Name: A Novel Ex vivo Cultuur Methode voor de embryonale Mouse Hart (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2013-05-24T13:00:00.000+00:00
Duration: 7 min 47 s
Description: Leer een ex vivo-cultuurmethode voor embryonale muizenharten met behulp van verdunde Matrigel. Deze techniek maakt langdurige observatie van hartontwikkeling mogelijk voor cardiovasculair onderzoek.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

playerTrialDesktop

Wij willen Andrea Portbury bedanken voor het kritisch lezen van het manuscript en het NIH (subsidie ​​# R01HL061656) voor financiële steun.

1. Uitsnijden van de Embryonale Hearts <ol><li> Euthanaseren een timed-zwangere muis op de gewenste embryonale dag met behulp van een goedgekeurde euthanasie techniek. Alle experimenten werden goedgekeurd door de Institutional Animal Care en gebruik Comite aan de Universiteit van North Carolina in Chapel Hill. </li><li> Deze spray het vrouwtje met 70% ethanol voorafgaand aan dissectie. Open buikholte van het vrouwtje op te halen en accijnzen de baarmoeder hoorn. </li><li> Plaats de baarmoeder hoorn in een petrischaal met koude 1x fosfaat-gebufferde zoutoplossing (PBS) en spoelen indien nodig. Knip de baarmoedertak via de middellijn naar de bijgevoegde embryonale zakken bloot. </li><li> Knip een embryonale sac en halen een embryo. Plaats de embryo in een tweede petrischaal met koude PBS. Terug de petrischaal met de baarmoedertak om ijs. </li><li> Onthoofden de embryo toegang tot de borstwand verbeteren. Als genotypering is nodig, verwijderen en opslaan van de staart in een Eppendorf buis op ijs geplaatst. </li><li> Met deembryo op zijn rug, opengesneden de borstwand naar het hart en de longen te visualiseren. Afhankelijk van het stadium, kan de borstwand transparant zijn. </li><li> Til het hart met behulp van een tang en snijd onder de schepen. Vervolgens snijd boven de grote vaten naar het hart te bevrijden. Verwijder eventueel vreemde weefsels. </li><li> Plaats het hart in een putje van een 24-well schotel gevuld met koude PBS en plaats de schaal op het ijs. </li><li> Herhaal de vorige stappen totdat harten zijn uitgesneden uit alle embryo&#39;s. </li></ol> 2. Cultuur Set-up <ol><li> In een laminaire afzuigkap, combineren koude Matrigel en het gewenste kweekmedium (bijv. 10% foetaal bovine serum (FBS) in Dulbecco&#39;s Gemodificeerd Eagle Medium (DMEM)) in een 1:1 verhouding. Niet pre-warme het kweekmedium. </li><li> Het houden van de verdunde Matrigel op ijs, pipet 500-1000 ul van de verdunde oplossing in een putje van een 24-well cultuur schotel die ook wordt gehandhaafd op ijs. </li><li> In de kap, zorgvuldig te halen en plaats de weggesnedenhart in een goed van de Matrigel-bevattende cultuur schotel met behoud van de cultuur schotel op het ijs. </li><li> Als oriëntatie van de ingesloten hart is cruciaal: Royaal spuiten van een omgekeerde microscoop en de omringende ruimte met 70% ethanol. In de kap, plaats de uitgesneden hart in een goed van de Matrigel-bevattende kweekplaat terwijl nog op het ijs. Vervolgens plaatst u de plaat op een microscoop en snel oriënteren het uitgesneden hart als de Matrigel begint te stollen. </li><li> Plaats de kweekschaal in een bevochtigde 37 ° C incubator (5% CO2) en laat de Matrigel stollen gedurende ongeveer 30 minuten. </li><li> Voeg 1 ml voorverwarmde kweekmedium aan elk putje met een hart. </li><li> Harten kunnen in de cultuur blijven gedurende ten minste vier dagen. Wijzigen kweekmedium twee dagen wordt aanbevolen. </li></ol> 3. Fixatie en Visualisatie <ol><li> Indien gewenst, voeg een fluorescente live-cell kleurstof (bv. Syto-16) naar de live hart visualiseren. Fotografie zal wordenbeperkt tot de kant van het hart dat zichtbaar basis van de positie waarin deze is ingebed. </li><li> Als post-kweken analyses (bv. ganse berg imaging of snijden) zullen worden uitgevoerd, verwijder het kweekmedium en vervang met koud 4% formaldehyde. Zet de schaal op ijs gedurende 30 minuten. </li><li> Na de koude formaldehyde en ijs te bevorderen ontbinding van de Matrigel, vervang het fixeermiddel (en Matrigel) met verse formaldehyde en repareren harten overnacht bij 4 ° C. </li><li> Was de harten met buffer (bijv. PBS of Tris) en bewaar bij 4 ° C tot verdere analyse. </li></ol>

