Name: Het gebruik van Time lapse microscopie om Anoxie-geïnduceerde Suspended Animation Visualiseer in C. elegans Embryos (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2012-12-03T13:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 49 s
Description: Leer een in vivo beeldvormingstechniek voor subcellulaire dynamica in C. elegans embryo's onder anoxie met behulp van een gasstroomopstelling en een spindelschijfconfocale microscoop.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

playerTrialDesktop

Wij willen graag onze waardering uit te drukken voor de input en opmerkingen van de leden van de Padilla Lab. Nematode stammen in dit werk werden verstrekt door de Caenorhabditis Genetics Center, dat wordt gefinancierd door de NIH National Center for Research Resources (NCRR). We erkennen en Dr Lon Turnbull bedanken voor technische bijstand met confocale microscopie. Dit werk werd ondersteund door een subsidie ​​van de National Science Foundation (NSF-IOS, CARRIÈRE) naar PAP

1. Monstervoorbereiding <ol><li> Produceren of verkrijgen geschikte transgene C. elegans stam van belang het gebruik van transgene methoden of van Caenorhabditis Genetics Stock Center (CGC) of collega. In dit geval gebruiken we stam TH32 (pie-1 :: TBG-1 :: GFP, pie-1 :: GFP :: H2B) 5 tot chromosomen en centrosomen visualiseren als markers voor de celdeling. </li><li> Genereer een gesynchroniseerde bevolking door het gebruik van een van de drie manieren: 1) desintegreren zwangere volwassenen in hypochloriet oplossing en het gebruik van de resterende embryo&#39;s 6, 2) pick zwangere volwassenen op een geplaatste bord en laat ze liggen embryo&#39;s voor 1-2 uur, of 3) pick L4 larven van een gemengde populatie en verhuizing naar een nieuw geplaatste plaat. </li><li> Grow nematoden bij 20 ° C aan zwangere jonge volwassenheid, die ongeveer 96 uur duurt vanaf het uitkomen, 72 uur van L1 larven of 24 uur na L4 molt. Embryo&#39;s (2-20 cellen) in de baarmoeder bevatten grote blastomeren en kernen die optimaal zijn voor imaging sub-cellulaire en sub-nucleaire veranderingen respectievelijk. Deze methode biedt de mogelijkheid om een ​​populatie van jonge volwassenen die een overvloedig aantal vroege embryo&#39;s bevatten genereren. </li></ol> 2. Schuif Voorbereiding en Anoxie Kamer Set Up <ol><li> Een vochtige kamer de bereidingen dia houden door een vochtige papieren handdoek in een grote petrischaal of bak afgedekt met een deksel van voldoende grootte. </li><li> Bereid gesmolten 2% agarose in gedeïoniseerd H 2 O door het verwarmen van het mengsel in glaswerk via magnetron of waterbad. </li><li> Plaats 1-3 druppels van warme agarose op een schoon glas microscoopglaasje. Plaats onmiddellijk een tweede dia loodrecht omgekeerd op de top van de agarose druppel (s), drukt u op een beetje zodat de resulterende pad zal zijn dun en vrij van luchtbellen. </li><li> Laat de tijd om af te koelen en langzaam uit elkaar te halen de twee microscoopglaasjes het verlaten van de agarose pad intact op een van de dia&#39;s. Het is belangrijk om de agarose pad is dun genoeg om niet interferentiesgaan met de mogelijkheid om de microscoop later richten. Vermogen om monster te visualiseren is ook afhankelijk van de specifieke optische afstand van het doel in gebruik, dat kan variëren van microscopen. </li><li> Gebruik een schoon scheermesje aan agarose pad te vormen tot een klein vierkantje. Bewaren in de voorbereide vochtige kamer totdat klaar voor gebruik. </li><li> Voorzichtig, met behulp van dezelfde schoon scheermesje, neem de rand van de agarose pad en overbrengen van de dia op een ronde 25 mm micro dekglaasje, het vermijden van de accumulatie van luchtbellen onder het kussen. De ronde coverglass geselecteerd voor gebruik in de juiste past microincubator. </li><li> Een druppeltje anestheticum (0,5% tricaine, 0,05% tetramisool in M9 buffer) op de agarose pad voor gebruik als anestheticum. Kies vijf tot tien wormen en plaats in de druppel verdoving. Staan 1-3 min voor wormen om beweging te staken. </li><li> De reden voor het observeren van embryo&#39;s in de volwassen baarmoeder, in plaats van