Name: Beoordeling van de maaglediging in niet-obese diabetische muizen met behulp van een 13 C -octaanzuur ademtest (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2013-03-23T14:00:00.000+00:00
Duration: 12 min 24 s
Description: Leer een niet-invasieve methode voor het meten van maaglediging bij muizen met behulp van een [13C]-octaanzuur ademtest. Deze techniek maakt herhaalde metingen mogelijk voor onderzoek naar gastroparese.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Deze video publicatie is mogelijk gemaakt door financiële steun van het Nationaal Instituut voor Diabetes en Maag-, Darm-en nierziekten (NIDDK) voor het Programma projectsubsidie ​​&quot;Pathobiologie van het enterische systeem&quot; DK 68055. Christopher T. Creedon werd ondersteund door het Rochester Public Schools mentorschap programma. Wij danken de heer Gary Stoltz voor technische bijstand, mevrouw Kristy Zodrow voor secretariële ondersteuning en Dr Douglas Baer uit Los Gatos Research, Inc (Mountain View, CA).

1. Training en gewenning van de muizen <ol><li> Vóór analyse zet alle muizen in de testkamers voor 2-4 uur met constant debiet om ze wennen aan de testomstandigheden. Dit vermindert aanzienlijk stress die anders zouden kunnen leiden dat afwijkende detectie van vertraagde maaglediging. Behandel de muizen op dezelfde wijze als de maaglediging experiment werd uitgevoerd. Bereid eidooier (zie verder) zonder toevoeging octaanzuur en voeden 0,2 g aan elke muis. </li><li> Herhaal dit proces totdat de muizen voldoende scholing (meestal 2-3 keer). De muizen doorgaans gemakkelijk gewend zolang de omgevingsomstandigheden zijn gelijk gehouden. </li></ol> Opmerking: Niet-gewende muizen blijven bewegen voor ongeveer 1 uur na overschrijving naar de kamer, en en poepen urineren vaak, terwijl gewende muizen snel stil te vestigen in hun nieuwe omgeving en rust. Geente: Tijdens het experiment: Monitor dieren op tekenen van verlies van gewenning, zoals teveel plassen, ontlasting, gebrek aan interesse in het eten van het ei. Als dit het geval heroverwegen habituating in een lege kamer 1-2 keer voordat deze maaglediging data. Consistentie is uiterst belangrijk terwijl het doen van dit experiment. Dingen doen op precies dezelfde manier elke keer is de enige manier om betrouwbare en reproduceerbare resultaten te krijgen. Dit omvat waarbij behandeling (bijvoorbeeld insuline) elke dag op hetzelfde tijdstip, niet scheiden van de muizen uit de kooi mates niet absoluut noodzakelijk, de muizen vasten en starten van de maaglediging test tegelijkertijd recentelijk de muizen op dezelfde manier. 2. Voorbereiding van de isotoop die test-Meal <ol><li> Begin met een gewicht van 5 g van eigeel in een 50 ml falcon buis. Herhaal deze stappen elke experimentele dag om een ​​frisse toets maaltijd te bereiden. </li><li> Voeg 10 ul van octaanzuur met een concentratie van 2 ul / g in de 50 ml falcon-buis met de eieren toe en meng grondig gedurende 1 min met een spatel in de falcon-buis. </li><li> Het ei wordt dan overgebracht naar een glazen beker en verhit met een bunsenbrander totdat het stolt en de samenhang is geschikt voor kleine ballen. Dit duurt gewoonlijk ongeveer 30 sec. </li></ol> Opmerking: De ballen van eigeel moet 0,2 g af te wegen per muis. Dit is belangrijk om de cumulatieve dosis constant te houden in alle muizen. 3. Starten van het Experiment <ol><li> Eenmaal getraind en klaar voor de maaglediging, snel de muizen &#39;s nachts (12 uur) op een metalen &quot;mesh-bottom&quot; vasten rack te coprophagia te voorkomen. Zorg ervoor dat ze hebben gratis toegang tot drinkwater. Aangezien diabetische muizen gebruikt in het huidige experiment, moeten ze niet vasten langer dan 16 uur. </li><li> Begin met het opzetten van de maaglediging kamers. Gebruik schone kamers en covers die zijn lucht gedroogd. Ook eventuelebuizen verbinden de kamers naar de analyser of het CO 2 luchttoevoer moet vochtvrij, water kan interfereren met het signaal door het meetsysteem </li><li> Sluit de kamers om de inlaatbuizen dat een constante lucht toe. Sluit vervolgens de uitlaatbuizen van de kamers aan de machine. Sluit de buizen en schakel de luchtstroom. </li></ol> Opmerking: Breng een zeer kleine hoeveelheid Vaseline eind van het deksel deksels zodat ze gemakkelijk sluiten en veilig gesloten. Deze afdichting is noodzakelijk om alle kooldioxide door de muizen te verzamelen. 4. Experimentele Procedures <ol><li> Begin door weging van elke muis. Lichaamsgewicht is een maat voor hun voortdurende goede gezondheid. Plaats dan elke muis in de juiste kamer. Het is uiteraard belangrijk om het hebben stroomt in de kamers op dit moment. </li><li> Om de meting te starten, zodat de muizen naar de kamers laten wennen voordat passenING de lucht niveaus. </li><li> Zodra de muizen lijken kalme, kan dat een paar minuten duren, past u het luchtdebiet voor elke muis kamer. Dit kan voor elke muis. Typisch wordt de luchtstroom ingesteld op het begin van het experiment te waarborgen dat uitgeademde CO 2 bereikt vlak vast welke apparatuur wordt gebruikt, en ervoor te zorgen dat het niveau blijft laag genoeg gezonde lucht omzet te waarborgen. We maken gebruik van de eerste CO 2-uitstoot tussen de 1.000 en 1.500 delen per miljoen. </li><li> Als problemen met aanpassingen, controleer op luchtlekkage. Dan herhaal het proces voor elk van de kamers en kijken voor een nieuwe ronde van de metingen om te zien of aanpassingen van de luchtstroom gecorrigeerd het CO 2-niveau. Het is belangrijk om een ​​vlakke basislijn lezen voordat de muizen te voeren. We maken gebruik van een machine met een zelf kalibratie. Indien dit niet het geval kalibratie te controleren. </li><li> Wanneer dit is bereikt, het beheer van de ei maaltijdnaar de eerste muis en neem de tijd elke muis krijgt het voedsel. </li><li> We lopen de procedure voor het 4 uur om voldoende waarden te verkrijgen voor de montage van de 13 CO 2 verrijking curve voor elke muis. Controleer op de muizen elke 30-60 min om ervoor te zorgen dat de CO 2-niveaus nog steeds veilig zijn voor de muizen. </li><li> Bereid nieuwe dozen met levensmiddelen vóór het einde van de test dat de muizen kan gaan eten direct na de test is. </li></ol>

