Name: Rechter ventrikel systolische druk Metingen in combinatie met Harvest van Lung en Immune weefselmonsters in Muizen (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2013-01-16T12:00:00.000+00:00
Duration: 10 min 20 s
Description: Leer een snel protocol voor het meten van rechterventrikelfunctie en longontsteking bij muizen. Deze methode combineert fysiologische beoordeling met microdissectie voor cardiovasculair en immunologisch onderzoek.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Dit werk werd gefinancierd door de National Institutes of Health 1R21HL092370-01 (GG), 1R01 HL095764-01 (GG); R01HL082694 (JW); American Heart Association, oprichters affiliate (0855943D, GG); Stony Wold - Herbert Fonds, New York (SHP).

1. Voorbereiding <ol><li> Bereid de volgende oplossingen en buizen (Tabel 1) als volgt: <ol><li> Hanks oplossing, geen calcium, magnesium of indicator met penicilline (100 U / ml) / streptomycine (100 mg / ml). </li><li> Fosfaat gebufferde zoutoplossing (PBS), 1x, geen calcium, magnesium no. </li><li> Ethanol, 70%, 500 ml maken. </li><li> Gebufferde formaldehyde, 7-10% met PBS, maken 500 ml. </li><li> Anesthesie-oplossingen: <ol><li> Avertin. Voeg voorzichtig 5 ml 2-Methyl-2-butanol met 5 g 2,2,2-tribroomethanol. Na oplossen houden stock oplossing bij kamertemperatuur in het donker. Neem 0,25 ml van de stamoplossing en verdun het met 10 ml 1xPBS in glazen bodem fles. Wikkel de fles met aluminiumfolie, plaats bij 37 ° C opgelost en vervolgens tot aliquot in 5 ml polypropyleenbuisjes en bewaar in de koelkast. Warm een ​​aliquot op de ochtend van het experiment. </li><li> Barbituraat. Verdun voorraad oplossing met PBS met 2,6% te geven barbituraat solution. Plaats 3-4 ml porties in polypropyleenbuisjes. </li></ol></li></ol></li><li> Organiseer drie werken-gebieden (figuur 1). </li><li><ol><li> Gebied A: Leg de volgende items: studie vorm te studeren identificatienummer, datum, het lichaamsgewicht, het gewicht van rechts hart, linker hart en septum te registreren; precisieweegschaal (0-50 g op 0,01 g nauwkeurig) om het lichaamsgewicht te bepalen; micro-schaal tot hart gewichten bepalen bij 0,001 g nauwkeurig, wegen boten, anesthesieoplossingen (duidelijk aangegeven); kleine dewar met vloeibare stikstof, geïsoleerde container met ijs buizen, 24-well plaat bloed en weefselmonsters (tabel 1) te verzamelen; chirurgische instrumenten ( tabel 2, figuur 2) en oplossingen voor de instrumenten (tabel 1) reinigen. </li><li> Gebied B: Leg de volgende items: dissectiemicroscoop, rechts Hartkatheter verbonden met een druk regeleenheid die is verbonden met een versterker en laptop computer. De katheter wordt geplaatst ineen beker met water. Schik chirurgische instrumenten (tabel 2), stukjes hechtdraad gesneden om een optimale lengte en geplaatst in een af te wegen boot, tape (autoclaaf tape is optimaal) gesneden optimale lengte en breedte en opgesteld op microscoop of labtafel voor een gemakkelijke toegang, wattenstaafjes en haar remover oplossing. Kalibreer de catheter aan het begin van de studie. </li><li> Gebied C: Leg de volgende items: magnifier lens; tracheacanule; 1 ml spuiten; hechtdraad gesneden om een ​​optimale lengte en geplaatst in een af ​​te wegen boot, kleine dewar met vloeibare stikstof; geïsoleerde container met ijs; buizen en 24-well plaat te verzamelen BAL en weefselmonsters (tabel 1), chirurgische instrumenten (tabel 2); oplossingen uitvoeren BAL en de tracheale canule en de instrumenten (tabel 1) reinigen. </li></ol></li></ol> 2. Rechts hartkatheterisatie <ol><li> Weeg muis met behulp van een precisie schaal door voorzichtig het plaatsen van de muis in een wegen bhaver. Zorg ervoor dat u het dier te behandelen vriendelijk en rustig. Record gewicht. De beschreven protocol werkt het beste voor muizen die 20 g of meer omdat de diameter van de halsslagader te bieden aan de druk catheter, is het mogelijk om kleinere muizen (17 g of meer) zolang katheteriseren de ader groot genoeg is. </li><li> Verdoven de muis door injectie met Avertin afhankelijk van het lichaamsgewicht (10 ul / g), bijv. voor 20 g 200 ul, 25 g 250 ul, 30 g 300 pl. Het exacte injectievolume moet worden aangepast aan de