Name: Gecontroleerde Cervicale Laceration Letsel in Muizen (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2013-05-09T13:00:00.000+00:00
Duration: 7 min 28 s
Description: Leer een gecontroleerde cervicale laceratiemethode voor ruggenmergletselonderzoek bij muizen met behulp van een oscillatieblad en stabilisatieapparaat. Deze techniek verbetert de reproduceerbaarheid en precisie van experimentele modellen.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

De ontwikkeling van dit apparaat werd ondersteund door LISA Co, Louisville, Kentucky. Wij erkennen ook de voortdurende steun van Norton Healthcare, Louisville, KY naar CBS, en NIH NS050243, NS052290 en NS059622 te XMX.

1. Animal Voorbereiding en toepassing van de Spine Stabilizer De muis cervicale wervelkolom concaaf ventraal gezien vanaf de laterale. De doornuitsteeksels C3 tot T1 zijn klein en bros en derhalve niet geschikt voor vertebrale stabilisatie zoals algemeen beschreven 3,4. Wij raden wervelkolom stabilisatie worden uitgevoerd door laterale facet fixatie. De fixatie inrichting bestaat uit een U-vormig metalen kanaal naar de muis en twee verstelbare RVS armen die zijdelings klemmen elk facet ondersteunen. Hier vandaan immobilisatie van het doel wervel. Na spinale fixatie wordt de wervelkolom licht verhoogd om de cervicale wervelkolom kromming plat betere blootstelling van het ruggenmerg verschaffen. <ol><li> Steriliseren de volgende chirurgische instrumenten: 2-3 paren van tangen, 2 paar microscissors, een 30 G naald, hechtdraad en naald houder, huid clips en clip applicator. Ontsmet de wervelkolom stabilisator. Anesthetize de muis met een intraperitoneale cocktail van ketamine / xylazine (100 mg / 10 mg / kg). Scheer de haren van de hals van de muis. </li><li> Na reiniging van de huid met een povidonjood-oplossing en 70% alcohol, beweeg de muis naar de operatietafel verwarmd met een verwarmingselement. Bedek de ogen van het dier met oogzalf om cornea drogen te voorkomen. </li><li> Na inductie van de anesthesie (bereikt wanneer de muis niet reageert op een staart knijpen), maak een posterieure cervicale middellijn incisie in de huid van de achterhoofdsknobbel tot de onderhuidse vet-pad van de lagere cervicale wervelkolom. Onder vergroting, het uitvoeren van een middellijn incisie tussen de trapezius spieren op C2 en splitsen de semispinalis capitis spieren. Identificatie van de submusculair vet pad vergemakkelijkt dissectie in de juiste laag. </li><li> Verleng de middellijn spier dissectie caudaal aan de T2 doornuitsteeksels proces dat als een betrouwbare landmark fungeert. Snijd de spieren aan de T2 wervel en verwijder het kraakbeen gedeelte van de T2doornuitsteeksels proces. </li><li> Ontleden de paravertebrale spieren van de C2 via T2 laminae met een paar micro-schaar. Muscle dissectie begint naast de doornuitsteeksels en strekt bilateraal de facetgewrichten. Scheid de spieren direct naast de doornuitsteeksels en laminae (in de periostale laag) tot bloeding minimaliseren. Nadat de laterale vlakken blootgesteld, zet de muis in de U-vormige kanaal van de LISA fase. </li><li> Bevestig de RVS armen onder de blootgestelde facetten bilateraal. Zodra de armen zijn in de plaats, draai de duimschroeven van de stalen armen om de wervelkolom te immobiliseren. Deze onderhoudt stevige fixatie van de doelgroep wervel en zorgt voor een uitstekende belichting. De armen kunnen worden aangepast om nauwkeurige horizontale oriëntatie van de wervelkolom. </li><li> Incise het ligamentum flavum tussen C5 en C6 te bloot onderliggende dura. Tussen de interlaminaire ruimte, gebruik maken van een 30 G naald een kleine durotomie waardoor microscissors worden geplaatst om te creërenbreiden de durotomie. Het ruggenmerg is nu bereid om de gecontroleerde scheur laesie ondergaan. </li></ol> 2. Cervicale ruggenmerg Laceration Met de LISA-apparaat <ol><li> De breedte van het ruggenmerg uitbreiding varieert op verschillende niveaus. Maak een dorsale hemisectie laesie op C5-6 met een 2,3 mm platte en stel de amplitude van de trilling van de gehele breedte van het ruggenmerg te dekken. Bladen worden verkregen van Fine Science Tools Inc (Foster City, CA) en aangepast voor het ruggenmerg snijwonden. Handhaaf de amplitude van de oscillatie blad op ≥ 0,5 mm, aangezien lagere amplitude niveaus zal het gemak van scheuren koord verminderen. </li><li> Plaats de wervelkolom stabilisator en de muis op de LISA podium. Het blad is bevestigd aan de LISA haar positie gecontroleerd door micro-drivers kunnen drie bewegingsbereik. Onderdelen van de LISA en hun functies worden beschreven in figuur 1. </li><li> Macht het mes-vibrerende schakelaar aan. Onder magnificatie, beweeg de muis zodat de blootgestelde ruggenmerg rechtstreeks wordt gepositioneerd onder de vibrerende mes. </li><li> Verhoog het podium ondersteuning van de muis in de richting van de oscillerende mes. De &quot;0&quot;-stand wordt opgenomen wanneer het blad nauwelijks raakt de dorsale ader van het ruggenmerg. Meet de diepte van het ruggenmerg scheur ten opzichte van de &quot;0&quot; stand. </li><li> Verhoog het podium positie door micro-driver control: een 360 ° bocht van de micro-driver knop verheft het podium met 0,25 mm. Aldus wordt een 0,75 mm dorsale hemisectie laesie gecreëerd door de micro-driver knop 3 keer. De nauwkeurigheid van de laesie ± 0.01 mm. Als het blad begint het ruggenmerg verscheuren Smeer het chirurgische veld met irrigatie zoutoplossing. De snijdiepte van het ruggenmerg wordt door de verticale micro-driver en is onafhankelijk van visuele geleiding. </li><li> Zodra de vooraf bepaalde diepte is bereikt, zet de vibrerende schakelaar uit. Idealiter wordt de oscillerende mes gepositioneerd in het lEsion kloof zonder bewijs van weefsel vervorming. Verlaag het podium van het snijmes en verwijder het bloed en zout uit het chirurgische veld met behulp van katoen Q-tips. Hemostase spontaan in &lt;1 min. </li><li> Laat de muis van de wervelkolom stabilisator. Geschatte de paraspinale spieren met behulp 6-0 zijden hechtdraad en sluit de huid gewonden met RVS Michel clips. </li></ol> 3. Animal Care <ol><li> Subcutaan injecteren van een totaal van 1-2 ml zoutoplossing om een ​​adequate hydratatie te handhaven en plaats de muis in het herstel kooi op een verwarmingselement tijdje weer bij bewustzijn. </li><li> Zorg voor water en zacht voedsel ad lib en beheren pijnstillers voor 48 uur post-operatief. Er is geen noodzaak voor blaas zorg na dorsale hemisectie van het ruggenmerg. </li></ol>

