Name: Imaging Analyse van de Neuron tot Glia Interactie in Microfluïdische Cultuur Platform (MCP)-gebaseerde Neuronale Axon en Glia Co-cultuur systeem (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2012-10-14T14:00:00.000+00:00
Duration: 9 min 34 s
Description: Leer hoe u een microfluïdische co-cultuur opzet om neuron-glia interacties te analyseren met behulp van hoge-resolutie beeldvorming. Deze methode maakt gedetailleerde studie van axon-astrocyt signalering mogelijk.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

playerTrialDesktop

We willen graag Dr Jeffrey Rothstein bedanken voor het verstrekken van BAC GLT1 eGFP muizen en GLT1 antilichaam; Tufts Center for Neuroscience Research (NIH P30 NS047243, PI, Rob Jackson) voor het leveren van waardevolle kernfaciliteiten; Nieuwe faculteit werving subsidie ​​(NIH P30 5P30NS069254-02 , PI, Phil Haydon) in Tufts Neuroscience Department.

1. Vergadering van de Microfluïdische Cultuur Kamer (MCP) <ol><li> MCP (figuur 1) zijn ontworpen voor open kamers compartimenten culturen van verschillende soorten cellen 4. Het heeft meestal twee compartimenten die zijn verbonden via het centrale kanaal (3 urn in diameter). Montage van MCP met glazen bodem gerechten is noodzakelijk voor het bereiden van culturen en de daaropvolgende beeldvorming analyse. </li><li> Eerste laag steriele glazen bodem gerechten met polyornithine (Sigma-Aldrich, 1 mg / ml) opgelost in natriumtetraboraat (Sigma-Aldrich, 10 mM pH 8,5) en werden overnacht geïncubeerd bij 37 ° C. </li><li> De volgende dag werden de beklede glazen bodem gerechten driemaal gewassen met ddH 2 O en gedroogd onder steriele zuurkast. De glazen bodem gerechten zijn daarna verder bekleed met laminine (Sigma-Aldrich, 1 mg / ml) en gedroogd onder UV licht gedurende 1 uur. Beklede schalen zijn klaar voor gebruik of kan worden opgeslagen bij -20 ° C tot gebruik. Deze coating eenopnieuw nodig plating neuronen en astrocyten in de co-cultuur. </li><li> Om de cultuur platform monteren platforms werden microfluïdische cultuur bovenop de gecoate glazen bodem gerechten centrale verbindingskanalen op de onderkant om een ​​goede afdichting te vormen. Regelmatige neuron of astrocyten voedingsbodems toegevoegd (de cel plating gebieden) aan beide zijden (fig. 1) in de gemonteerde MCP en gedurende 2-4 uur bij 37 ° C, om te zorgen geen lekkage tussen MCP en de glazen bodem schotel. We hebben getest met medium voor het uitplaten cellen om ervoor te zorgen is er geen lekkage. De montage van MCP op de glazen bodem schaal moet vers worden bereid voor gebruik. </li></ol> 2. Voorbereiding van Neuronale Cultuur en Inductie van Neuronale Axonen in gemonteerd MCP <ol><li> Corticale neuronale celculturen werden vers bereid uit embryonale 14 tot 16 dagen oude muis hersenen. Het neuron kweekmedium is samengesteld uit neurobasal medium, 2% B27 neurobasal supplement, 2 mM glutamine door 1% van 100x glutamax en 1% penicilline-streptomysin. Na dissectie van de hersenen van muizen, werd de meninges uit de cortex onder de dissectiemicroscoop. Het weefsel werd vervolgens fijngemaakt met een scheermesje om kleine weefselblokken maken om de oppervlakte blootgesteld aan trypsine verhogen. Weefselblokken werden getrypsiniseerd (Sigma-Aldrich, 0,05% trypsine) gedurende 10 min in een 37 ° C waterbad en vervolgens gedissocieerd door trituratie voorzichtig met vuurgepolijst Pasteur pipet. Gedissocieerde cellen werden gefiltreerd door een 70 pm zeef duidelijke neuronale celsuspensie verzamelen. </li><li> Neuronen (2-3 x 10 6 / ml, 150 ul) werden uitgezet op de cel plating gebieden rechts (figuur 1) van de geassembleerde MCP zodat neuronen kunnen hechten in de cel behouden (Figuur 1). Vers bereide neuronen werden bedekt met neuron plating medium dat met 5% foetaal bovine serum (Hyclone) aangevuld in de regelgevingr neuron kweekmedium. Omdat alleen de neuronen die hechten in de cel bewaargebied kunnen axonen groeien tot de andere kant van de samengestelde MCP door centrale kanalen, is