muizenstam. Zorg ervoor dat u het dier te behandelen vriendelijk en rustig, omdat stress kan de reactie op de verdoving te veranderen. </li><li> Zodra de muis wordt verdoofd, plaats op dubbel-geplooid vloeipapier. Noteer het ID-nummer op het papier. Wrijf zachtjes over ontharen lotion in het ventrale aspect van de nek tot de chirurgische veld te wissen. Plaats de muis op het papier en wacht 1-2 minuten. </li><li> Haal haar uit de ventrale aspectvan de nek door zachtjes strelen van de haren tegen de richting van de haargroei met een wattenstaafje. </li><li> Voorzichtig de voldoende diepte van de anesthesie te bepalen door te controleren op de afwezigheid van de teen reflex: de muis reageert niet op knijpen van haar tenen. </li><li> Werken snel en ontspannen, moet de rest van het rechter hart catheterisatie niet meer dan 10 minuten, optimaal 3 tot 6 minuten. Het is belangrijk dat het weefsel niet uitdroogt omdat de katheter moet glijden in de ader en de binnenkant van de ader verder een laag vochtgehalte. Consistent timing van de procedure is belangrijk voor het genereren van vergelijkbare gegevens tussen groepen. </li><li> Plaats de muis terug op vloeipapier en overdracht met tissue papier op piepschuim boord. Fix poten en kop op zijn plaats met behulp van autoclaaf tape. </li><li> Maak incisie van de huid van kaken naar sternum (borstbeen). </li><li> Voorzichtig ontleden de schildklier grote omhoog naar de kaken naar rechts halsader een blootnd trachea. </li><li> Plaats piepschuim bord met de muis onder de dissectie microscoop met de focus vliegtuig al op zijn plaats en het objectief op ongeveer 0,8 x vergroting (totale vergroting [lens x oculair] is ongeveer 8x. </li><li> Voorzichtig microdissect het recht halsader door het verwijderen van de omliggende bindweefsel met chirurgische pincet. </li><li> Plaats twee stukken hechtdraad bovenop de rechter halsader. Bind de hechting dichtst bij de onderkaak af te sluiten bloedstroom in de ader met een kleine trickle plaatst de hechtdraad die aan het borstbeen / borstbeen dichtst bij een losse knoop rond de ader. Men kan de kleine straaltje bloed gebruikt om het gat later te vinden in de ader dient dit nodig. </li><li> Adem en ontspannen (draai de spieren in de nek en kaak) om uw ogen op de ader door het oculair. Dit zal ervoor zorgen dat uw handen en vingers stevig zal bewegen, soepel en ontspannen. Terwijl de ader met forceps aan de zijde het dichtst bijde kaken, een gat in de ader tussen de twee hechtingen met behulp van micro-schaar die door de andere hand. Leg de micro-schaar, en het houden van die hand ontspannen, te voelen voor de katheter. Voorzichtig ophalen van de katheter vast te houden tussen duim en wijsvinger (figuur 3). Breng de katheter in de opening van de ader. </li><li> Voorzichtig de katheter in de rechter hart (figuur 3). Let op de markeringen op de katheter, dat een geschatte index van hoe ver de katheter moet worden ingebracht te geven en zich aan de monitor. Zodra de druk curven worden weergegeven voorzichtig haal de onderste hechting rond de katheter. Omdat de katheter heeft treksterkte, dat geeft het een spoel, en omdat de ademhaling en hartslag van de muis toe te voegen beweging, bovendien brengt de katheter met tape. </li><li> Record drukmetingen gedurende 2 minuten later analyse (Figuur 4). </li><li> Open het hechtingsvasthoudelement de katheter vervolgens voorzichtig Retrieve catheter. Veeg het gedeelte achter de drukopnemer, terug te plaatsen in het bekerglas met water. Raak de drukopnemer. </li><li> Breng de muis bovenop het tissuepapier gebied A om euthanasie, de verzameling van bloed en miltweefsel. Reinig chirurgische instrumenten. </li><li> Start de procedure met de volgende dier. Als de timing toelaat, injecteer de verdoving tijdens het wachten op de druk curve (2.15) op te nemen. </li></ol> 3. Inzameling van bloed en milt monsters <ol><li> Injecteer barbituraat oplossing, 400 ul per muis en wacht 1-2 minuten. Dit wordt routinematig uitgevoerd in ons laboratorium om de mogelijkheid dat de muizen onbedoeld herstellen Avertin-anesthesie tijdens uitgebloed voorkomen. Geschikte normalisatie van het experiment wordt verkregen door injectie dezelfde dosis