Name: A Novel chirurgische benadering voor intratracheale toediening van bioactieve stoffen in een Foetale Muis Model (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2012-10-31T13:00:00.000+00:00
Duration: 10 min 12 s
Description: Leer een chirurgische techniek voor intratracheale toediening van bioactieve stoffen in foetale muizen. Deze methode verbetert de levering aan de longen en minimaliseert verdunning in vruchtwater.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

MC en AVDP zijn docs ondersteund door subsidies van het Instituut voor de Aanmoediging van Innovatie door Wetenschap en Technologie in Vlaanderen (IWT-Vlaanderen). JT heeft een part-time Clinical Research Fellowship (Koor) van UZ Leuven. DV is een doctoraal onderzoeker ondersteund door een subsidie ​​van de KU Leuven, DBOF/10/062. MMDC is een doctoraal onderzoeker ondersteund door een subsidie ​​van Conselho Nacional de Pesquisa e Desenvolvimento (CNPq) en Erasmus Mundus. Onderzoek werd gefinancierd door IWT-Vlaanderen, door de EG-subsidie ​​DIMI (LSHB-CT-2005-512.146 duizend) en door de in vivo moleculaire beeldvorming Onderzoeksgroep (Imir) van de KU Leuven. We willen graag de UPenn Vector Core opgericht door James M. Wilson voor hun vriendelijke gave van de AAV6.2 inpakplasmide voor rAAV vector productie te erkennen.