het belangrijk om plate hoge dichtheid van neuronen in de cel plating gebied zorgen voor voldoende neuronen aan de cel retentiegebied. Een representatief beeld van hoge dichtheid van neuronale axonen wordt getoond in Figuur 2A. </li><li> De volgende dag werd het neuron plating medium vervangen door kweekmedium regelmatig neuron. Veranderende medium werd bewerkstelligd door voorzichtig afzuigen van het medium van de cel plating ruimte van de kamer, maar niet van de cel retentiegebied van de samengestelde MCP, om luchtbellen in de cel retentiegebied en de centrale verbindingskanalen voorkomen. Luchtbellen zal het axon uitgroei en boeking achteraf ernstig belemmeren in de centrale kanalen in de MCP. Gliale cellen afgeleide neurotrofe factor (GDNF, 10-20 ng / ml) werd toegevoegd aan de andere (links)van de kamer op dezelfde dag aan de inductie van axon uitgroei 5 vergemakkelijken van de neuronale zijde en kras door centrale kanalen van het geassembleerde MCP (Figuur 2A). Eerlijk bedrag van spontane neurietuitgroei zonder GDNF wordt ook waargenomen vanuit de neuronale kant en cross via centrale kanalen van de geassembleerde MCP. Axonen die doorlopen in het centrale kanaal worden vaak waargenomen 2-3 dagen na uitplaten. Zodra de axons gaan in het centrale kanaal, die doorgaans naar de andere zijde binnen een dag. Axonen gewoonlijk intact gedurende ten minste een week na het invoeren van de andere kant. </li></ol> 3. Toevoeging van Cultured Astrocyten om MCP aan een Gecompartimenteerde Co-cultuur systeem in te stellen Primaire astrocyt culturen werden bereid uit de P1-3 muis pup hersenen. De hersenen dissociatie procedure lijkt op de neuronale celisolatie hierboven beschreven procedure. Astrocyten werden voor het eerst uitgeplaat in 10 cm schotel die voorafBekleed met polyornithine (Sigma-Aldrich, 1 mg / ml). De astrocyt kweekmedium (DMEM, 10% foetaal runderserum, 1% penicilline-streptomysin) werd elke dag twee dagen om het puin. Daarna werd het medium elke drie dagen. <ol><li> Astrocyten 90% confluent worden en vormen een monolaag na 7 dagen. Confluente astrocyten werden getrypsiniseerd en 150 ul geresuspendeerd astrocyten (1x10 6 / ml) werden opnieuw uitgeplaat in de cel plating gebied van de linker zijde van het geassembleerde MCP wanneer axons gaat invoeren of zijn juist in de linkerkant van de samengestelde MCP. Astrocyten werden meestal bedekt 4-5 dagen na de neuronen waren verguld. GDNF werd eerst verwijderd voordat de re-plating van de astrocyten in de linkerkant van de MCP. Re-plated astrocyten werden bevestigd in de cel retentiegebied, zoals blijkt uit de GFAP immunokleuring (figuur 1). Minimale mediumstroom tussen beide zijden van de kamers (bepaald door fluorescentie dja) gevonden in de MCP, zoals eerder getoond 4,6. </li><li> Astrocyten 90% confluent worden en vormen een monolaag na 7 dagen. Confluente astrocyten werden getrypsiniseerd en 150 ul geresuspendeerd astrocyten (1 x 10 6 / ml) werden opnieuw uitgeplaat in de cel plating gebied van de linker zijde van het geassembleerde MCP wanneer axons gaat invoeren of alleen zijn opgenomen in de linker zijde van het geassembleerde MCP. Astrocyten werden meestal bedekt 4-5 dagen na de neuronen waren verguld. GDNF werd eerst verwijderd voordat de re-plating van de astrocyten in de linkerkant van de MCP. Re-plated astrocyten werden bevestigd in de cel retentiegebied, zoals blijkt uit de GFAP immunokleuring (figuur 1). Minimale mediumstroom tussen beide zijden van de kamers (bepaald door fluorescentie kleurstoffen) gevonden in de MCP, zoals eerder getoond 4,6. </li><li> Na de re-plating van de astrocyten, axons dat de linkerzijde van de samengestelde MCP ingevoerde directe interactie met de Astrocytes door ofwel direct axonale contact of afgifte van oplosbare factoren. Immunokleuring van astrogliale plasmamembraan glutamaattransporter GLT1 en neuronale βIII-tubuline werd uitgevoerd om de interactie tussen axonen en astrocyten visualiseren, zoals in figuur 2D-F. </li></ol>