<ol><li>Yeung, C. K., McCurrie, J. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+simple+method+to+investigate+the+inhibitory+effects+of+drugs+on+gastric+emptying+in+the+mouse+in+vivo%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Pharmacol.+Toxicol.+Methods%22%5BJournal%5D)">A simple method to investigate the inhibitory effects of drugs on gastric emptying in the mouse in vivo.</a> J. Pharmacol. Toxicol. Methods. 45, 235-240 (2001).</li>
<li>Osinski, M. A., Seifert, T. R., Cox, B. F., Gintant, G. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+improved+method+of+evaluation+of+drug-evoked+changes+in+gastric+emptying+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Pharmacol.+Toxicol.+Methods%22%5BJournal%5D)">An improved method of evaluation of drug-evoked changes in gastric emptying in mice.</a> J. Pharmacol. Toxicol. Methods. 47, 115-120 (2002).</li>
<li>Ghoos, Y. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Measurement+of+gastric+emptying+rate+of+solids+by+means+of+a+carbon-labeled+octanoic+acid+breath+test%5BTitle%5D)+AND+%22Gastroenterology%22%5BJournal%5D)">Measurement of gastric emptying rate of solids by means of a carbon-labeled octanoic acid breath test.</a> Gastroenterology. 104, 1640-1647 (1993).</li>
<li>Symonds, E., Butler, R., Omari, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Noninvasive+breath+tests+can+detect+alterations+in+gastric+emptying+in+the+mouse%5BTitle%5D)+AND+%22Eur.+J.+Clin.+Invest%22%5BJournal%5D)">Noninvasive breath tests can detect alterations in gastric emptying in the mouse.</a> Eur. J. Clin. Invest. 32, 341-344 (2002).</li>
<li>Symonds, E. L., Butler, R. N., Omari, T. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Assessment+of+gastric+emptying+in+the+mouse+using+the+%5B13C%5D-octanoic+acid+breath+test%5BTitle%5D)+AND+%22Clin.+Exp.+Pharmacol.+Physiol%22%5BJournal%5D)">Assessment of gastric emptying in the mouse using the [13C]-octanoic acid breath test.</a> Clin. Exp. Pharmacol. Physiol. 27, 671-675 (2000).</li>
<li>Verhulst, P. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Role+of+ghrelin+in+the+relationship+between+hyperphagia+and+accelerated+gastric+emptying+in+diabetic+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Gastroenterology%22%5BJournal%5D)">Role of ghrelin in the relationship between hyperphagia and accelerated gastric emptying in diabetic mice.</a> Gastroenterology. 135, 1267-1276 (2008).</li>
<li>Schoonjans, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+13C-octanoic+acid+breath+test%3A+validation+of+a+new+noninvasive+method+of+measuring+gastric+emptying+in+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Neurogastroenterol.+Motil%22%5BJournal%5D)">The 13C-octanoic acid breath test: validation of a new noninvasive method of measuring gastric emptying in rats.</a> Neurogastroenterol. Motil. 14, 287-293 (2002).</li>
<li>Choi, K. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Determination+of+gastric+emptying+in+nonobese+diabetic+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Am.+J.+Physiol.+Gastrointest.+Liver+Physiol%22%5BJournal%5D)">Determination of gastric emptying in nonobese diabetic mice.</a> Am. J. Physiol. Gastrointest. Liver Physiol. 293, 1039-1045 (2007).</li>
<li>Atkinson, M. A., Leiter, E. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+NOD+mouse+model+of+type+1+diabetes%3A+as+good+as+it+gets%3F%5BTitle%5D)+AND+%22Nat.+Med%22%5BJournal%5D)">The NOD mouse model of type 1 diabetes: as good as it gets?</a> Nat. Med. 5, 601-604 (1999).</li>
<li>Camilleri, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Clinical+practice.+Diabetic+gastroparesis%5BTitle%5D)+AND+%22N.+Engl.+J.+Med%22%5BJournal%5D)">Clinical practice. Diabetic gastroparesis.</a> N. Engl. J. Med. 356, 820-829 (2007).</li>
<li>Choi, K. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Heme+oxygenase-1+protects+interstitial+cells+of+Cajal+from+oxidative+stress+and+reverses+diabetic+gastroparesis%5BTitle%5D)+AND+%22Gastroenterology%22%5BJournal%5D)">Heme oxygenase-1 protects interstitial cells of Cajal from oxidative stress and reverses diabetic gastroparesis.</a> Gastroenterology. 135, 2055-2064 (2008).</li>
<li>Kashyap, P. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Carbon+monoxide+reverses+diabetic+gastroparesis+in+NOD+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Am.+J.+Physiol.+GI%22%5BJournal%5D)">Carbon monoxide reverses diabetic gastroparesis in NOD mice.</a> Am. J. Physiol. GI. G298, G1013-G1019 (2010).</li>
</ol>

