Name: Stereotactische Intracraniale Implantatie en In vivo Bioluminescent Imaging van tumorxenograften in een Muis Model Systeem van glioblastoma multiforme (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2012-09-25T11:00:00.000+00:00
Duration: 10 min 52 s
Description: Leer stereotactische intracraniale implantatie van glioblastoma multiforme cellen in naakte muizen. Deze methode maakt niet-invasieve bioluminescentiebeeldvorming mogelijk om tumorgroei en behandelingsrespons te volgen.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

playerTrialDesktop

We zijn dankbaar voor Dr Andrew Hollander, Sara Davis, Lee Shuman, Tim Jenkins en Dr Xiangsheng Xu voor hun deskundige hulp. Wij erkennen de steun van dr. Ann Kennedy. BCB werd ondersteund op de Radiation Biology Training Grant C5T32CA009677. JFD werd ondersteund op de Burroughs Wellcome Career Award voor medische wetenschappers (1006792). JLB werd ondersteund door de supers subsidie ​​(5 R25 CA140116-03). We willen graag Dr Steve Hahn wiens aanmoediging en steun heeft geholpen om ons onderzoek mogelijk te erkennen. We willen ook graag de Universiteit van Pennsylvania Nano-Bio-interface Center (NBIC) en Dr Dennis Discher bedanken voor bemoediging en nuttige opmerkingen. Wij erkennen de beeldvorming van kleine proefdieren Facility (SAIF) aan de Universiteit van Pennsylvania voor het gebruik van hun MRI en optische / Bioluminescentie Core Facilities. Deze technieken werden ontwikkeld in het kader van projecten die werden gesteund door de National Institutes of Health (RC1 CA145075 en K08 NS076548-01).