<ol><li>Stevens, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neuron-astrocyte+signaling+in+the+development+and+plasticity+of+neural+circuits%5BTitle%5D)+AND+%22Neuro-Signals%22%5BJournal%5D)">Neuron-astrocyte signaling in the development and plasticity of neural circuits.</a> Neuro-Signals. 16, 278-288 (2008).</li>
<li>Paixao, S., Klein, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neuron-astrocyte+communication+and+synaptic+plasticity%5BTitle%5D)+AND+%22Current+opinion+in+neurobiology%22%5BJournal%5D)">Neuron-astrocyte communication and synaptic plasticity.</a> Current opinion in neurobiology. 20, 466-473 (2010).</li>
<li>Fields, R. D., Stevens-Graham, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((New+insights+into+neuron-glia+communication%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">New insights into neuron-glia communication.</a> Science. 298, 556-562 (2002).</li>
<li>Park, J. W., Vahidi, B., Taylor, A. M., Rhee, S. W., Jeon, N. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Microfluidic+culture+platform+for+neuroscience+research%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Microfluidic culture platform for neuroscience research.</a> Nature. 1, 2128-2136 (2006).</li>
<li>Wang, C. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Regulation+of+neuromuscular+synapse+development+by+glial+cell+line-derived+neurotrophic+factor+and+neurturin%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+biological+chemistry%22%5BJournal%5D)">Regulation of neuromuscular synapse development by glial cell line-derived neurotrophic factor and neurturin.</a> The Journal of biological chemistry. 277, 10614-10625 (2002).</li>
<li>Yang, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Presynaptic+regulation+of+astroglial+excitatory+neurotransmitter+transporter+GLT1%5BTitle%5D)+AND+%22Neuron%22%5BJournal%5D)">Presynaptic regulation of astroglial excitatory neurotransmitter transporter GLT1.</a> Neuron. 61, 880-894 (2009).</li>
<li>Regan, M. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Variations+in+promoter+activity+reveal+a+differential+expression+and+physiology+of+glutamate+transporters+by+glia+in+the+developing+and+mature+CNS%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+neuroscience%22%5BJournal%5D)">Variations in promoter activity reveal a differential expression and physiology of glutamate transporters by glia in the developing and mature CNS.</a> The Journal of neuroscience. 27, 6607-6619 (2007).</li>
<li>Swanson, R. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neuronal+regulation+of+glutamate+transporter+subtype+expression+in+astrocytes%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+neuroscience%22%5BJournal%5D)">Neuronal regulation of glutamate transporter subtype expression in astrocytes.</a> The Journal of neuroscience. 17, 932-940 (1997).</li>
<li>Schlag, B. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Regulation+of+the+glial+Na%2B-dependent+glutamate+transporters+by+cyclic+AMP+analogs+and+neurons%5BTitle%5D)+AND+%22Molecular+pharmacology%22%5BJournal%5D)">Regulation of the glial Na+-dependent glutamate transporters by cyclic AMP analogs and neurons.</a> Molecular pharmacology. 53, 355-369 (1998).</li>
<li>Ponomarev, E. D., Novikova, M., Maresz, K., Shriver, L. P., Dittel, B. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Development+of+a+culture+system+that+supports+adult+microglial+cell+proliferation+and+maintenance+in+the+resting+state%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+immunological%22%5BJournal%5D)">Development of a culture system that supports adult microglial cell proliferation and maintenance in the resting state.</a> Journal of immunological. 300, 32-46 (2005).</li>
<li>Espinosa-Jeffrey, A., Wakeman, D. R., Kim, S. U., Snyder, E. Y., de Vellis, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Culture+system+for+rodent+and+human+oligodendrocyte+specification%2C+lineage+progression%2C+and+maturation%5BTitle%5D)+AND+%22Current+protocols+in+stem+cell+biology%22%5BJournal%5D)">Culture system for rodent and human oligodendrocyte specification, lineage progression, and maturation.</a> Current protocols in stem cell biology. Chapter 2, (2009).</li>
<li>Barres, B. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+mystery+and+magic+of+glia%3A+a+perspective+on+their+roles+in+health+and+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Neuron%22%5BJournal%5D)">The mystery and magic of glia: a perspective on their roles in health and disease.</a> Neuron. 60, 430-440 (2008).</li>
<li>Debanne, D., Rama, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Astrocytes+shape+axonal+signaling%5BTitle%5D)+AND+%22Science+signaling%22%5BJournal%5D)">Astrocytes shape axonal signaling.</a> Science signaling. 4, pe11(2011).</li>
</ol>

Geen belangenconflicten verklaard.