<ol><li>Blackmore, M., Letourneau, P. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Changes+within+maturing+neurons+limit+axonal+regeneration+in+the+developing+spinal+cord%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Neurobiol%22%5BJournal%5D)">Changes within maturing neurons limit axonal regeneration in the developing spinal cord.</a> J. Neurobiol. 66 (4), 348(2006).</li>
<li>Blackmore, M. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Kruppel-like+Factor+7+engineered+for+transcriptional+activation+promotes+axon+regeneration+in+the+adult+corticospinal+tract%5BTitle%5D)+AND+%22Proc.+Natl.+Acad.+Sci+U.S.A%22%5BJournal%5D)">Kruppel-like Factor 7 engineered for transcriptional activation promotes axon regeneration in the adult corticospinal tract.</a> Proc. Natl. Acad. Sci U.S.A. 109 (19), 7517(2012).</li>
<li>Carbajal, K. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Surgical+transplantation+of+mouse+neural+stem+cells+into+the+spinal+cords+of+mice+infected+with+neurotropic+mouse+hepatitis+virus%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Vis.+Exp%22%5BJournal%5D)">Surgical transplantation of mouse neural stem cells into the spinal cords of mice infected with neurotropic mouse hepatitis virus.</a> J. Vis. Exp. (53), e2834(2011).</li>
<li>Duhamel, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mouse+lumbar+and+cervical+spinal+cord+blood+flow+measurements+by+arterial+spin+labeling%3A+sensitivity+optimization+and+first+application%5BTitle%5D)+AND+%22Magn.+Reson.+Med%22%5BJournal%5D)">Mouse lumbar and cervical spinal cord blood flow measurements by arterial spin labeling: sensitivity optimization and first application.</a> Magn. Reson. Med. 62 (2), 430(2009).</li>
<li>Hermanns, S., Reiprich, P., Muller, H. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+reliable+method+to+reduce+collagen+scar+formation+in+the+lesioned+rat+spinal+cord%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Neurosci.+Methods%22%5BJournal%5D)">A reliable method to reduce collagen scar formation in the lesioned rat spinal cord.</a> J. Neurosci. Methods. 110 (1-2), 141(2001).</li>
<li>Hill, R. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Anatomic+and+functional+outcomes+following+a+precise%2C+graded%2C+dorsal+laceration+spinal+cord+injury+in+C57BL%2F6+mice%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Neurotrauma%22%5BJournal%5D)">Anatomic and functional outcomes following a precise, graded, dorsal laceration spinal cord injury in C57BL/6 mice.</a> J. Neurotrauma. 26 (1), 1(2009).</li>
<li>Iannotti, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dural+repair+reduces+connective+tissue+scar+invasion+and+cystic+cavity+formation+after+acute+spinal+cord+laceration+injury+in+adult+rats%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Neurotrauma%22%5BJournal%5D)">Dural repair reduces connective tissue scar invasion and cystic cavity formation after acute spinal cord laceration injury in adult rats.</a> J. Neurotrauma. 23 (6), 853(2006).</li>
<li>Inman, D., Guth, L., Steward, O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Genetic+influences+on+secondary+degeneration+and+wound+healing+following+spinal+cord+injury+in+various+strains+of+mice%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Comp+Neurol%22%5BJournal%5D)">Genetic influences on secondary degeneration and wound healing following spinal cord injury in various strains of mice.</a> J. Comp Neurol. 451 (3), 225(2002).</li>
<li>Onifer, S. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Adult+rat+forelimb+dysfunction+after+dorsal+cervical+spinal+cord+injury%5BTitle%5D)+AND+%22Exp.+Neurol%22%5BJournal%5D)">Adult rat forelimb dysfunction after dorsal cervical spinal cord injury.</a> Exp. Neurol. 192 (1), 25(2005).</li>
<li>Ramer, M. S., Harper, G. P., Bradbury, E. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Progress+in+spinal+cord+research+-+a+refined+strategy+for+the+International+Spinal+Research+Trust%5BTitle%5D)+AND+%22Spinal+Cord%22%5BJournal%5D)">Progress in spinal cord research - a refined strategy for the International Spinal Research Trust.</a> Spinal Cord. 38 (8), 449(2000).</li>
<li>Seitz, A., Aglow, E., Heber-Katz, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Recovery+from+spinal+cord+injury%3A+a+new+transection+model+in+the+C57Bl%2F6+mouse%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Neurosci.+Res%22%5BJournal%5D)">Recovery from spinal cord injury: a new transection model in the C57Bl/6 mouse.</a> J. Neurosci. Res. 67 (3), 337(2002).</li>
<li>Sivasankaran, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((PKC+mediates+inhibitory+effects+of+myelin+and+chondroitin+sulfate+proteoglycans+on+axonal+regeneration%5BTitle%5D)+AND+%22Nat.+Neurosci%22%5BJournal%5D)">PKC mediates inhibitory effects of myelin and chondroitin sulfate proteoglycans on axonal regeneration.</a> Nat. Neurosci. 7 (3), 261(2004).</li>
<li>Yu, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Inhibitor+of+DNA+binding+2+promotes+sensory+axonal+growth+after+SCI%5BTitle%5D)+AND+%22Exp.+Neurol%22%5BJournal%5D)">Inhibitor of DNA binding 2 promotes sensory axonal growth after SCI.</a> Exp. Neurol. 231 (1), 38(2011).</li>
<li>Zhang, Y. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dural+closure%2C+cord+approximation%2C+and+clot+removal%3A+enhancement+of+tissue+sparing+in+a+novel+laceration+spinal+cord+injury+model%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Neurosurg%22%5BJournal%5D)">Dural closure, cord approximation, and clot removal: enhancement of tissue sparing in a novel laceration spinal cord injury model.</a> J. Neurosurg. 100, 343(2004).</li>
</ol>

