Name: Invriezen menselijke embryonale stamcellen (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2006-10-12T00:00:00.000+00:00
Duration: 8 min
Description: Leer het invriezen van menselijke embryonale stamcellen met een effectief protocol voor celbehoud. Deze methode waarborgt viabiliteit en differentiatiepotentieel na ontdooien voor regeneratieve geneeskunde.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

<ol><li> Een gezonde, exponentieel groeiende cultuur wordt gewassen met PBS om de resterende media die anders zouden kunnen blussen van de Trypsine reactie te verwijderen. </li><li> Opgewarmd 0,05% trypsine-EDTA wordt dan toegevoegd aan de cellen te dekken, en de plaat mag incuberen tot maximaal 5 minuten bij kamertemperatuur. Gedurende deze tijd-cellen kunnen worden waargenomen afronding, en kolonies tillen uit het plaatoppervlak. </li><li> Gentle herhaald pipetteren zal verwijderen cellen en kolonies van de plaat oppervlak. </li><li> Getrypsiniseerd cellen zijn geplaatst in een standaard conische buis met een voorverwarmde hES cell media om de resterende trypsine te lessen, en dan gesponnen. </li><li> Cellen worden geresuspendeerd groei media bij een concentratie van ongeveer een miljoen cellen in een ml media. </li><li> Na de cellen voldoende geresuspendeerd, is ijskoud Invriezen Media toegevoegd gelijk volume. </li><li> Celsuspensies worden grondig gemengd, in hoeveelheden verdeeld in invriezen flesjes, en liet langzaam bevriezen tot-80C gedurende 24 uur. </li><li> Bevroren cellen kunnen dan verplaatst naar de dampfase van vloeibaar stikstof voor langdurige opslag, of blijven bij -80 gedurende ongeveer zes maanden. </li></ol><p> Let op: zo&#39;n bevroren hoeveelheid bij een concentratie van 106 cellen / ml is voldoende om een ​​cultuur leven in te blazen op een 10cm plaat. </p>

<ol>
	<li>Cowan, C. A. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Derivation+of+Embryonic+Stem+Cells+from+Human+Blastocysts.">Derivation of Embryonic Stem Cells from Human Blastocysts.</a> , 1650-1656 (2004).</li></ol>

<p> De techniek die we beschrijven voor het invriezen van TINTEN cellijnen werkt goed voor het efficiënt opslaan en herrijzen TINTEN cellijnen en ook alle zoogdiercellen van belang. Invriezen een klein deel van de cellen op elke passage is een belangrijke overweging bij het werken met hES cellijnen, als karyotype afwijkingen kunnen ontstaan ​​en abnormale cellen kunnen zich snel nemen over de lijn. Dus, met bevroren splitst bij elke passage naast de grote banken op bepaalde passages is zeer wenselijk. </p>

<table><tbody><tr><td>HuES-medium</td><td>medium</td><td></td><td></td><td>Voor een totaal van 651,5 mL, voeg toe: 500 mL KO-DMEM + 6,5 mL PenStrep + 6,5 mL L-Glut + 6,5 mL NEAA 6,5 mL + beta-mercapto&amp;#8211;ethanol 0,6 &amp;micro;L (14,3 M stock) + 65 mL Serum Replacement + 65 mL Plasmanate + 0,65 mL bFGF2 (~10 ng/mL eindconcentratie)</td></tr><tr><td>Invriesmedium</td><td>medium</td><td></td><td></td><td>80% FCS (foetaal kalfserum) + 20% DMSO (dimethylsulfoxide). Bewaard bij 4 &amp;deg;C.</td></tr></tbody></table>

invriezen menselijke embryonale stamcellen

Freezing Human ES Cells

<p class="jove_content">Hier laten we zien hoe onze lab TINTEN menselijke embryonale stamcellijnen bevriest. Een gezonde, exponentieel groeiende cultuur wordt gewassen met PBS om de resterende media die anders zouden kunnen blussen van de Trypsine reactie te verwijderen. Opgewarmd 0,05% trypsine-EDTA wordt dan toegevoegd aan de cellen te dekken, en de plaat mag incuberen tot maximaal 5 minuten bij kamertemperatuur. Gedurende deze tijd-cellen kunnen worden waargenomen afronding, en kolonies tillen uit het plaatoppervlak. Gentle herhaald pipetteren zal verwijderen cellen en kolonies van de plaat oppervlak. Getrypsiniseerd cellen zijn geplaatst in een standaard conische buis met een voorverwarmde hES cell media om de resterende trypsine te lessen, en dan gesponnen. Cellen worden geresuspendeerd groei media bij een concentratie van ongeveer een miljoen cellen in een ml van media, een concentratie zodanig dat een bevroren hoeveelheid is voldoende om een ​​cultuur leven in te blazen op een 10cm plaat. Na de cellen voldoende geresuspendeerd, is ijskoud bevriezen media toegevoegd gelijk volume. Celsuspensies worden grondig gemengd, in hoeveelheden verdeeld in invriezen flesjes, en liet langzaam bevriezen tot-80C gedurende 24 uur. Bevroren cellen kunnen dan verplaatst naar de dampfase van vloeibaar stikstof voor langdurige opslag, of blijven bij -80 gedurende ongeveer zes maanden.</p>

<p class="jove_content">Hier laten we zien hoe onze lab TINTEN menselijke embryonale stamcellijnen bevriest.</p>

Invriezen menselijke embryonale stamcellen

Hier demonstreren wij hoe ons laboratorium HuES-menselijke embryonale stamcellijnen invriest. Een gezonde, exponentieel expanderende cultuur wordt gewassen met PBS om ... te verwijderen.

