Name: Isolatie van CD4 + T-cellen van de muis lymfeknopen Met behulp van Miltenyi MACS Zuivering (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2007-11-01T00:34:55.000+00:00
Duration: 9 min 47 s
Description: Leer de isolatie van CD4+ T-cellen uit muizenlymfeknopen met de Miltenyi MACS-kit. Deze negatieve selectiemethode levert cellen met ≥96% zuiverheid voor immunologisch onderzoek.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

playerTrialDesktop

We willen Rebecca Paquett bedanken voor de bereiding van MACS buffer.

Lees en volg het protocol opgenomen in de Miltenyi kit of online op <a href="http://www.miltenyibiotec.com/">http://www.miltenyibiotec.com/</a> .

<ol><li>Miller, M. J., Hejazi, A. S., Wei, S. H., Cahalan, M. D., Parker, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((T+cell+repertoire+scanning+is+promoted+by+dynamic+dendritic+cell+behavior+and+random+T+cell+motility+in+the+lymph+node%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+Natl+Acad+Sci+U+S+A%22%5BJournal%5D)">T cell repertoire scanning is promoted by dynamic dendritic cell behavior and random T cell motility in the lymph node.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 101, 998-1003 (2004).</li>
<li>Matheu, M. P., Deane, J. A., Parker, I., Fruman, D. A., Cahalan, M. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Class+IA+phosphoinositide+3-kinase+modulates+basal+lymphocyte+motility+in+the+lymph+node%5BTitle%5D)+AND+%22J+Immunol%22%5BJournal%5D)">Class IA phosphoinositide 3-kinase modulates basal lymphocyte motility in the lymph node.</a> J Immunol. 179, 2261-2269 (2007).</li>
</ol>

De auteurs hebben niets te melden.

Isolatie van cellen uit de primaire bron is een noodzakelijke stap in veel meer complexe protocollen. Miltenyi biedt kits te isoleren cellen van verschillende organismen waaronder de mens, niet-menselijke primaten, rat en, zoals we hier beschrijven, muizen. Magnetische bead-based celscheiding maakt zowel positieve selectie (of cel depletie) als negatieve selectie. Hier tonen we negatieve selectie van de ongerepte of na ve CD4 + helper T-cellen. Met behulp van deze standaard protocol we meestal zuiveren cellen die ≥ 96% zuiver CD4 + / CD3 +....

<table><tbody><tr><td>MACS-buffer</td><td>Reagens</td><td>Geen</td><td>Geen</td><td>Bereiden zoals beschreven door Miltenyi.</td></tr><tr><td>CD4+ T-cel isolatiekit: Untouched Isolation</td><td>Reagens</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>130-090-860</td><td>Voor gebruik met het Miltenyi-systeem.</td></tr><tr><td>Steriele fosfaatgebufferde zoutoplossing (PBS)</td><td>Reagens</td><td></td><td></td><td>Voor gebruik bij de bereiding van de MACS-buffer.</td></tr><tr><td>Corning 35mm niet TC-behandelde kweekschaal</td><td>Overig</td><td>Corning</td><td>430588</td><td>Gebruikt bij de bereiding van een single cell suspensie.</td></tr><tr><td>70 micron celzeef</td><td>Tool</td><td>BD Biosciences</td><td>352350</td><td>Gebruikt bij de bereiding van een single cell suspensie.</td></tr><tr><td>6 mL spuit</td><td>Tool</td><td>Tyco Healthcare, Covidien</td><td>8881516051</td><td>Gebruikt bij de bereiding van een single cell suspensie.</td></tr><tr><td>10x Dulbecco&amp;rsquo;s fosfaatgebufferde zoutoplossing (DPBS)</td><td>Reagens</td><td>Invitrogen</td><td>14200-075</td><td>Voor gebruik bij RBC-lyse.</td></tr><tr><td>Steriel water</td><td>Reagens</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>W4502</td><td>Voor gebruik bij RBC-lyse.</td></tr></tbody></table>

isolatie van cd4 + t-cellen van de muis lymfeknopen met behulp van miltenyi macs zuivering

Isolation of CD4+ T cells from Mouse Lymph Nodes Using Miltenyi MACS Purification

