Name: Uitgebreide Profilering van Dopamine verordening in de substantia nigra en het ventrale tegmentale gebied (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2012-08-10T13:00:00.000+00:00
Duration: 9 min 54 s
Description: Leer een precieze dissectiemethode voor dopamineregulatie in de substantia nigra en het ventrale tegmentale gebied bij knaagdieren. Deze techniek combineert HPLC-analyse met eiwitbepaling voor uitgebreide moleculaire inzichten.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

De financiering voor de dit werk, en zoals aangehaald 2,10, werd verstrekt, voor een deel, door een onderzoek te verlenen awards uit aan MF Salvatore van de Amerikaanse Federatie voor Aging Research, de Edward P. Stiles Trust Fund en Biomedische Research Foundation van Noordwest-Louisiana, en BS Pruett van de Ike Muslow Predoctoraal Fellowship, LSU Health Sciences Center-Shreveport.

<ol><li>Trevitt, J. T., Carlson, B. B., Nowend, K., Salamone, J. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Substantia+nigra+pars+reticulate+is+a+highly+potent+site+of+action+for+the+behavioral+effects+of+the+D1+antagonist+SCH23390+in+rat%5BTitle%5D)+AND+%22Psychopharmacology%22%5BJournal%5D)">Substantia nigra pars reticulate is a highly potent site of action for the behavioral effects of the D1 antagonist SCH23390 in rat.</a> Psychopharmacology. 156, 32-41 (2001).</li>
<li>Salvatore, M. F., Pruett, B. S., Spann, S. L., Dempsey, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Aging+reveals+a+role+for+nigral+tyrosine+hydroxylase+ser31+phosphorylation+in+locomotor+activity+generation%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+ONE%22%5BJournal%5D)">Aging reveals a role for nigral tyrosine hydroxylase ser31 phosphorylation in locomotor activity generation.</a> PLoS ONE. 4, e8466(2009).</li>
<li>Rossato, J. L., Bevilaqua, L. R. M., Izquierdo, I., Medina, J. H., Cammarota, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dopamine+controls+persistence+of+long-term+memory+storage%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Dopamine controls persistence of long-term memory storage.</a> Science. 325, 1017-1020 (2009).</li>
<li>Keller, C. M., Salvatore, M. F., Pruett, B. S., Guerdin, G. F., Goeders, N. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Biphasic+dopamine+regulation+in+mesoaccumbens+pathway+in+response+to+non-contigent+binge+and+escalating+methamphetamine+regimens+in+the+Wistar+rat%5BTitle%5D)+AND+%22Psychopharmacology%22%5BJournal%5D)">Biphasic dopamine regulation in mesoaccumbens pathway in response to non-contigent binge and escalating methamphetamine regimens in the Wistar rat.</a> Psychopharmacology. 215, 513-526 (2011).</li>
<li>Lu, L., Dempsey, J., Liu, S. Y., Bossert, J. M., Shaham, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+single+infusion+of+brain-derived+neurotrophic+factor+into+the+ventral+tegmental+area+induces+long-lasting+potentiation+of+cocaine+seeking+after+withdrawal%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Neurosci%22%5BJournal%5D)">A single infusion of brain-derived neurotrophic factor into the ventral tegmental area induces long-lasting potentiation of cocaine seeking after withdrawal.</a> J. Neurosci. 24, 1604-1611 (2004).</li>
<li>Hoffer, B. J., Hoffman, A., Bowenkamp, K., Huettl, P., Hudson, J., Martin, D., Lin, L. F., Gerhardt, G. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Glial+cell+line-derived+neurotrophic+factor+reverses+toxin-induced+injury+to+midbrain+dopaminergic+neurons+in+vivo%5BTitle%5D)+AND+%22Neurosci.+Lett%22%5BJournal%5D)">Glial cell line-derived neurotrophic factor reverses toxin-induced injury to midbrain dopaminergic neurons in vivo.</a> Neurosci. Lett. 182, 107-111 (1994).</li>
<li>Salvatore, M. F., Zhang, J. L., Large, D. M., Wilson, P. E., Gash, C. R., Thomas, T. C., Haycock, J. W., Bing, G., Stanford, J. A., Gash, D. M., Gerhardt, G. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Striatal+GDNF+administration+increases+tyrosine+hydroxylase+phosphorylation+in+the+rat+striatum+and+substantia+nigra%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Neurochem%22%5BJournal%5D)">Striatal GDNF administration increases tyrosine hydroxylase phosphorylation in the rat striatum and substantia nigra.</a> J. Neurochem. 90, 245-254 (2004).</li>