A. Pre-operatieve Tumor Cell Voorbereiding <ol><li> Transduceren U251 glioblastoma multiforme cellen met een lentivirale expressievector (pGreenFire, System Biosciences) om stabiel tot expressie de vuurvlieg luciferase-gen. </li><li> Deze cellen werden gekweekt in 10 ml van Modification volledige Dulbecco van medium Eagle&#39;s medium (DMEM), dat bestaat uit DMEM aangevuld met 10% foetaal kalfsserum, 1% penicilline-streptomycine en 1% niet-essentiële aminozuren in een T75 weefselkweekfles incuberen bij 5% C0 2 en 37 ° C. </li><li> Voer standaard celkweek, te beginnen met de cellen te wassen met fosfaat gebufferde zoutoplossing (PBS), gevolgd door trypsinizing. </li><li> Doof de trypsine met volledige DMEM, breng de oplossing in een 50 ml erlenmeyer en bepalen de cellulaire concentratie met de Coulter Counter. </li><li> Centrifugeer de geoogste cellen in volledig DMEM gedurende 3 min bij ongeveer 3000 omwentelingen per minuut. </li><li> Na centrifugeren van zuigenf de media waardoor slechts een pellet van cellen op de bodem van de 50 ml erlenmeyer. </li><li> Snel werken om de cellen uitdrogen, de cellen resuspendeer in een volume van vers compleet DMEM de gewenste concentratie van 50.000 cellen / pl overgebracht in een 2 ml steriele flacon op ijs te bereiken. </li><li> Cellen op het ijs moeten kort worden gevortexed op een lage stand om de ~ 20 min tot celadhesie te voorkomen. Cellen kunnen veilig worden gebruikt voor intracraniale implantaties tot twee uur na plaatsing op ijs. </li></ol> B. orthotope Xenograft Implantatie <ol><li> Weeg naakt athymische NCR muizen (nu / nu) een basislijn, pre-implantatie vast gewicht. We meestal kies muizen 6-10 weken oud met gewichten tussen 17 en 24 gram. </li><li> 1 uur vóór implantatie, pre-medicijnen de muis met 5 mg / kg van het niet-steroïde anti-inflammatoir geneesmiddel meloxicam via subcutane injectie als behandeling van post-operatieve pijn en ontsteking. </li><li> Anesthetize het dier met een intraperitoneale injectie van een ketamine / xylazine mengsel bij een dosis van 140 mg / kg en 10 mg / kg. </li><li> Controleer of de muis voldoende verdoofd door beoordeling van het dier spontane reactie op een teen pinch. Als het dier reageert op de teen knijpen, vertraging van de procedure tot de verdoving kan in werking of overwegen injecteren extra verdoving (&lt;25% van het oorspronkelijke bedrag). </li><li> Bereid de verdoofde muis voor positionering in de Stoelting Digital Net voor Muis Stereotactische platform (Stoelting Inc) door het inhaken van de muis snijtanden in de bijt bar van de snuit weerhouder en het aanscherpen van de neus klem over de snuit, terwijl ervoor te zorgen dat de muis het hoofd staat een niveau vliegtuig. </li><li> Breng de beheerste muis om de stereotactische platform Stoelting, aanpassing van de positie van het dier zodat de uiteinden van het oor balk op het caudale einde van de gehoorgang. Zodra het dier craniaal naar caudale positionering is het bijstellented, zet de beet balk om de stereotactische frame. De muis moet rusten op een stevige kunststof verwarmingsplaat (Harvard Apparatus) vastgezet met tape om de Stoelting platform om feedback gestuurde temperatuurregeling tijdens de operatie te geven. </li><li> Stel de hoogte van het oor bars als nodig is en dan vooruit het oor bars in het caudale deel van de gehoorgang, af te sluiten, zodat de muis het hoofd is in een level vliegtuig en geïmmobiliseerd op vinger. Monitor zorgvuldig op tekenen van ademnood na plaatsing van het oor bars. Draai en re-positie als het dier in nood is. </li><li> Plaats de gesmeerde uiteinde van een rectale temperatuur probe aangesloten op de TCAT-2DF temperatuurregelaar (Harvard Apparatus) het dier de temperatuur volgen en feedback control aan de verwarmingsplaat geplaatst onder de muis om het dier lichaamstemperatuur op 36 ° C gedurende de procedure. </li><li> Breng oogzalf om de ogen te Prevent drogen. </li><li> Toepassing betadine oplossing voor de kruin van de muis op de incisieplaats desinfecteren zorg ervoor dat de ogen. </li><li> Voer een teen kneep bevestigen muis bewusteloos is, levert een kleine hoeveelheid extra ketamine / xylazine (&lt;25% van de aanvangsdosis) indien nodig. </li><li> Reinig de braam 0,45 mm boor (Stoelting) aan de boor (Foredom Microdrill) met een alcohol pad en de boor in een glaskraal sterilisator (Germinator 500, CellPoint Scientific) gedurende 15 sec steriliseren dompelen alleen de boor in de sterilisator kralen. </li><li> Met een steriele scalpel, een lengte 0,75 cm incisie in het midden scalp zich vanaf de ooghoogte caudaal. Bevestig visualisatie van de bregma. </li><li> Bevestig de boor houder de Stoelting platform en plaats een boor (Foredom Microdrill) met een 0,45 mm braam boor (Stoelting) in de boorhouder, vastzetten in positie. </li><li> Plaats