barbituraat oplossing per muis, en door te wachten dezelfde hoeveelheid tijd voor de oogst van bloed. Indien toegestaan ​​door de Institutional Animal Care en gebruik Comite enZolang de dieren zorgvuldig gecontroleerd op de diepte van de anesthesie vóór leegbloeden, kan deze stap worden weggelaten. </li><li> Maak incisie in de buik. Open de caudale ader (vena cava) en het verzamelen van bloed met behulp van een overdracht pipet. </li><li> Verwijder de milt, of een stuk van de milt in de Eppendorf buis en snap bevriezen in vloeibare stikstof of in de plaat met 24 putjes in een putje met Hanks buffer voor later bereiding van enkelvoudige cellen. </li><li> Breng de muis bovenop het tissuepapier werk-gebied C voor het verzamelen van BAL, long drainerende lymfeklier, long-en hartweefsel. Reinig chirurgische instrumenten. </li></ol> 4. Het verzamelen van longen en het hart Monsters <ol><li> Prepareer de luchtpijp vrij van spier-en bindweefsel. Het plaatsen van een tang onder de luchtpijp, trek hechtdraad door. Voorzichtig het genereren van voldoende stretch om een ​​gat te snijden. Het handhaven van de zachte stretch, plaatst u de tracheale canule met een licht draaiende beweging, en hechtdraad canule into plaats. Voor het inbrengen van de tracheale canule, ervoor zorgen dat de trachea vochtig is, eventueel een druppeltje Hanks oplossing. Tijdens de gehele procedure, ademen, ontspannen nek-en kaakspieren, om handbewegingen veilig en glad. </li><li> Prepareer opent de ribbenkast door zorgvuldig verwijderen van het borstbeen vanaf de buik einde. Niet storen de inhoud van de thorax, want dit maakt het zeer moeilijk om de lymfeklier te vinden. </li><li> Voer bronchoalveolaire lavage (BAL) door voorzichtig 1 ml van Hanks buffer, draai de spuit en ophalen BAS vloeistof. Herhaal dit 3 keer, in de buurt buis en plaats op ijs. Gedurende de procedure houdt ogen op het einde van de tracheale canule die is verbonden met de spuit. Blik op thorax aan de inflatie en deflatie van de longen te observeren. </li><li> Oogst long lymfeklier door te oordelen ribbenkast muur met een set van een tang, het vinden en ophalen van de lymfeklier met een andere tang. Plaats lymfeklier in 24 wells plaat. Het is belangrijk knu waar te zoeken: vanaf de nek, de ingang van de ribbenkast te vinden vanaf de rechterkant van de muis en kijk boven de wervelkolom (figuur 5). </li><li> Oogst hart en leg ze op vloeipapier. Isoleer de rechter hart door zorgvuldig ontleden langs het septum. Transfer naar het werk-gebied A te wegen, nemen het gewicht en de plaats in Eppendorf-buisjes te bevriezen breken in vloeibare stikstof. </li><li> Plaats hechtdraad rond de linker long kwab aan de hoofdbronchus sluiten. Ontleden de linker long kwab vrij plaats in Eppendorf buis en snap bevriezen in vloeibare stikstof of plaats in een putje van een 24 wells plaat met Hanks oplossing voor later isolatie van enkel-celsuspensies. </li><li> Plaats ca. 0,5 ml gebufferde formaldehyde oplossing door de trachea canule in de resterende longkwabben. Na de inflatie, ontleden de longkwabben uit de thorax en de plaats in 50 ml buis met formaldehyde-oplossing. Voor een alternatieve studie ontwerp kan de longen worden opgeblazen met optimal snijden media (LGO, verdund 1:4 met PBS) en bevroren in een mal met onverdund LGO voor latere bereiding van bevroren secties. Een andere opzet van het onderzoek kunnen leiden tot het verkrijgen van snap bevroren longweefsel en single cell suspensies uit de longen. In dat geval is geen inflatie nodig: ontleden de resterende longkwabben; daaruit op de thorax en plaats in de plaat met 24 putjes in een putje met Hanks buffer. </li><li> Verwijder tracheacanule, schoon door spoelen met Hanks buffer, schoon chirurgische instrumenten. </li></ol> 5. Analyse van de druk Curves gegenereerd uit de Right Heart Catheter De opgenomen rechter ventrikel druk gegevens worden geanalyseerd met behulp van LabChart 7 software zonder kennis van de groepsidentiteit van iedere opname. Meer dan 20 bochten willekeurig geselecteerd en het verschil tussen maximale en minimale ventriculaire druk voor elk curve gemeten (AP). De gemiddelde AP wordt berekend om de juiste ventricular systolische druk.