<ol><li>Willson, D. F., Notter, R. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+future+of+exogenous+surfactant+therapy%5BTitle%5D)+AND+%22Respir.+Care%22%5BJournal%5D)">The future of exogenous surfactant therapy.</a> Respir. Care. 56, 1369-1388 (2011).</li>
<li>Abdel-Latif, M. E., Osborn, D. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intratracheal+Clara+cell+secretory+protein+%28CCSP%29+administration+in+preterm+infants+with+or+at+risk+of+respiratory+distress+syndrome%5BTitle%5D)+AND+%22Cochrane+Database+Syst.+Rev%22%5BJournal%5D)">Intratracheal Clara cell secretory protein (CCSP) administration in preterm infants with or at risk of respiratory distress syndrome.</a> Cochrane Database Syst. Rev. CD008308, (2011).</li>
<li>Thebaud, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Vascular+endothelial+growth+factor+gene+therapy+increases+survival%2C+promotes+lung+angiogenesis%2C+and+prevents+alveolar+damage+in+hyperoxia-induced+lung+injury%3A+evidence+that+angiogenesis+participates+in+alveolarization%5BTitle%5D)+AND+%22Circulation%22%5BJournal%5D)">Vascular endothelial growth factor gene therapy increases survival, promotes lung angiogenesis, and prevents alveolar damage in hyperoxia-induced lung injury: evidence that angiogenesis participates in alveolarization.</a> Circulation. 112, 2477-2486 (2005).</li>
<li>Griesenbach, U., Alton, E. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Gene+transfer+to+the+lung%3A+lessons+learned+from+more+than+2+decades+of+CF+gene+therapy%5BTitle%5D)+AND+%22Adv.+Drug+Deliv.+Rev%22%5BJournal%5D)">Gene transfer to the lung: lessons learned from more than 2 decades of CF gene therapy.</a> Adv. Drug Deliv. Rev. 61, 128-139 (2009).</li>
<li>Aneja, M. K., Rudolph, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Gene+therapy+of+surfactant+protein+B+deficiency%5BTitle%5D)+AND+%22Curr.+Opin.+Mol.+Ther%22%5BJournal%5D)">Gene therapy of surfactant protein B deficiency.</a> Curr. Opin. Mol. Ther. 8, 432-438 (2006).</li>
<li>Flotte, T. R., Mueller, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Gene+therapy+for+alpha-1+antitrypsin+deficiency%5BTitle%5D)+AND+%22Hum.+Mol.+Genet%22%5BJournal%5D)">Gene therapy for alpha-1 antitrypsin deficiency.</a> Hum. Mol. Genet. 20, R87-R92 (2011).</li>
<li>Roybal, J. L., Santore, M. T., Flake, A. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Stem+cell+and+genetic+therapies+for+the+fetus%5BTitle%5D)+AND+%22Semin+Fetal+Neonatal+Med%22%5BJournal%5D)">Stem cell and genetic therapies for the fetus.</a> Semin Fetal Neonatal Med. 15, 46-51 (2010).</li>
<li>Peebles, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Widespread+and+efficient+marker+gene+expression+in+the+airway+epithelia+of+fetal+sheep+after+minimally+invasive+tracheal+application+of+recombinant+adenovirus+in+utero%5BTitle%5D)+AND+%22Gene+Ther%22%5BJournal%5D)">Widespread and efficient marker gene expression in the airway epithelia of fetal sheep after minimally invasive tracheal application of recombinant adenovirus in utero.</a> Gene Ther. 11, 70-708 (2004).</li>
<li>Deprest, J., Gratacos, E., Nicolaides, K. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fetoscopic+tracheal+occlusion+%28FETO%29+for+severe+congenital+diaphragmatic+hernia%3A+evolution+of+a+technique+and+preliminary+results%5BTitle%5D)+AND+%22Ultrasound+Obstet.+Gynecol%22%5BJournal%5D)">Fetoscopic tracheal occlusion (FETO) for severe congenital diaphragmatic hernia: evolution of a technique and preliminary results.</a> Ultrasound Obstet. Gynecol. 24, 121-126 (2004).</li>
<li>Buckley, S. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intra-amniotic+delivery+of+CFTR-expressing+adenovirus+does+not+reverse+cystic+fibrosis+phenotype+in+inbred+CFTR-knockout+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Mol.+Ther%22%5BJournal%5D)">Intra-amniotic delivery of CFTR-expressing adenovirus does not reverse cystic fibrosis phenotype in inbred CFTR-knockout mice.</a> Mol. Ther. 16, 819-824 (2008).</li>
<li>Davies, L. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Adenovirus-mediated+in+utero+expression+of+CFTR+does+not+improve+survival+of+CFTR+knockout+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Mol.+Ther%22%5BJournal%5D)">Adenovirus-mediated in utero expression of CFTR does not improve survival of CFTR knockout mice.</a> Mol. Ther. 16, 812-818 (2008).</li>
<li>Mitchell, M., Jerebtsova, M., Batshaw, M. L., Newman, K., Ye, X. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Long-term+gene+transfer+to+mouse+fetuses+with+recombinant+adenovirus+and+adeno-associated+virus+%28AAV%29+vectors%5BTitle%5D)+AND+%22Gene+Ther%22%5BJournal%5D)">Long-term gene transfer to mouse fetuses with recombinant adenovirus and adeno-associated virus (AAV) vectors.</a> Gene Ther. 7, 1986-1992 (2000).</li>
<li>Henriques-Coelho, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Targeted+gene+transfer+to+fetal+rat+lung+interstitium+by+ultrasound-guided+intrapulmonary+injection%5BTitle%5D)+AND+%22Mol.+Ther%22%5BJournal%5D)">Targeted gene transfer to fetal rat lung interstitium by ultrasound-guided intrapulmonary injection.</a> Mol. Ther. 15, 340-347 (2007).</li>
<li>Toelen, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fetal+gene+transfer+with+lentiviral+vectors%3A+long-term+in+vivo+follow-up+evaluation+in+a+rat+model%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Obstet+Gynecol%22%5BJournal%5D)">Fetal gene transfer with lentiviral vectors: long-term in vivo follow-up evaluation in a rat model.</a> Am J Obstet Gynecol. 196, e1-e6 (2007).</li>
<li>Waddington, S. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Long-term+transgene+expression+by+administration+of+a+lentivirus-based+vector+to+the+fetal+circulation+of+immuno-competent+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Gene+Ther%22%5BJournal%5D)">Long-term transgene expression by administration of a lentivirus-based vector to the fetal circulation of immuno-competent mice.</a> Gene Ther. 10, 1234-1240 (2003).</li>
<li>Waddington, S. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Permanent+phenotypic+correction+of+hemophilia+B+in+immunocompetent+mice+by+prenatal+gene+therapy%5BTitle%5D)+AND+%22Blood%22%5BJournal%5D)">Permanent phenotypic correction of hemophilia B in immunocompetent mice by prenatal gene therapy.</a> Blood. 104, 2714-2721 (2004).</li>
<li>Senoo, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Adenovirus-mediated+in+utero+gene+transfer+in+mice+and+guinea+pigs%3A+tissue+distribution+of+recombinant+adenovirus+determined+by+quantitative+TaqMan-polymerase+chain+reaction+assay%5BTitle%5D)+AND+%22Mol.+Genet.+Metab%22%5BJournal%5D)">Adenovirus-mediated in utero gene transfer in mice and guinea pigs: tissue distribution of recombinant adenovirus determined by quantitative TaqMan-polymerase chain reaction assay.</a> Mol. Genet. Metab. 69, 269-276 (2000).</li>
<li>Carlon, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Efficient+gene+transfer+into+the+mouse+lung+by+fetal+intratracheal+injection+of+rAAV2%2F6.2%5BTitle%5D)+AND+%22Mol.+Ther%22%5BJournal%5D)">Efficient gene transfer into the mouse lung by fetal intratracheal injection of rAAV2/6.2.</a> Mol. Ther. 18, 2130-2138 (2010).</li>
<li>Schmiedl, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Lipopolysaccharide-induced+injury+is+more+pronounced+in+fetal+transgenic+ErbB4-deleted+lungs%5BTitle%5D)+AND+%22Am.+J.+Physiol.+Lung+Cell+Mol+Physiol%22%5BJournal%5D)">Lipopolysaccharide-induced injury is more pronounced in fetal transgenic ErbB4-deleted lungs.</a> Am. J. Physiol. Lung Cell Mol Physiol. 301, L490-L499 (2011).</li>
<li>Buckley, S. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Factors+influencing+adenovirus-mediated+airway+transduction+in+fetal+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Mol.+Ther%22%5BJournal%5D)">Factors influencing adenovirus-mediated airway transduction in fetal mice.</a> Mol. Ther. 12, 484-492 (2005).</li>
</ol>