ontleed embryo&#39;s, is het minimaliseren van het potentieel van embryo desiccatie en beweging door de stroom stikstofgas in de embryo. </li><li> Voeg onmiddellijk een druppel Halocarbonolie bovenop de wormen de wormen voorkomen dehydratie gas stroomde door de kamer. Omdat de halogene olie is stroperig kan men gebruik maken van een pipet tip of punt van een worm kiezen om olie-and-drop te verzamelen op de wormen. </li><li> Zodra de circulaire dekglaasje met de wormen klaar is, de twee helften van de Leiden gesloten perfusie microincubator gescheiden en de coverglass Daarna wordt rechtop op de onderste ring. De twee zijden van de kamer worden daarna stevig samen gesloten. </li><li> De kamer wordt dan verbonden met het stikstofgas tank via flexibele plastic buis en geplaatst in de juiste plaats op de microscooptafel (Figuur 1C). Op dit moment de slang en microincubator moeten zorgvuldig worden gecontroleerd op lekkage door te zorgen veilige bevestiging van de slang en de poort kleppen langs de kant van de kamer. Men kan alzo licht verspreidde een kleine hoeveelheid zeep water over de slang op zoek naar bubbels, die ontstaan ​​als een lekkage aanwezig is. </li></ol> 3. Microscopie in Anoxie <ol><li> Zoek dieren bij lagere vergroting, daarna, gaat u naar de gewenste hogere vergroting (64x voor deze toepassing) om de afbeelding weefsel of cellen van belang, zoals embryonale blastomeren of eicellen bij volwassenen. Zet de 488 nm laser GFP signaal bekijken en GFP fusie-eiwit in de cel (len) plaats vinden. </li><li> Om de arrestatie op specifieke fase van de celcyclus te visualiseren (bijv. eind profase) identificeren van een blastomeer in een eerdere fase van de celdeling (verlate interfase of begin profase). Cellulaire merkers zoals centriole positie inleiding van chromosoom condensatie chromosoom locatie en de aanwezigheid of afwezigheid van de nucleaire envelop helpen bepalen celcyclus fase (figuur 2A). </li><li> De kamer wordt dan geperfuseerd met stikstofgas (99,999%N 2; &lt;2 ppm O 2). In dat geval gebruikt een druk van 6 psi echter druk kan moeten worden aangepast en geoptimaliseerd afhankelijk van de grootte van elk microincubator en diameter van buizen in gebruik. Blijf de blastomeer (s) controleren terwijl de stikstof vult de kamer, het aanpassen van het brandvlak als dat nodig is. </li><li> Op dit punt heeft time-lapse imaging begonnen. Imaging wordt uitgevoerd zolang als nodig verschijnsel interesse hebben, in dit geval prophase arrestatie en docking chromosomen van de binnenste nucleaire membraan. Beelden worden eenmaal elke 10 sec niet langer dan 30 minuten. Frequenties van het vastleggen van beelden en instellingen, zoals versterking en laservermogen moeten worden aangepast zoveel als nodig. </li><li> De tijd waarin de embryo&#39;s reageren op de zuurstofloos milieu kan variëren afhankelijk van de celcyclus fase bij anoxia blootstelling. Typisch anoxie-geïnduceerde profase arrestatie plaatsvindt binnen 20-30 min. van het begin van stikstof gasstroom. We hebben gezien anoxie-geïnduceerde cel cyclus arrest bedrijfspensioenvoorzieningrring in &lt;20 min. Afbeeldingen kunnen worden verkregen tijdens deze periode, of specifieke beelden kunnen later van een time-lapse serie worden geïsoleerd. Een extra optie is videomicroscopie om sub-cellulaire structuren te visualiseren in embryo&#39;s. </li><li> Om het herstel van de anoxie-geïnduceerde gearresteerd toestand documenteren, wordt het gas uitgeschakeld en de kamer is toegestaan ​​om te normoxia terug te keren door diffusie tijdens het opnemen van een time-lapse serie. Hervatting van de voortgang van de celcyclus en loskoppelen van de chromosomen treedt meestal binnen 5-20 min. van het draaien van de stikstofgas uit. </li><li> Merk op dat in afzonderlijke experimenten een indicator anoxie, resazurine, werd in de doorstroom microkamer, werd vastgesteld dat de kamer wordt anoxische gemiddeld ongeveer 19 min na stikstofgasstroom begonnen. </li><li> Afbeeldingen en video&#39;s worden verwerkt met behulp van Imaris, Afbeelding J of Photoshop en geïmporteerd in QuickTime voor weergave. </li></ol>