<ol><li>Tu, S., Chi, N. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Zebrafish+models+in+cardiac+development+and+congenital+heart+birth+defects%5BTitle%5D)+AND+%22Differentiation%22%5BJournal%5D)">Zebrafish models in cardiac development and congenital heart birth defects.</a> Differentiation. 84, 4-16 (2012).</li>
<li>Lavine, K. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fibroblast+growth+factor+signals+regulate+a+wave+of+Hedgehog+activation+that+is+essential+for+coronary+vascular+development%5BTitle%5D)+AND+%22Genes+Dev%22%5BJournal%5D)">Fibroblast growth factor signals regulate a wave of Hedgehog activation that is essential for coronary vascular development.</a> Genes Dev. 20, 1651-1666 (2006).</li>
<li>Red-Horse, K., Ueno, H., Weissman, I. L., Krasnow, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Coronary+arteries+form+by+developmental+reprogramming+of+venous+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Coronary arteries form by developmental reprogramming of venous cells.</a> Nature. 464, 549-553 (2010).</li>
<li>Stuckmann, I., Evans, S., Lassar, A. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Erythropoietin+and+retinoic+acid%2C+secreted+from+the+epicardium%2C+are+required+for+cardiac+myocyte+proliferation%5BTitle%5D)+AND+%22Dev.+Biol%22%5BJournal%5D)">Erythropoietin and retinoic acid, secreted from the epicardium, are required for cardiac myocyte proliferation.</a> Dev. Biol. 255, 334-349 (2003).</li>
<li>Zhang, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+FGF-BMP+signaling+axis+regulates+outflow+tract+valve+primordium+formation+by+promoting+cushion+neural+crest+cell+differentiation%5BTitle%5D)+AND+%22Circ.+Res%22%5BJournal%5D)">The FGF-BMP signaling axis regulates outflow tract valve primordium formation by promoting cushion neural crest cell differentiation.</a> Circ. Res. 107, 1209-1219 (2010).</li>
<li>Pillekamp, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Establishment+and+characterization+of+a+mouse+embryonic+heart+slice+preparation%5BTitle%5D)+AND+%22Cellular+Physiology+and+Biochemistry%3A+international+journal+of+experimental+cellular+physiology%2C+biochemistry%2C+and+pharmacology%22%5BJournal%5D)">Establishment and characterization of a mouse embryonic heart slice preparation.</a> Cellular Physiology and Biochemistry: international journal of experimental cellular physiology, biochemistry, and pharmacology. 16, 127-132 (2005).</li>
<li>Habeler, W., Peschanski, M., Monville, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Organotypic+heart+slices+for+cell+transplantation+and+physiological+studies%5BTitle%5D)+AND+%22Organogenesis%22%5BJournal%5D)">Organotypic heart slices for cell transplantation and physiological studies.</a> Organogenesis. 5, 62-66 (2009).</li>
<li>Janssen, P. M., Lehnart, S. E., Prestle, J., Hasenfuss, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Preservation+of+contractile+characteristics+of+human+myocardium+in+multi-day+cell+culture%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Mol.+Cell+Cardiol%22%5BJournal%5D)">Preservation of contractile characteristics of human myocardium in multi-day cell culture.</a> J. Mol. Cell Cardiol. 31, 1419-1427 (1999).</li>
<li>Brandenburger, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Organotypic+slice+culture+from+human+adult+ventricular+myocardium%5BTitle%5D)+AND+%22Cardiovasc.+Res%22%5BJournal%5D)">Organotypic slice culture from human adult ventricular myocardium.</a> Cardiovasc. Res. 93, 50-59 (2012).</li>
<li>Weaver, M., Dunn, N. R., Hogan, B. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Bmp4+and+Fgf10+play+opposing+roles+during+lung+bud+morphogenesis%5BTitle%5D)+AND+%22Development%22%5BJournal%5D)">Bmp4 and Fgf10 play opposing roles during lung bud morphogenesis.</a> Development. , 127-2695 (2000).</li>
<li>Viragh, S., Challice, C. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+origin+of+the+epicardium+and+the+embryonic+myocardial+circulation+in+the+mouse%5BTitle%5D)+AND+%22Anat.+Rec%22%5BJournal%5D)">The origin of the epicardium and the embryonic myocardial circulation in the mouse.</a> Anat. Rec. 201, 157-168 (1981).</li>
<li>Kirby, M. L. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aKirby%2C+ML+%22Cardiac+Development%22">Cardiac Development</a>. , Oxford University Press. (2007).</li>
<li>Arima, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Angiogenic+morphogenesis+driven+by+dynamic+and+heterogeneous+collective+endothelial+cell+movement%5BTitle%5D)+AND+%22Development%22%5BJournal%5D)">Angiogenic morphogenesis driven by dynamic and heterogeneous collective endothelial cell movement.</a> Development. 138, 4763-4776 (2011).</li>
</ol>