Geen belangenconflicten verklaard.

Kritische stappen <ul><li> De muizenstam we ervoor gekozen om te werken met is NMRI muizen omdat ze een overvloedig aantal pups (gemiddelde nestgrootte 14,4 ± 1,8, eigen gegevens), goed verdragen interventies en hebben goede moederlijke eigenschappen. </li><li> Het plaatsen van de portemonnee koord door de baarmoederwand en de foetale membranen is een cruciale stap als je alleen wilt het foetale hoofd en niet de schouders bloot, anders herpositionering is bijna onmogelijk zonder dat trauma. </li><li> Een optimale posit...

<table border="1"><tbody><tr><td> Naam van het reagens </td><td> Vennootschap </td><td> Catalogusnummer </td><td> Opmerkingen (optioneel) </td></tr><tr><td> NMRI muizen </td><td> Janvier, Le Genest St Isle, Frankrijk </td><td></td><td></td></tr><tr><td> Isofluraan </td><td> Isoba, Intervet / Schering-Plough Animal Health, Milton Keynes, UK </td><td></td><td></td></tr><tr><td> Prolene 6-0 </td><td> Ethicon, Groot Bijgaarden, België </td><td></td><td></td></tr><tr><td> Vicryl 5-0 </td><td> Ethicon, Groot Bijgaarden, België </td><td></td><td></td></tr><tr><td> 50 ul Hamilton glazen injectiespuit, Model 1710,5 TLLX SYR </td><td> Hamilton, Reno, NV, USA </td><td> 5,495-20 </td><td></td></tr><tr><td> 30G scherpe naald </td><td> Hamilton, Reno, NV, USA </td><td> 7762 tot 03 </td><td></td></tr><tr><td> 2% Xylocaine </td><td> AstraZeneca, Zoetermeer, Nederland </td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

a novel chirurgische benadering voor intratracheale toediening van bioactieve stoffen in een foetale muis model

A Novel Surgical Approach for Intratracheal Administration of Bioactive Agents in a Fetal Mouse Model