De MCP based neuron en astrocyten co-cultuur systeem maakt dissectie gedetailleerde neuron astroglia signaalwegen door alleen de axons langs de centrale kanalen en interactie met de astrogliale cellen. Deze co-cultuur systeem kan eenvoudig worden ingesteld met conventionele neuron en astrocyte cultuur procedures. We hebben ook beschreef een praktische toepassing van deze co-cultuur systeem door het gebruik van een eGFP gebaseerde reporter voor het aantonen van axon-afhankelijke GLT1 promotor activering in astrocyten. </...

<table border="1"><tbody><tr><td> Foetaal runderserum </td><td> Hyclone </td><td> SH30070.03 </td><td> voor het plateren neuron voor neuron cutlure medium </td></tr><tr><td> Foetaal runderserum </td><td> Sigma-Aldrich </td><td> F4135 </td><td> voor astrocyten kweekmedium </td></tr><tr><td> Gliale afgeleide zenuw factor </td><td> R &amp; D systems </td><td> 212-GD </td><td> Toepassing 10-20 ng / ml tot neuron kant van de kamer </td></tr><tr><td> Dulbecco Modified Eagle Medium hoge glucose </td><td> Sigma-Aldrich </td><td> 11995 </td><td></td></tr><tr><td> 70 mm cel zeef </td><td> BD Falcon </td><td> 352350 </td><td></td></tr><tr><td> Steriele glazen bodem schaal </td><td> MatTek Corporation </td><td></td><td></td></tr><tr><td> Microfluïdische cultuur platforms </td><td> Xona Microfluidics LLC </td><td> SND150 </td><td></td></tr><tr><td> 6 putjes van de petrischaal </td&gt; <td> Cellstar </td><td> 657 160 </td><td></td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td> Neuron kweekmedium <ul><li> Neurobasal medium </li><li> 2% B27 Neurobasal supplement </li><li> 2 mM glutamaat door 1% 100x Glutamax </li><li> 1% penicilline-streptomysin </li></ul></td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td> Neuron kweekmedium voor plating cel <ul><li> Neurobasal medium </li><li> 2% B27 Neurobasal supplement </li><li> 2 mM glutamaat door 1% 100x Glutamax </li><li> 1% penicilline-streptomysin </li><li> 5% foetaal bovine serum SH30070.03 </li></ul></td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td> Astrocyten kweekmedium <ul><li> Dulbecco gemodificeerd eagle medium hoog glucosegehalte </li><li> 10% foetaal bovine serum F4135 </li><li> 1% penicilline-streptomysin </li></ul></td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td> Tabel 1. Materialen die worden gebruikt in de microfluïdische cultuur platform op basis van neuronale axon en glia co-cultuur systeem. </td></tr></tbody></table>

imaging analyse van de neuron tot glia interactie in microfluïdische cultuur platform (mcp)-gebaseerde neuronale axon en glia co-cultuur systeem

Imaging Analysis of Neuron to Glia Interaction in Microfluidic Culture Platform (MCP)-based Neuronal Axon and Glia Co-culture System

