Beoordeling van Sensorimotor Functie in muismodellen van de ziekte van Parkinson

Het algemene doel van deze procedures is om de sensorische motorische functie kwantitatief te beoordelen. Bij muizen. We bereiken dit door een batterij van gevoelige gedragstests te gebruiken.

Deze omvatten uitdagende balkdoorwaadbaarheid, spontane activiteit in de cilinder en de kleefverwijderingstest, ook wel bekend als de DOT-test. Na de testen kunnen video-opnamen van de balkdoorwaadbaarheid en spontane activiteit worden geregistreerd. Uiteindelijk kunnen deze tests worden gebruikt om sensorische of motorische functie te karakteriseren in nieuwe genetische muismodellen, evenals in preklinische geneesmiddelenstudies die potentiële therapeutischa voor ziekten bestuderen.

Het belangrijkste voordeel van deze tests ten opzichte van andere tests, vooral geautomatiseerde, is dat we ze zeer gevoelig vinden voor motorische disfunctie, gevoeliger dan tests zoals de rotorstaaf. Bovendien zijn deze tests eigenlijk zeer kosteneffectief, vooral in vergelijking met geautomatiseerde, die duizenden dollars kunnen kosten. Deze tests kunnen sleutelvraagstukken beantwoorden op het gebied van bewegingsstoornissen in het algemeen, en ze zijn zeer nuttige uitkomstmaten.

Bij het testen van potentiële therapeutischa, wordt de balk opgesteld door drie schone muizenkooien op een tafelblad of in een muizenkooi te keren. Veranderende afzuigkap, lijn de kooien gelijkmatig uit zodat ze de lengte van een meter balk kunnen ondersteunen. Verzamel vervolgens de vier secties van de balk van de breedste naar de smalste sectie en plaats ze bovenop de omgekeerde muizenkooien.

Plaats de kooi van de muizen die u van plan bent te testen op zijn zij aan het uiteinde van de balk zodat de smalste kant van de balk recht in de kooi leidt. Om de ondersteunde proef te beginnen, pak de eerste muis bij de basis van zijn staart en ondersteun zijn achterpoten met de palm van je hand. Plaats de muis aan de brede kant van de balk en laat zijn staart los en verwijder je hand.

Laat de muis snuffelen en rondlopen om zich beter te oriënteren op de inrichting. Als de muis zich omdraait, leid hem zachtjes in de gewenste richting. Om de muis aan te moedigen om de baan af te leggen, til het hokje op, houd het in dezelfde positie op zijn zij, en breng het dicht bij de testmuis.

Zodra de muis begint te proberen het hokje binnen te gaan, beweeg het terug zodat de muis niet binnengaat, maar een stap naar voren maakt. Laat de muis uiteindelijk het hokje binnengaan. Doe dezelfde procedure voor elke muis in de kooi.

Reinig de balk grondig tussen de kooien met dierenruimte schoonmaakmiddel binnen een kooi. Het is belangrijk om eventuele urine of uitwerpselen van de balk te verwijderen voordat de volgende muis wordt geplaatst, omdat dit de volgende muis kan afleiden. Zodra alle muizen in de kooi één ondersteunde proef hebben doorlopen, pak de eerste muis opnieuw op en plaats hem indien nodig aan de brede kant van de balk.

Richt de muis voorzichtig in de gewenste richting en raak lichtjes zijn achterkant aan om hem aan te moedigen zich langs de lengte van de balk richting zijn hokje te bewegen, corrigeer de muis als hij stopt met snuffelen of van de balk loopt. Houd uw hand in de buurt om de muis naar het uiteinde van de balk te leiden. Minimaliseer stoppen en verkennen terwijl u op de balk bent.

Hoe meer dit tijdens het trainen wordt gedaan, hoe minder de muis het doet. Tijdens het testen eindigt de proef wanneer de muis een van zijn vier ledematen in het hokje plaatst, de volgende muis kan dan zijn tweede proef ontvangen. Muizen ontvangen in totaal vijf proeven op de eerste trainingsdag, afwisselend tussen muizen, zodat elke muis een interproefinterval van 30 seconden of meer heeft.

Op de tweede dag, voer vijf extra proeven uit voor elke muis met behulp van dezelfde balkopstelling als op de eerste dag, de muizen hebben geen hulp nodig, maar moeten mogelijk worden gecorrigeerd of op de rug worden aangeraakt om te voorkomen dat ze stoppen of verkennen. 24 uur later, begin de testdag. Stel de balk op dezelfde manier op zoals de vorige twee trainingsdagen.

Plaats echter een gaasrooster dat overeenkomt met elke balkbreedte bovenop elke balksectie. Gebruik een videocamera om alle balkdoorwaadbaarheidsproeven op te nemen voordat elke proef begint. Label een kaart met de essentiële experimentinformatie zoals datum, muisnummer en proefnummer, en plaats deze voor de camera.

Neem twee tot drie seconden op voorafgaand aan elke proef, zodat het duidelijk is welke muis wordt getest en op welke proef deze zich bevindt. Voor elke test, plaats de muis op het rasteroppervlak op de breedste sectie en neem op terwijl het zich langs de balk beweegt, neem op zodat de volledige lengte van het lichaam van de muis zichtbaar is. De camera moet zo worden gepositioneerd dat het raster in het midden van de kijker staat.

Laat elke muis vijf keer door de test op het rasteroppervlakbalk lopen, waarbij deze tussen elke muis wordt schoongemaakt. Om het experiment met spontane activiteit op te zetten, schik twee kooien naast elkaar op ongeveer 18 centimeter afstand zodat de voorkanten van de kooien naar de experimentator gericht zijn. Indien nodig, plaats een extra kooi achter de andere twee kooien om als ondersteuning voor de spiegel te dienen.

Plaats vervolgens een stuk glas op de twee kooien en positioneer het zodat het glas wordt ondersteund door de buitenrand van de eerste twee kooien. Plaats vervolgens een cilinder bovenop het glas en een spiegel in een hoek onder het glas. Leunend op de derde kooi achter.

De hoek kan variëren van 30 tot 45 graden, maar belangrijker is dat de weergave van de camera de volledige diameter van de cilinder moet omvatten. Zodra het experiment is opgezet, plaats de videocamera voor de spiegel en pas zowel de spiegel als de videocamera aan totdat u de volledige diameter van de onderkant van de cilinder kunt bekijken. Stel vervolgens een timer in op drie minuten en label een kaart met de belangrijke experimentdetails zoals in de vorige experimentvideo.

Neem de label op voor twee tot drie seconden. Stop dan. Om het experiment uit te voeren