Prenatale pulmonale toediening van cellen, genen of farmacologische middelen kunnen de basis vormen voor nieuwe therapeutische strategieën voor verschillende genetische en verworven ziekten. Naast congenitale of erfelijke afwijkingen met de vereiste lange termijn expressie van het afgeleverde gen, verscheidene niet-erfelijke perinatale omstandigheden, waarbij korte termijn genexpressie of farmacologische interventie voldoende is om therapeutische effecten te bereiken, worden beschouwd als potentiële toekomstige aanwijzingen voor soort benadering. Kandidaat ziekten voor de toepassing van de korte termijn prenatale therapie kan de voorbijgaande neonatale tekort aan surfactant proteïne B veroorzaakt neonatale respiratory distress syndrome 1,2 of hyperoxische verwondingen van de neonatale long 3 zijn. Kandidaat ziekten voor permanente therapeutische correctie zijn Cystic Fibrosis (CF) 4, genetische varianten van oppervlakte-actieve stof gebreken 5 en α1-antitrypsine-deficiëntie 6. &lt;p class = &quot;jove_content&quot;&gt; algemeen is een belangrijk voordeel van prenatale gentherapie is de mogelijkheid om therapeutische interventie vroeg in ontwikkeling op of voorafgaand aan klinische manifestaties in de patiënt, waardoor onherstelbare schade aan het individu. Bovendien foetale organen een verhoogde celproliferatie in vergelijking tot volwassen organen, die een efficiëntere gen of stamcel overdracht naar de foetus kan leiden. Verder wordt in de baarmoeder gentherapie uitgevoerd wanneer de eigen afweersysteem niet helemaal volwassen. Daarom moet transplantatie van heterologe cellen of aanvullen van een niet-functioneel eiwit of afwezig een correcte versie niet leiden immuun sensibilisatie voor de cel, vector of transgene product, dat onlangs is het geval bewezen met zowel cellulaire als gentherapieën 7 . In de huidige studie onderzochten we de mogelijkheid om direct richten op de foetale luchtpijp in een muis model. Deze procedure wordt gebruikt in grotere diermodellen zoals konijnen, schapen 8 en zelfs in een klinische setting 9, maar is tot op heden niet uitgevoerd voordat in een muismodel. Als we de mogelijkheden van foetale gentherapie voor erfelijke ziekten zoals CF, het muizenmodel is bijzonder nuttig als een eerste proof-of-concept vanwege de grote beschikbaarheid van verschillende transgene muizenstammen, het goed gedocumenteerd embryogenese en foetale ontwikkeling, minder strenge ethische voorschriften, korte dracht en de grote worpgrootte. Verschillende toegangswegen zijn beschreven om de foetale knaagdier long richten, met inbegrip van intra-amniotische injectie 10-12, (echogeleide) intrapulmonale injectie 13,14 en intraveneuze toediening in de dooierzak vaten 15,16 of navelstreng 17. Onze nieuwe chirurgische procedure stelt onderzoekers in staat om de agent van de keuze direct te injecteren in de foetale luchtpijp muis die het mogelijk maaktvoor een efficiëntere levering aan de luchtwegen dan bestaande technieken 18.

We hebben een nieuwe chirurgische aanpak voor intratracheale toediening van bioactieve stoffen in de muis foetus. De levering route is efficiënter in het foetale richten muizenlongen dan de gebruikelijke intra-amniotische injectie. Deze procedure is tot op heden niet beschreven in een muismodel.

A Novel chirurgische benadering voor intratracheale toediening van bioactieve stoffen in een Foetale Muis Model

Prenatale pulmonale toediening van cellen, genen of farmacologische middelen zou de basis kunnen vormen voor nieuwe therapeutische strategieën voor een verscheidenheid aan genetische en ...