<ol><li>Price, L. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Inflammation+in+pulmonary+arterial+hypertension%5BTitle%5D)+AND+%22Chest%22%5BJournal%5D)">Inflammation in pulmonary arterial hypertension.</a> Chest. 141, 210-221 (2012).</li>
<li>Olschewski, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cellular+pathophysiology+and+therapy+of+pulmonary+hypertension%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Lab.+Clin.+Med%22%5BJournal%5D)">Cellular pathophysiology and therapy of pulmonary hypertension.</a> J. Lab. Clin. Med. 138, 367-377 (2001).</li>
<li>Hassoun, P. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Inflammation%2C+growth+factors%2C+and+pulmonary+vascular+remodeling%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Am.+Coll.+Cardiol%22%5BJournal%5D)">Inflammation, growth factors, and pulmonary vascular remodeling.</a> J. Am. Coll. Cardiol. 54, S10-S19 (2009).</li>
<li>Rabinovitch, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Molecular+pathogenesis+of+pulmonary+arterial+hypertension%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Clin.+Invest%22%5BJournal%5D)">Molecular pathogenesis of pulmonary arterial hypertension.</a> J. Clin. Invest. 118, 2372-2379 (2008).</li>
<li>Steudel, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Sustained+pulmonary+hypertension+and+right+ventricular+hypertrophy+after+chronic+hypoxia+in+mice+with+congenital+deficiency+of+nitric+oxide+synthase+3%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Clin.+Invest%22%5BJournal%5D)">Sustained pulmonary hypertension and right ventricular hypertrophy after chronic hypoxia in mice with congenital deficiency of nitric oxide synthase 3.</a> J. Clin. Invest. 101, 2468-2477 (1998).</li>
<li>Zaidi, S. H., You, X. M., Ciura, S., Husain, M., Rabinovitch, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Overexpression+of+the+serine+elastase+inhibitor+elafin+protects+transgenic+mice+from+hypoxic+pulmonary+hypertension%5BTitle%5D)+AND+%22Circulation%22%5BJournal%5D)">Overexpression of the serine elastase inhibitor elafin protects transgenic mice from hypoxic pulmonary hypertension.</a> Circulation. 105, 516-521 (2002).</li>
<li>Guignabert, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tie2-mediated+loss+of+peroxisome+proliferator-activated+receptor-gamma+in+mice+causes+PDGF+receptor-beta-dependent+pulmonary+arterial+muscularization%5BTitle%5D)+AND+%22Am.+J.+Physiol.+Lung+Cell+Mol.+Physiol%22%5BJournal%5D)">Tie2-mediated loss of peroxisome proliferator-activated receptor-gamma in mice causes PDGF receptor-beta-dependent pulmonary arterial muscularization.</a> Am. J. Physiol. Lung Cell Mol. Physiol. 297, L1082-L1090 (2009).</li>
<li>West, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pulmonary+hypertension+in+transgenic+mice+expressing+a+dominant-negative+BMPRII+gene+in+smooth+muscle%5BTitle%5D)+AND+%22Circ.+Res%22%5BJournal%5D)">Pulmonary hypertension in transgenic mice expressing a dominant-negative BMPRII gene in smooth muscle.</a> Circ. Res. 94, 1109-1114 (2004).</li>
<li>Cook, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Increased+eNO+and+pulmonary+iNOS+expression+in+eNOS+null+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Eur.+Respir.+J%22%5BJournal%5D)">Increased eNO and pulmonary iNOS expression in eNOS null mice.</a> Eur. Respir. J. 21, 770-773 (2003).</li>
<li>West, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mice+expressing+BMPR2R899X+transgene+in+smooth+muscle+develop+pulmonary+vascular+lesions%5BTitle%5D)+AND+%22Am.+J.+Physiol.+Lung+Cell+Mol.+Physiol%22%5BJournal%5D)">Mice expressing BMPR2R899X transgene in smooth muscle develop pulmonary vascular lesions.</a> Am. J. Physiol. Lung Cell Mol. Physiol. 295, L744-L755 (2008).</li>
<li>Tu, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Autocrine+fibroblast+growth+factor-2+signaling+contributes+to+altered+endothelial+phenotype+in+pulmonary+hypertension%5BTitle%5D)+AND+%22Am.+J.+Respir.+Cell+Mol.+Biol%22%5BJournal%5D)">Autocrine fibroblast growth factor-2 signaling contributes to altered endothelial phenotype in pulmonary hypertension.</a> Am. J. Respir. Cell Mol. Biol. 45, 311-322 (2011).</li>
<li>Daley, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pulmonary+arterial+remodeling+induced+by+a+Th2+immune+response%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Exp.+Med%22%5BJournal%5D)">Pulmonary arterial remodeling induced by a Th2 immune response.</a> J. Exp. Med. 205, 361-372 (2008).</li>
<li>Song, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Inflammation%2C+endothelial+injury%2C+and+persistent+pulmonary+hypertension+in+heterozygous+BMPR2-mutant+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Am.+J.+Physiol.+Heart+Circ.+Physiol%22%5BJournal%5D)">Inflammation, endothelial injury, and persistent pulmonary hypertension in heterozygous BMPR2-mutant mice.</a> Am. J. Physiol. Heart Circ. Physiol. 295, 677-690 (2008).</li>
<li>Thibault, H. B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Noninvasive+assessment+of+murine+pulmonary+arterial+pressure%3A+validation+and+application+to+models+of+pulmonary+hypertension%5BTitle%5D)+AND+%22Circulation.+Cardiovascular+imaging%22%5BJournal%5D)">Noninvasive assessment of murine pulmonary arterial pressure: validation and application to models of pulmonary hypertension.</a> Circulation. Cardiovascular imaging. 3, 157-163 (2010).</li>