<ol><li>Powell-Coffman, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hypoxia+signaling+and+resistance+in+C.+elegans%5BTitle%5D)+AND+%22Trends+Endocrinol.+Metab%22%5BJournal%5D)">Hypoxia signaling and resistance in C. elegans.</a> Trends Endocrinol. Metab. 21 (10), 435-440 (2010).</li>
<li>Padilla, P. A., Ladage, M. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Suspended+animation%2C+diapause+and+quiescence%3A+Arresting+the+cell+cycle+in+C.+elegans%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Cycle%22%5BJournal%5D)">Suspended animation, diapause and quiescence: Arresting the cell cycle in C. elegans.</a> Cell Cycle. 11, (2012).</li>
<li>Hu, P. J. Dauer. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aHu%2C+PJ+%22WormBook%22">WormBook</a>. , 1-19 (2007).</li>
<li>Zhou, K. I., Pincus, Z., Slack, F. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Longevity+and+stress+in+Caenorhabditis+elegans%5BTitle%5D)+AND+%22Aging+%28Albany+NY%29%22%5BJournal%5D)">Longevity and stress in Caenorhabditis elegans.</a> Aging (Albany NY). 3, 733-753 (2011).</li>
<li>Schmidt, D. J., Rose, D. J., Saxton, W. M., Strome, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Functional+analysis+of+cytoplasmic+dynein+heavy+chain+in+Caenorhabditis+elegans+with+fast-acting+temperature-sensitive+mutations%5BTitle%5D)+AND+%22Mol.+Biol.+Cell%22%5BJournal%5D)">Functional analysis of cytoplasmic dynein heavy chain in Caenorhabditis elegans with fast-acting temperature-sensitive mutations.</a> Mol. Biol. Cell. 16, 1200-1212 (2005).</li>
<li>Sulston, J., Hodgkin, J. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aSulston%2C+J+%22The+Nematode+Caenorhabditis+elegans%22">The Nematode Caenorhabditis elegans</a>. Wood, W. B. , Cold Spring Harbor Laboratory Press. 587-606 (1988).</li>
<li>Padilla, P. A., Nystul, T. G., Zager, R. A., Johnson, A. C., Roth, M. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dephosphorylation+of+Cell+Cycle-regulated+Proteins+Correlates+with+Anoxia-induced+Suspended+Animation+in+Caenorhabditis+elegans%5BTitle%5D)+AND+%22Mol.+Biol+Cell%22%5BJournal%5D)">Dephosphorylation of Cell Cycle-regulated Proteins Correlates with Anoxia-induced Suspended Animation in Caenorhabditis elegans.</a> Mol. Biol Cell. 13, 1473-1483 (2002).</li>
<li>Hajeri, V. A., Trejo, J., Padilla, P. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Characterization+of+sub-nuclear+changes+in+Caenorhabditis+elegans+embryos+exposed+to+brief%2C+intermediate+and+long-term+anoxia+to+analyze+anoxia-induced+cell+cycle+arrest%5BTitle%5D)+AND+%22BMC+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">Characterization of sub-nuclear changes in Caenorhabditis elegans embryos exposed to brief, intermediate and long-term anoxia to analyze anoxia-induced cell cycle arrest.</a> BMC Cell Biol. 6, 1471-2121 (2005).</li>
<li>Padilla, P. A., Goy, J. M., Hajeri, <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aPadilla%2C+PA+%22Anoxia%22">Anoxia</a>. Padilla, P. A. , InTech. (2012).</li>
<li>Hajeri, V. A., Little, B. A., Ladage, M. L., Padilla, P. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((NPP-16%2FNup50+function+and+CDK-1+inactivation+are+associated+with+anoxia-induced+prophase+arrest+in+Caenorhabditis+elegans%5BTitle%5D)+AND+%22Mol.+Biol.+Cell%22%5BJournal%5D)">NPP-16/Nup50 function and CDK-1 inactivation are associated with anoxia-induced prophase arrest in Caenorhabditis elegans.</a> Mol. Biol. Cell. 21, 712-724 (2010).</li>
<li>Nystul, T. G., Goldmark, J. P., Padilla, P. A., Roth, M. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Suspended+animation+in+C.+elegans+requires+the+spindle+checkpoint%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Suspended animation in C. elegans requires the spindle checkpoint.</a> Science. 302, 1038-1041 (2003).</li>
<li>Margalit, A., Vlcek, S., Gruenbaum, Y., Foisner, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Breaking+and+making+of+the+nuclear+envelope%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Cell+Biochem%22%5BJournal%5D)">Breaking and making of the nuclear envelope.</a> J. Cell Biochem. 95, 454-465 (2005).</li>
<li>Maddox, A. S., Maddox, P. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((High-resolution+imaging+of+cellular+processes+in+Caenorhabditis+elegans%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">High-resolution imaging of cellular processes in Caenorhabditis elegans.</a> Methods Cell Biol. 107, 1-34 (2012).</li>
<li>Miller, D. L., Roth, M. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((C.+elegans+are+protected+from+lethal+hypoxia+by+an+embryonic+diapause%5BTitle%5D)+AND+%22Curr.+Biol%22%5BJournal%5D)">C. elegans are protected from lethal hypoxia by an embryonic diapause.</a> Curr. Biol. 19, 1233-1237 (2009).</li>
</ol>