De auteurs verklaren dat zij geen concurrerende financiële belangen.

De huidige cultuur systeem vormt significante voordelen voor de embryonale muis hart onderzoeken. Deze cultuur systeem bewaart myocardcontractiliteit en de coronaire plexus, met beperkte tekenen van necrose, zelfs na vier dagen in de cultuur. Verder, de halfvaste matrix bevat voldoende steun aan de driedimensionale morfologie van het ontwikkelen van hart behouden terwijl flexibiliteit contract en om beklede kralen tijdens kweek op zijn plaats. Desondanks steun, deze matrix is ​​permeabel voor fluorescente kleurstoffen z...

De afgelopen jaren heeft de transgene muis is het overheersende modelsysteem voor het bestuderen van de ontwikkeling hartafwijkingen. Echter, andere modelorganismen, zoals de zebravis, bewezen aanzienlijke voordelen boven de muis hebben. Drie belangrijke voordelen van de zebravis zijn de externe leggen van eieren, voor gemakkelijke toegang tot de embryo, de optische transparantie van de embryo&#39;s die eenvoudige visualisatie van de ontwikkeling van het hart toelaten, en het gemak van aanbrengen van kleine moleculaire behandelingen te moduleren ontwikkeling van het embryo 1. Aldus zou de ontwikkeling van een cultuur techniek die ex utero groei van een embryonale orgaan toegestaan ​​omzeilen, althans gedeeltelijk, de beperkingen vandaag op onderzoekers die de ontwikkeling in transgene muizen. Ex vivo cardiale kweek zijn ontwikkeld in zowel het kuiken en muisembryo dat behandeling met kleine moleculen en analyse van de ver mogelijklende regio&#39;s van het hart te communiceren 2-6. Voor geheel muizenhart cultuur, harten die uit embryo&#39;s tot embryonale (E) 12.5 van leeftijd kan in kweekmedium geplaatst worden met of zonder schommelen 2,3,5. Met deze techniek, zijn embryonale harten succes geïncubeerd om de gelijkwaardigheid van E13.5 en harten gekweekt met schudden werden wel drie dagen (vanaf E10.5) 3 gehandhaafd. Er zijn echter geen studies meldde de succesvolle cultuur van de harten van oudere embryo&#39;s. Ook hebben reddingsexperimenten beperkt tot de toepassing van de therapeutische agens wereldwijd aan het kweekmedium 2. Een plak kweeksysteem waarin harten uitgesneden, ingebed en coupes met een vibratome is ook gebruikt bij jongere harten, zoals E12.5 muisharten en Hamburger-Hamilton stage 36 (ongeveer E16 in de muis) chick hearts 2,4,6, en ouder harten, zoals postnatale en volwassen muis hearts en volwassen menselijke harten 7,8. Terwijl de embryonale analyses hebben doorgaans gebruikt 150-urn dikke secties 2,4, kan snijdikte een groot als 500 micrometer zijn zonder bewijs van zuurstoftekort 8. Deze slice culturen zijn gehandhaafd zolang twee maanden in de cultuur, met de meeste schijfjes behoud contractiliteit