<li>Otto, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pulmonary+hypertension+and+right+heart+failure+in+pituitary+adenylate+cyclase-activating+polypeptide+type+I+receptor-deficient+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Circulation%22%5BJournal%5D)">Pulmonary hypertension and right heart failure in pituitary adenylate cyclase-activating polypeptide type I receptor-deficient mice.</a> Circulation. 110, 3245-3251 (2004).</li>
<li>Burton, V. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Attenuation+of+leukocyte+recruitment+via+CXCR1%2F2+inhibition+stops+the+progression+of+PAH+in+mice+with+genetic+ablation+of+endothelial+BMPR-II%5BTitle%5D)+AND+%22Blood%22%5BJournal%5D)">Attenuation of leukocyte recruitment via CXCR1/2 inhibition stops the progression of PAH in mice with genetic ablation of endothelial BMPR-II.</a> Blood. 118, 4750-4758 (2011).</li>
<li>Fujita, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pulmonary+hypertension+in+TNF-alpha-overexpressing+mice+is+associated+with+decreased+VEGF+gene+expression%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Appl.+Physiol%22%5BJournal%5D)">Pulmonary hypertension in TNF-alpha-overexpressing mice is associated with decreased VEGF gene expression.</a> J. Appl. Physiol. 93, 2162-2170 (2002).</li>
<li>Motley, H. L., Cournand, A., Werko, L., Himmelstein, A., Dresdale, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+Influence+of+Short+Periods+of+Induced+Acute+Anoxia+Upon+Pulmonary+Artery+Pressures+in+Man%5BTitle%5D)+AND+%22Am.+J.+Physiol%22%5BJournal%5D)">The Influence of Short Periods of Induced Acute Anoxia Upon Pulmonary Artery Pressures in Man.</a> Am. J. Physiol. 150, 315-320 (1947).</li>
<li>Liljestrand, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Regulation+of+Pulmonary+Arterial+Blood+Pressure%5BTitle%5D)+AND+%22Arch.+Intern.+Med%22%5BJournal%5D)">Regulation of Pulmonary Arterial Blood Pressure.</a> Arch. Intern. Med. 81, 162-172 (1948).</li>
<li>Euler, U. S. V., Liljestrand, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Observations+on+the+pulmonary+arterial+blood+pressure+in+the+cat%5BTitle%5D)+AND+%22Acta+Physiol.+Scand%22%5BJournal%5D)">Observations on the pulmonary arterial blood pressure in the cat.</a> Acta Physiol. Scand. 12, 301-320 (1946).</li>
<li>Van den Broeck, W., Derore, A., Simoens, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Anatomy+and+nomenclature+of+murine+lymph+nodes%3A+Descriptive+study+and+nomenclatory+standardization+in+BALB%2FcAnNCrl+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+immunological%22%5BJournal%5D)">Anatomy and nomenclature of murine lymph nodes: Descriptive study and nomenclatory standardization in BALB/cAnNCrl mice.</a> Journal of immunological. 312, 12-19 (2006).</li>
<li>Rabinovitch, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Angiotensin+II+prevents+hypoxic+pulmonary+hypertension+and+vascular+changes+in+rat%5BTitle%5D)+AND+%22Am.+J.+Physiol%22%5BJournal%5D)">Angiotensin II prevents hypoxic pulmonary hypertension and vascular changes in rat.</a> Am. J. Physiol. 254, 500-508 (1988).</li>
<li>Rabinovitch, M., Gamble, W., Nadas, A. S., Miettinen, O. S., Reid, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Rat+pulmonary+circulation+after+chronic+hypoxia%3A+hemodynamic+and+structural+features%5BTitle%5D)+AND+%22Am.+J.+Physiol%22%5BJournal%5D)">Rat pulmonary circulation after chronic hypoxia: hemodynamic and structural features.</a> Am. J. Physiol. 236, 818-827 (1979).</li>
<li>Rabinovitch, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Changes+in+pulmonary+blood+flow+affect+vascular+response+to+chronic+hypoxia+in+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Circ.+Res%22%5BJournal%5D)">Changes in pulmonary blood flow affect vascular response to chronic hypoxia in rats.</a> Circ. Res. 52, 432-441 (1983).</li>
<li>Kugathasan, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+angiopietin-1-Tie2+pathway+prevents+rather+than+promotes+pulmonary+arterial+hypertension+in+transgenic+mice%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Exp.+Med%22%5BJournal%5D)">The angiopietin-1-Tie2 pathway prevents rather than promotes pulmonary arterial hypertension in transgenic mice.</a> J. Exp. Med. 206, 2221-2234 (2009).</li>
<li>Bearer, C., Emerson, R. K., ORiordan, M. A., Roitman, E., Shackleton, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Maternal+tobacco+smoke+exposure+and+persistent+pulmonary+hypertension+of+the+newborn%5BTitle%5D)+AND+%22Environ.+Health+Persp%22%5BJournal%5D)">Maternal tobacco smoke exposure and persistent pulmonary hypertension of the newborn.</a> Environ. Health Persp. , 105-202 (1997).</li>
<li>Graham, B. B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Schistosomiasis-induced+experimental+pulmonary+hypertension%3A+role+of+interleukin-13+signaling%5BTitle%5D)+AND+%22Am.+J.+Pathol%22%5BJournal%5D)">Schistosomiasis-induced experimental pulmonary hypertension: role of interleukin-13 signaling.</a> Am. J. Pathol. 177, 1549-1561 (2010).</li>
<li>Butrous, G., Ghofrani, H. A., Grimminger, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pulmonary+vascular+disease+in+the+developing+world%5BTitle%5D)+AND+%22Circulation%22%5BJournal%5D)">Pulmonary vascular disease in the developing world.</a> Circulation. 118, 1758-1766 (2008).</li>
<li>Crosby, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Praziquantel+reverses+pulmonary+hypertension+and+vascular+remodeling+in+murine+schistosomiasis%5BTitle%5D)+AND+%22Am.+J.+Respir.+Crit.+Care+Med%22%5BJournal%5D)">Praziquantel reverses pulmonary hypertension and vascular remodeling in murine schistosomiasis.</a> Am. J. Respir. Crit. Care Med. 184, 467-473 (2011).</li>
</ol>