Research

JoVE Journal

Biology

Biologie

Hier laten we zien hoe onze lab een TINTEN menselijke embryonale stamcellen lijn cultuur begint met een bevroren voorraad.

Menselijke ES-cellen: Vanaf Cultuur van bevroren cellen

Gekweekte zoogdiercellen worden op grote schaal gebruikt in de celbiologie studies. Deze video beschrijft de basisvaardigheden die nodig zijn om te bevriezen en op te slaan cellen en hoe om bevroren voorraden herstellen.

Invriezen, ontdooien, en verpakking Cellen van Verkeer

De differentiatie van ESC samenvalt met cel-type specifieke veranderingen in de structuur en samenstelling van het chromatine. De detectie van deze veranderingen geeft waardevolle inzichten in de mechanismen die stemcellness en celdifferentiatie te definiëren. Chromatine immunoprecipitatie (ChIP) vormt een waardevolle methode om de moleculaire mechanismen die ten grondslag liggen stamcellen differentiatie ontleden.

Chromatine immunoprecipitatie van menselijke embryonale stamcellen

Sinds James Thomson et al. ontwikkelde een techniek in 1998 te isoleren en HES groeien in de cultuur, hebben vriescellen voor later gebruik en ontdooien en uitbreiden van cellen van een ingevroren voorraad belangrijk geworden procedures uitgevoerd in routine hES celkweek. Omdat hES-cellen zijn zeer gevoelig voor de stress van het invriezen en ontdooien, speciale aandacht genomen. Hier laten we zien de juiste techniek voor het snel ontdooien van hES cellen van vloeibare stikstof voorraden,...

Invriezen en ontdooien van menselijke embryonale stamcellen

We beschrijven een protocol om humane amnion-epitheelcellen (hAEC's) te isoleren en te kweken met behulp van dierlijk productvrije reagentia in overeenstemming met de richtlijnen voor goede fabricagepraktijken (cGMP).

Isolatie, cryopreservatie en cultuur van de mens Amnion epitheelcellen voor klinische toepassingen

Genoombewerking van humane pluripotente stamcellen (hPSC's) kan snel en efficiënt worden uitgevoerd. Hier wordt een robuuste experimentele procedure gepresenteerd om hPSC's genetisch te manipuleren, zoals geïllustreerd door het bewerken van het AAVS1-veilige havenlocus om EGFP tot expressie te brengen en antibioticaresistentie te introduceren.

Oprichting van Genome bewerkte menselijke pluripotente stamcellijnen: Van Targeting naar Isolation

Uitbreiding van menselijke kinderen oesofageale epitheelcellen gebruikmaking voorwaardelijke herprogrammering biedt onderzoekers met een patiënt-specifieke populatie van cellen die kunnen worden gebruikt voor de engineering oesofageale constructen autologe implantatie defecten of letsel behandelen en dienen als een reservoir voor therapeutische screeningstesten.

Voorwaardelijke herprogrammeren van Pediatric Human slokdarmkanker epitheelcellen voor gebruik in Tissue Engineering and Disease Investigation

Een protocol is bedoeld om te bereiden polyvinyl alcohol-co-itacon zuur hydrogels met verschillende stijfheid, die waren geënt met en zonder oligopeptides, te onderzoeken van het effect van de stijfheid van biomaterialen op de differentiatie en de verspreiding van de cellen van de stam. De stijfheid van de hydrogels werd gecontroleerd door het crosslinking tijd.

Menselijke pluripotente stamcel cultuur op Polyvinyl Alcohol-Co-itacon zuur Hydrogels met verschillende stijfheid onder voorwaarden Xeno-gratis

Dit protocol beschrijft een aangepaste methode om microvasculaire endotheelcellen van de hersenen af te leiden, uit te breiden en cryopreserveren, verkregen door het differentiëren van door de mens geïnduceerde pluripotente stamcellen, en om de eigenschappen van de bloed-hersenbarrière in een ex vivo model te bestuderen.

Afleiding, expansie, cryopreservatie en karakterisering van hersenmicrovasculaire endotheelcellen uit door de mens geïnduceerde pluripotente stamcellen

Hier laten we zien hoe het sandwich-vriesapparaat kan worden gebruikt voor het snel invriezen van biologische monsters, waaronder bacteriën, gist, gekweekte cellen, geïsoleerde cellen, dierlijke en menselijke weefsels en virussen. We laten ook zien hoe u monsters kunt voorbereiden op ultradunne secties na snelvriezen.

Snelvriezen met behulp van sandwichbevriezingsapparaat voor goed ultrastructureel behoud van biologische monsters in elektronenmicroscopie

Deze studie biedt een gedetailleerd protocol voor de efficiënte cryopreservatie van van menselijke stamcellen afgeleide retinale pigmentepitheelcellen.

cryopreservatie van menselijke embryonale stamcel-afgeleide retinale pigmentepitheelcellen in het optimale stadium

Leer het invriezen van menselijke embryonale stamcellen met een effectief protocol voor celbehoud. Deze methode waarborgt viabiliteit en differentiatiepotentieel na ontdooien voor regeneratieve geneeskunde.

Invriezen menselijke embryonale stamcellen

Meer video's verkennen