<ol><li> Verschillende auteurs (YPZ, XMX, CBS) een financieel belang in de Louisville Impactor System, Inc </li><li> De auteurs, Yi Ping Zhang, Lisa BE Shields en Christopher B. Shields, zijn medewerkers van Norton Healthcare, Louisville, KY. Andere auteurs zijn in dienst van de Universiteit van Indiana, Indianapolis, IN. </li><li> De auteurs hebben geen financiering te ontvangen van elk bedrijf dat reagentia en instrumenten gebruikt in dit artikel te produceren. </li></ol>

Vertebrale stabilisatie vóór scheuren verwondingen aan het ruggenmerg werd verkregen door fixatie van de doornuitsteeksels. Zowel de cervicale wervelkolom lordotic curve en bevestiging van klemmen om de broze korte baarmoederhals doornuitsteeksels C3 tot T1 in de muis te voorkomen effectieve wervelkolom stabiliseren. Bovendien wordt het gebruik van een scheermesje of microscissors gebruikt onder handbediening weefsel veroorzaken aanzienlijke vervormingen die variabiliteit leidt in de diepte van de laesie 6. Dit kan leiden tot een verkeerde interpretatie van de gegevens in het bijzonder wanneer axonale regeneratie van specifieke studierichtingen wordt bestudeerd. Bijvoorbeeld kan gespaard dorsale corticospinal axons worden geïnterpreteerd als geregenereerde axonen als de dorsale corticospinal darmkanaal is niet helemaal doorgesneden bij de laesie. Deze problemen worden opgelost met een ruggengraat stabilisatieapparaat bevestigingsmateriaal om de facetten op een niveau en nauwkeurige laesie van het ruggemerg. Bovendien zou het gebruik ahoge frequentie oscillerend mes produceert een scherpe scheur zonder pletten of contusing de aangrenzende ruggenmerg. Deze werkwijze is gebruikt voor de productie ruggenmerg verwonding letsel bij ratten 9,12,14, met latere wijziging van thoracale ruggenmerg snijwonden produceren muizen 6. In deze mededeling, beschrijven we de methode van het creëren van betrouwbare cervicale letsels scheur in de muis. Voorzover de achterwaartse diameter van het ruggenmerg is &lt;2 mm in de muis, nauwkeurige diepte van de scheur laesie cruciaal zijn voor een betrouwbaar experimenteel model. Minimale variabiliteit in de laesie diepte zullen de resultaten van de experimenten beoordelen axonregeneratie evenals volumetrische en gedragsstudies aanzienlijk veranderen. De nauwkeurigheid van de laesiediepte deze methode is ± 0,01 mm omdat we gebruikten hoge precisie micro-stuurprogramma om de positie van het zaagblad te beheersen. Deze methode heeft de inconsistentie verminderdherent in andere modellen van het creëren van een scheur SCI. Deze werkwijze is bijzonder nuttig bij het bestuderen van axonale regeneratie van het ruggenmerg lange trajecten in de dorsale helft van het ruggenmerg, zoals de corticospinale tractus, de rubrospinale darmkanaal en de dorsale opgaande kanaal. Met deze methode kunnen deze vezelbanen volledig en betrouwbaar zijn doorgesneden. In dit opzicht zijn onjuiste interpretatie van gegevens geminimaliseerd, waardoor de betrouwbaarheid van de rapportage van experimenteel onderzoek van SCI. Samengevat hebben we een nieuwe techniek beschreven om een reproduceerbare maken in vivo model van ruggenmerg verwonding schade in de muis. Deze techniek is gebaseerd op de rug stabilisatie door fixatie van de cervicale facetten en scheuren van het ruggenmerg met een oscillerend mes. Met behulp van deze methode in een dorsale thoracale ruggenmerg rijwond model in muizen 6, hebben we aangetoond een strakke correlatie tussen de scheur diepte, histologie, engedrag herstel. Een dergelijke techniek is ook gevonden betrouwbaar door verscheidene andere laboratoria 2,12.

De beschikbaarheid van genetisch gemodificeerde muizen is een krachtig hulpmiddel om de effecten van bepaalde genen die een rol spelen bij de mechanismen van SCI identificeren. Laceration SCI is een belangrijk model gebruikt om therapeutische middelen of moleculen die een effectieve behandeling kan bieden na deze blessure 8 onderzoeken. Fixatie van de doornuitsteeksels tijdens het maken van de scheur letsel bij muizen is onnauwkeurig te wijten aan de moeilijkheden om de dunne en kwetsbare doornuitsteeksels betrokken bij het ​​handhaven van spinale fixatie 5,11. Variabiliteit in de diepte van de scheur van slechts 0,2 mm (10% van de diameter van de muis ruggenmerg) veroorzaakt misleidende interpretatie van gegevens. De aard en omvang van het ruggenmerg scheur laesie moet exact worden gedefinieerd 10. Om deze uitdaging aan te pakken, hebben we een nieuwe techniek die bestaat uit vertebrale stabilisatie ontwikkeld en gebruikt gefabriceerd bladen bevestigd aan de Louisville Injury System Apparatus (LISA) een scheur SCI 7,14 produceren. Deze blessure is gemaakt met behulp van een scherpe oscillerend mes dat weefsel vervorming vermeden tijdens de scheur proces. De diepte van de scheur was precies met een nauwkeurigheid van 0,01 mm met behulp van micro-drivers die de scheur diepte te controleren. Snijbladen zijn op maat gemaakt voor de specifieke vormen en breedtes om de gewenste scheur creëren contour 9. We demonstreren 1) de methode van cervicale wervelkolom blootstelling, 2) de techniek van het wervellichaam stabilisatie met behulp van een bilaterale facet fixatie-apparaat, en 3) het creëren van een cervicale scheur letsel met behulp van een vibrerende mes.