Geen belangenconflicten verklaard.

Zuurstoftekort en Suspended Animation Hoewel blootstelling aan ernstige zuurstoftekort kan fataal zijn voor een aantal organismen, sommige organismen zijn in staat om blootstelling aan zuurstoftekort te overleven. In het geval van C. elegans, overleving van anoxie blootstelling is afhankelijk van het ontwikkelingsstadium en de reactie op anoxie wordt de toegang tot een omkeerbare toestand van schijndood, waarin een aantal waarneembare biologische processen worden gearresteerd. Celdelin...

<table border="1"><tbody><tr><td> Reagentia / Apparatuur </td><td></td><td></td><td> Samenstelling </td></tr><tr><td> Hypochlorietoplossing </td><td></td><td></td><td> 0,7 g KOH, 12 ml 5% NaOCl, brengen 50 ml met 2 0 ddH </td></tr><tr><td> M9 buffer </td><td></td><td></td><td> 3 g KH 2PO 4, 11 g Na 2 HPO 4, 5 g NaCl, 1 ml (1 M) MgSO4 per 1 L 2 O ddH </td></tr><tr><td> Glazen objectglaasjes </td><td> Fisher Scientific </td><td> 12-550-343 </td><td> 3 &quot;x1&quot; x1.0 mm </td></tr><tr><td> Ronde micro coverglass </td><td> Electron Microscopy Sciences </td><td> 72.223-01 </td><td> 25 mm Diameter </td></tr><tr><td> Halocarbonolie 700 </td><td> Sigma </td><td> H8898-100ml </td><td></td></tr><tr><td> Verdovingsmiddel </td><td></td><td></td><td> 0,5% tricaine, 0,05% tetramisool </td></tr><tr><td> Leiden Gesloten Perfusie Microincubator </td><td> Harvard Apparatus </td><td> 650041 </td><td></td></tr><tr><td> UHP Stikstof </td><td> Calgaz (Air Liquide) </td><td></td><td> &gt; 99,9990% N 2 &lt;2 ppm O 2 </td></tr><tr><td> Kunststof buis </td><td> VWR </td><td> 89068-468 </td><td> 0.062 &quot;ID x 0.125&quot; OD </td></tr><tr><td> Spinning Disk confocale microscoop </td><td> McBain Systems </td><td></td><td> Zeiss omgekeerd optische microscoop, epifluorescentie verlichtingssysteem, CSU-10 Yokogawa confocale scanner, Hamamatsu elektron multiplier CCD-camera. </td></tr></tbody></table>

het gebruik van time lapse microscopie om anoxie-geïnduceerde suspended animation visualiseer in<em&gt; c. elegans</em&gt; embryo&#39;s

Use of Time Lapse Microscopy to Visualize Anoxia-induced Suspended Animation in C. elegans Embryos

