Name: Parabiose in Muizen: Een gedetailleerd protocol (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2013-10-06T21:30:00.000+00:00
Duration: 7 min 56 s
Description: Leer het parabioseprotocol voor muizen om een gedeeld circulatiesysteem te creëren. Deze chirurgische techniek maakt bloedchimerisme binnen 10 tot 14 dagen mogelijk zonder immunosuppressie.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

De auteurs willen graag Adriane Mosley en Libuse Jerabek (Stanford) bedanken voor hulp bij de chirurgische techniek.

Alle dierlijke studies werden uitgevoerd volgens de richtlijnen van UCLA Animal Care en gebruik Comite en de National Institutes of Health Guide voor de zorg en het gebruik van proefdieren. De duur van de hieronder beschreven procedure is ongeveer 45-60 minuten van begin tot eind. 1. Bereiding van chirurgische Field <ol><li> Voer de procedure in een schone dier operatie kamer. </li><li> Uitrusting: isofluraan Vaporizer, Gaymer T Pomp met verwarming pad. </li><li> Steriele instrumenten: twee gebogen pincet, fijne schaar, naald houder. </li><li> Steriele handschoenen moeten worden gebruikt tijdens de gehele procedure. </li></ol> 2. Voorbereiding van de dieren <ol><li> Plaats twee mannelijke of vrouwelijke muizen van dezelfde genetische achtergrond van vergelijkbaar gewicht en grootte in dezelfde kooi en monitor minstens twee weken harmonieuze samenleven garanderen. Vrouwelijke muizen hebben de voorkeur vanwege hun minder agressief gedrag. </li><li> Verdoven dieren doormet een isofluraan vaporizer. Plaats muizen in een Posi-Seal inductie kamer verbonden met de verdamper isofluraan (4-5% v / v). Na anesthesie geïnduceerd Breng het dier de vacht scheren stippellijn onderhouden van de anesthesie tijdens de procedure via een neuskegel verbonden met isofluraan (1,5-2% v / v). Solliciteer oogzalf met een Q-tip om droge ogen te voorkomen. </li><li> Plaats het dier op de rugligging. Grondig scheren linkerkant van de muis op de linker en de rechterkant van de muis geplaatst rechts vanaf ongeveer 1 cm boven de elleboog tot 1 cm onder de knie. </li><li> Aseptisch bereiden de geschoren gebieden door het grondig af te vegen (2-3x) met Betadine doordrenkte doekjes gevolgd door alcohol doekjes. Leg de muizen op een verwarmd kussen bedekt met een steriel gaasje. </li><li> Analgesie, beheren Carprofen en Buprenorfine intraperitoneaal of subcutaan in een dosis van 10 mg / kg en 0,1 mg / kg respectievelijk. </li><li> Plaats dieren aan hun kant, rug aan rug, met eendjacent geschoren gebieden naar boven. Om verontreiniging van het chirurgische gebied te voorkomen, hebben betrekking op de muizen met een steriel laken bloot alleen het operatiegebied. Maak een klein laken opening naar steriel blijven bij het uitvoeren van de operatie. We maakten het laken venster groot om een ​​beter zicht te hebben tijdens video-opnamen. </li></ol> 3. Parabiose <ol><li> Met een scherpe schaar Voer longitudinale incisies op de geschoren zijden van elk dier vanaf 0,5 cm boven de elleboog tot aan 0,5 cm onder het kniegewricht (figuur 1). Na de incisie, voorzichtig los de skin uit de subcutane fascia door die de huid met een paar gebogen pincet en scheiden de fascia met een tweede paar 0,5 cm vrije huid te creëren. Voer deze scheiding langs de gehele incisie. </li><li> Begin met het verbindingsstuk door aan de linker olecranon van een dier rechts olecranon van de andere. Zowel olecranons en kniegewrichten zijn duidelijk te onderscheiden volgende the huidincisie. Ter vergemakkelijking van de toetreding, buig de elleboog van de eerste muis en laat de naald van de niet-absorbeerbare 3-0 hechtdraad onder de olecranon. Evenzo, buig de elleboog van de tweede muis en geef dezelfde hechtdraad eronder. Bevestig gewrichten strak door een dubbele chirurgische knoop. </li><li> Sluit de kniegewrichten volgens dezelfde procedure. </li><li> Na de bevestiging van de gewrichten, sluit de huid van de twee dieren met een doorlopende absorbeerbare 5-0 hechtdraad Vicryl vanaf ventraal van de elleboog naar de knie. Om breuk huid en ontmenging tegen voeren een strakke hechtdraad afsluiting