<table><tbody><tr><td>Mice vertebral stabilizer </td><td>Louisville Impactor System</td><td></td><td>Stabiliseren en blootleggen van de cervicale wervel</td></tr><tr><td>LISA vibraknife </td><td>Louisville Impactor System</td><td></td><td>Produceer de laceratie-blessure van het cervicale ruggenmerg</td></tr><tr><td>Spring Scissors</td><td>Fine Science Tools (USA)</td><td>15013-12</td><td>Huid- en trapeziusspier incisie</td></tr><tr><td>Spring Scissors</td><td>Fine Science Tools (USA)</td><td>15023-10</td><td>Spieren scheiden van de laminae</td></tr><tr><td>Spring Scissors</td><td>Fine Science Tools (USA)</td><td>15002-08</td><td>Incisie van de dura</td></tr><tr><td>Graefe forceps </td><td>Fine Science Tools (USA)</td><td>11154-10</td><td>Huid terugtrekken</td></tr><tr><td>Dumont #7 forceps </td><td>Fine Science Tools (USA)</td><td>11274-20</td><td>Spier terugtrekking (gemodificeerde punt)(Fig. A)</td></tr><tr><td>Dumont SS forceps </td><td>Fine Science Tools (USA)</td><td>11203-25</td><td>Fixatie van de wervel (gemodificeerde punt)(Fig.B)</td></tr><tr><td>30G naald </td><td>Becton Dickenson</td><td>305106</td><td>Een dura opening maken </td></tr><tr><td>6-0 naald </td><td>Ethicon</td><td>8806H</td><td>Sluiten van spier- en fascialagen </td></tr><tr><td>wondclip </td><td>Fine Science Tools (USA)</td><td>12031-07</td><td>Huid sluiten</td></tr><tr><td>Tribrom&#8211;thanol (Avertin)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>90710-10G</td><td>Anesthetisch middel</td></tr><tr><td colspan="4">Louisville Impactor System, Inc, 210 E. Gray St., Suite 1102, Louisville, KY 40202, (502) 629-5510, E-mail: <a href="mailto:cbshields1@gmail.com">cbshields1@gmail.com</a> Fine Science Tools (USA), Inc, 373-G Vintage Park Drive, Foster City, CA 94404-1139, (800) 521-2109, E-mail: <a href="mailto:info@finescience.com">info@finescience.com</a> Becton Dickenson, 1 Becton Drive, Franklin Lakes, NJ USA 07417, (201) 847-6800 Ethicon, Route 22 West, Somerville, NJ 08876 1-877-ETHICON Sigma-Aldrich Corp. St. Louis, MO, USA, 63178 (314) 771-5765, E-mail: cssorders@sial.com</td></tr><tr><td colspan="4">Figuur A is de gemodificeerde Dumont #7 forceps; B is de gemodificeerde Dumont SS forceps.</td></tr></tbody></table>

gecontroleerde cervicale laceration letsel in muizen

Controlled Cervical Laceration Injury in Mice

Gebruik van genetisch gemodificeerde muizen verbetert ons begrip van de moleculaire mechanismen die ten grondslag liggen aan verschillende neurologische aandoeningen zoals een dwarslaesie (SCI). Freehand handbediening gebruikt om een ​​scheur model van SCI produceren creëert inconsistent blessures vaak geassocieerd met een crush of kneuzing component en daarom werd een nieuwe techniek ontwikkeld. Ons model van cervicale laceratie SCI heeft inherente problemen met de vrije hand methode opgelost door het opnemen van 1) cervicale wervelkolom stabilisatie door wervel facet fixatie, 2) verbeterde spinal cord blootstelling, en 3) de oprichting van een reproduceerbare scheur van het ruggenmerg met behulp van een oscillerende mes met een nauwkeurigheid van ± 0,01 mm in de diepte zonder bijbehorende kneuzing. Vergeleken met de standaard methoden voor het maken van een scheur SCI zoals vrije hand gebruik van een scalpel of schaar is onze werkwijze produceerde een consistente laesie. Deze methode is nuttig voor studies op axonale regeneratie van corticospinal, rubrospinale, en dorsale oplopende traktaten.