in deze periode 9. Vergeleken met studies in geïsoleerde cardiomyocyten, die slice culturen kan de co-cultuur van cardiomyocyten met naburige celtypes en een bruikbare werkwijze voor ex vivo analyse. Echter, deze culturen vereisen uitgebreidere opstelling dan simpelweg plaatsen van een hart in kweekmedium (bijv. inbedding het levende hart voor het snijden op vibratome) en de analyses is uiteraard beperkt tot het gedeelte van het hart binnen het gedeelte. Gezien de bovenstaande beperkingen voor het kweken van embryonale muis harten en de rijkdom van de transgene muizen available voor studie, hebben we een ex vivo muizenhart cultuur systeem vergelijkbaar met een ex vivo long kweeksysteem ontwikkeld door Weaver ontwikkeld, et al.. 10 Onze cultuur systeem maakt op lange termijn de cultuur en de visualisatie van de verbouwing coronaire circulatie binnen hele embryonale muis harten. Bovendien, het gebruik van Matrigel kunnen kralen worden vastgehouden in het hart, waardoor een gelokaliseerde behandeling met therapeutische middelen. Deze experimenten kunnen op verschillende ontwikkelingsstadia tijdstippen worden uitgevoerd om het effect van een bepaalde behandeling te vergelijken op een werkwijze zoals coronaire formatie. Omdat kleine moleculen kunnen diffunderen door Matrigel, kan deze cultuur systeem ook gebruikt worden om de cultuur ontleed regio&#39;s van het hart bij elkaar om te bepalen of specifieke cel-cel contacten die nodig zijn voor bepaalde ontwikkelingsprocessen of dat paracrienen van de ene regio naar de andere is zijn noodzakelijk. Deze cultuur systeemis relatief eenvoudig en, in tegenstelling tot de slice kweeksysteem maakt gebruik van basiscultuur reagentia en configuraties die gemakkelijk beschikbaar in de meeste laboratoria. In het kort, worden uitgesneden embryonale hart gekweekt in verdunde Matrigel, waar semi-vaste drager verschaft. Deze steun is voldoende om de driedimensionale morfologie van het hart te handhaven en daarbij tevens het hart samentrekken. Met dit systeem kan geheel harten van oudere muizen embryo&#39;s (E14.5-E16.5) in cultuur worden gehandhaafd voor maximaal vier dagen. De gehele coronaire plexus wordt gehandhaafd, in tegenstelling tot in de slice culturen, zodat eventuele signalering signalen die zich voordoen tussen de verschillende regio&#39;s van het hart aanwezig blijven. Bovendien kunnen levende cellen fluorescerende kleurstoffen het Matrigel doordringen tot visualisatie van de levende hart toe, en proteïne-geconjugeerde kralen kunnen in de buurt van het hart worden geplaatst om een ​​gelokaliseerde signalering bron bieden. Samen zijn deze voordelen maken deze techniek een ideale methode voor het bestuderen van ontwikkelingsprocessen in de embryonic muis hart.