Geen belangenconflicten verklaard.

De experimentele stroom hier beschreven zorgt voor een snelle en gelijktijdige meting van systolische rechterventriculaire druk en oogsten van monsters voor analyse van de reacties in de longen, het hart en het immuunsysteem in muizen. De procedure combineert hart fysiologie metingen, micro-dissectie en de daaropvolgende weefsel oogst voor levende cellen onderzoeken is een histologische analyse, of omics-analyse van de weefsels. De hele procedure duurt minder dan 20 minuten per muis. Door het werk-gebied georganiseerde ...

<table border="1"><tbody><tr><td> Naam </td><td> Vennootschap </td><td> Catalogusnummer </td><td> Opmerkingen (optioneel) </td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td> Reagentia </td></tr><tr><td> 2-Methyl-2-butanol </td><td> Sigma-Aldrich </td><td> 152463 </td><td></td></tr><tr><td> 2,2,2-tribroomethanol </td><td> Sigma-Aldrich </td><td> T48402 </td><td></td></tr><tr><td> desinfecterende zeep (Dekking Spray TB plus Steris) </td><td> Fisher Scientific </td><td> 1629-08 </td><td></td></tr><tr><td> Ethyl Alcohol, 200 Proof, Absolute, Watervrij ACS / USP Grade </td><td> PHARMCO-AAPER </td><td> 111000200 </td><td> Verdunnen tot 70% met gedestilleerd water </td></tr><tr><td> Formaldehydeoplossing </td><td> Sigma-Aldrich </td><td> F1635-500ML </td><td> Verdunnen tot een 7-10% formaldehyde concentratie op een PBS concentratie van 1x gebruik van PBS voorraad-oplossing en water </td></tr><tr><td> Hanks oplossing, geen calcium, magnesium </td><td> Fisher Scientific </td><td> 21-022-CV </td><td></td></tr><tr><td> Oktober </td><td> Tissue-Tek </td><td> 4583 </td><td></td></tr><tr><td> Penicilline (10.000 U / ml) / streptomycine (10.000 mg / ml) oplossing </td><td> Thermo Scientific </td><td> SV30010 </td><td></td></tr><tr><td> Fosfaat gebufferde zoutoplossing (PBS), geen calcium, magnesium no, 1x en 10x oplossingen </td><td> Fisher Scientific </td><td></td><td></td></tr><tr><td> Natriumpentobarbital 26% </td><td> Fort Dodge Animal Health </td><td> NDC 0856-0471-01 </td><td></td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td> Labware </td></tr><tr><td> Platen 12, 24, 96 well </td><td> Valk </td><td></td><td></td></tr&gt; <tr><td> Transfer Pipet </td><td> Fisher Scientific </td><td> 13-711-9BM </td><td></td></tr><tr><td> Tube, EDTA gecoat </td><td> Sarstedt </td><td> 2,013-08 </td><td></td></tr><tr><td> Buizen 0,65 ml en 1,7 ml micro-centrifuge </td><td> VWR </td><td></td><td></td></tr><tr><td> Buizen 12 x 75 mm polypropyleen </td><td> Fisher Scientific </td><td> 14-956-1D </td><td></td></tr><tr><td> Buizen, diverse maten, polypropyleen </td><td> Fisher Scientific </td><td></td><td></td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td> Instrumenten </td></tr><tr><td> Tang, Dumon # 5 Fine </td><td> Fine Science Tools </td><td> 11.254-20 </td><td></td></tr><tr><td> Tang, extra fijne Graefe-0.5mm tips gebogen </td><td> Fine Science Tools </td><td> 11.152-10 </td><td></td></tr><tr><td> Tang, extra fine Graefe-0.5mm tips rechtstreeks </td><td> Fine Science Tools </td><td> 11.150-10 </td><td></td></tr><tr><td> Canule 18ga, 19 ga </td><td> BD </td><td> Precisie Glide Naalden </td><td> Gesneden optimale lengte, afgestompt en buiten geraspte op een grove buiten oppervlak te creëren </td></tr><tr><td> Schaar, Dissector schaar-slim bladen 9cm </td><td> Fine Science Tools </td><td> 14.081-09 </td><td></td></tr><tr><td> Hechtdraad voor BAL, gevlochten zijden hechtdraad, 4-0 </td><td> Fine Science Tools </td><td> SP116 </td><td></td></tr><tr><td> Hechtdraad voor rechts hartkatheterisatie, gevlochten zijden hechtdraad, 6-0 </td><td> Teleflex Medical </td><td> 18.020-60 </td><td></td></tr><tr><td> Spuit, 1 ml </td><td> BD </td><td> 309659 </td><td></td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td> Uitrusting </td></tr><tr><td> Versterker, PowerLab 4/30 </td&gt; <td> ADInstrument </td><td> Model ML866 </td><td></td></tr><tr><td> Catheter, druk F1.4 </td><td> Millar Instruments, Inc </td><td> 840-6719 </td><td></td></tr><tr><td> Dissectiemicroscoop </td><td> Variscope </td><td></td><td></td></tr><tr><td> Pincet, Vannas lente schaar-2mm bladen </td><td> Fine Science Tools </td><td> 15.000-00 </td><td></td></tr><tr><td> Halogeen Verlichte Desk Vergrootglas </td><td> Fisher Scientific </td><td> 11-990-56 </td><td></td></tr><tr><td> Laptop computer </td><td> Asus </td><td> Modelnummer A52F i5-processor, 15 inch </td><td></td></tr><tr><td> Lichtbron </td><td> Amscope </td><td> HL-250-A </td><td></td></tr><tr><td> Pressure Control Unit </td><td> Millar Instruments, Inc </td><td> PCU-2000 </td><td></td></tr><tr><td> Software, Labchart-Pro V.7 </td><td> AD Instrumenten </td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

