met behulp van sandwichbevriezingsapparaat voor goed ultrastructureel behoud van biologische monsters in elektronenmicroscopie

We demonstreren een methode voor het isoleren van moeilijk te kweken leden van de nieuwe bacteriële fylum, Saccharibacteriën, door tandplak te filteren en samen te kweken met gastheerbacteriën.

Het vestigen van stabiele binaire culturen van symbiotische saccharibacteriën uit de mondholte

Phormidium lacuna is een filamenteuze cyanobacterie die werd geïsoleerd uit mariene rotspoelen. Dit artikel beschrijft de isolatie van filamenten uit natuurlijke bronnen, DNA-extractie, genoomsequencing, natuurlijke transformatie, expressie van sfGFP, cryoconservatie en motiliteitsmethoden.

Natuurlijke transformatie, eiwitexpressie en cryoconservatie van de lacune van de filamenteuze cyanobacterium Phormidium

Dit protocol beschrijft de stappen die betrokken zijn bij de productie en fysisch-chemische karakterisering van een gesproeidroogd probiotisch product.

Procesontwikkeling voor het sproeidrogen van probiotische bacteriën en evaluatie van de productkwaliteit

Ontdek hoe vriesdrogingsformuleringen de overleving van bacteriële cellen beïnvloeden. Deze methode optimaliseert celbehoud door fysische eigenschappen te analyseren voor microbiologisch onderzoek.

Formuleringen voor Vriesdrogen van bacteriën en hun invloed op de overleving van de cel

Meer video's verkennen