van de huid in het gebied rond de ellebogen en knieën. Zodra de ventrale beslag huid is voltooid, voert u een dubbele chirurgische knoop. Leg de muizen in buikligging en blijven de hechtdraad dorsally eindigend met een dubbele chirurgische knoop. Controleer de continuïteit van de hechtdraad en bevestigen gebrek openingen. </li><li> Dien 0,5 ml 0,9% NaCl subcutaan aan elke muis gedehydrateerde vorm voorkomendration. </li></ol> 4. Postoperatief herstel <ol><li> Houd dieren op verwarmd pad tot herstel. </li><li> Na herstel, bieden pijnstillers carprofen en buprenorfine. Herhaal intraperitoneaal of subcutaan om 24 en 12 uur, respectievelijk, voor 48 uur bij dezelfde doseringen boven (stap 2.5) beschreven. Monitor dieren op tekenen van pijn en verdriet, zoals schudden, lethargie, kauwen van staart, gebogen rug, gebrek aan verzorging, enz. daags gedurende twee weken. </li><li> Profylactisch behandelen muizen met Sulfamethoxazol / Trimethoprim orale suspensie in hun waterfles 2 mg sulfa / ml 0,4 mg trim / ml gedurende 10 dagen om bacteriële infecties te voorkomen. </li><li> Huis elk parabiotic pair in een schone kooi met monolithische strooisel (bijv. papieren handdoek of een absorberend steriel gaasje) om aspiratie van strooisel voorkomen. De terugkeer van de dieren naar een beddengoed gevulde kooi wanneer ze in staat zijn om borstligging onderhouden met hun hoofd omhoog. Om de spanning te minimaliserenvan het bereiken van voedsel, terwijl de aanpassing aan parabiotic bestaan, plaatst de bevochtigde voedsel pellets op de kooi vloer. Zorg voor nestmateriaal. In 1-2 weken parabiotic muizen hebben het vermogen om normaal ambulate op chirurgisch gepaarde voor-en achterpoten-ledematen. </li><li> Bloed chimerisme optreedt 10-14 dagen na de operatie. </li></ol> 5. Bevestiging en Reverse Procedure <ol><li> Na twee weken trekken bloed uit de staart aderen van elke muis voor flow-cytometrische analyse bloed chimerisme (figuur 3) bevestigen. </li><li> Bloedverwerkende voor flowcytometrische analyse: verdun 2-3 druppels bloed in 500 ui 10 mM EDTA. Voeg 500 ul van 2% dextran (verdund in PBS), meng en incubeer bij 37 ° C gedurende 30 minuten. Breng het supernatant in een nieuwe buis centrifugeren op 1200 rpm gedurende 5 minuten en resuspendeer de gepelleteerde cellen in PBS (of een andere buffer) voor flowcytometrische analyse. </li><li> Afhankelijk van de experimentele opzet, kan de parabiotic paar worden gescheiden eent latere tijdstippen. In onze ervaring, hebben we parabiosed paren constant tot maximaal 9 maanden zonder complicaties. </li><li> Voer omgekeerde procedure op een steriele chirurgische oppervlak. Verdoven muizen door ze in een inductie kamer verbonden met een verdamper isofluraan (4-5%) en anesthesie te onderhouden met 1,5-2% isofluraan, zoals hierboven (stap 2.2) beschreven. </li><li> Verwijder haar van de omgeving van het initiële hechting en aseptisch bereiden het geschoren gebied zoals hierboven beschreven (stap 2.3, 2.4). </li><li> Analgesie, beheren Carprofen en Buprenorfine intraperitoneaal of subcutaan in een dosis van 10 mg / kg en 0,1 mg / kg, respectievelijk. </li><li> Bedek operatiegebied met een steriel laken zoals hierboven (stap 2.6) beschreven. </li><li> Met scherpe schaar, scheid de muizen via een longitudinale incisie langs de laterale hechting en voorzichtig los de nieuw gevormde fascia tussen de twee muizen met een paar gebogen pincet. Aan de gewrichten los, snijd de knopen van de hechtdraadze aansluit. Snij de huid langs de incisie om gladde randen bereiken en sluit de huid met een absorbeerbare continue 5-0 gecoate Vicryl hechtdraad. </li><li> Om uitdroging te voorkomen, dienen 0,5 ml 0,9% NaCl subcutaan aan elke muis. Houd dieren op verwarmd pad tot herstel. </li><li> Na herstel, herhaal pijnstillende administratie, carprofen (10 mg / kg) elke 24 uur en buprenorfine (0,1 mg / kg) om de 12 uur gedurende 48 uur. </li><li> Om te voorkomen dat bacteriële infecties te behandelen muizen met Sulfamethoxazol / Trimethoprim suspensie voor oraal gebruik (2 mg sulfa / ml 0,4 mg trim / ml) in hun fles water gedurende 10 dagen. </li></ol>