rechter ventrikel systolische druk metingen in combinatie met harvest van lung en immune weefselmonsters in muizen

Right Ventricular Systolic Pressure Measurements in Combination with Harvest of Lung and Immune Tissue Samples in Mice

De functie van de rechter hart is om bloed rond te pompen door de longen, waardoor het koppelen van rechter hart fysiologie en pulmonaire vasculaire fysiologie. Ontsteking is een gemeenschappelijke modifier van hart en longfunctie, door de uitwerking van cellulaire infiltratie, de productie van cytokines en groeifactoren, en door te remodeling processen 1. Vergeleken met de linker ventrikel, rechter ventrikel het een lage druk pomp die werkt in een relatief smalle zone van drukveranderingen. Verhoogde pulmonale arteriële bloeddruk gepaard gaan met hogere druk in de long vaatbed en pulmonale hypertensie 2. Pulmonale hypertensie wordt vaak geassocieerd met inflammatoire longziekten, zoals chronische obstructieve longziekte, of auto-immuunziekten 3. Omdat pulmonale hypertensie geeft een slechte prognose voor de kwaliteit van leven en de levensverwachting, is veel onderzoek gericht op het begrijpen van de mechanismen die might doelwit zijn van farmaceutische interventie 4. De voornaamste uitdaging voor de ontwikkeling van effectieve beheersinstrumenten voor pulmonale hypertensie blijft de complexiteit van de gelijktijdige begrip van moleculaire en cellulaire veranderingen in het rechter hart, de longen en het immuunsysteem. Hier geven we een procedurele workflow voor snelle en nauwkeurige meting van drukveranderingen in het rechter hart van muizen en de gelijktijdige oogst van monsters van hart, longen en immune weefsels. De methode is gebaseerd op de directe catheterisatie van de rechter ventrikel via de halsader in close-chested muizen eerst ontwikkeld in de late jaren 1990 als surrogaat maat voor de druk in de longslagader 5-13. De georganiseerde team-aanpak vergemakkelijkt een zeer snelle recht hartkatheterisatie techniek. Dit maakt het mogelijk de metingen uit te voeren in muizen die spontaan ademen kamerlucht. De organisatie van de work-flow in verschillende werk-gebiedenvermindert de vertraging en opent de mogelijkheid om gelijktijdig uit te voeren fysiologie experimenten en oogst immuunsysteem, hart en longen. De workflow hier geschetste procedure kan worden aangepast voor een groot aantal laboratoriumsituatie en studie ontwerpen van kleine, gerichte experimenten om grote drugtesten. De gelijktijdige aankoop van hartfysiologie gegevens die kunnen worden uitgebreid tot echocardiografie 5,14-17 en oogst van hart-, long-en immuunsysteem weefsels bevatten vermindert het aantal dieren dat nodig is om de gegevens die de wetenschappelijke kennisbasis vooruit te krijgen. De procedurele workflow hier gepresenteerde biedt ook een ideale basis voor het verwerven van kennis van de netwerken die immuun-, long-en hartfunctie te koppelen. Dezelfde principes hier beschreven kan worden aangepast aan andere of aanvullende organen bestuderen nodig.

Het primaire resultaat voor het verkrijgen van goede hart drukcurven wordt bereikt door de juiste positie van het rechter hart katheter. De vorm van de druk tijdcurve is kritiek omdat de juiste plaatsing van de katheter in de rechter ventrikel leidt tot druk plateaus (figuur 4). Spiky curves daarentegen blijkt een katheter die wordt bewogen door de ademhaling of hartslag beweging tegen de wand van de rechter hartkamer. Teneinde mogelijke problemen met de fase van overleving van de dieren, de standaardaf...

Een specifieke en snelle protocol tegelijkertijd onderzoeken juiste hartfunctie, longontsteking en de immuunrespons wordt beschreven als leermiddel. Video en cijfers beschrijven fysiologie en microdissectie technieken in een georganiseerd team-aanpak die aanpasbaar is om te worden gebruikt voor kleine tot grote studies.

Rechter ventrikel systolische druk Metingen in combinatie met Harvest van Lung en Immune weefselmonsters in Muizen

The function of the right heart is to pump blood through the lungs, thus linking right heart physiology and pulmonary vascular physiology. Inflammation is ...

right-ventricular-systolic-pressure-measurements-combination-with

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Immunologie en Infectie

Het volgende protocol schetst het proces van isoleren, ventileren en instrumenteren muis longen stabiel of pulsatiele pulmonale vasculaire druk-flow relaties maatregel om de effecten van de bloedstroom, luchtstroom, luchtweg veranderingen en vasculaire veranderingen op rechter ventrikel afterload kwantificeren.