De auteurs verklaren dat zij geen concurrerende financiële belangen hebben.

De beschreven techniek maakt hierin voor herhaalde of niet-invasieve in vivo meting van vaste maaglediging in muizen. Dit systeem heeft het voordeel dat de dieren niet beperkt in de meetkamer, zodat ze bewegen en vrij kunnen draaien. Aangezien dit een onbekende omgeving, de muizen moeten nog worden opgeleid en gewend aan het testen kamers om de effecten van stress te voorkomen op de maaglediging. In het algemeen we aannemen dat de maaglediging data betrouwbaar is als de intra-muis variabiliteit tussen opeenvolg...

Deze publicatie beschrijft de technische en methodologische overwegingen betrokken zijn bij niet-invasieve meting van maaglediging bij muizen. Door het volgen van het protocol hier beschreven, onderzoekers kunnen betrouwbaar en reproduceerbaar veranderingen in de maaglediging als gevolg van de ontwikkeling van de ziekte te volgen, vooral de invloed van farmacologische middelen op de maaglediging en volg de respons van de maaglediging op de behandeling van een ziekte of gebreken 6,8, 11,12. In eerdere publicaties de toepassing van 13C octaanzuur ademtesten bleek een nuttige manier meten maaglediging bij mensen en dieren 3,8 zijn. Dit document beschrijft in detail de procedures die nodig zijn om betrouwbare gegevens te verkrijgen over de 6 tot 8 maanden nodig zijn voor een longitudinale studie van de maaglediging bij muizen met diabetes. De voordelen van deze volgende protocol vergeleken met eerder gepubliceerde methoden zijn dat de onderzoeker kan de data obtaine verzekerdd zal zijn betrouwbaar en reproduceerbaar. Bovendien het automatische systeem voor het verzamelen en analyseren van de gasmonsters hier beschreven verhoogt het aantal dieren dat tegelijk kan worden gevolgd in een studie. Over het geheel genomen het doel van deze paper is het identificeren van de belangrijkste factoren die gewenning van de muizen op de proef en dat de variabiliteit te verminderen in de verkregen resultaten te handhaven. Voor de in vivo meting van maaglediging, worden muizen overnacht gevast en in de transparante plastic testkamers met constante luchtstroom. Na de muizen krijgen gewend aan de buizen, basislijn uitgeademde 13 CO 2-gehalte wordt bepaald en luchtstroom overeenkomstig aangepast. Vervolgens beheren wij een testmaaltijd bestaande uit eidooier gemengd met 13 C-gelabelde octaanzuur. Omdat de muizen gevast en getraind, zij over het algemeen eten de testmaaltijd binnen 2 minuten. De toegediende octaanzuur niet wordt geabsorbeerd in de maag, maar wordt opgenomen in het duodenum eend krijgt in de lever in 13 CO 2 uitgezonden en uitgeademd, waardoor een verrijking van 13 CO 2 in de omgevingslucht. Luchtmonsters worden verzameld op bepaalde tijdstippen en geanalyseerd door de koolstofisotoop analyzer. De snelheidsbepalende stap in dit proces is maaglediging en de pulmonale uitscheiding van 13 CO 2 direct overeenkomt met maaglediging van het gelabelde maaltijd. <img src="/files/ftp_upload/50301/50301fig1.jpg" alt="Figuur 1" fo:content-width="6in" fo:src="/files/ftp_upload/50301/50301fig1highres.jpg"/> Figuur 1. Schema van maaglediging inrichting. Na een nacht vasten, worden muizen geplaatst in transparante kamers waardoor ze te bewegen en vrij kunnen draaien. Een inlaatbuis kan frisse lucht en constante stroom en een uitlaat leidt tot het isotoop analyzer het meten van de 13 C-to-12C verhouding in de uitgeademde lucht. De kamer heeft ook een centrale poort voor de voedselproducten met [13C]-octaanzuur.