<ol><li>Bert, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Exp%C3%A9riences+et+consid%C3%A9rations+sur+la+greffe+animale%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+de+l%27Anatomie+et+de+la+Physiologie%22%5BJournal%5D)">Expériences et considérations sur la greffe animale.</a> Journal de l'Anatomie et de la Physiologie. 1, 69-87 Forthcoming.</li>
<li>Bunster, E., Meyer, R. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Improved+methods+of+parabiosis%5BTitle%5D)+AND+%22Anat.+Rec%22%5BJournal%5D)">Improved methods of parabiosis.</a> Anat. Rec. 57, 339-380 (1933).</li>
<li>Waskow, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Generation+of+parabiotic+mice+for+the+study+of+DC+and+DC+precursor+circulation%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+Mol.+Biol%22%5BJournal%5D)">Generation of parabiotic mice for the study of DC and DC precursor circulation.</a> Methods Mol. Biol. 595, 413-428 (2010).</li>
<li>Finerty, J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Parabiosis+in+physiological+studies%5BTitle%5D)+AND+%22Physiol.+Rev%22%5BJournal%5D)">Parabiosis in physiological studies.</a> Physiol. Rev. 32, 277-302 (1952).</li>
<li>Aicher, A., Heeschen, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Nonbone+marrow-derived+endothelial+progenitor+cells%3A+what+is+their+exact+location%5BTitle%5D)+AND+%22Circ.+Res%22%5BJournal%5D)">Nonbone marrow-derived endothelial progenitor cells: what is their exact location.</a> Circ. Res. 101, e102(2007).</li>
<li>Abe, S., Boyer, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cells+derived+from+the+circulation+contribute+to+the+repair+of+lung+injury%5BTitle%5D)+AND+%22Am.+J.+Respir.+Crit.+Care+Med%22%5BJournal%5D)">Cells derived from the circulation contribute to the repair of lung injury.</a> Am. J. Respir. Crit. Care Med. 170, 1158-1163 (2004).</li>
<li>Donskoy, E., Goldschneider, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Thymocytopoiesis+is+maintained+by+blood-borne+precursors+throughout+postnatal+life.+A+study+in+parabiotic+mice%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Immunol%22%5BJournal%5D)">Thymocytopoiesis is maintained by blood-borne precursors throughout postnatal life. A study in parabiotic mice.</a> J. Immunol. 148, 1604-1612 (1992).</li>
<li>Powell, A. E., Anderson, E. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fusion+between+Intestinal+epithelial+cells+and+macrophages+in+a+cancer+context+results+in+nuclear+reprogramming%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Res%22%5BJournal%5D)">Fusion between Intestinal epithelial cells and macrophages in a cancer context results in nuclear reprogramming.</a> Cancer Res. 71, 1497-1505 (2011).</li>
<li>Duyverman, A. M., Kohno, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+transient+parabiosis+skin+transplantation+model+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Nat.+Protoc%22%5BJournal%5D)">A transient parabiosis skin transplantation model in mice.</a> Nat. Protoc. 7, 763-770 (2012).</li>
<li>Ajami, B., Bennett, J. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Local+self-renewal+can+sustain+CNS+microglia+maintenance+and+function+throughout+adult+life%5BTitle%5D)+AND+%22Nat.+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Local self-renewal can sustain CNS microglia maintenance and function throughout adult life.</a> Nat. Neurosci. 10, 1538-1543 (2007).</li>
<li>Weissman, I. L., Jerabek, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tolerance+and+the+H-Y+antigen%3A+Requirement+for+male+T+cells%2C+but+not+B+cells%2C+to+induce+tolerance+in+neonatal+female+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Transplantation%22%5BJournal%5D)">Tolerance and the H-Y antigen: Requirement for male T cells, but not B cells, to induce tolerance in neonatal female mice.</a> Transplantation. 37, 3-6 (1984).</li>
</ol>

De auteurs hebben geen concurrerende financiële belangen.