Karakterisering van de geïsoleerde, geventileerde en Instrumented Mouse Lung geperfuseerd met pulsatiele flow

Het meten van linker ventrikel druk (LV) in embryonale en neonatale muizen wordt beschreven. De druk wordt gemeten door het inbrengen van een naald is aangesloten op een met vloeistof gevulde transducer in de LV onder echografische begeleiding. Er moet worden normaal hartfunctie handhaven tijdens de experimentele protocol.

Het meten van linker ventrikel druk in de late embryonale en neonatale muizen

Dit artikel geeft een protocol voor de echocardiografische evaluatie van rechter ventriculaire omvang en pulmonale hypertensie bij muizen. Toepassingen zijn onder andere fenotype vastberadenheid en seriële beoordeling in transgene en toxine-geïnduceerde muismodellen van cardiomyopathie en pulmonale vasculaire ziekte.

Echocardiografische Beoordeling van de rechter hart in Muizen

Rechterventrikel (RV) disfunctie is cruciaal voor het ontstaan ​​van hart-en vaatziekten, maar beperkt voorhanden zijn voor de evaluatie ervan. Recente ontwikkelingen in de echografie zorgen voor een niet-invasieve en accurate optie voor longitudinale RV studie. Hierin hebben we een stap-voor-stap echocardiografische onder toepassing van een muizenmodel van drukoverbelasting detail.

Beoordeling van de rechter ventrikel structuur en functie in een muismodel van longslagader Vernauwing door Transthoracale Echocardiografie

Dit manuscript beschrijft een gedetailleerd protocol voor het verzamelen van de druk-volume data van de muis.

Het meten van druk Volume Loops in de muis

Dit protocol beschrijft de inductie van pulmonale hypertensie (PH) bij muizen op basis van de blootstelling aan hypoxie en de injectie van een VEGF receptor antagonist. De dieren ontwikkelen PH en rechts ventriculaire (RV) hypertrofie 3 weken na de inleiding van het protocol. De functionele en morfometrische karakterisering van het model wordt ook gepresenteerd.

Inductie en karakterisering van pulmonale hypertensie bij muizen met behulp van het Hypoxia/SU5416-model

Hier bieden we een nuttige aanpak voor het bestuderen van het mechanisme van rechter ventriculaire mislukking. Een handiger en efficiënter aanpak van de longslagader vernauwing wordt vastgesteld met behulp van chirurgische instrumenten gemaakt inhouse. Bovendien worden methoden voor het evalueren van de kwaliteit van deze aanpak door echocardiografie en catheterisatie geleverd.

Inductie van rechter ventrikel falen door longslagader vernauwing en evaluatie van rechter ventriculaire functie bij muizen

Hier presenteren we een protocol voor het uitvoeren van een invasieve hemodynamische beoordeling van de rechter ventrikel en longslagader bij muizen met behulp van een open-borstchirurgie aanpak.

Invasieve hemodynamische beoordeling voor het rechter ventrikel systeem en hypoxie-geïnduceerde pulmonale arteriële hypertensie bij muizen

Hier wordt een protocol gepresenteerd om de biventriculaire hartfunctie bij muizen te beoordelen door druk-volume (PV)-lussen te genereren van de rechter- en linkerventrikel in hetzelfde dier met behulp van gesloten thorakatheterisatie. De focus ligt op het technische aspect van chirurgie en data-acquisitie.

Biventriculaire beoordeling van hartfunctie en druk-volumelussen door katheterisatie met gesloten borstkas bij muizen

Hier beschrijven we een cardiale druk-volume lusanalyse onder toenemende doses intraveneus geïnfundeerd isoproterenol om de intrinsieke hartfunctie en de β-adrenerge reserve bij muizen te bepalen. We gebruiken een aangepaste open-borstbenadering voor de druk-volume lusmetingen, waarbij we ventilatie met positieve eind-expiratoire druk opnemen.

Cardiale respons op β-adrenerge stimulatie bepaald door druk-volume lusanalyse

We beschrijven een muizenmodel van overbelasting van de rechterventrikeldruk geïnduceerd door pulmonale rompbanden. Gedetailleerde protocollen voor intubatie, chirurgie en fenotypering door middel van echocardiografie zijn opgenomen in de paper. Op maat gemaakte instrumenten worden gebruikt voor intubatie en chirurgie, waardoor het model snel en goedkoop kan worden gereproduceerd.

Een muizenmodel van door drukoverbelasting geïnduceerde rechterventrikelhypertrofie en falen door pulmonale rompbanden

Leer een snel protocol voor het meten van rechterventrikelfunctie en longontsteking bij muizen. Deze methode combineert fysiologische beoordeling met microdissectie voor cardiovasculair en immunologisch onderzoek.

Rechter ventrikel systolische druk Metingen in combinatie met Harvest van Lung en Immune weefselmonsters in Muizen

Meer video's verkennen