Immobilisatie van de doelstelling wervel van groot belang genereren nauwkeurige laesies van de muis ruggenmerg. Onze wervelkolom stabilisatie apparaat overwint de anatomische aspecten van korte doornuitsteeksels en ventrale lordose van de muis cervicale wervelkolom. De halswervels zijn goed belicht met behulp van onze cervicale wervelkolom stabilisator (Figuur 2). De muis wervelkolom stabilisatie-inrichting is een betrouwbare techniek om de wervelkolom bereiden ruggenmerg procedures. De diepte van de laesie met de LISA nauwkeurig tot 0,01 mm 6,13. De precieze scheur veroorzaakt geen kneuzing aan de laesie / weefsel-interface (Figuur 3). De nauwkeurigheid van de dorsale hemisectie laesies aangetoond in C57BL / 6 muizen in een studie op axonale regeneratie waarbij een 0,9 mm diepe snijwonden uitgebreid net buiten het centrale kanaal in elk specimen bevestigd pathologische secties van het ruggenmerg 1. Locomotion van al deze dieren te herstellened volgt deze ruggenmerg scheuren letsel. <img alt="Figuur 1" src="/files/ftp_upload/50030/50030fig1.jpg" /> Figuur 1. (A) De muis in de wervelkolom stabilisator bovenaan de LISA podium. De trillende blad is gericht op het ruggenmerg te worden verscheurd. Micro-driver bedieningselementen bevinden zich onder het podium en zijn ontworpen om de muis te positioneren in de juiste website. De verticale micro-bestuurder de controle over de laesie diepte, en het kantelen knop regelt het horizontale vlak van het ruggenmerg naar hoeking van de scheuren te voorkomen. De aan-uit schakelaar regelt de vibratie motor, en een andere knop regelt de amplitude. (B) A 0.75 mm dorsale hemisectie laceratie laesie te snijden onder intact laminaire bogen. <img alt="Figuur 2" src="/files/ftp_upload/50030/50030fig2.jpg" /> Figuur 2. </strong&gt; (A) De muis wervelkolom stabilisator bestaat uit een U-vormig kanaal en twee armen en connectoren. De muis wordt in het C trog voor cervicale SCI en de T drinkbak thoracale SCI. (B) de cervicale wervelkolom wordt gefixeerd door het plaatsen van de armen onder de laterale vlakken en vergrendelen de duimschroeven. De dura wordt belicht tussen de bladen van C5-6, C6-7, en C7-T1 zonder verwijdering van het bot. <img alt="Figuur 3" src="/files/ftp_upload/50030/50030fig3.jpg" /> Figuur 3. Four dorsale ruggenmerg snijwonden diepte van 0.5, 0.8, 1.1 en 1.4 mm waargenomen in het sagittale (cresyl-violet en eosine kleuring) die de grote nauwkeurigheid met deze techniek.

Een nieuwe techniek om een ​​reproduceerbare creëren<em&gt; In vivo</em&gt; Model van cervicale ruggenmerg verwonding verwonding in de muis wordt beschreven. Deze techniek is gebaseerd op de rug stabilisatie door fixatie van de cervicale facetten en scheuren van het ruggenmerg met een oscillerend mes met een nauwkeurigheid van ± 0,01 mm.

Gecontroleerde Cervicale Laceration Letsel in Muizen

Use of genetically modified mice enhances our  understanding of molecular mechanisms underlying several neurological disorders  such as a spinal cord ...