Proper neuron glia interactie is essentieel om fysiologische functie van het centrale zenuwstelsel (CNS). Deze bi-directionele communicatie wordt sophisticatedly gemedieerd door specifieke signaalwegen tussen neuron en glia 1,2. Identificatie en karakterisering van deze signaalroutes is essentieel voor het begrijpen hoe neuron glia interactie vormen CNS fysiologie. Eerder hebben neuron en glia gemengde kweken op grote schaal gebruikt voor het testen en karakteriseren signaalwegen tussen neuronen en glia. Wat we geleerd van deze preparaten en andere in vivo gereedschap heeft echter gesuggereerd dat onderlinge signalering tussen neuronen en glia vaak voor in specifieke compartimenten in neuronen (bijvoorbeeld axon, dendriet of soma) 3. Dit maakt het belangrijk om de ontwikkeling van een nieuwe cultuur systeem dat scheiding van neuronale compartimenten maakt en in het bijzonder onderzoekt de interactie tussen glia en neurointerne axonen / dendrieten. Bovendien is de conventionele mengcultuur systeem niet kunnen differentiëren de oplosbare factoren en direct contact membraan signalen tussen neuronen en glia. Bovendien is de grote hoeveelheid neuronen en gliacellen in de conventionele co-cultuur ontbreekt het de resolutie nodig is om de interactie tussen een axon en een gliacel observeren. In deze studie beschrijven we een nieuwe axon en glia co-cultuur systeem met behulp van een microfluïdisch platform cultuur (MCP). In dit co-cultuur systeem worden neuronen en gliale cellen gekweekt in aparte kamers die zijn verbonden via meerdere centrale kanalen. In deze microfluïdische cultuur platform, alleen neuronale processen (met name axonen) kan de gliale kant binnenkomen via de centrale kanalen. In combinatie met krachtige fluorescerend eiwit labeling, dit systeem rechtstreeks onderzoek van signaalroutes tussen axonale / dendritische en gliale interacties dergelijkes axon-gemedieerde transcriptionele regulatie in glia, glia-gemedieerde receptor handel in neuronale terminals, en glia-gemedieerde axon groei. De smalle diameter van de kamer ook significant verbiedt de stroom van de neuron verrijkte medium in de kamer gliale, vergemakkelijken sondering van de direct membraan-eiwit interactie tussen axonen / dendrieten en gliale oppervlakken.

Time-lapse imaging analyse van axon-geïnduceerde GLT1 promotor activering in astrocyten De compartimenten neuron en astrocyt co-cultuur systeem slechts de neuronale processen, vooral de axonen, selectief interactie met astrocyten. Na de succesvolle oprichting van axon en astrocyten (of andere gliacellen) co-cultuur in de gemonteerde MCP, kan verschillende types van axon-glia interacties worden bestudeerd, zoals; axon-geïnduceerde activatie van astrogliale gen promoter activering, astrocyten-geï...

Deze studie beschrijft de procedures van het opzetten van een nieuwe neuronale axon en (astro) glia co-cultuur platform. In deze co-cultuur systeem, manipulatie van directe interactie tussen een axon (en single gliale cel) wordt het mogelijk, waardoor mechanistische analyse van de wederzijdse neuron naar gliale signalering.

Imaging Analyse van de Neuron tot Glia Interactie in Microfluïdische Cultuur Platform (MCP)-gebaseerde Neuronale Axon en Glia Co-cultuur systeem

Een correcte interactie tussen neuronen en glia is cruciaal voor de fysiologische functie van het centrale zenuwstelsel (CZS). Deze bidirectionele communicatie is ...

Dit protocol beschrijft een nieuw co-cultureplatform voor neurale axonen en astroglia om interacties tussen neuronen en glia te analyseren met behulp van imaging met hoge resolutie. Eerst wordt de microfluïdische kweekkamer geassembleerd, worden neurale culturen voorbereid en worden de neurale axonen gestimuleerd om de andere zijde van de MCP binnen te dringen. Vervolgens worden gecultiveerde astrocyten toegevoegd om een gecompartimenteerd co-culturesysteem te vestigen; de resultaten, waaronder time-lapse imaging met confocale immunofluorescentiemicroscopie, kunnen helpen bij het begrijpen van de interacties tussen axonen, astroglia en neurale axonen.We kregen oorspronkelijk het idee voor deze methode toen we probeerden het effect van neuronale uitlopers te scheiden van neuronale secretie bij de regulatie van GT. Personen die nog niet bekend zijn met deze methode zullen doorgaans moeite hebben met het induceren van axonen naar andere delen van het cellulaire compartiment. Hiervoor is een hoge densiteit van gezonde neuronen nodig, geplaatst op de neuronale zijde met de neuronen vlakbij de centrale kanalen.De MCP open kamers zijn ontworpen voor gecompartimenteerde culturen van versch

imaging-analysis-neuron-to-glia-interaction-microfluidic-culture

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Neurowetenschap

BioMEMS: het aangaan van nieuwe samenwerkingen tussen biologen en ingenieurs

Dit artikel beschrijft een nieuw protocol en reagensset ontworpen voor de gevoelige meting van de neurotoxische effecten van verbindingen en behandelingen op co-culturen van neuronen en astrocyten met behulp van hoge inhoudsanalyse. Resultaten tonen aan dat de hoge inhoudelijke analyse een spannende nieuwe technologie voor neurotoxiciteit assessment vertegenwoordigt.