<table border="1"><tbody><tr><td> NAAM </td><td> BEDRIJF </td><td> CAT NUMBER </td><td> OPMERKINGEN </td></tr><tr><td> Een bron van constante luchttoevoer, flow en samenstelling </td><td> centrale luchttoevoer in de onderzoeksfaciliteit </td><td></td><td></td></tr><tr><td> 130 ml monsterkamer die luchtinlaat, luchtuitlaat, en voedsel administratie opening heeft Kunststof buizen voor luchttoevoer </td><td> In-huis gebouwd </td><td></td><td></td></tr><tr><td> Octaanzuur </td><td> Cambridge isotopenlaboratoria (Andover, MA) </td><td> CLM-293-1 </td><td></td></tr><tr><td> Om het ei maaltijd te bereiden: <ul><li> kleine beker </li><li> 50 ml plastic buis </li><li> Bunsenbrander </li><li> ei </li><li> spatel </li></ul></td><td> Elke leverancier </td><td></td><td> Probeer tein overeenstemming met het ei leverancier sinds de smakelijkheid en voedingswaarde van de eieren en maaglediging inname van de maaltijd beïnvloeden </td></tr><tr><td> Kooldioxide isotoop analyzer </td><td> Los Gatos Research Inc (Mountain View, CA) </td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

beoordeling van de maaglediging in niet-obese diabetische muizen met behulp van een [<sup&gt; 13</sup&gt; c]-octaanzuur ademtest

Assessment of Gastric Emptying in Non-obese Diabetic Mice Using a [13C]-octanoic Acid Breath Test

Maaglediging studies in muizen zijn beperkt door het onvermogen om maaglediging veranderingen in hetzelfde dier te volgen aangezien de meest gebruikte technieken vereisen doden van de dieren en postmortem herstel van de maaltijd 1,2. Deze aanpak voorkomt dat longitudinale studies om te bepalen veranderingen in de maaglediging met de leeftijd en de progressie van de ziekte. De meest gebruikte [13 C]-octaanzuur ademtest voor mens 3 is aangepast voor gebruik in muizen ratten 4-6 en 7 en we eerder aangetoond dat deze test betrouwbaar en reageren op veranderingen in maaglediging in respons op geneesmiddelen en tijdens diabetes progressie 8. In deze video presentatie van het beginsel en de praktische uitvoering van deze gewijzigde test wordt uitgelegd. Evenals in de vorige studie worden NOD LTJ muizen gebruikt, een model van type 1 diabetes 9. Een deel van deze muizen ontwikkelen symptomen van gastroparese, een complicatie van diabetes gekenmerkt door vertraagde maaglediging zonder mechanische obstructie van de maag 10. Dit document laat zien hoe de muizen trainen voor het testen, hoe de test maaltijd te bereiden en het verkrijgen van 4 uur maaglediging data en hoe de verkregen gegevens te analyseren. De koolstofisotopen analyzer gebruikt in de onderhavige studie is geschikt voor de automatische monstername van de luchtmonsters tot wel 12 muizen op hetzelfde moment. Deze techniek maakt de longitudinale opvolging van maaglediging van grotere groepen van muizen met diabetes of andere langdurige ziekten.