de boor precies boven thij bregma en zero-de x, y, z-coördinaten van de digitale stereotactische display. Beweeg de punt van de boor naar een positie 2 mm posterior en 1,5 mm lateraal van de bregma in de rechter hersenhelft en boren in de schedel van het dier met de Foredom boor, doorboren alleen het bot. Een steriel wattenstaafje kan worden gebruikt om zachtjes trekken de randen van de incisie om visualisatie van de schedel te vergemakkelijken. </li><li> Verwijder de boor en de boor houder van de stereotactische platform. </li><li> Bevestig de Nanomite injector spuitpomp (Harvard Apparatus) om de stereotactische platform. </li><li> Verwijder de cellen van ijs en ofwel voorzichtig vortex de flacon met de tumorcellen met korte pulsen of tik zachtjes tegen de flacon om resuspendeer de cellen. Opstellen 7 pi van de celsuspensie door middel van een 30 gauge 1 &quot;lange, platte schuine naald bevestigd aan een 10 ul injectiespuit (Hamilton Spuit). Vermijd grote luchtbellen in de injectiespuit. Zorg ervoor dat er geen luchtbellen in de eerste 6 pi van vloeistof which zal het totale volume geïnjecteerd in de muis. Kleine luchtbellen in de resterende 1 ul van geen belang. Vermijd herhaaldelijk draw-ups van de celsuspensie indien mogelijk schade aan de cellen te minimaliseren. </li><li> Plaats de gevulde spuit in de spuit injector. Met een alcohol pad, verwijderen van de celsuspensie vloeistof die aan de punt van de naald om verontreiniging van de incisie met kankercellen die leiden tot tumor groeit in de extracraniële ruimte te voorkomen. </li><li> Stel de injectiepomp tot 6,0 ul leveren met een snelheid van 0,5 ul / min. De 1 pi celsuspensie in de spuit na implantatie zodat de luchtbellen die vaak verzamelt in de spuit niet geïnjecteerd in het dier. Injectie van luchtbellen kan leiden tot fatale luchtembolie. </li><li> Voer de naald in de boorgat het handhaven van de naald loodrecht (90 graden) naar de schedel. Zodra de naald heeft afgelegd de schedel, nul de Coordinates de stereotactische digitale display en duw de punt van de naald gedurende 4 min tot aan een diepte van 2,5 mm. De naald door de cortex en delen van de achterste hippocampus. De x, y, z-coördinaten van stereotactische implantatie werden gekozen om een ​​zijkant geplaatste tumor genereren in de hersenhelft terwijl voorkomen van schade aan belangrijke hersenstructuren zoals de thalamus en de nabijheid van de ventrikels waardoor de kans van enten van de cerebrospinale vloeistof met tumorcellen die kan leiden tot ongewenste ruggenmergtumoren. Een achterste locatie ten opzichte van de bregma werd geselecteerd om de waarschijnlijkheid van een grote, lokaal gevorderde tumor zweren in de baan verkleinen. Pauze met de naald op diepte gedurende 2 minuten en vervolgens initiëren implantatie van cellen. </li><li> Tijdens de implantatie, herhaaldelijk droog de schedel met een microchirurgische spons speer aan een tumor-bevattende vloeistof die kunnen hebben gerefluxed van de boorgat tijdens verwijderenimplantatie. Vermijd het verstoren van de naald met de microchirurgische spons. Het verwijderen van deze vloeistof moet de kans op tumor groeit in de extracraniële ruimte. </li><li> Na injectie is voltooid, laat de naald in de hersenen ongeveer 2 minuten en vervolgens langzaam de naald te trekken over een periode van 3-4 minuten. </li><li> Draai het oor bars en snuit weerhouder en verwijder de muis van de stereotactische apparatuur. </li><li> Sluit het boorgat in de schedel met een steriele bot was afgezet door te wrijven was heen en weer over het boorgat van de houten eind van een steriele wattenstaafje. Blijven toepassen bot wax totdat het gat is volledig afgesloten en het bot was het afdichten van de braam in een lijn staat met de aangrenzende schedel. </li><li> Re-benadering de randen van de incisie met steriele wattenstaafjes en veterinaire toepassing weefsellijm de wond sluiten en zorg te lijmen blootstelling aan ogen van het dier te voorkomen. </li><li> Tot slot plaatst u de muis op een verwarming pad ingesteld op 37 °C totdat het dier hersteld bewustzijn. Transfer terug het dier naar de oorspronkelijke kooi zodra de muis is alert en responsief. </li></ol> C. Bioluminescent Imaging (BLI) om tumorgroei en reactie op de behandeling te controleren Korte instructies voor bioluminescente beeldvorming. <ol><li> Verdoven muizen eerder geïmplanteerd met tumor in een kamer met 2% isofluraan en zuurstof. </li><li> Terwijl de muizen verdoofd, injecteer die ofwel subcutaan of intraperitoneaal met 60 ul van D-luciferine kaliumzout verdund in PBS tot een concentratie van 50 mg / ml. </li><li> Schakel de stroom van de anesthesie bij de neus kegels in de bioluminescente imaging scanner en snel de muizen over te dragen aan de scanner plaatsen van hun snuit in de neus