<li>Lu, L., Wang, X., Wu, P., Xu, C., Zhao, M., Morales, M., Harvey, B. K., Hoffer, B. J., Shaham, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Role+of+ventral+tegmental+area+glial+cell-line+derived+neurotrophic+factor+in+incubation+of+cocaine+craving%5BTitle%5D)+AND+%22Biol.+Psychiatry%22%5BJournal%5D)">Role of ventral tegmental area glial cell-line derived neurotrophic factor in incubation of cocaine craving.</a> Biol. Psychiatry. 66, 137-145 (2009).</li>
<li>Lavicky, J., Dunn, A. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Corticotropin-releasing+factor+stimulates+catecholamine+release+in+hypothalamus+and+prefrontal+cortex+in+freely+moving+rats+as+assessed+by+microdialysis%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Neurochem%22%5BJournal%5D)">Corticotropin-releasing factor stimulates catecholamine release in hypothalamus and prefrontal cortex in freely moving rats as assessed by microdialysis.</a> J. Neurochem. 60, 602-612 (1993).</li>
<li>Salvatore, M. F., Pruett, B. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dichotomy+of+tyrosine+hydroxylase+and+dopamine+regulation+between+somatodendritic+and+terminal+field+areas+of+nigrostriatal+and+mesoaccumbens+pathways%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+ONE%22%5BJournal%5D)">Dichotomy of tyrosine hydroxylase and dopamine regulation between somatodendritic and terminal field areas of nigrostriatal and mesoaccumbens pathways.</a> PLoS ONE. 7, e29867(2012).</li>
<li>Salvatore, M. F., Garcia-Espana, A., Goldstein, M., Deutch, A. Y., Haycock, J. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Stoichiometry+of+tyrosine+hydroxylase+phosphorylation+in+the+nigrostriatal+and+mesolimbic+systems+in+vivo%3A+Effects+of+acute+haloperidol+and+related+compounds%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Neurochem%22%5BJournal%5D)">Stoichiometry of tyrosine hydroxylase phosphorylation in the nigrostriatal and mesolimbic systems in vivo: Effects of acute haloperidol and related compounds.</a> J. Neurochem. 75, 225-232 (2000).</li>
<li>Salvatore, M. F., Waymire, J. C., Haycock, J. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Depolarization-stimulated+catecholamine+biosynthesis%3A+involvement+of+protein+kinases+and+tyrosine+hydroxylase+phosphorylation+sites+in+situ%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Neurochem%22%5BJournal%5D)">Depolarization-stimulated catecholamine biosynthesis: involvement of protein kinases and tyrosine hydroxylase phosphorylation sites in situ.</a> J. Neurochem. 79, 349-360 (2001).</li>
<li>Haycock, J. W., Lew, J. Y., Garcia-Espana, A., Lee, K. Y., Harada, K., Meller, E., Goldstein, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Role+of+serine-19+phosphorylation+in+regulating+tyrosine+hydroxylase+studied+with+site-+and+phosphospecific+antibodies+and+site-directed+mutagenesis%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Neurochem%22%5BJournal%5D)">Role of serine-19 phosphorylation in regulating tyrosine hydroxylase studied with site- and phosphospecific antibodies and site-directed mutagenesis.</a> J. Neurochem. 71, 1670-1675 (1998).</li>
<li>Lindgren, N., Xu, Z. Q., Linskog, M., Herrera-Marschitz, M., Goiny, M., Haycock, J. W., Goldstein, M., Hokfelt, T., Fisone, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Regulation+of+tyrosine+hydroxylase+activity+and+phosphorylation+at+ser19+and+ser40+via+activation+of+glutamate+NMDA+receptors+in+rat+striatum%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Neurochem%22%5BJournal%5D)">Regulation of tyrosine hydroxylase activity and phosphorylation at ser19 and ser40 via activation of glutamate NMDA receptors in rat striatum.</a> J. Neurochem. 74, 2470-2477 (2000).</li>
</ol>

Geen belangenconflicten verklaard.

Zoals in figuur 1, dienen de hierboven beschreven leveren meerdere metingen van dopamine en regulerende eiwitten TH, DAT en VMAT2 van een monster van SN of VTA verkregen van ofwel de rat of muis. Nogmaals, de voordelen van het uitvoeren van dit protocol is dat de onderzoeker kan operationeel op elkaar afgestemde uitlezingen van de manier waarop dopamine is geregeld in vivo onder nagenoeg alle experimentele paradigma, en daarmee belangrijke experimentele middelen te besparen door het verminderen van het aantal d...