Het algemene doel van het volgende experiment is om in staat te zijn een gekozen middel direct in de trachea van een foetale muis te injecteren, wat een efficiëntere toediening aan de luchtwegen mogelijk maakt dan met bestaande technieken. Dit wordt bereikt door de foetale kop via een hysterotomie naar buiten te brengen en zo toegang te krijgen tot de foetale trachea. Vervolgens wordt er een verticale incisie in de nek gemaakt om de trachea zichtbaar te maken, waarna een naald onder visuele begeleiding wordt ingebracht.Vervolgens worden fluorescerende beads of een virale vector in de trachea geïnjecteerd om de gekozen stof efficiënt af te leveren in de foetale luchtwegen. Microscopische analyse van weefselcoupes van behandelde longen laat zien dat intratracheale injectie resulteert in een efficiëntere aflevering van fluorescerende moleculen of virale vectoren in de foetale luchtwegen vergeleken met de meest gebruikte intra-amniotische toedieningsroute. Het belangrijkste voordeel van deze techniek ten opzichte van bestaande methoden, zoals foetale intra-amniotische injectie, is dat verdunning van de geïnjecteerde stof in het vruchtwater wordt voorkomen.Dit maximaliseert het effect van de hoeveelheid partikels die aanwezig zijn in de foetale muizenlong. In het algemeen zullen mensen die nieuw zijn met deze technologie het uiterst uitdagend vinden om een perfecte endotracheale injectie uit te voeren. Dit komt doordat de foetale trachea uiterst fragiel is en daardoor zeer gemakkelijk geperforeerd kan worden.Wanneer u dit doet, voert u een pertracheale injectie uit en zult u daarom de foetale long niet raken. Maar zoals altijd geldt: oefening baart kunst. Ter voorbereiding op de intratracheale of it-injectie gebruikt u drachtige MRI-muizen. Deze zijn 18 dagen drachtig op het moment van de operatie, zowel vóór als na de ingreep.Ze worden gehuisvest in kooien met filtertop bij normale kamertemperatuur en normaal daglicht, met vrije toegang tot water en voer. Nadat de muis is geanestheseerd met isofluoraan, wordt deze op een warmtemat bij 37 °C geplaatst om de lichaamstemperatuur te handhaven, waarna het niveau van anesthesie wordt gecontroleerd door middel van een knijptest aan de teen. Desinfecteer de buik met povidonjodium en voer een mediane laparotomie uit om de zwangere uterus bloot te leggen, exterioriseer de twee uterine hoorns en tel het aantal drachtzakken.Per hoorn wordt één foetus geopereerd, uitgaande van de optimale positie voor de externalisatie van de foetale kop. Om de foetus in de uterus te fixeren, worden er vanuit de schouders zes 0-proline purse-string hechtingen van ongeveer één centimeter diameter door de uteruswand en de foetale membranen gehaald, over het gebied waar de foetale kop blootgesteld zal worden. Maak vervolgens met een kleine schaar met een scherpe punt een incisie van ongeveer 0,8 centimeter in de uteruswand binnen de purse-string.Knijp vervolgens voorzichtig de kop en de nek van de foetus door de hysterotomie. Trek daarna voorzichtig aan de purse-stringhechting om deze strak rond de nek te trekken en gebruik hiervoor twee micro-mosquito-klemmen. Gebruik vijf-0 polyactine om deze positie te fixeren.Plaats negen 10-hechtingsdraden met twee pincetten in de mond rond de bovenkaak om het foetale hoofd in hyperextensie te houden onder een stereomicroscoop. Visualiseer de trachea middels scherpe en botte dissectie door een verticale incisie in de nek te maken en het onderliggende weefsel verder te dissekeren om de trachea te bereiken. Injecteer met een Hamilton-glasspuit van 50 µL met een scherpe naald van 30 gauge een totaal volume van 30 µL van de stof.Een minimale terugstroom van de geïnjecteerde vloeistof bij het verwijderen van de naald bevestigt dat de injectie correct is uitgevoerd. Om de kop terug in de uterus te plaatsen, wordt er zachte druk op de neus uitgeoefend. Eerst gaat de nek terug de uterus in, gevolgd door de kop.En tot slot, de neus. Voer een naald met zoutoplossing in via de incisie binnen de purse-string hechting. Sluit de hysterotomie door de purse-string hechting aan te trekken en injecteer in totaal ongeveer 500 µL zoutoplossing in de vruchtzak om oligohydramnios te voorkomen.Nadat de uterus is teruggeplaatst in de buikholte, wordt een doorlopende hechting met 5-0 Vicryl in twee afzonderlijke lagen aangebracht. Om