kegels. </li><li> Plaats zwarte dividers tussen de muizen om het bloeden van bioluminescente signaal te beperken van een tumor met een hoge signaal intensiteit naar een aangrenzende tumor met een veel lagere signaal. </li><li> Gebruikhet levende beeld software neem regelmatig seriële posities voor een totale duur van maximaal 30 minuten na de injectie van D-luciferine. Wij geven de voorkeur het instellen van de Blootstellingtijd op &quot;Auto&quot; om de waarschijnlijkheid van een onder-of overbelichte beeld te beperken. Geen enkele blootstellingstijd&gt; 5 min zijn. </li><li> Voer herhalen bioluminescente beeldvorming met passende tussenpozen. Seriële wekelijkse beeldvorming is een redelijke optie voor veel longitudinale experimenten testen respons op de behandeling. </li><li> Na de overname van beelden, gebruikt u de Living Image software programma om tumoren te analyseren door het tekenen van een gebied van belang (ROI) rondom de tumor in elk beeld verworven tijdens de bioluminescente imaging sessie. Breng een tweede, kleiner gebied van belang voor de onderste flank van elke muis in elk beeld als achtergrond van belang zijnde de bioluminescent signaal van de tumor gebaseerd op de mate van achtergrond bioluminescent signaalintensiteit corrigeren. Wij geven de voorkeur het gebruik van de &quot;Radiance&quot; instelling in plaats van &quot;Counts&quot; als de outputwaarden voor bioluminescente signaal. </li><li> Exporteer de ROI resultaten in Excel en bepaal de maximale achtergrond gecorrigeerde bioluminescente signaal voor elke muis. </li><li> Herhaal bioluminescent imaging zoals voor seriële monitoring van tumorgroei. In onze experimenten, voeren we wekelijks BLI. Wij verkiezen bepalen van de maximale BLI signaal voor een bepaalde opnamesessie door middel frequent blootstelling gedurende 5 - 30 min na injectie van D-luciferine. </li></ol> D. Representatieve resultaten Deze stereotactische implantatie techniek is geassocieerd met een succesvolle tumor-nemen percentage van 90-100% en met lage perioperatieve mortaliteit die gewoonlijk minder dan 5%. Het risico van onbedoelde bijwerkingen is laag met deze techniek, waaronder complicaties zaaien van het ruggenmerg van tumorcellen geïmplanteerd in de ventrikels of extracraniale tumorgroei van beide zaaien van de incisie met tumorcellen of onvoldoende sluiting van het boorgat eenllowing intracraniale tumor uit te breiden door de opening in de schedel. Ex vivo analyse van tumorxenotransplantaten aangetoond verwacht gebieden van hypoxie, verhoogde VEGF expressie en necrose. Fluorescentiemicroscopie voor groen fluorescent eiwit (GFP) stabiel tot expressie gebracht door onze GBM cellijn bleek de infiltratieve aard van deze xenografts. Figuur 1 toont de resultaten van een typische succesvolle stereotactische implantatie van GBM cellen in de hersenen van een muis. Dit is een T2-gewogen hersen MRI-scan van een muis hersenen uitgevoerd met een 9,4 Tesla magneet 21 dagen na implantatie met de techniek hier beschreven. Figuur 1 toont een focus van de tumor in de rechter hersenhelft (contouren in het roze) het meten van 19 mm 3 dat lokaliseert de precieze coördinaten van de implantatieplaats. Figuur 2 toont de resultaten van bioluminescent beeldvorming met de techn<html> iques hier beschreven voor een groep van 10 muizen met stereotactisch geïmplanteerde tumoren die waren gelijkmatig gestratificeerd op basis van maximale bioluminescente intensiteit van het signaal om ofwel craniale bestraling (4 x 4 Gy dagelijkse fracties) of helemaal geen behandeling krijgen. In dit experiment blijkt dat bioluminescent imaging bestraling proliferatie van de geïmplanteerde tumoren remt, wat geen verhoging van het gedetecteerde bioluminescent signaal, het signaal aanzienlijk verhoogt in mock-bestraalde controle tumoren vanwege wildgroei van de kankercellen. Figuur 1 (Video). Coronale MRI secties van een muis hersenen met een U251 glioblastoma multiforme tumor met contouren van de tumor volume (in het roze). De scan werd uitgevoerd met behulp van een spin echo T2 gewogen protocol op een 9,4 Tesla scanner. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/4089/4089movie1.m4v" target="_blank">Klik hier om film te bekijken</a> . re 2 &quot;src =&quot; / files/ftp_upload/4089/4089fig2.jpg &quot;/&gt; Figuur 2. 10 muizen met stereotactisch geïmplanteerde glioblastoma multiforme tumoren werden behandeld met ofwel uitwendige bestraling tot 16 Gy in 4 fracties of geen behandeling. Muizen werden afgebeeld met bioluminescent beeldvorming vóór de behandeling en wekelijks na het begin van de behandeling. De grafiek geeft de relatieve bioluminescentie berekend mediane factor van verandering wanneer veelvoudverandering wordt gedefinieerd als de verhouding van huidige maximale waarde BLI voorbehandelen maximale BLI waarde.