HPLC-systeem: Het basissysteem bestaat uit een Shimadzu LC10-ADvp HPLC-pomp, een Waters WISP 717 automatische monsterinjector, een 250 x 4,4 mm 5 micron Spherosorb ODS-1 C18 reverse-fase kolom (Waters), een Bioanalytical Systems (BAS) TL12 dual glazige koolstof elektrode, twee BAS LC4B elektrochemische detectoren, en een Waters Empower 2 het verzamelen van gegevens en integratie-systeem. De kolom wordt op 30-45 ° C (verwarming BAS LC22A kolom). De mobiele fase is 0,1 M natriumfosfaat (pH 3,0), 0,1 mM EDTA, 0.2-0.4 mM 1-Octane sulfonzuur (Eastman-Kodak), en 0,35% acetonitril (v / v), gefilterd door een 0,45 micron filter. Debiet is van 1,2 ml / min. Vier liter batches van de mobiele fase zijn geoptimaliseerd voor scheidingen door de pH, Octane sulfonzuur kolomtemperatuur. De mobiele fase wordt gerecycled en continu gespoeld met heliumgas aan opgeloste zuurstof te verwijderen. Recycling van de mobiele faseis bijna essentieel voor een goede resolutie voor een redelijke periode te handhaven. De mobiele fase houdbaarheid wordt onderhouden door middel van een flow switch (gecontroleerd door de integrator) om af te leiden naar de eerste 2-7 min van elke run te verspillen. De elektroden worden gehandhaafd op potentialen van ongeveer 0,78 en 0.95V ten opzichte van een referentie-elektrode Ag/AgC1. De elektrode aan de hogere potentiaal uitsluitend gebruikt voor het bepalen van tryptofaan (en NMDA interne standaard). De 0,78 V mogelijke geeft een uitstekende signaal-ruisverhouding voor detectie van de aminoverbindingen en verbindingen, andere dan tryptofaan. De chromatogrammen worden opgeslagen op de harde schijf van de Empower werkstation, en vervolgens verwerkt en de gegevens direct overgebracht naar een Excel-spreadsheet voor de berekening van metaboliet bedragen en de samenstelling van de groep gegevens. Pomp: Shimadzu LC-10AD Cell: BAS Cross Flow. Glassy carbon werkzame elektrode bij 0,780 en 0,950 V potentieel. Detector: BAS LC-4B gebruikt in dual channel mode. Gegevens Acq. Systeem: Waters Empower Pro 2. Injector: Waters WISP 717 Column: Waters Spherosorb ODS-1, 5 uM deeltje, 4,4 mm x 250 mm. <table border="1"><tbody><tr><td> Naam van het serum </td><td> Vennootschap </td><td> Catalogusnummer </td></tr><tr><td> Natriumdodecylsulfaat (SDS) </td><td> - JT Baker </td><td> 4095-02 </td></tr><tr><td> Trizma Base </td><td> Sigma </td><td> T1503-1KG </td></tr><tr><td> Trizma HCl </td><td> Sigma </td><td> T3253-1KG </td></tr><tr><td> Glycerol </td><td> Sigma </td><td> G8773-500 mL </td></tr><tr><td> PVP-40 </td><td> Sigma </td><td> PVP40-1KG </td></tr><tr><td> DPBS </td><td> Gibco </td><td> 21600-069 </td></tr><tr><td> Tween20 </td><td> Sigma </td><td> P1379-500 mL </td></tr><tr><td> Glycine </td><td> Sigma </td><td> G8898-1KG</td></tr><tr><td> Ponceau S </td><td> Fluka </td><td> 81460 </td></tr><tr><td> Broomfenolblauw </td><td> Sigma </td><td> B8026-5G </td></tr><tr><td> Dithiothreitol </td><td> Sigma </td><td> D-9163 </td></tr><tr><td> Eiwit Standaard 2 mg BSA </td><td> Sigma </td><td> P5619-25VL </td></tr><tr><td> Pierce BCA Protein Assay Reagens A </td><td> Thermo-Fisher Scientific </td><td> 23223 </td></tr><tr><td> Precision Plus Protein Standard </td><td> Bio Rad </td><td> 161-0373 </td></tr><tr><td> [125I]-proteïne A, specifieke activiteit </td><td> Perkin-Elmer </td><td></td></tr></tbody></table> Tabel 2. Reagentia. <table border="1"><tbody><tr><td> Reagentia </td><td> Formules </td></tr><tr><td> 10% SDS </td><td> 10 g SDS, 100 ml DI H 2 0 </td></tr><tr><td> 1% SDS (pH 8,2) </td><td><ol><li> 10 mL10% SDS </li><li> 60,5 mg Trizma Base </li><li> 37,22 mg EDTA </li><li> 90 ml DI H 2 0 </li></ol></td></tr><tr><td> Koper II Sulfaat-oplossing </td><td><ol><li> 1 g koper II sulfaat </li><li> 25 ml DI H 2 0 </li></ol></td></tr><tr><td> 3X monsterbuffer </td><td><ol><li> Trizma Base 2,27 g </li><li> SDS 6 g </li><li> Dithiothreitol 0,463 g </li><li> Glycerol 30 g </li><li> Broomfenolblauw 10 mg </li><li> Dih 2 0 (aanvankelijk boven reagentia aan 40 ml H 2 0 in een maatcilinder, voeg H 2 0 tot volume aan 100 ml) </li><li> HCl (toevoegen als nodig pH van 6,85 bereikt) </li><li> Bevries oplossing in 50 ml 2,0 buizen. </li></ol> (Maakt 100 ml): volume van 3X monsterbuffer nodig = ½ volume van de SDS gebruikt in de steekproef. </td></tr><tr><td> 1X monsterbuffer </td><td> Verdunnen 3X Sample Buffer tot 1X monsterbuffer met behulp van DI H 2 0 </td></tr><tr><td> 10X<html> Running Buffer (Voor 4 L) </td><td><ol><li> Trizma Base 121,1 g </li><li> Glycine 577 g </li><li> SDS 40 g </li></ol></td></tr><tr><td> 10X Transfer Buffer: (Voor 4 L) </td><td><ol><li> Glycine 360 ​​g </li><li> Trizma Base 96 g </li></ol></td></tr><tr><td> Ponceau </td><td><ol><li> Ponceau S 0,5 g </li><li> Azijnzuur 5 ml </li><li> DI H 2 0 95 mL </li></ol></td></tr><tr><td> 0,2% HCl-oplossing </td><td> 5,2 ml HCl in 500ml DI H 2 0 </td></tr><tr><td> PVP-T20 blokkeren Soln. (Voor 4 L) </td><td><ol><li> PVP-40 40 g </li><li> DPBS 38,2 g </li><li> Tween20 2 g </li><li> Thimerisol 0,4 g </li><li> 1 M Tris pH 7,6 (60,6 g Tris HCl + 13,9 g Tris Base in 500 ml DI H 2 0) - 50 ml </li></ol></td></tr><tr><td> 10X Blot Buffer (Voor 4 L) </td><td><ol><li> Tween 20 20 g </li><li> Tris Base 14 g </li><li> Tris HCl 61 g </li></ol></td></tr></tbody></table>NHOUD &quot;&gt; Tabel 3. Protein Assay en Western blotting Formules. Tyrosine hydroxylase normen: De gekalibreerde TH eiwit en fosforylering normen die door dit laboratorium zijn afgeleid van PC12 cel extracten, die werden geanalyseerd op TH eiwitgehalte en fosforylering stoichiometrie opzichte van een vooraf gekalibreerde TH normen die uiteindelijk is ontstaan ​​uit het laboratorium van Dr John Haycock 11 .