<table><tbody><tr><td colspan="4">REAGENTS</td></tr><tr><td>Timed-pregnant mice</td><td></td><td></td><td>Te worden gedissecteerd in het embryonale stadium van belang</td></tr><tr><td>PBS (1x)</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>DMEM</td><td>Cellgro</td><td></td><td></td></tr><tr><td>FBS</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>F2442</td><td></td></tr><tr><td>Growth factor-reduced Matrigel</td><td>BD Bioscience</td><td>356231</td><td></td></tr><tr><td>Syto-16</td><td>Invitrogen</td><td>S7578</td><td>Gebruikt zoals aangegeven in 13 </td></tr><tr><td>24-well culture plate</td><td>Fisher Scientific</td><td>07-200-84</td><td></td></tr><tr><td colspan="4">EQUIPMENT</td></tr><tr><td>Stereoscopic microscope</td><td>Nikon</td><td>SMZ645</td><td></td></tr><tr><td>Cell culture incubator</td><td>Thermo</td><td>3110</td><td></td></tr></tbody></table>

a novel<em&gt; ex vivo</em&gt; cultuur methode voor de embryonale mouse hart

A Novel Ex vivo Culture Method for the Embryonic Mouse Heart

Ontwikkelingsstudies in de muis worden gehinderd door de ontoegankelijkheid van het embryo tijdens de dracht. Aldus protocollen het isoleren en kweken individuele organen plaats zijn essentieel voor een werkwijze voor het visualiseren van zowel veranderingen in de ontwikkeling en waardoor nieuwe behandelingsstrategieën bieden. Om de lange termijn cultuur van het embryonale hart te bevorderen in de late stadia van de zwangerschap, hebben we een protocol waarin het uitgesneden hart wordt gekweekt in een semi-vaste, verdunde Matrigel ontwikkeld. Dit substraat verschaft voldoende steun aan de driedimensionale structuur te behouden, maar is flexibel genoeg om verdere krimp mogelijk. In het kort, worden harten uitgesneden uit het embryo en in een mengsel van koude Matrigel 1:1 verdund met kweekmedium. Na het verdunde Matrigel stolt, wordt groeimedium toegevoegd aan de kweekschaal. Harten uitgesneden zo laat embryonale dag 16,5 levensvatbaar waren voor vier dagen na de dissectie. Analyse van de coronaire plexus blijkt dat deze methode nietverstoren coronaire vasculaire ontwikkeling. Zo presenteren we een nieuwe werkwijze voor de lange termijn kweek van embryonale hart.

Met deze techniek het hart handhaaft zijn driedimensionale morfologie en levensvatbaar blijft, zoals aangegeven door aanhoudende contracties (Film 1). Deze samentrekkingen zijn steeds meer prominent in de atria dan in de ventrikels. Na cultuur, harten kan worden gefixeerd en verwerkt voor histologie en immunohistochemie of specifieke marker expressie of structuren te onderzoeken. Figuur 1A toont de basis van de ventrikels en de grote slagaders van een embryonale muizen hart dat werd gek...

Ontwikkelingsstudies in de muis worden gehinderd door de ontoegankelijkheid van het embryo tijdens de dracht. Om de lange termijn cultuur van het embryonale hart te bevorderen in de late stadia van de zwangerschap, hebben we een protocol waarin het uitgesneden hart wordt gekweekt in een semi-vaste, verdunde Matrigel ontwikkeld.

A Novel<em&gt; Ex vivo</em&gt; Cultuur Methode voor de embryonale Mouse Hart

Developmental studies in the mouse are hampered  by the inaccessibility of the embryo during gestation. Thus, protocols to  isolate and culture individual ...

Het algemene doel van deze procedure is het excideren van het embryonale hart voor ex vivo kweek. Dit wordt bereikt door eerst de uterine hoorn uit een drachtige vrouwelijke muis te halen. Vervolgens wordt een embryo retrieved en klaargemaakt voor dissectie.Vervolgens wordt de embryonale borstwand geopend om het hart zichtbaar te maken. Ten slotte wordt het hart geëxcyseerd en geplaatst in een kweekput met verdunde matrigel. Uiteindelijk kunnen resultaten worden verkregen die een gezond, levend hart tonen door middel van observatie onder een lichtveldmicroscoop.Het belangrijkste voordeel van deze techniek ten opzichte van andere methoden, zoals schommelende culturen, is dat het hart kan worden behandeld met zowel lokale middelen, zoals een proteïne geconjugeerd aan een kraal, als met globale middelen, zoals het toevoegen van een klein molecuul aan de matrigel. De implicaties van deze techniek strekken zich uit tot therapie voor cardiovasculaire ziekten, omdat het mogelijk maakt om gebeurtenissen binnen gespecialiseerde segmenten van het hart te onderzoeken in de context van het volledige intacte orgaan. Nadat een zwangere muis op de gewenste embryonale dag is geëuthanaseerd, bespro

a-novel-ex-vivo-culture-method-for-the-embryonic-mouse-heart

Research

JoVE Journal

Biology

Biologie

We beschrijven de dissectie en ex vivo cultuur van muis embryonale huid. De cultuur systeem houdt een lucht-vloeistof-interface over het weefsel oppervlak en maakt beeldvorming op een omgekeerde microscoop. Melanoblasten, een component van de ontwikkeling huid, worden fluorescerend gemerkte waardoor hun gedrag wordt waargenomen met behulp van confocale microscopie.

Ex vivo cultuur van muis embryonale Huid en live-beeldvorming van melanoblast Migratie

We beschrijven een aantal methoden om kleurstoffen injecteren van DNA vectoren, virussen en cellen om zowel cellot en fenotype van endogene en geënte cellen uit embryonale of pluripotente cellen in muizenembryo's op embryonale dag (E) 9,5 en latere stadia bewaken ontwikkeling.