Een Neuronale en astrocyte co-cultuur assay voor High Content Analysis van neurotoxiciteit

We ontwikkelden een nieuw meerdere compartimenten neuron co-cultuur microsysteem platform voor in-vitro CNS axon-glia interactie onderzoek. Het platform is in staat het uitvoeren van maximaal zes onafhankelijke experimenten in parallel en werd vervaardigd met behulp van een nieuw ontwikkelde macro / micro hybrid fabricage methode.

Een Multi-compartimenten CNS Neuron-glia Co-cultuur Microfluïdische Platform

This video demonstrates the assessment of neuronal electrical activity in a co-culture of hiPSC-derived cortical glutamatergic neurons and glioma cells using a microfluidic device with multielectrode arrays.

Assessing Glutamatergic Neurons and Glioma Cells Interactions in a Co-Culture

Dit protocol beschrijft de indirecte neuron-astrocyten co-cultuur voor verzuilde analyse van neuron-glia interacties.

De indirecte Neuron-astrocyten Coculture Assay: An<em&gt; In Vitro</em&gt; Set-up voor het gedetailleerd onderzoek van het neuron-glia interacties

Dit protocol heeft tot doel om aan te tonen hoe te in vitro micro-elektrode-arrays combineren met microfluidic apparaten voor het bestuderen van de actiepotentiaal transmissie in neuronale culturen. Data-analyse, namelijk de opsporing en karakterisering van teeltmateriaal van de actie potentieel, is uitgevoerd met behulp van een nieuwe geavanceerde, nog gebruikersvriendelijk en vrij beschikbaar zijn, computationele gereedschap.

Interfacing Microfluidics met micro-elektrode Arrays voor het bestuderen van de neuronale communicatie- en axonale signaal vermeerdering

Hier presenteren we een eenvoudige aanpak met behulp van specifieke cultuurmedia die de oprichting van neuron- en astrocytenverrijkte culturen, of neuron-glia culturen uit de embryonale cortex, met hoge opbrengst en reproduceerbaarheid mogelijk maakt.

Een cel cultuur model voor het bestuderen van de rol van Neuron-Glia Interacties in Ischemie

Recente werken onthullen de neuronale impact op hoogwaardige pediatrische glioomcellen (pHGG) en hun wederzijdse interacties. Het huidige werk toont de ontwikkeling van een in vitro model dat pHGG-cellen en glutamaterge neuronen co-cultiveert en hun elektrofysiologische interacties registreerde om die interactiviteiten na te bootsen.

Co-cultuur van glutamaterge neuronen en pediatrische hoogwaardige glioomcellen in microfluïdische apparaten om elektrische interacties te beoordelen

Dit protocol beschrijft een microglia-neuronale co-cultuur die is opgezet uit primaire neuronale cellen geïsoleerd uit muizenembryo's op embryonale dagen 15-16 en primaire microglia gegenereerd uit de hersenen van neonatale muizen op postnatale dagen 1-2.

Genereren en co-cultureren van primaire microglia en corticale neuronen van muizen

Dit protocol beschrijft een microfluïdisch systeem dat neuronale metabole dynamiek modelleert na axonale verwonding, waardoor beeldvorming, multi-omics-analyse en mechanistische studies van intrinsieke metabole remodellering mogelijk zijn.

Microfluïdische chip voor axonale letselmodellen, constructie en het mogelijk maken van multi-omics-analyse

Leer hoe u een microfluïdische co-cultuur opzet om neuron-glia interacties te analyseren met behulp van hoge-resolutie beeldvorming. Deze methode maakt gedetailleerde studie van axon-astrocyt signalering mogelijk.

Imaging Analyse van de Neuron tot Glia Interactie in Microfluïdische Cultuur Platform (MCP)-gebaseerde Neuronale Axon en Glia Co-cultuur systeem (Video) | JoVE Journal

Imaging Analyse van de Neuron tot Glia Interactie in Microfluïdische Cultuur Platform (MCP)-gebaseerde Neuronale Axon en Glia Co-cultuur systeem

Meer video's verkennen