uitgebreide profilering van dopamine verordening in de substantia nigra en het ventrale tegmentale gebied

Comprehensive Profiling of Dopamine Regulation in Substantia Nigra and Ventral Tegmental Area

Dopamine een krachtig onderzocht neurotransmitter in het CNS. Inderdaad, heeft zijn betrokkenheid bij de bewegingsactiviteit en beloning gerelateerd gedrag bevorderd vijf decennia van onderzoek naar de moleculaire tekortkomingen in verband met dopamine regelgeving. Het merendeel van deze onderzoeken van dopamine regelgeving in de hersenen focus op de moleculaire basis voor de regulering in de terminal gebied regio&#39;s van de nigrostriatale en mesoaccumbens paden, striatum en de nucleus accumbens. Bovendien hebben deze studies gericht op de analyse van dopamine weefsel inhoud met normalisatie alleen nat weefsel gewicht. Onderzoek van de eiwitten die regelen dopamine, zoals tyrosine hydroxylase (TH) eiwit, TH fosforylering, dopamine transporter (DAT), en vesiculaire monoamine transporter 2 (VMAT2) eiwit vaak niet een analyse omvatten van dopamine weefsel inhoud in hetzelfde monster. De mogelijkheid om zowel dopamine weefsel inhoud en het regelen van eiwitten (waaronder post-tra te analyserennslational wijzigingen) geeft niet alleen inherente kracht om het interpreteren van de relatie van dopamine met het eiwit-niveau en de functie van TH, DAT, of VMAT2, maar strekt zich ook uit monster economie. Dit vertaalt zich in lagere kosten, en toch levert inzichten in de moleculaire regulatie van dopamine in vrijwel elke paradigma van de onderzoekers &#39;keuze. We richten ons de analyses in de middenhersenen. Hoewel de SN en VTA worden meestal genegeerd in de meeste studies van dopamine regelgeving, worden deze kernen gemakkelijk ontleed met de praktijk. Een uitgebreide uitlezing van dopamine weefsel inhoud en TH, DAT, of VMAT2 kunnen worden uitgevoerd. Er is snel groeiende literatuur over de invloed van dopamine functie in de SN en VTA op het gedrag en de impingements van exogene stoffen of ziekte processen die in 1-5. Bovendien, verbindingen zoals groeifactoren hebben een diepgaand effect op dopamine en dopamine-regulerende eiwitten, met een relatief grotere mate in de SN of VTA <sup&gt; 6-8. Daarom wordt deze methode gepresenteerd voor verwijzing naar de laboratoria die willen op hun vragen uit te breiden over de manier waarop specifieke behandelingen moduleren gedrag en dopamine regelgeving. Hier wordt een multi-step methode gepresenteerd voor de analyses van dopamine weefsel inhoud, het eiwit niveau van TH, DAT, of VMAT2, en TH fosforylering van de substantia nigra en de VTA van knaagdieren middenhersenen. De analyse van TH fosforylatie kan tot significante inzichten niet alleen hoe TH activiteit wordt gereguleerd, maar ook signaleringscascades getroffen in somatodendritisch kernen in een bepaalde paradigma. Wij illustreren de ontleding techniek om deze twee kernen en het monster verwerking van ontleed weefsel dat een profiel waaruit moleculaire mechanismen van dopamine regeling in vivo, specifiek voor elk kernen (figuur 1) levert scheiden.

Dopamine is duidelijk geregeld in de middenhersenen kernen, die de cellichamen en dendrieten van de dopamine neuronen bevatten. Hier beschrijven we een dissectie en sample-handling aanpak om de resultaten te maximaliseren, en dus conclusies en inzichten, op dopamine regelgeving in de middenhersenen kernen van de substantia nigra (SN) en ventrale tegmentale gebied (VTA) bij knaagdieren.

Uitgebreide Profilering van Dopamine verordening in de substantia nigra en het ventrale tegmentale gebied

Dopamine is een neurotransmitter in het CZS die intensief wordt bestudeerd. De betrokkenheid ervan bij locomotorische activiteit en beloningsgerelateerd gedrag heeft geleid tot vijf ...

Het algemene doel van deze procedure is om de informatie van de moleculaire readouts geassocieerd met de regulatie van dopamine te maximaliseren vanuit een enkele weefseldissectie van de somatodendritische regio's van de middenhersenstam. Dit wordt bereikt door eerst een nauwkeurige dissectie uit te voeren om de substantia nigra te scheiden van het ventrale segmentale gebied. De tweede stap is het verwerken van de weefsels voor de analyse van dopamine via HPLC en verdere verwerking van het geprecipiteerde endogene eiwit voor analyse.Vervolgens maakt de verwerking van het neergeslagen eiwit voor het totale eiwitgehalte het mogelijk om te bepalen welke dopamine-regulerende eiwitten of eiwitfosforylaties kunnen worden gemeten in samenhang met de bepaling van de dopamineconcentratie in het weefsel van de monster. Uiteindelijk maken de analyses van dopamine en de regulerende eiwitten in de specifieke somatodendritische regio's van de middenhersenen het mogelijk om conclusies te trekken over de moleculaire mechanismen die geassocieerd zijn met de dopamineregulatie.Monoaminen beïnvloeden veel gedragsmatige uitkomsten, en onderzoekers op het gebied van verslaving, biologie en locomotorisch

comprehensive-profiling-dopamine-regulation-substantia-nigra-ventral

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Neurowetenschap

Een protocol voor het uitvoeren van unilaterale 6-OHDA letsels van de mediale voorhersenen bundel bij muizen wordt beschreven. Deze methode heeft een laag sterftecijfer (13,3%) met 89% van de overlevende dieren die&gt; 95% verlies van striatale dopamine en 90,63 ± -4,02% ipsiversive rotatie voorkeur voor de kant van de laesie.