<ol><li>Stupp, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Radiotherapy+plus+concomitant+and+adjuvant+temozolomide+for+glioblastoma%5BTitle%5D)+AND+%22N.+Engl.+J.+Med%22%5BJournal%5D)">Radiotherapy plus concomitant and adjuvant temozolomide for glioblastoma.</a> N. Engl. J. Med. 352, 987-996 (2005).</li>
<li>Jacobs, V. L., Valdes, P. A., Hickey, W. F., De Leo, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Current+review+of+in+vivo+GBM+rodent+models%3A+emphasis+on+the+CNS-1+tumour+model%5BTitle%5D)+AND+%22ASN+Neuro%22%5BJournal%5D)">Current review of in vivo GBM rodent models: emphasis on the CNS-1 tumour model.</a> ASN Neuro. 3, e00063(2011).</li>
<li>Shelton, L. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+novel+pre-clinical+in+vivo+mouse+model+for+malignant+brain+tumor+growth+and+invasion%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Neurooncol%22%5BJournal%5D)">A novel pre-clinical in vivo mouse model for malignant brain tumor growth and invasion.</a> J. Neurooncol. 99, 165-176 (2010).</li>
<li>Brehar, F. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+development+of+xenograft+glioblastoma+implants+in+nude+mice+brain%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Med.+Life%22%5BJournal%5D)">The development of xenograft glioblastoma implants in nude mice brain.</a> J. Med. Life. 1, 275-286 (2008).</li>
<li>Ozawa, T., James, C. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Establishing+Intracranial+Brain+Tumor+Xenografts+With+Subsequent+Analysis+of+Tumor+Growth+and+Response+to+Therapy+using+Bioluminescence+Imaging%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Vis.+Exp%22%5BJournal%5D)">Establishing Intracranial Brain Tumor Xenografts With Subsequent Analysis of Tumor Growth and Response to Therapy using Bioluminescence Imaging.</a> J. Vis. Exp. (41), e1986(2010).</li>
<li>Radaelli, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Immunohistopathological+and+neuroimaging+characterization+of+murine+orthotopic+xenograft+models+of+glioblastoma+multiforme+recapitulating+the+most+salient+features+of+human+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Histol.+Histopathol%22%5BJournal%5D)">Immunohistopathological and neuroimaging characterization of murine orthotopic xenograft models of glioblastoma multiforme recapitulating the most salient features of human disease.</a> Histol. Histopathol. 24, 879-891 (2009).</li>
<li>Baumann, B. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Enhancing+the+efficacy+of+drug-loaded+nanocarriers+against+brain+tumors+by+targeted+radiation+therapy%5BTitle%5D)+AND+%22%22%5BJournal%5D)">Enhancing the efficacy of drug-loaded nanocarriers against brain tumors by targeted radiation therapy.</a> , Submitted (2012).</li>
<li>Baumann, B. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+integrated+method+for+reproducible+and+accurate+image-guided+stereotactic+cranial+irradiation+of+brain+tumors+using+the+Small+Animal+Radiation+Research+Platform+%28SARRP%29%5BTitle%5D)+AND+%22Transl.+Oncol%22%5BJournal%5D)">An integrated method for reproducible and accurate image-guided stereotactic cranial irradiation of brain tumors using the Small Animal Radiation Research Platform (SARRP).</a> Transl. Oncol. , Forthcoming (2012).</li>
<li>Park, S. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((MicroPET%2FCT+imaging+of+an+orthotopic+model+of+human+glioblastoma+multiforme+and+evaluation+of+pulsed+low-dose+irradiation%5BTitle%5D)+AND+%22Int.+J.+Radiat.+Oncol.+Biol.+Phys%22%5BJournal%5D)">MicroPET/CT imaging of an orthotopic model of human glioblastoma multiforme and evaluation of pulsed low-dose irradiation.</a> Int. J. Radiat. Oncol. Biol. Phys. 80, 885-892 (2011).</li>
<li>Szentirmai, O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Noninvasive+bioluminescence+imaging+of+luciferase+expressing+intracranial+U87+xenografts%3A+correlation+with+magnetic+resonance+imaging+determined+tumor+volume+and+longitudinal+use+in+assessing+tumor+growth+and+antiangiogenic+treatment+effect%5BTitle%5D)+AND+%22Neurosurgery%22%5BJournal%5D)">Noninvasive bioluminescence imaging of luciferase expressing intracranial U87 xenografts: correlation with magnetic resonance imaging determined tumor volume and longitudinal use in assessing tumor growth and antiangiogenic treatment effect.</a> Neurosurgery. 58, 365-372 (2006).</li>
<li>Dinca, E. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Bioluminescence+monitoring+of+intracranial+glioblastoma+xenograft%3A+response+to+primary+and+salvage+temozolomide+therapy%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Neurosurg%22%5BJournal%5D)">Bioluminescence monitoring of intracranial glioblastoma xenograft: response to primary and salvage temozolomide therapy.</a> J. Neurosurg. 107, 610-616 (2007).</li>
</ol>