Isolatie van cellen uit de primaire bron is een noodzakelijke stap in veel meer complexe protocollen. Miltenyi biedt kits te isoleren cellen van verschillende organismen waaronder de mens, niet-menselijke primaten, rat en, zoals we hier beschrijven, muizen. Magnetische bead-based celscheiding maakt zowel positieve selectie (of cel depletie) als negatieve selectie. Hier tonen we negatieve selectie van de ongerepte of na ve CD4 + helper T-cellen. Met behulp van deze standaard protocol we meestal zuiveren cellen die ≥ 96% zuiver CD4 + / CD3 +. Dit protocol wordt gebruikt in combinatie met het protocol Dissection en 2-Photon Imaging van perifere lymfeklieren in Muizen gepubliceerd in nummer 7 van Jupiter, voor het zuiveren van T-cellen en andere celtypes te adoptief dragen voor de beeldvorming doeleinden. Hoewel we FACS-analyse niet aan te tonen in dit protocol video, is het sterk aanbevolen om de totale zuiverheid van de geïsoleerde cellen met behulp van de juiste antilichamen via FACS te controleren. Daarnaast tonen we de niet-steriele methode van T-cel isolatie. Als steriele cellen nodig zijn voor uw specifieke end-user applicatie, moet u alle van de aangetoonde procedures in de weefselkweek kap doen onder standaard steriele omstandigheden. Bedankt voor het kijken en veel succes met uw eigen experimenten!

Isolatie van lymfocyten met behulp van de Miltenyi MAC-kit is een betrouwbare manier om cellen van hele lymfeweefsel homogenaten te zuiveren. Cellen gezuiverd met behulp van de Miltenyi systeem zijn meestal ≥ 96% zuiver. Hier tonen we de stappen die zijn genomen om CD4 + T-cellen, een van de vele kits worden aangeboden door Miltenyi isoleren.

Isolatie van CD4 + T-cellen van de muis lymfeknopen Met behulp van Miltenyi MACS Zuivering

Het isoleren van cellen uit de primaire bron is een noodzakelijke stap in veel complexere protocollen. Miltenyi biedt kits aan om cellen te isoleren uit verschillende ...

Dit is een Max MIDI magneet. Er staat: voorzichtig, extreem sterke magnetische velden. Hoi, ik ben Melanie Matthew van het laboratorium van Mike Collins aan de University of California Irvine, Department of Physiology and Biophysics.Vandaag gaan we u een negatieve selectiepreparatie van CD4-positieve T-cellen laten zien met behulp van de kits van Miltenyi Biotec. Hier hebben we de MiniMACS en de MACS-magneten; de MiniMACS worden gebruikt voor grotere scheidingen. U kunt tot 10⁹ cellen door een kolom leiden die in de MiniMACS past, terwijl de MACS-magneten worden gebruikt voor veel kleinere celvolumes.Afhankelijk van het feit of u een positieve of een negatieve selectie uitvoert, labelt u de cellen met het juiste antilichaam. Deze zijn voorzien van een magnetische kraal die zich aan de magneet zal hechten. In het geval van een negatieve selectie zullen de cellen waarin u geïnteresseerd bent door de kolom stromen, waarna u het eluaat kunt opvangen, dat uw doelcellen bevat.Ik moet vermelden dat de technieken die ik u vanavond laat zien niet steriel zijn. Als u deze cellen dus voor celkweek wilt gebruiken, dient u alles in de weefselkweekkap met steriele instrumenten uit te voeren. Hoe

isolation-cd4-t-cells-from-mouse-lymph-nodes-using-miltenyi-macs

Research

JoVE Journal

Biology

Biologie

Een sterk gezuiverde bereiding van de muis long dendritische cellen wordt beschreven. Specifieke aandacht wordt gegeven aan de isolatie van de conventionele dendritische cel subset.

Isolatie van Mouse Lung dendritische cellen

This video describes T-cells enrichment from the spleen of a mouse by negative selection using a magnetic separator. The technique involves targeting the other cells in the sample for depletion using antibodies or ligands directed against specific cell surface antigens.