Het algemene doel van het experiment is om een reproduceerbare laceratie-laesie van het ruggenmerg van de muis te genereren. Dit wordt bereikt door de cervicale lamina posterieur bloot te leggen wanneer het dier is gepositioneerd in het Louisville-letselsysteemapparaat. Als tweede stap wordt een speciaal ontworpen stabilisatieapparaat gebruikt voor de fixatie van de doelwervel van de ruggengraat van de muis.Vervolgens wordt het doelgebied van het ruggenmerg tussen de laminae geïdentificeerd nadat het ligamentum flavum aan het uiteinde is verwijderd. De cervicale dorsale hemisectie op een diepte van 0,75 millimeters wordt nauwkeurig uitgevoerd met behulp van een oscillerend mesje en een micro-driver. Het belangrijkste voordeel van de techniek die wij in het laboratorium hebben ontwikkeld, is de creatie van een zeer accurate methode voor het veroorzaken van een laceratie-ruggenmergletsel.Dit is van belang omdat de tot nu toe gebruikte technieken, namelijk de schaar of het scalpel, problemen hebben veroorzaakt in de vorm van onvolledige en onnauwkeurige methoden voor het toebrengen van ruggenmergletsel. We beschikken nu over methoden om contusie van het ruggenmerg, verplaatsing van het ruggenmerg weg van het snijinstrument en de excessieve bloeding die optreedt bij ruggenmergletsel te vermijden. Door deze techniek te gebruiken, kunnen we een zeer precieze methode creëren die visuele schatting van de diepte van het ruggenmergletsel overbodig maakt.Door deze techniek te gebruiken, zijn wij van mening dat we de methoden voor experimentele ruggenmerglaesies in het laceratiemodel kunnen revolutioneren, wat inherent belangrijk kan zijn voor axonale regeneratie en voor het vinden van een genezing voor ruggenmergletsel. Deze procedure wordt gedemonstreerd door eing Jang, een neurochirurg en neurochirurgisch onderzoeker in ons laboratorium. Begin deze procedure door de volgende chirurgische instrumenten te steriliseren: twee tot drie pincetten, drie microscharen, een naald van 30 gauge, micro URS-hechtmateriaal, een naaldhouder, huidclips en een clipapplicator. Desinfecteer vervolgens de ruggenmergstabilisator en anesthetiseer daarna de muis met een cocktail van ketamine, xylazine of tri-ethanol via intraperitoneale injectie.Scheer vervolgens het haar van de nek van de muis. Reinig de huid met een povidonjodiumoplossing en 70% alcohol. Plaats de muis daarna op de operatietafel met een voorverwarmd warmtekussen.Breng oogzalf aan in de ogen om uitdroging van het hoornvlies te voorkomen. Maak na de inductie van de anesthesie een huidincisie in de posterieure cervicale middenlijn, van de huid tot aan het subcutane vetweefsel van de lage cervicale wervelkolom. Maak onder de microscoop een huidincisie in de middenlijn tussen de trapeziusspieren ter hoogte van C2 en retracteer de semispinalis capitis-spieren lateraal.Breid vervolgens de dissectie van de middenlijnspieren voorzichtig uit tot aan het doornuitsteeksel van T2, dat als betrouwbaar herkenningspunt dient. Scheid de spieren van het doornuitsteeksel van T2. Verwijder daarna het kraakbeengedeelte van het doornuitsteeksel van T2.Dissect vervolgens de paraspinale spieren aan beide zijden van de laminaire bogen vrij van C4 tot en met T2 met behulp van een microschaartje. Begin naast de doornuitsteeksels en breid dit uit over beide laminaire bogen tot aan de facetgewrichten. Nadat de laterale facetten zijn blootgelegd, wordt de muis in het U-vormige kanaal van de ruggengraatstabilisator voor muizen geplaatst.Plaats vervolgens de roestvrijstalen armen van de muisstabilisator bilateraal onder de blootgestelde facetten. Zodra de armen op hun plaats zitten, worden destelschroeven