Een representatieve gegevensreeks uit drie verschillende muizen wordt weergegeven in figuur 2. De zwarte grafiek geeft de datapunten van een muis met normale maaglediging. Het toont de fractie van 13 C die wordt teruggewonnen in de uitgeademde lucht, uitgedrukt als een percentage van de toegediende dosis per uur uitgedrukt als een functie van tijd. De blauwe curve is van een muis met een versnelde maaglediging met een T half waarde van 40 min en de rode curve is van een muis met een vertraagd...

Bepaling van maaglediging Niet-invasieve [<sup&gt; 13</sup&gt; C]-octaanzuur ademtest voor het opsporen van gastroparese bij vrouwelijke NOD LTJ muizen.

Beoordeling van de maaglediging in niet-obese diabetische muizen met behulp van een [<sup&gt; 13</sup&gt; C]-octaanzuur ademtest

Gastric emptying studies in mice have been limited by the inability to follow gastric emptying changes in the same animal since the most commonly used ...

Het algemene doel van deze procedure is het vaststellen van een methode voor het in vivo meten van de maaglediging bij muizen met behulp van een 13C-octanoïzuur ademtest. Muizen en andere kleine dieren zijn uiteraard zeer nuttig geweest om ons te helpen de pathofysiologie van ziekten te begrijpen. Ons laboratorium bestudeert gastroparese, en een van de uitdagingen bij gastroparese is dat we, om de ziekte te bestuderen, de maaglediging in de loop van de tijd moeten volgen. Dit was een probleem bij huidige technieken, omdat deze vereisen dat er een vloebare of vaste stof in de maag van de muis wordt geplaatst, om vervolgens de muis op een later tijdstip te offeren en te schatten welk deel de maag heeft verlaten.Ons doel was om een niet-invasieve techniek voor het meten van de maaglediging te ontwikkelen; hiervoor hebben we de bekende 13C-aminozuur-ademtest aangepast zodat deze bij muizen kan worden toegepast. Dit stelt ons in staat om herhaalde metingen over een bepaalde periode uit te voeren en de resultaten vervolgens te correleren met zowel histologie als fysiologie. De apparatuur die we hier gebruiken maakt het mogelijk om de procedure te automatiseren, hoewel dit uiteraard ook handmatig kan worden uitgevoerd.Het voordeel van automatisering is niet alleen het feit dat we in dezelfde tijd veel meer maagledigingen kunnen uitvoeren, maar dat we dit daadwerkelijk bij meerdere muizen tegelijkertijd kunnen doen. We zullen een methode laten zien waarbij we tot 12 muizen tegelijkertijd kunnen behandelen. De volgende animatie toont de opstelling van ons maagledigingsexperiment voor de in vivo meting van de maaglediging.De muizen worden geplaatst in transparante plastic buizen met een constante luchtstroom. Nadat de muizen gewend zijn geraakt aan de buizen en de luchtstroom is aangepast, dienen we een testmaaltijd toe bestaande uit eigeel gemengd met 13C-gelabeld Octanoïzuur.Binnen twee minuten wordt het toegediende OCT NOIC-zuur opgenomen in het duodenum, waarna het in de lever wordt gemetaboliseerd en vervolgens vrijkomt en wordt uitgeademd. Dit resulteert in een verrijking van 13 koolstofdioxide in de omgevingslucht, wat vervolgens wordt gemeten door onze isotoopanalyzer. Laten we gedetailleerder kijken naar wat er in het lichaam van de muis gebeurt. Na het eten van de testmaaltijd die 13 koolstofgelabeld OCT NOIC-zuur bevat, komt de maaltijd in de maag terecht.Het OCT NOIC-zuur blijft intact in de maag. Na passage door de pylorus wordt het snel geabsorbeerd in het duodenum. De gelabelde verbinding bereikt de lever via de poortader en wordt gemetaboliseerd tot 13 koolstof-gelabeld kooldioxide.Het gelabelde koolstofdioxide komt vrij in het veneuze bloed en wordt uitgeademd. De snelheidsbepalende stap in dit gehele proces is de maaglediging. Dit betekent dat de pulmonale excretie van 13 koolstofdioxide direct correspondeert met de maaglediging van de gelabelde maaltijd.Luchtmonsters worden met bepaalde tijdsintervallen verzameld en geanalyseerd met een koolstofisotopenanalysator. Diverse isotopenanalysatoren kunnen worden gebruikt. In deze studie hebben we gekozen voor een LGR 13 koolstofisotopenanalysator van GATOS research.Het verzamelen