Caenorhabdits elegans is uitgebreid gebruikt in de studie van stressbestendigheid, dat wordt vergemakkelijkt door de transparantie van de volwassene en embryo fasen alsook door de beschikbaarheid van genetische mutanten en transgene stammen die talloze fusie-eiwitten 1-4. Daarnaast kunnen dynamische processen zoals celdeling worden weergegeven met fluorescent gemerkte reporter eiwitten. De studie van mitose kan worden vergemakkelijkt door het gebruik van time-lapse experimenten in diverse systemen waaronder intacte organismen, vandaar de vroege C. elegans embryo is geschikt voor deze studie. Hier gepresenteerde een techniek waarbij in vivo beeldvorming van sub-cellulaire structuren in reactie op anoxische (99,999% N2, &lt;2 ppm O 2) spanning kan op eenvoudige gasstroom door instellen op een krachtige microscoop. Een microincubation kamer wordt gebruikt in combinatie met stikstofgasstroom en door een draaiende schijf confocale microscoopeen gecontroleerde omgeving waarin dieren kunnen worden afgebeeld in vivo maken. Met GFP-gelabelde gamma tubuline en histon kan de dynamiek en arrestatie van celdeling worden gecontroleerd voor, tijdens en na blootstelling aan een zuurstofarme omgeving. De resultaten van deze techniek zijn hoge resolutie, gedetailleerde video&#39;s en foto&#39;s van cellulaire structuren binnen blastomeren van embryo&#39;s worden blootgesteld aan zuurstoftekort.

C. elegans embryo&#39;s worden blootgesteld aan ernstige zuurstoftekort (anoxie) in staat zijn om te overleven met de arrestatie van biologische processen zoals ontwikkeling en celdeling 7. De anoxie-geïnduceerde arrestatie van celdeling kan worden gecontroleerd, een sub-cellulair niveau, door een microincubation kamer in samenhang met stikstofgasstroom en door een draaiende schijf confocale microscoop om een gecontroleerde omgeving waarin dieren kunnen worden afgebeeld in vivo creëren <stro...

Hier beschreven wordt een<em&gt; In vivo</em&gt; Techniek image subcellulaire structuren dieren blootgesteld aan anoxie met een gasstroom door microincubation kamer in combinatie met een draaiende schijf confocale microscoop. Deze methode is eenvoudig en flexibel genoeg om een ​​aantal experimentele parameters en modelsystemen passen.

Het gebruik van Time lapse microscopie om Anoxie-geïnduceerde Suspended Animation Visualiseer in<em&gt; C. elegans</em&gt; Embryo&#39;s

*Caenorhabditis elegans* is uitgebreid gebruikt bij de bestudering van stressresistentie, wat wordt gefaciliteerd door de transparantie van de volwassen stadia en de embryo's ...

Het algemene doel van deze procedure is het beschrijven van een in vivo techniek om subcellulaire dynamiek in embryo's van C. elegans te beelden die zijn blootgesteld aan anoxie, met behulp van een gasstroomopstelling op een krachtige microscoop. Dit wordt bereikt door eerst een monster van jonge volwassen transgene dieren voor te bereiden om een geschikte populatie jonge embryo's voor beeldvorming te genereren. Bereid vervolgens dunne agarose-pads op objectglazen voor gebruik in de micro-incubatiekamer.Vervolgens worden de zee-eleganties adequaat geanestheseerd en bedekt met halokoolstofolie om uitdroging te voorkomen bij blootstelling aan de gasstroom. Ten slotte wordt het ronde dekglas met de geanestheseerde dieren in de micro-incubatiekamer geplaatst. De kamer wordt daarna op de microscooptafel geplaatst en gevuld met stikstofgas om een anoxische omgeving te creëren tijdens de beeldvorming, waarbij uiteindelijk gebruik wordt gemaakt van een gasstroom door de micro-incubatiekamer.In combinatie met in vivo fluorescentiemicroscopie maakt dit methode gedetailleerde video's en beelden met een hoge resolutie mogelijk van celcyclusarrest als reactie op anoxie. Het belangrijkste voorde

use-time-lapse-microscopy-to-visualize-anoxia-induced-suspended

Research

JoVE Journal

Biology

Biologie

Imaging C. elegans Embryo&#39;s met behulp van een epifluorescerende Microscoop en Open Source Software

Dit artikel beschrijft een techniek voor de visualisatie van de vroege gebeurtenissen van embryogenese in de...

Time-lapse microscopie van de vroege embryogenese in Caenorhabditis elegans

Een eenvoudige microfluïdische apparaat is ontwikkeld om verdoving gratis uit te...