van de stalen armen aangedraaid om de wervelkolom onder de microscoop te immobiliseren. Verwijder het ligamentum flavum tussen de laminaire bogen van C5 en C6 om de onderliggende dura in de interlaminaire ruimte bloot te leggen.Gebruik een naald van 30 gauge om een kleine durotomie te maken en microschaartjes om de durotomie te verbreden. Het ruggenmerg is nu klaar voor de gecontroleerde laceratie-laesie. Plaats bij deze procedure de ruggengraatstabilisator en de muis op de tafel van het Louisville injury system-apparaat, waaraan een mesje is bevestigd waarvan de positie door micro-aansturingen wordt geregeld.In staat tot drie bewegingsvrijheden om een dorsale HEMI-sectieletsel uit te voeren tussen de laminae van C5 en C6 met een plat blad van 2,3 millimeter bevestigd aan de oscillator. Stel de amplitude van het oscillerende blad in op 0,5 millimeter, aangezien lagere amplitudes de eenvoud van een volledige dwarsdoorsnede van het ruggenmerg kunnen verminderen. Zet vervolgens de schakelaar van de blad-vibrator aan en plaats onder de microscoop het ruggenmerg van de muis direct onder het trillende blad.Beweeg vervolgens de tafel met de micro-driverbediening naar het oscillerende mes toe. De nulpositie is het punt waarop het mes net de dorsale vene van het ruggenmerg raakt; de diepte van de laceratie van het ruggenmerg wordt gemeten ten opzichte van deze nulpositie. Verhoog daarna de positie van de tafel met de micro-driverbediening.Een draai van 360 graden aan de knop van de micro-driver tilt de tafel met 0,25 millimeter op. Een dorsale hemisectie-laesie van 0,75 millimeter wordt dus gecreëerd door de knop van de micro-driver drie keer te draaien; terwijl het mes het ruggenmerg begint in te snijden, dient het operatieveld te worden gesmeerd met irrigatie van fysiologische zoutoplossing. Zodra de vooraf bepaalde diepte is bereikt, wordt de schakelaar van de vibrator uitgeschakeld en wordt de tafel die de muis en de klem ondersteunt, weggehaald van het snijmes.Verwijder het bloed door de chirurgische plaats te spoelen met zoutoplossing. Droog vervolgens het gebied af met wattenstaafjes, aangezien hemostase gewoonlijk binnen één minuut optreedt. Verwijder tot slot de muis uit de wervelkolomstabilisator en sluit de huid met roestvrijstalen hechtdraden.Michelle clips. De nekwervelkolom wordt gefixeerd door de armen onder de laterale facetten te plaatsen en vervolgens de duimschroeven te vergrendelen zoals in deze figuur wordt getoond; de dura wordt blootgelegd tussen de lamina van C5-C6, C6-C7 en C7-T1 zonder verwijdering van bot. Hier worden de sagittale aanzichten getoond van vier dorsale ruggenmerglaceraties op dieptes van 0,5, 0,8, 1,1 en 1,4 millimeters.Deze wijzen op de hoge mate van precisie bij het gebruik van deze techniek. Een van de problemen die inherent was aan het veroorzaken van dwarslaesies, was het gebrek aan stabilisatie van de nekwervelkolom. Met behulp van de wervelkolomstabilisator die door onze groep is ontwikkeld, zijn we nu in staat om een volledig immobiliseerde nekwervelkolom te creëren.Dit maakt het mogelijk om spinal cord injury te intensiveren middels spinal cord contusion, injecties in het ruggenmerg, alsook celtransplantatie in het ruggenmerg voor alle methoden van ruggenmergonderzoek.

controlled-cervical-laceration-injury-in-mice

Research

JoVE Journal

Medicine

Geneeskunde

De chirurgische procedure gebruikt om experimentele myocardinfarct bij de muis begint met linker thoractomie tussen de derde en vierde ribben om visualiseren het voorste oppervlak van het hart en linker long. De linker coronaire arterie geligeerd, wordt de borst gesloten en de muis mag spontaan herstellen.