Geen belangenconflicten verklaard.

De methode van stereotactische implantatie van kankercellen in muizen beschreven in dit document genereert reproduceerbaar tumoren die redelijkerwijs recapituleren de infiltratieve en snelle groei patroon van klinische glioblastoma multiforme 2, 6-8. Deze techniek is bijzonder geschikt voor experimenten stratificatie muizen gelijkmatig verschillende behandelgroepen waar reproduceerbare tumoren van vergelijkbare grootte en biologische eigenschappen en in specifieke anatomische locaties gewenst. Stereotactische...

<table border="1"><tbody><tr><td> Beschrijving </td><td> Leverancier </td><td> Catalogus nummer </td><td> Reacties </td></tr><tr><td> Digitale Alleen voor Muis stereotaxische Instrument </td><td> Stoelting </td><td> 51730D </td><td> Stereotactische platform voor muis implantatie </td></tr><tr><td> Ketamine / xylazine </td><td></td><td></td><td> Injecteerbare anesthesie </td></tr><tr><td> Puralube Vet zalf (oogheelkundige) </td><td> Amazon.com </td><td></td><td> Om het drogen te voorkomen van de ogen van de muis </td></tr><tr><td> Boor houder voor de stereotactische platform </td><td> Stoelting </td><td> 51681 </td><td></td></tr><tr><td> Micromotor Elektrische Boor </td><td> Stoelting </td><td> 51449 </td><td> Voor het boren door de schedel </td></tr><tr><td> 0,45 mm hardmetalen boor </td><td> Stoelting </td><td> 514551 </td><td></td></tr><tr><td> Steriele wattenstaafjes </td><td> Fisher Scientific </td><td> 23-400-100 </td><td></td></tr><tr><td> Glaskraal droog sterilisator (Germinator 500) </td><td> Braintree Scientific </td><td> GER-5287 </td><td> Om metalen chirurgische instrumenten te steriliseren </td></tr><tr><td> Muis rectale sonde </td><td> Braintree Scientific </td><td> RET-3-ISO </td><td> Compatibel met de temperatuurregelaar </td></tr><tr><td> Temperatuurregelaar (TCAT-2DF) </td><td> Harvard Apparatus </td><td> 727561 </td><td> Temperatuurregelaar dier temperatuur te handhaven tijdens chirurgie </td></tr><tr><td> Kleine verwarmingsplaat </td><td> Harvard Apparatus </td><td> 727617 </td><td> Voor gebruik met temperatuurregelaar muis warmen operatie. De verwarmingsplaat past onder de muis op de stereotaxische platform. </td></tr><tr><td> Wegwerp Scalpels </td><td> BD Bard-Parker </td><td> 2015-11 </td><td> # 10 scalpel </td></tr><tr><td> 10 microliter injectiespuit </td><td> Hamilton </td><td> 7635-01 </td><td> Voor injectie van tumorcellen </td></tr><tr><td> 30 gauge naalden, 1 &quot;lang, met platte punt </td><td> Hamilton </td><td> Divers </td><td> Verenigbaar moet zijn met de injectiespuit 10 pi </td></tr><tr><td> Nanomite Programmeerbare spuitpomp </td><td> Harvard Apparatus </td><td> 704507 </td><td> Digitale gemotoriseerde spuit injector voor stereotaxische apparaat </td></tr><tr><td> Cellulose steriele chirurgische speer sponzen </td><td> Ultracell </td><td> 40410 </td><td> Om het chirurgische veld drogen </td></tr><tr><td> Bone wax </td><td> Ethicon </td><td> W31 </td><td> Om de braam gat dichten </td></tr><tr><td> Tissumend II synthetische absorbeerbare weefselhechtmiddel </td><td> Veterinary Products Laboratoria </td><td> 3002931 </td><td> Om de incisie verzegelen </td></tr><tr><td> Warm water pomp met verwarmingskussen </td><td> Gaymar </td><td> TP-650 </td><td> Verwarmt muizen in post-operatieve periode </td></tr><tr><td> IVIS Lumina II </td><td> Caliper Life Science </td><td></td><td> Bioluminescent imager </td></tr><tr><td> D-luciferine kaliumzout </td><td> Gold Biotechnologie </td><td> LUCK-1 </td><td> Luciferine voor bioluminescente beeldvorming </td></tr></tbody></table>

stereotactische intracraniale implantatie en<em&gt; in vivo</em&gt; bioluminescent imaging van tumorxenograften in een muis model systeem van glioblastoma multiforme