de abdominale wand van de moeder te sluiten, wordt de incisie geïnfiltreerd met 0,2% Xylocaine voor postoperatieve pijnstilling. Houd de muis op een warmteplaat tot deze volledig is hersteld om een intra-amniotische of IA-injectie bij de foetus uit te voeren.Nadat de drachtige muis is geanestheseerd, wordt povidonjodium gebruikt om de buik te desinfecteren en wordt een mediane laparotomie uitgevoerd om de drachtige uterus bloot te leggen, waarna de twee uterine hoorns worden geëxterioriseerd en het aantal vruchtzakken wordt geteld. Met een Hamilton-glasspuit van 50 µL met een scherpe naald van 30 gauge wordt de naald in de zak ingebracht, dicht bij de mond van de foetus zonder deze aan te raken, waarna 30 µL van de oplossing in het vruchtwater wordt geïnjecteerd.Nadat alle foetussen zijn geïnjecteerd, wordt de uterus teruggeplaatst in de buikholte en wordt de buikwand en huid gehecht met een 5-0 Vicryl-hechtraad. Na euthanasie van de moeder, 36 uur na de foetale interventie, worden de foetussen via een keizersnede geboren en wordt hun levensvatbaarheid beoordeeld door te controleren op de aanwezigheid van een hartslag, een roze huidskleur en spontane bewegingen. Plaats de pups in de nabijheid van een zuurstofbron om de ademhaling en zuurstofopname te stimuleren.Markeer vervolgens de pups aan de basis van de staart. Met behulp van Chinese inkt kan een succesvolle injectie worden geëvalueerd door een geopereerd foetus te eutanaseren en de longen te dissecteren om macroscopisch de aanwezigheid van de zichtbare kleurstof in de longen te beoordelen in vergelijking met niet-geïnjecteerde controlelongen. Dek daarna de overige pups die voldoen aan de levensvatbaarheidscriteria af.Gebruik nestmateriaal dat feces en urine bevat van een pleegmoeder met pups van één dag oud en plaats de pups bij het nest van de pleegmoeder. Laat in totaal niet meer dan 10 pups in het nest van de pleegmoeder. Plaats de kooi vervolgens gedurende 12 uur in een rustige, ongestoorde omgeving en beoordeel de overlevingskans na het onderbrengen bij de pleegmoeder om het optimale volume hiervoor te bepalen.Injectievolumes van 10, 20 en 30 microliter van 100 nanometer rode fluorescerende moleculen werden empirisch gekozen. Hier worden confocale beelden getoond van gefixeerde longsecties met kernkleuring. Hoewel er tijdens de foetale chirurgie pas een terugstroom werd gedetecteerd na injectie van 30 microliter, wat wees op een overschot aan geïnjecteerde vloeistoffen, gaf 30 microliter de hoogste hoeveelheid fluorescerend signaal in het longparenchym, zoals gekwantificeerd door de relatieve fluorescentie te meten zoals hier getoond; deze injectie resulteerde in een significant hogere afgifte van fluorosferen aan de foetale long vergeleken met de I A-route.Het maag-darmkanaal was ook positief voor zowel de IT- als de IA-geïnjecteerde dieren. Er werd geen rode fluorescentie waargenomen in andere weefsels van behandelde foetussen of in de negatieve controledieren. Om de effectiviteit van de virale transductie na injectie te beoordelen, werden IT- en IA-injecties uitgevoerd met RAAV-vectoren ENC die firefly luciferase coderen onder controle van de chicken beta actin promoter op een leeftijd van één week. De totale fotonenflux voor de IT-groep was significant hoger dan voor de IA-pups en de negatieve controle.Om onderscheid te maken tussen een correcte en een incorrecte IT-injectie werd een combinatie van MRI (magnetic resonance imaging) en BLI (bioluminescentie-imaging) uitgevoerd om een overlay-afbeelding te verkrijgen die het oppervlakkige BLI-signaal combineert met een visualisatie van de diepere anatomische structuren uit de MRI-beeldvorming, zoals hier getoond. Op een leeftijd van één week onthulde BL-imaging een signaal afkomstig uit de nek- en thoraxregio.Co-registratie van MRI met BLI lokaliseerde de expressie van het luciferase-gen in de longregio na een correcte injectie, maar in de nek en het buikgebied na een incorrecte injectie. Histologische analyse via ex gal-kleuring bevestigde de in vivo co-registratie. Zodra men de procedure beheerst, kan de volledige intra-injectie in een half uur worden uitgevoerd, van de incisie tot de sluiting van het moederdier.Een korte operatietijd resulteert in een betere overleving van de foetussen en meer dieren die na de geboorte bestudeerd kunnen worden.