Cell Labeling en Injectie in ontwikkelingslanden Embryonale Mouse Hearts

Mutaties die leiden tot aangeboren hartafwijkingen profiteren van in vivo onderzoek van de hartstructuur tijdens de ontwikkeling, maar hoogwaardige structurele studies in het embryonale muishart zijn technisch uitdagend. Hier presenteren we een robuuste immunofluorescentie- en beeldanalysemethode om cardiomyocyt-specifieke structuren in het zich ontwikkelende muishart te beoordelen.

Analyse van Cardiomyocyte Development behulp Immuunfluorescentie in Embryonale Muis Hart

Hier beschrijven we methoden voor het isoleren van primaire muis epicardiale cellen door middel van een uitgroei-kweektest en het beoordelen van de functionele migratie van epicardiale-afgeleide cellen (EPDC) met behulp van een ex vivo hartkweeksysteem. Deze protocollen zijn geschikt voor het identificeren van genetische en chemische modulatoren van epicardiale epitheel-naar-mesenchymale overgang (EMT) en mobiliteit.

Epicardiale uitgroei Cultuur en Assay<em&gt; Ex Vivo</em&gt; Evaluatie van Epicardial-afgeleide Cell Migratie

Voor de eerste keer presenteren we hier een reproduceerbare bandingprocedure om de hemodynamiek in het zich ontwikkelende hart ex ovo te veranderen. Dit wordt bereikt door de uitstroomtractus (OFT) gedeeltelijk te constricten.

Een roman<em&gt; Ex Ovo</em&gt; Banding techniek voor Intracardiale Hemodynamica Alter in een embryonale Chicken System

Het epicardium is een essentiële bron van multipotente cardiovasculaire stamcellen en paracriene factoren die nodig zijn voor cardiovasculaire ontwikkeling en regeneratie. We beschrijven hier een methode om muis embryonale epicardiale cellen te kweken.

In Vitro Cultuur van epicardiale cellen uit muis embryonale Heart

Bij deze methode zijn embryonale cardiale weefsels chirurgisch microdissected, losgekoppeld, fluorescently label en host embryonale weefsels ingeplant. Dit biedt een platform voor het bestuderen van de individu of weefsel niveau developmental organisatie onder ectopische hemodynamische voorwaarden en/of veranderde omgevingen van de paracrine/juxtacrine.

Microinjection-gebaseerd systeem voor In Vivo implantatie van embryonale Cardiomyocytes in het aviaire Embryo

We presenteren de protocollen te onderzoeken muis hart ontwikkelen met behulp van microscopie van de hele berg epifluorescerende op muis embryo's ontleed van ventriculaire specifieke MLC-2v-tdTomato verslaggever knock-in muizen. Deze methode laat ons direct visualiseren van elke fase van de ventriculaire formatie tijdens de ontwikkeling van de hart van de muis zonder arbeidsintensieve histochemische methoden.

Analyse van de ontwikkeling van de cardiale kamer tijdens muis embryogenese met hele Mount Epifluorescence

Het huidige protocol beschrijft aortacantnulatie en retrograde perfusie van het ex-vivo neonatale muizenhart.  Een tweepersoonsstrategie, met behulp van een ontleedmicroscoop en een stompe kleine naald, maakt betrouwbare cannulatie mogelijk. Kwantificering van longitudinale contractiele spanning wordt bereikt met behulp van een krachttransducer die is verbonden met de top van de linker ventrikel.

Aangepaste techniek voor het gebruik van neonatale muizenharten in het Langendorff-preparaat

We presenteren een gedetailleerd protocol voor het kweken en beeldvorming van muizenembryo's dat 3D + tijdbeeldvorming van cardiale voorlopercellen mogelijk maakt. Deze video-toolkit behandelt de belangrijkste vaardigheden die nodig zijn voor succesvolle live imaging die anders moeilijk te verkrijgen zijn uit tekstpublicaties.

Live beeldvorming van vroege cardiale voorlopers in het muizenembryo

Dit protocol presenteert een gedetailleerd methodologisch kader voor op elektroporatie gebaseerde transgenese van hartcellen in zich ontwikkelende muizenharten. De video-items die hier worden aangeboden, vergemakkelijken het leren van deze veelzijdige techniek.

Een efficiënte transgenesebenadering voor genafgifte in het embryonale hart van muizen

Leer een ex vivo-cultuurmethode voor embryonale muizenharten met behulp van verdunde Matrigel. Deze techniek maakt langdurige observatie van hartontwikkeling mogelijk voor cardiovasculair onderzoek.

A Novel

Meer video's verkennen