Stereotactic Intracranial Implantation and In vivo Bioluminescent Imaging of Tumor Xenografts in a Mouse Model System of Glioblastoma Multiforme

Glioblastoma multiforme (GBM) is een high-grade primaire hersenkanker met een mediane overleving van slechts 14,6 maanden in de mens, ondanks standaard tri-modaliteit behandeling bestaande uit chirurgische resectie, post-operatieve radiotherapie en temozolomide chemotherapie 1. Nieuwe therapeutische benaderingen zijn duidelijk nodig om overleving van de patiënten en de kwaliteit van leven te verbeteren. De ontwikkeling van meer effectieve behandeling strategieën zouden worden geholpen door dierlijke modellen van GBM die ziekte bij de mens recapituleren nog toe seriële beeldvorming om tumorgroei en respons op de behandeling te controleren. In dit artikel beschrijven we onze techniek voor de precieze stereotactische implantatie van bio-afdrukbare GBM kankercellen in de hersenen van muizen naakt resulteert in tumorxenotransplantaten dat de belangrijkste klinische kenmerken van GBM 2 recapituleren. Deze methode levert tumoren die reproduceerbaar zijn en bevinden zich in precieze anatomische locaties terwijl bioluminescentie beeldvorming naar serieel intracraniale xenograft groei en de reactie op behandelingen 3-5. Deze methode wordt ook goed verdragen door de dieren met een lage perioperatieve morbiditeit en mortaliteit.

We beschrijven een geïntegreerde methode voor de exacte, stereotactische implantatie van menselijke glioblastoma multiforme cellen in de hersenen van muizen en vervolgens naakt serial<em&gt; In vivo</em&gt; Imaging groei en reactie op behandeling van de resulterende xenografts controleren.

Stereotactische Intracraniale Implantatie en<em&gt; In vivo</em&gt; Bioluminescent Imaging van tumorxenograften in een Muis Model Systeem van glioblastoma multiforme

Glioblastoma multiforme (GBM) is een primaire hersenkanker met een hoge graad en een mediane overleving van slechts 14,6 maanden bij mensen, ondanks standaard tri-modale...

Het algemene doel van deze procedure is om via nauwkeurige stereotactische implantatie van bio-beeldbare glioblastoma multiforme-kankercellen in de hersenen van naakte muizen tumorxenografen te genereren die belangrijke klinische kenmerken van glioblastoma multiforme nabootsen. Dit wordt bereikt door eerst glioblastoma multiforme-tumorcellen voor te bereiden om luciferase stabiel tot expressie te brengen voor seriële niet-invasieve bioluminescente beeldvorming. De tweede stap is om de muis te anesthetiseren en in de stereotactische fixatiehouder te plaatsen.Vervolgens wordt er een incisie in de huid gemaakt en wordt er een boorgat geboord op de exacte coördinaten vanaf de B bgma. De laatste stap is de langzame implantatie van tumorcellen in de hersenen met behulp van stereotactische technieken, gevolgd door het verwijderen van de naald en het sluiten van de incisie. Ten slotte worden bioluminescentie-imaging en MRI gebruikt om seriële niet-invasieve beeldvorming uit te voeren om de tumorgroei en de respons op experimentele behandelingen te volgen.Het belangrijkste voordeel van deze techniek vergeleken met bestaande methoden, zoals niet-stereotactische handmatige implantatie van kan

stereotactic-intracranial-implantation-vivo-bioluminescent-imaging

Research

JoVE Journal

Medicine

Geneeskunde

Luciferase-gemodificeerd menselijk brein tumor xenotransplantaten kan intracranially worden vastgesteld athymische muizen, met de daaropvolgende controle van de tumorgroei en de respons op de therapie met behulp van bioluminescentie beeldvorming. In combinatie met survival analyse, bioluminescentie monitoring is een essentieel onderzoeksinstrument voor pre-klinisch testen van therapieën worden overwogen voor de behandeling van hersentumoren.