Eenvoudige Microfluïdische Inrichtingen voor<em&gt; In vivo</em&gt; Beeldvorming van<em&gt; C. elegans</em&gt;,<em&gt; Drosophila</em&gt; En zebravis

Dit protocol beschrijft hoe u het delende cellen binnen een weefsel in Caenorhabditis elegans embryo. Terwijl verschillende protocollen beschrijven hoe afbeelding celdeling in de vroege embryo, dit protocol wordt beschreven hoe u foto celdeling binnen een zich ontwikkelende weefsel tijdens midden late embryogenese.

Visualiseren neuroblast Cytokinese Tijdens<em&gt; C. elegans</em&gt; Embryogenese

Een protocol wordt beschreven dat gebruikt anoxie / uithongering C. elegans model ischemie / reperfusie. Functionele resultaten omvatten een verhoogde mortaliteit, zichtbare afwijkingen in GFP-gelabelde neuronale processen, en verminderde gedragsreacties die neuronale functie nodig hebt.

Een Anoxia-verhongering Model voor ischemie / reperfusie in<em&gt; C. elegans</em

Hier wordt getoond hoe ontwikkelingsprocessen in C. elegans kunnen worden gevolgd en gekwantificeerd. De gepresenteerde methoden zijn gebaseerd op open-source tools die gemakkelijk kunnen worden geïmplementeerd. Het wordt gedemonstreerd hoe 3D-celvormmodellen kunnen worden gereconstrueerd, hoe subcellulaire structuren handmatig kunnen worden gevolgd en hoe corticaal contractiele stroom kan worden geanalyseerd.

Tracking en kwantificeren van ontwikkelingsprocessen in<em&gt; C. elegans</em&gt; Het gebruik van open-source tools

Hier beschrijven we protocollen die specifiek zijn ontworpen om morfogenetische defecten te monitoren die optreden tijdens de vroege en late fasen van embryonale verlenging van de rondworm Caenorhabditis elegans. Uiteindelijk zijn deze protocollen ontworpen om genen te identificeren die deze fasen reguleren en om hun differentiële vereisten langs de antero-posterior as van het embryo te karakteriseren.

Novel Metrics te karakteriseren Embryonale Verlenging van de nematode<em&gt; Caenorhabditis elegans</em

Hier presenteren we een combinatie benadering met behulp van hoge-resolutie microscopie, computationele tools, en single-cell etikettering in levende C. de embryo's van de neurologische om de enige cel dynamiek te begrijpen.

Isotrope licht-vel microscopie en geautomatiseerde Cell Lineage analyses catalogus Caenorhabditis embryogenese met subcellulaire resolutie

Dit werk beschrijft een semi-High-throughput protocol dat gelijktijdige 3D time-lapse beeldvorming van embryogenese in 80 – 100 C. elegans embryo's in een enkele nachtelijke run toestaat. Daarnaast worden tools voorbeeld verwerking en visualisatie meegeleverd om de gegevensanalyse te stroomlijnen. De combinatie van deze methoden met aangepaste reporter stammen maakt gedetailleerde controle van embryogenese.

Een semi-High-throughput imaging methode en data visualisatie Toolkit om C. elegans embryonale ontwikkeling te analyseren

Hier presenteren we een protocol voor het voorbereiden en monteren van Caenorhabditis elegans-embryo's , het registreren van de ontwikkeling onder een 4D-microscoop en het traceren van de cellijn.

4D-microscopie: Caenorhabditis elegans embryonale ontwikkeling ontrafelen met behulp van Nomarski-microscopie

Het protocol beschrijft een eenvoudig microfluïdisch chipontwerp en microfabricagemethodologie die wordt gebruikt om C. elegans te laten groeien in aanwezigheid van een continue voedselvoorziening gedurende maximaal 36 uur. Het groei- en beeldvormingsapparaat maakt ook intermitterende langetermijnbeeldvorming met hoge resolutie van cellulaire en subcellulaire processen mogelijk tijdens de ontwikkeling gedurende meerdere dagen.

Een eenvoudige microfluïdische chip voor groei op lange termijn en beeldvorming van Caenorhabditis elegans

Leer een in vivo beeldvormingstechniek voor subcellulaire dynamica in C. elegans embryo's onder anoxie met behulp van een gasstroomopstelling en een spindelschijfconfocale microscoop.

Het gebruik van Time lapse microscopie om Anoxie-geïnduceerde Suspended Animation Visualiseer in

Meer video's verkennen