NADH fluorescentie beeldvorming van geïsoleerde Biventriculaire Werken Rabbit Hearts

Het algemene doel van deze procedure is om metabolisme te bestuderen. Door gebruik te maken van NADH-beeldvorming in een werkende hartvoorbereiding, wordt dit bereikt door eerst het konijnenhart te isoleren. De tweede stap van de procedure is om alle vier de kamers van het hart succesvol te canuleren om een werkende hartmodel te bereiken.

De laatste stap is het opzetten van beeldvormingsapparatuur en het verzamelen van NADH-gegevens bij verschillende stapfrequenties. Uiteindelijk kunnen resultaten metabolische veranderingen van het hart tonen door middel van beeldvorming van fluorescerend NADH. Het belangrijkste voordeel van deze techniek ten opzichte van bestaande methoden zoals de lanor retroperfusie, is dat het hart werkt in zijn fysiologische toestand met stroom in de normale richting en met het hart dat zijn eigen druk levert voor coronaire perfusie.

Deze methode kan helpen bij het beantwoorden van belangrijke vragen in elektrofysiologie en de mechanismen van dodelijke aritmieën. Dit gebeurt door een fysiologisch model te bieden om de link tussen coronaire stromingsmetabolisme en elektrische activiteit te bestuderen. Visuele demonstratie van deze methode is cruciaal omdat de stappen voor canuleringen van vaten en hartkamers moeilijk te leren zijn.

Onjuiste techniek kan het hart beschadigen en de rest van het experiment in gevaar brengen. Voordat u een experiment uitvoert, spoelt u alle buizen in de kamers van het werkende hartsysteem met gezuiverd water en zuigt u het water uit het systeem door de pompen te laten draaien. Voeg cellulosemembraanfilters toe in de lijn met de LOR-perfusiepomp, de linker hartperfusiepomp en de rechter hartperfusiepomp.

Na het toevoegen van perfuse acht aan het systeem, voer een tweede punt calibratie uit voor elke drukgevoelige sensor. Schakel het verwarmde circulabel bad in dat de met water gevulde buizen en de warmtewisselaars verwarmt. Schakel het waterbad in. Gebruikt om het PERFUSE acht te verwarmen.

Schakel de pompen in die het PERFUSE acht in een gesloten lus circuleren, schakel de circulabel tank in om de Perfuse te oxygeneren. Acht, zorg ervoor dat de microvezel oxygenator of hemo-filters 95% zuurstof leveren aan de perfuse acht bij 80 kilopascals. Zorg er ten slotte voor dat de warmtewisselaars de temperatuur van de circulerende perfuse vasthouden.

Acht bij 37 graden Celsius, begin met de hartexcisie door het werkende hartsysteem in te stellen om in constante druk te werken. LRF-modus. Stel de druk van de aortablok in tussen 50 en 60 na het sederende van een konijn.

Injecteer pentobarbital en heparine in de marginale oorader of de laterale safeneveine aan de binnenkant van de achterste ledemaat. Zodra het konijn geen pijnreactie meer vertoont, open snel de borstholte. Snijd het pericard af, klemp de aorta af en verwijder het hart en de longen.

De longen worden aangehecht om het isoleren van de longaders gemakkelijker te maken. Vul vervolgens een spuit met 60 milliliter per F acht en 200 eenheden heparine. Bevestig een vijf millimeter canule en canuleer de aorta.

Bevestig de aorta aan de canule met nul maat zijdedraad. Druk vervolgens langzaam op de spuit om het bloed door het hart te spoelen. Stel het werkende hartsysteem in door het hart eerst aan de aortablok te koppelen.

Benader de connector onder een schuine hoek en laat Perfuse acht voorzichtig druppelen van de connector in de canule terwijl deze is bevestigd. Dit voorkomt dat lucht de aorta binnendringt, waardoor coronaire emboli worden voorkomen terwijl het hart in constante druk wordt geperfundeerd. L endorf-modus.

Verwijder het vet en bindweefsel en lokaliseer de volgende vaten. Onderste en bovenste vena cva, a aose-vene, longslagader en longaders. Ligateer vervolgens de bovenste vena cva.

Snij de longslagader net onder de plaats waar deze zich splitst in de rechter en linker longslagader. De overblijvende vaten zijn de longaders. Groep ze tussen het hart en de longen en ligateer ze allemaal met één hechting.

Dit is om twee redenen belangrijk. Ten eerste zorgt het vastbinden van de vaten die met de longen zijn verbonden ervoor dat er geen lekkage is zodra de canuleer is voltooid. En ten tweede is het belangrijk om beide VNA-cavas furl later te canuleeren.

Verwijder nu de longen. Snijd een geschikte grootte gat in de hoek van de linker atriumaanhangsel en zorg ervoor dat het is gevuld met profuse acht. Canuleer vervolgens het aanhangsel terwijl de canule volledig gevuld is met perfuse acht.

Terwijl u het weefsel vasthoudt, hecht u de canule aan het aanhangsel. Het weefsel van het linker atriumaanhangsel is extreem delicaat en kan gemakkelijk scheuren. Het is dus belangrijk om het linker atrium bij de eerste poging te canuleren, anders is het misschien niet mogelijk.

Schakel de pomp nummer twee in om stroming naar het linker atrium te bieden. Stel de preload in tussen twee en zes tor gedurende het hele experiment. De druk moet mogelijk worden aangepast.

Houd het binnen twee millimeter van de doeldruk. Schakel nu het hart in werkende hartmodus door pomp nummer één, de langor-pomp, tijdelijk uit te schakelen. Verlaag de aortadruk tot tend tor en verhoog deze vervolgens langzaam tot binnen het bereik van 80 tot 100 tor.

Dit laat de aortaklep openen en functioneren zoals het zou doen tijdens normale fysiologische omstandigheden. Stel de uiteindelijke afterloaddruk in op een waarde die ongeveer 20. Tore minder is dan de piek LV-druk met behulp van een canule die direct aan het systeem is bevestigd.

Canuleer het rechter atrium via de onderste vena CVA en hecht de canule aan de ader. Voorkom het binnendringen van luchtbellen. Schakel pomp nummer drie, de rechter zijpomp, in om stroming naar het rechter atrium te bieden.

Stel de druk in op ongeveer drie tor. Canuleer ten slotte het rechter ventrikel zonder lucht binnen te laten en hecht de canule aan de longslagader ery. Dit voltooit de biventriculaire canuleer.

Ga nu door naar signaalverwer