van monsters gedurende vier uur levert reproduceerbare 13 koolstofdioxide-kinetiek op, die de snelheid van de maaglediging weerspiegelen. Curve fitting. Met behulp van niet-lineaire regressie kunnen de halfwaardetijden van de lediging worden berekend.Deze procedure is geschikt voor de follow-up van muizen met een chronische aandoening. In deze specifieke studie gebruiken we vrouwelijke non-obese diabetische, N-O-D-L-T-J muizen, die een model vormen voor menselijke diabetes type 1. Voorafgaand aan de analyse krijgen alle muizen de gelegenheid om te wennen aan de testkamers om het stressniveau te minimaliseren.Omdat een vertraging in de maaglediging een kenmerkende indicator is van stress bij muizen, blijven niet-gehabitueerde muizen ongeveer een uur na overplaatsing naar de kamer bewegen, defeceren en urineren. Meestal worden de muizen als succesvol gehabitueerd beschouwd wanneer zij zich snel aanpassen aan hun nieuwe omgeving. Na overplaatsing naar de kamer zullen de gehabitueerde muizen, na een korte periode van exploratie, rustig in de kamer blijven rusten.Bij gewende muizen moeten de resultaten van de maagledigingstest een verschil van minder dan 10% intra-muis variabiliteit vertonen. Zodra de muizen getraind en klaar zijn voor de maagledigingstest, moeten ze de dag vóór het experiment vasten. De muizen vasten gedurende de nacht op een vastenrek met een metalen gaasbodem.Om phasia te voorkomen, moet ervoor gezorgd worden dat ze vrije toegang hebben tot drinkwater. Diabetische muizen mogen niet langer dan 16 uur vasten. Consistentie is uiterst belangrijk tijdens een gastrisch MCN-experiment.Factoren zoals het op dezelfde manier hanteren van de muizen, het op hetzelfde tijdstip elke dag vasten van de muizen, en het op hetzelfde tijdstip per dag controleren van de glucosespiegels en het toedienen van insuline. Voor de gebruiker is het uiterst belangrijk om elke dag dezelfde cologne en dezelfde laboratoriumjas te dragen, omdat al deze factoren de gastrische MTN-data zullen beïnvloeden. De materialen die we gebruiken voor de bereiding van de eimaaltijd zijn een ei OC-zuur, een glazen bekerglas, een Falcon-buis en een spatel met gebogen uiteinde.Begin met het afwegen van vijf gram eigeel in een Falcon-buis van 50 milliliter. Voeg vervolgens 10 microliters okin NOIC-zuur met een concentratie van twee microliters per gram toe aan de Falcon-buis met het ei en meng dit krachtig met de spatel in de Falcon-buis. Gedurende één minuut wordt het ei vervolgens overgebracht naar een glazen bekerglas en verhit boven een bunsenbrander totdat het stolt en de consistentie geschikt is.Om kleine balletjes te maken, duurt dit gewoonlijk ongeveer 30 seconden. De balletjes eigeel moeten 0,2 gram per muis wegen. Het is belangrijk om de cumulatieve dosis bij alle muizen constant te houden.Ons bereik voor acceptabel cumulatief dosisherstel is 55 tot 100%. Begin met het opstellen van de kamers voor maaglediging. Gebruik schone kamers en afdekkingen die aan de lucht zijn gedroogd. Daarnaast moeten alle slangen die de kamer met de analyzer of de koolstofdioxide-luchttoevoer verbinden vrij zijn van vocht.Vocht kan het door de analyzer gelezen signaal beïnvloeden. Verbind de kamers met de inlaatbuizen die een luchtstroom leveren die is gereinigd van koolwaterstoffen. Het is belangrijk dat deze luchtstroom altijd constant is, omdat elke variatie in de hoeveelheid koolstofdioxide de basislijnwaarde kan veranderen.Sluit vervolgens de uitlaatbuizen van de kamers aan op het apparaat, sluit de buizen af en schakel de luchtstroom in. Breng een zeer kleine hoeveelheid Vaseline aan op het uiteinde van de kappen, zodat deze sluiten en gemakkelijk en stevig worden afgedicht. Deze luchtdichte afsluiting is noodzakelijk om alle door de muizen geproduceerde koolstofdioxide op te vangen.Weeg de muizen met behulp van een kleine muizenhouder om het stressniveau te verlagen. Het lichaamsgewicht wordt bepaald als maatstaf voor hun aanhoudende goede gezondheid. Plaats vervolgens elke muis in de juiste kamer.Het is belangrijk dat de lucht op dit moment door de kamers stroomt. Elke muis is voorzien van