T-Cell Enrichment: A Technique to Isolate T-Cells from Mixed Cell Population by Magnetic Separation

This video demonstrates a protocol for the magnetic labeling-based isolation of a low-concentration population of CD4+Vδ1+γδ T cells from human peripheral blood mononuclear cells (PBMCs). Using a combination of FITC-conjugated anti-Vδ1 antibodies, magnetic anti-FITC microbeads, and anti-CD4 antibody-coated superparamagnetic beads, the CD4+Vδ1+ T-cells can be successfully purified from the PBMC population.

Selective Isolation of CD4+ V&delta;1+ &gamma;&delta; T Cells from Human Peripheral Blood Mononuclear Cells

Met effector functies te onderscheiden van andere T-cel subsets, zijn Th17 cellen centraal zijn betrokken bij inflammatoire auto-immuniteit. Deze in vitro Th17 differentiatie protocol verschaft een middel om te bepalen of naïeve CD4 + T-lymfocyten kunnen differentiëren in Th17 cellen en hun rol bij auto-immuniteit en gastheerrespons verder te onderzoeken.

Isolatie en Th17 Differentiatie van naïeve CD4 T-lymfocyten

Dit protocol detailleert een methode voor het isoleren van antigen-presenterende cellen uit humane thymus via verschillende stappen enzymatische afbraak van het weefsel, gevolgd door centrifugatie van de enkele celsuspensie en tenslotte magnetische en / of FACS sorteren van celpopulaties plaats.

Isolatie van myeloïde dendritische cellen en epitheelcellen van Human Thymus

Naïve CD4+ T-cellen polariseren naar verschillende subsets, afhankelijk van de omgeving op het moment van activering.  De differentiatie van naïve CD4+ T-cellen naar verschillende effector-subsets kan in vitro worden bereikt door de toevoeging van T-celreceptor-stimuli en specifieke cytokine-signalen.

Muis Naïve CD4<sup&gt; +</sup&gt; T Cell Isolatie en<em&gt; In vitro</em&gt; Differentiatie in T cel subsets

Er bestaan verschillende zeldzame populaties van dendritische celsubpopulaties in lymfoïde organen en daarom zijn ze lastig te isoleren in voldoende aantallen en zuiverheid voor immunologische experimenten. Hier beschrijven we een methode met hoge efficiëntie en hoog rendement voor het isoleren van alle momenteel bekende belangrijke subpopulaties van dendritische cellen in de milt van muizen.

Een efficiënte en High Yield methode voor het isoleren van de muis dendritische cel subsets

Hier beschrijven we een gedetailleerd protocol voor de isolatie van lymfocyten van de inductieve sites met inbegrip van de darm-geassocieerde lymfoïde weefsel Peyer van patches en de zuig mesenterische lymfklieren, en de effector met inbegrip van de lamina propria en de intestinale epitheel van het kleine intestinale immuunsysteem.

Isoleren van lymfocyten van het immuunsysteem intestinale kleine muis

Hier presenteren we een protocol om te isoleren van dendritische cellen uit lymfkliertest milt door magnetische cel Sorteren en latere adoptief overdracht naïef muizen. Het model van hoge-zout geactiveerde dendritische cellen werd gekozen om de stapsgewijze procedures voor de overdracht van de geadopteerde en stroom cytometry uitleggen.

Isolatie en adoptief overdracht van hoge zout behandeld antigeen-presenteren dendritische cellen

Twee-foton beeldvorming heeft blootgelegd lymfocyten beweeglijkheid en cellulaire interacties binnen de lymfeklier onder basale omstandigheden en gedurende een immuunrespons 1. Hier laten we zien adoptieve overdracht van T-cellen, isolatie van de lymfeklieren, en beeldvorming beweeglijkheid van de CD4 + T-cellen in de geëxplanteerd lymfeklier.

Dissection en 2-Photon Imaging van perifere lymfeklieren in Muizen

Leer de isolatie van CD4+ T-cellen uit muizenlymfeknopen met de Miltenyi MACS-kit. Deze negatieve selectiemethode levert cellen met ≥96% zuiverheid voor immunologisch onderzoek.

Isolatie van CD4 + T-cellen van de muis lymfeknopen Met behulp van Miltenyi MACS Zuivering

Meer video's verkennen