a-novel-surgical-approach-for-intratracheal-administration-bioactive

Research

JoVE Journal

Medicine

Geneeskunde

This video describes an intrabronchial approach to administer an experimental agent selectively into distal right and left lung. In the featured protocol, we will administer bleomycin intrabronchially into a mouse to obtain a better model for pulmonary fibrosis.

Intrabronchial Delivery: A Technique to Administer an Experimental Agent Selectively Into a Mouse Lung

Source: Venuprasad, K., et al. Intra-tracheal Administration of Haemophilus influenzae in Mouse Models to Study Airway Inflammation. J. Vis. Exp. (2016)This video demonstrates the intratracheal delivery of a lung-pathogenic bacterial inoculum into an anesthetized mouse to model lower respiratory tract infection.

Performing Intratracheal Bacterial Delivery in a Mouse Model

This video demonstrates the transuterine tracheal occlusion procedure of a mouse fetus in a pregnant mouse. This model can be used to study the impact of occluded trachea on lung development.

Modeling Transuterine Fetal Tracheal Occlusion in Murine Model: A Surgical Procedure for Ligation of the Fetal Trachea Within a Pregnant Mouse

We hebben een eenvoudige, betrouwbare en relatief goedkope methode voor endotracheale intubatie bij muizen via directe laryngoscopie behulp van een otoscoop met een 2,0 mm speculum ontwikkeld. Deze techniek is atraumatische en kan worden gebruikt voor herhaalde metingen in chronische experimenten. We vinden het superieur aan tracheostomie of eerder gerapporteerde niet-chirurgische technieken.

Luchtpijpintubatie in Muizen<em&gt; Via</em&gt; Directe laryngoscopie behulp van een otoscoop

Het gebruik van een model dat de toestand van longziekten bij mensen nabootst is kritiek voor het bestuderen van de pathofysiologie en / of etiologie van een bepaalde ziekte en ontwikkelen van therapeutische interventie. Hier een niet-invasieve intratracheaal intubatie methode die direct exogene materialen kunnen leveren aan muizenlongen wordt gepresenteerd.

Niet-invasieve Intratracheaal intubatie om te studeren de Pathologie en Fysiologie van Mouse Lung

Dit artikel presenteert een snelle en eenvoudige methode voor het toedienen van bleomycine rechtstreeks in de muis luchtpijp via intubatie. Belangrijkste voordelen van deze werkwijze zijn dat het zeer reproduceerbaar, gemakkelijk onder de knie, en vereist geen gespecialiseerde apparatuur of lange hersteltijden.

Een verbeterde werkwijze voor snelle intubatie van de trachea in muizen

Intratracheal (IT) toediening van experimentele agentia bij muizen resulteert vaak in asymmetrische afgifte aan de distale longen.  In dit rapport beschrijven we een directe intrabronchiale (IB) benadering om elke Long in levende muizen niet-operatief te cannuleren.  Deze aanpak kan worden gebruikt om agenten selectief te beheren tot één Long of kan worden aangepast om de symmetrische agent levering aan beide longen te verbeteren.

Directe Intrabronchiale toediening om de selectieve depositie van de agent binnen de muis Long te verbeteren

Deze techniek om geneesmiddelen rechtstreeks in de luchtpijp van neonatale knaagdieren in te brengen, is belangrijk bij het bestuderen van de impact van lokaal toegediende geneesmiddelen of biologicals op neonatale longziekten. Bovendien kan deze methode ook worden gebruikt voor het induceren van longletsel in diermodellen.

Een minimaal invasieve methode voor intratracheale instillatie van geneesmiddelen bij neonatale knaagdieren om longziekte te behandelen

Verschillende diermodellen van congenitale diafragmatische hernia en foetale tracheale occlusie bieden voor- en nadelen met betrekking tot ethische kwesties, kosten, chirurgische moeilijkheidsgraad, grootte, overlevingspercentages en beschikbaarheid van genetische hulpmiddelen. Dit model biedt een nieuw hulpmiddel om de impact van zowel tracheale occlusie als verhoogde luminale druk op de longontwikkeling te bestuderen.

Transuterine foetale tracheale occlusie model in muizen

Hier stellen we een protocol voor intratracheale lipopolysaccharide (LPS) levering via niet-invasieve orofaryngeale endotracheale intubatie. Deze methode minimaliseert het trauma van de chirurgische procedure voor het dier en levert LPS nauwkeurig af aan de luchtpijp en vervolgens aan de longen.

Niet-invasieve intratracheale lipopolysaccharide-instillatie bij muizen

Dit protocol laat zien hoe het optimaal positioneren van een muis en het transoraal inbrengen van een op camera's gebaseerde otoscoop visualisatie van de glottis, snelle intubatie met minimaal weefseltrauma en consistente vloeistofafgifte aan de longen mogelijk maakt.

Verbeterde methodologie voor vloeistofafgifte aan de muizenlong: intubatie met behulp van een consumentenotoscoop

Leer een chirurgische techniek voor intratracheale toediening van bioactieve stoffen in foetale muizen. Deze methode verbetert de levering aan de longen en minimaliseert verdunning in vruchtwater.

A Novel chirurgische benadering voor intratracheale toediening van bioactieve stoffen in een Foetale Muis Model

Meer video's verkennen