een trackingapparaat. De gegevens over het gewicht van de muis, de bloedglucosewaarde en de behandelingen worden bijgehouden via een software-database die gebruikmaakt van dit nummer.Wij maken gebruik van software waarmee we het ID-nummer van de muis automatisch direct aan de opgeslagen gegevens kunnen koppelen. Dit kan uiteraard ook handmatig worden gedaan. Om de meting te starten, laat u de muizen eerst wennen aan de kamers voordat u de luchtgehaltes aanpast.Zodra de muizen kalm lijken, wat enkele minuten kan duren, past u de luchtstroomsnelheid voor elke muizenkamer aan. Dit kan per muis verschillen. Gewoonlijk wordt de luchtstroom aan het begin van het experiment ingesteld om ervoor te zorgen dat de uitgeademde koolstofdioxide niveaus bereikt die detecteerbaar zijn door de gebruikte apparatuur, en om te waarborgen dat het niveau laag genoeg blijft voor een gezonde luchtverversing.We gebruiken initiële koolstofdioxideniveaus tussen 1000 en 1500 parts per million; controleer op luchtlekken als er problemen zijn bij het afstellen. Herhaal vervolgens het proces voor elk van de kamers en voer een nieuwe reeks metingen uit om te zien of de aanpassingen van de luchtstroom het koolstofdioxideniveau hebben gecorrigeerd. Het is belangrijk om een stabiele basislijnmeting te verkrijgen voordat de muizen worden gevoed.Zodra dit is bereikt, geef het eierdieet aan de eerste muis en noteer het tijdstip waarop elke muis zijn voedsel ontvangt. We voeren de procedure vier uur lang uit om voldoende waarden te verkrijgen voor het fitten van de 13 carbon dioxide-verrijkingscurve voor elke muis. Controleer de muizen elke 30 tot 60 minuten om er zeker van te zijn dat de carbon dioxide-niveaus nog steeds veilig zijn.Voor de muizen meet ons apparaat elke 25 seconden de concentraties van 12 koolstofdioxide, 13 koolstofdioxide en water. Hierdoor kunnen 12 muizen gelijktijdig worden geanalyseerd met een interval van vijf minuten tussen de metingen. Indien er handmatig wordt bemonsterd of een ander apparaat wordt gebruikt, dient u ervoor te zorgen dat de metingen met intervallen van minimaal vijf tot 10 minuten worden uitgevoerd.Bereid vóór het einde van de test nieuwe doosjes met voedsel voor, zodat de muizen direct na afloop van de test kunnen beginnen met eten. Deze grafiek representeert de datapunten van een muis met een normale maaglediging. Het toont een fractie van koolstof-13 die wordt teruggevonden in de uitgeademde lucht, uitgedrukt als een percentage van de toegediende dosis per uur als functie van de tijd.De datapunten worden gefit door een curve met de volgende vergelijking. Waarom is het percentage van de 13 koolstof dat per uur in de adem wordt teruggevonden en B en CA regressieconstanten? De T half wordt berekend door de parameters van deze curve in de inverse gammafunctie te plaatsen, zoals vastgesteld in een eerdere studie in ons laboratorium; de normale maagledigingstijd voor een niet-diabetische NOD-muis in de leeftijd van 9 tot 15 weken varieert van 62 tot 131 minuten, zoals weergegeven door het grijze kader.De blauwe curve is afkomstig van een muis met een versnelde maaglediging met een T half-waarde van 40 minuten, en de rode curve is afkomstig van een muis met een vertraagde maaglediging met een T half-waarde van 168 minuten. Concluderend demonstreert deze video hoe de maaglediging van vaste stoffen kan worden gemeten aan de hand van een niet-invasieve ademtest. Bij muizen hebben we laten zien hoe de dieren voor de test moeten worden voorbereid, hoe het voedsel wordt bereid en hoe de gegevens worden verzameld.Deze methode voor het meten van de maaglediging van vaste stoffen door toediening van 13C-octanoïnezuur is eerder beschreven voor mensen, en wij hebben het protocol aangepast voor gebruik bij muizen. Dit protocol biedt ons een waardevolle methode om herhaaldelijk de maaglediging bij dezelfde muis te meten, wat onderzoek naar de maaglediging bij langdurige aandoeningen mogelijk maakt. Er zijn verschillende toekomstige toepassingen voor deze methode.Bijvoorbeeld het testen van verschillende geneesmiddelen voor de behandeling van diabetische gastroparese.