Ontwikkeling van een eenzijdig-gelaedeerde 6-OHDA muismodel van de ziekte van Parkinson

Met behulp van fast-scan cyclische voltammetrie elektrisch opgeroepen presynaptische dopamine dynamiek te meten in de hersenen striatale plakjes.

Presynaptische Dopamine Dynamiek in het striatum Brain Plakjes met Fast-scan cyclische voltammetrie

This video demonstrates the implantation of electrodes and cannulas in an anesthetized rat to measure dopamine release in the nucleus accumbens using a potentiostat and the infusion of drugs to modulate dopaminergic activity in the ventral tegmental area.

Monitoring Dopamine Release in a Rat Model with VTA Dopaminergic Neuron Receptor Manipulation

Dit protocol beschrijft twee verschillende omgevingsmanipulaties en een gelijktijdig protocol voor herseninfusie om omgevingsgeïnduceerde hersenveranderingen te bestuderen die ten grondslag liggen aan adaptief gedrag en hersenherstel bij volwassen muizen.

Milieu Modulaties van het aantal dopaminesysteem Neuronen in volwassen muizen

Snelle-scan cyclische voltammetrie kan in vivo dopamine neurotransmissie in de context van drugs, ziekte en andere experimentele manipulaties monitoren. Dit werk beschrijft de implementatie van QNsim1.0, een software voor het modelleren van elektrisch gestimuleerde dopamine responsen volgens het kwantitatieve neurobiologische model om schattingen van dopamine release en reuptake dynamics te kwantificeren.

Modellering Snel-scannen Cyclische Voltammetrie Gegevens van Elektrisch Gestimuleerde Dopamine Neurotransmissie Gegevens Met behulp van QNsim1.0

Synaptosomal dopamine opname en krachtige vloeibare chromatografie vertegenwoordigen experimentele analysetools te onderzoeken van dopamine homeostase in muizen door beoordeling van de functie van de dopamine transporter en niveaus van dopamine in striatale weefsel, respectievelijk. Hier presenteren we protocollen voor dopamine weefsel inhoud meten en beoordelen van de functionaliteit van de dopamine transporter.

Beoordeling van Dopaminerge homeostase in muizen door gebruik van High-performance Liquid Chromatography analyse en Synaptosomal Dopamine opname

Identificatie van dopamine D1-alpha receptor in de nucleus accumbens is van cruciaal belang voor de verduidelijking van de D1-receptor dysfunctie tijdens een ziekte van het centrale zenuwstelsel. Wij uitgevoerd een roman RNA in situ hybridisatie assay om te visualiseren single molecules van RNA in een specifieke hersenen gebied.

Identificatie van Dopamine D1-Alpha Receptor binnen knaagdier Nucleus Accumbens door een innovatieve RNA In Situ de technologie van de opsporing

Het doel van dit protocol is om ventrale tegmentale gebiedsreceptoren direct te manipuleren om hun bijdrage aan subseconde dopamine-afgifte te bestuderen.

Gecombineerde infusie en stimulatie met Fast-Scan cyclische voltammetrie (CIS-FSCV) om ventrale tegmentale gebiedsreceptorregulatie van fasische dopamine te beoordelen

Hier presenteren we een geautomatiseerde methode voor semi-kwantitatieve bepaling van dopaminerge neuron nummer in de rat substantia nigra pars compacta.

Semi-kwantitatieve bepaling van dopaminerge neurondichtheid in de substantia Nigra van knaagdiermodellen met behulp van geautomatiseerde beeldanalyse

Dit protocol laat zien hoe neuromelanine-gevoelige magnetische resonantie beeldvormingsgegevens van de substantia nigra kunnen worden verkregen.

Gestandaardiseerde data-acquisitie voor neuromelanine-gevoelige magnetische resonantie beeldvorming van de Substantia Nigra

Leer een precieze dissectiemethode voor dopamineregulatie in de substantia nigra en het ventrale tegmentale gebied bij knaagdieren. Deze techniek combineert HPLC-analyse met eiwitbepaling voor uitgebreide moleculaire inzichten.

Uitgebreide Profilering van Dopamine verordening in de substantia nigra en het ventrale tegmentale gebied

Meer video's verkennen