Tot vaststelling van Intracraniële hersentumor xenotransplantaten Met verdere analyse van de tumorgroei en de respons op de therapie met behulp van bioluminescentie Imaging

Intracraniële implantatie van GL261 cellen in C57BL / 6 muizen produceert kwaadaardige gliomen dat veel van de kenmerken van de menselijke glioblastoma multiforme samenvatten. We gebruikten GL261 cellen die stabiel uitdrukken luciferase om ons in staat om te...

Intracraniële Implantatie met Latere 3D In Vivo Bioluminescent Imaging van Murine Gliomen

Source: Clark, A.J., et al. Bioluminescence Imaging of an Immunocompetent Animal Model for Glioblastoma. J. Vis. Exp. (2016)This video demonstrates bioluminescence imaging to track glioblastoma progression in an immunocompetent mouse model, using luciferase-expressing tumor cells and luciferin to quantify tumor growth non-invasively.

Bioluminescence Imaging of an Immunocompetent Mouse Model for Glioblastoma

We hebben een corticaal orthotope glioblastoom model vastgesteld muizen intravitale twee-foton microscopie dat de biofysische beperkingen recapituleert beginsel zullen spelen tijdens de groei van de tumor. Een chronische glazen venster vervangen van de schedel boven de tumor kan de follow-up van de progressie van de tumor na verloop van tijd door twee-foton microscopie.

Een orthotope Glioblastoma Muis Model Handhaving Brain Parenchymale fysieke beperkingen en geschikt voor intravitale twee-foton microscopie

De hersenen is een unieke site met eigenschappen die niet goed weergegeven door in vitro of ectopische analyses. Orthotopische muismodellen met reproduceerbare ligging en groei-eigenschappen op betrouwbare wijze kan worden gemaakt met intracraniële injecties met een stereotaxisch fixatie instrument en een lage druk spuit pomp.

Creëren Anatomisch nauwkeurige en reproduceerbare Intracranial Xenograften van Human hersentumoren

GL261-glioomcellen bieden een bruikbaar immunocompetent diermodel van glioblastoom. De doelen van dit protocol zijn om de juiste technieken te demonstreren voor het monitoren van intracraniële tumorgroei met behulp van in vivo bioluminescentie-beeldvorming, en om de bruikbaarheid van luciferase-gemodificeerde GL261-cellen te verifiëren voor het bestuderen van tumorimmunologie en immunotherapeutische benaderingen voor de behandeling van glioblastoom.

Bioluminescentie beeldvorming van een Immunocompetente diermodel voor Glioblastoma

Orthotopic intracraniële injectie van tumorcellen wordt in kankeronderzoek te bestuderen hersenen tumor biologie, progressie en evolutie therapeutische respons uitgegaan. Hier presenteren we fluorescentie moleculaire tomografie van tumor xenografts, die biedt real-time intravital imaging en kwantificering van een tumor massa in preklinische glioblastoma modellen.

Fluorescentie moleculaire tomografie voor In Vivo Imaging van Glioblastoma Xenografts

Hier beschrijven we een preklinisch orthotopisch muismodel voor GBM, vastgesteld door intracraniële injectie van cellen afgeleid van genetisch gemanipuleerde muismodeltumoren. Dit model toont de ziektekenmerken van menselijke GBM. Voor translationele studies wordt de hersentumor van de muis gevolgd door in vivo MRI en histopathologie.

Translationele orthotopische modellen van glioblastoom multiforme

We presenteren een nieuwe benadering voor twee-fotonmicroscopie van de tumorafgifte van fluorescerend gelabelde ijzeroxide-nanodeeltjes aan glioblastoom in een muismodel.

Intravitale microscopie met twee fotonen van glioblastoom in een muizenmodel

Het doel van dit protocol is om onderzoekers een zeer reproduceerbare techniek te bieden voor intracraniële implantaties.

Stereotactische intracraniële implantatie van door de patiënt afgeleide xenograftcellijnen van de glioblastoom bij muizen

Leer stereotactische intracraniale implantatie van glioblastoma multiforme cellen in naakte muizen. Deze methode maakt niet-invasieve bioluminescentiebeeldvorming mogelijk om tumorgroei en behandelingsrespons te volgen.

Stereotactische Intracraniale Implantatie en In vivo Bioluminescent Imaging van tumorxenograften in een Muis Model Systeem van glioblastoma multiforme (Video) | JoVE Journal

Stereotactische Intracraniale Implantatie en

Meer video's verkennen