assessment-gastric-emptying-non-obese-diabetic-mice-using-13c

Research

JoVE Journal

Medicine

Geneeskunde

This video introduces how to perform an oral glucose tolerance test on a laboratory mouse.

Oral Glucose Tolerance Test (OGTT): Measuring Glucose Metabolism in Mice

De in vivo meting van gladde spiercontracties langs het maag-darmkanaal van laboratoriumdieren blijft een krachtige, hoewel ondergebruikte, techniek. Flexibele, dubbele elementen spanningsmeters zijn niet commercieel verkrijgbaar en vereisen fabricage. Dit protocol beschrijft de constructie van betrouwbare, goedkope spanningsmeters voor acute of chronische implantatie bij knaagdieren.

Fabricage en Implantatie van Miniatuur Dual-element rekstrookjes voor het meten van<em&gt; In Vivo</em&gt; Maag-Weeën in Knaagdieren.

Bariatrische chirurgie is de meest efficiënte manier om het lichaamsgewicht te verminderen en de dodelijke metabole complicaties (diabetes, obesitas en dyslipidemie) die vaak gepaard gaan met morbide obesitas. Muismodellen van bariatrische chirurgie vormen een unieke aanwinst voor het ontcijferen van moleculaire mechanismen achter de gunstige effecten van deze operaties op diabetes, hypertensie en dyslipidemie.

Technieken van Sleeve Gastrectomie en Modified Roux-en-Y Gastric Bypass in Muizen

Het huidige artikel beschrijft het genereren en metabole karakterisering van vetrijke dieet-gevoed muizen als een model van dieet-geïnduceerde insulineresistentie en overgewicht. Het beschikt verder over gedetailleerde protocollen voor het uitvoeren van de orale glucose tolerantie test en de insuline tolerantie test, toezicht op de gehele lichaam wijzigingen van het glucose metabolisme in vivo.

Studie van In Vivo Glucose metabolisme in High-fat dieet-gevoed muizen met behulp van orale Glucose tolerantie Test (OGTT) en insuline tolerantie Test (ITT)

De incidentie van obesitas stijgt en verhoogt het risico van chronische longziekten. De onderliggende mechanismen en preventieve strategieën, welomschreven dier vast te stellen modellen nodig zijn. Hier bieden wij drie methoden (glucose-tolerantie-test, lichaam plethysmography en fixatie van de Long) te bestuderen van het effect van obesitas op pulmonaire resultaten in muizen.

Intraperitoneaal Glucose tolerantie Test, meting van de longfunctie, en fixatie van de longen om te bestuderen van de gevolgen van obesitas en verminderde stofwisseling op pulmonaire resultaten

Het huidige artikel beschrijft een gedetailleerd protocol voor isocaloric 2:1 intermitterende vasten te beschermen en te behandelen tegen obesitas en verminderde glucose metabolisme in wild-type en ob/ob muizen.

Beoordeling van de metabole effecten van isocaloric 2:1 intermitterende vasten bij muizen

Deze studie beschrijft de directe meting van de leverglucoseproductie in een polycysteus ovariumsyndroom muismodel door gebruik te maken van een stabiele isotopische glucose tracer via staartader in zowel nuchtere als glucoserijke toestanden in tandem.

Evaluatie van leverglucoseproductie in een muismodel met polycysteus ovariumsyndroom

Dit protocol introduceert twee methoden voor beeldacquisitie bij maagechografie. Daarnaast worden tips gegeven voor het interpreteren van deze informatie om te helpen bij de medische besluitvorming.

Echografie van het maagpunt bij volwassenen: beeldacquisitie en -interpretatie

Een test batterij (IMAP) voor het uitvoeren van een grondige beoordeling van de auditieve en cognitieve vaardigheden bij te dragen aan luistervaardigheid wordt beschreven. Het is snel te beheren, kind-vriendelijke en vrij van taal verwart. Stimulus generatie en het beheer protocol worden aangestuurd via een software-platform (IHR-STAR) te repliceerbaar procedures te verzekeren.

Making Sense van het Luisteren: De IMAP-testbatterij

Ammoniak is een belangrijk fysiologisch metaboliet dat relevant is voor verschillende ziekte- en welzijnstoestanden. Het is ook een moeilijk molecuul om in adem te meten, wat bepaalde voorzorgsmaatregelen vereist om nauwkeurige resultaten te verkrijgen. Niet alle factoren die ammoniak beïnvloeden, zijn bekend, maar vooruitgang kan moeilijk zijn zonder rekening te houden met deze factoren.

Snel en nauwkeurig de uitgeademde lucht Ammoniak Meting

Leer een niet-invasieve methode voor het meten van maaglediging bij muizen met behulp van een [13C]-octaanzuur ademtest. Deze techniek maakt herhaalde metingen mogelijk voor onderzoek naar gastroparese.

Beoordeling van de maaglediging in niet-obese diabetische muizen met behulp van een [

Meer video's verkennen