Gewijzigd Techniek voor Coronary Artery Ligatie in Muizen

Source: Gao, Z., et al. A Mouse Model of Direct Anastomosis via the Prespinal Route for Crossing Nerve Transfer Surgery. J. Vis. Exp. (2021).This video demonstrates restoring forelimb movement in a mouse via direct cervical nerve reconnection. It begins with a mouse with a paralyzed right forelimb due to a transected right C7 nerve at its nerve root. The left C7 nerve is severed, guided to the right via the prespinal route, and sutured with the right C7 nerve. The surgical site is then cleaned...

Direct Reconnection of Cervical Nerves to Restore Forelimb Mobility in a Mouse

We introduceren een chirurgische methode experimentele ischemie / reperfusie (I / R) letsel veroorzaken simuleren myocardiaal infarct (MI) in muismodellen die zorgt voor meer duidelijkheid in positionering van de ligatie van de LAD (LAD) om de reproduceerbaarheid te verhogen MI van experimenten in muizen.

Een muizenmodel van myocard ischemie-reperfusie schade door de eileiders van de LAD

Fototrombose is een minimaal invasieve en zeer reproduceerbare procedure om focale ischemie in het ruggenmerg te induceren en dient als een model voor ruggenmergletsel bij muizen.

Photothrombosis-geïnduceerde focale ischemie als een model van Spinal Cord Injury in Muizen

Wij introduceren een weefselverplaatsingsgebaseerd contusief ruggenmergbeseringsmodel dat een consequente contusieve ruggengraatbesering in volwassen muizen kan veroorzaken.

Een Weefselverplaatsing-gebaseerde Contusive Spinal Cord Injury Model in Muizen

Dit protocol beschrijft hoe u een nauwkeurige laminectomie voor inductie van stabiele transsectie-type dwarslaesie in het muismodel, met minimale bijkomende schade voor het onderzoek van de dwarslaesie te creëren.

Inductie van volledige transsectie-type ruggenmergletsel bij muizen

Intraparenchymale bloeding en neuro-inflammatie vergezeld van hersenkneuzing kunnen ernstig secundair hersenletsel veroorzaken. Dit protocol beschrijft een muisgecontroleerd corticaal impactmodel (CCI), waarmee onderzoekers bloedingen, kneuzingen en posttraumatische immuunresponsen kunnen bestuderen en mogelijke therapieën kunnen onderzoeken.

Een preklinisch gecontroleerd corticaal impactmodel voor traumatische bloedingen, kneuzingen en neuro-inflammatie

Hier beschrijven we een muismodel van retinale ischemie door voorbijgaande bilaterale gemeenschappelijke halsslagader occlusie met behulp van eenvoudige hechtingen en een klem. Dit model kan nuttig zijn voor het begrijpen van de pathologische mechanismen van retinale ischemie veroorzaakt door cardiovasculaire afwijkingen.

Een Murine-model van ischemisch netvliesletsel veroorzaakt door voorbijgaande bilaterale gemeenschappelijke halsslagader Occlusie

Minimaal invasieve technieken en een eenvoudig laboratoriumapparaat verbeteren de reproduceerbaarheid van het ruggenmergletselmodel door operatieve schade aan de proefdieren te verminderen en anatomisch morfologisch onderhoud mogelijk te maken. De methode is de moeite waard omdat de betrouwbare resultaten en reproduceerbare procedure het onderzoek naar de mechanismen van ziekteherstel vergemakkelijken.

Het opzetten van een muiskneuzingsletselmodel op basis van een minimaal invasieve techniek

Het huidige protocol dat het centrale navelstrengsyndroom (CCS) bij muizen simuleert, heeft de herhaalbaarheid verbeterd en de operatieschade aan de proefdieren geminimaliseerd, waardoor de anatomische structuur niet overmatig wordt verstoord. De strategie in deze studie is voordelig omdat het onderzoek naar letselmechanismen mogelijk maakt door consistente resultaten te produceren.

Vaststelling van het Central Cord Syndrome-model in C57BL/6J-muis

Dit protocol beschrijft een procedure voor het induceren van baarmoederbeschadiging in een muismodel, gevolgd door stroomafwaartse analyses tijdens een volgende zwangerschap.

Muismodel van chirurgisch baarmoederletsel en daaropvolgende zwangerschapsuitkomsten

Leer een gecontroleerde cervicale laceratiemethode voor ruggenmergletselonderzoek bij muizen met behulp van een oscillatieblad en stabilisatieapparaat. Deze techniek verbetert de reproduceerbaarheid en precisie van experimentele modellen.

Gecontroleerde Cervicale Laceration Letsel in Muizen

Meer video's verkennen