De parabiose methode die hier besproken presenteert minimale technische problemen en resulteert in lage sterftecijfers. De bevestiging van de knie en elleboog gewrichten is een aanzienlijke verbetering van de Bunster en Meyer techniek. De procedure blijft invasieve aldus handhaven van steriele omstandigheden tijdens de operatie is noodzakelijk. Voor infectie van de operatiewond verder te voorkomen, is het belangrijk dat de parabiosed dieren een combinatie van antibiotica en regelmatig worden gecontroleerd. Voor goede st...

Parabiose, de chirurgische samenvoegen van twee organismen, werd eerst beschreven in 1864 door Paul Bert als een manier om een model van gedeelde bloedsomloop kunnen bestuderen en bestond uit het verbinden van de huid en spieren wanden van twee ratten 1. Parabiose bevordert vorming van capillairen in de plaats van ontsteking 3 en verscheidene toepassingen in fysiologische studies, zoals hormonale communicatie tussen de hypofyse en de geslachtsklieren en de rol van de nier hypertensie 4 hadden. Het is verder gebruikt om de rekrutering en integratie van progenitorcellen onderzoeken neovascularisatie 5, migratie van hematopoietische stamcellen 6 en lymfocyttransport 7, alsmede de rol en kinetiek van circulerende inflammatoire of stamcellen in tumormetastase 8,9, en neurodegeneratieve ziekten 10. Een belangrijk voordeel van parabiose leugensin dat het een partnerschap dieren hebben gemeenschappelijke circulerende antigenen, waardoor cel migratie en neovascularisatie, zonder dat er een immunologische reactie. Belangrijk Weissman e.a.. Gebleken dat parabiose tussen mannelijke en vrouwelijke muizen leidt niet tot vorming van antilichamen anti HY 11. In het oorspronkelijke protocol beschreven door Paul Bert werden de twee dieren elkaar verbonden door verbinding van de huid en spieren wanden 1. Deze werkwijze echter tot aanzienlijke belasting voor de dieren en resulteerde in hoge mortaliteit als gevolg van infectie van de wond. Sindsdien is de parabiose techniek is herzien door verschillende groepen met de meest overheersende zijnde de door Bunster en Meyer voorgesteld in 1933 2 protocol. Hun methode onder verbinding van de scapula gewrichten, lichaamsholten, en de huid, waardoor betere ondersteuning en minder pijn voor de dieren. Tegelijkertijd resultaat van de nieuwe werkwijze minimale postoperatieve zorg en significant verlaagde sterftecijfers. De hierin beschreven protocol is een modificatie van de Bunster en Meyer techniek die minder invasief en kan steviger verbinden. Namelijk worden muizen verbonden door de elleboog en kniegewrichten en de huid. De bundeling voorkomt verlenging van de huid en veroorzaakt dus minder pijn en complicaties. Hier beschrijven we de toetreding van een wild-type (WT) volwassen muis om een ​​constitutief GFP-expressie muis. We zien dat twee weken na chirurgie bereiken we 50% bloed chimerisme aantonen van de effectiviteit van deze chirurgische procedure om een ​​gedeelde bloedsomloop systeem.

<table><tbody><tr><td>Isoflurane-Phoenix</td><td>Clipper</td><td>NDC 57319-559-06</td><td></td></tr><tr><td>Posi-Seal Inductiekamer</td><td>Moleculaire Beeldvormingsproducten</td><td>AS-01-0530-SM</td><td></td></tr><tr><td>Draagbaar anesthesiesysteem</td><td>Moleculaire Beeldvormingsproducten</td><td>AS-01-0007</td><td></td></tr><tr><td>Gaymer T Pomp</td><td>Gaymar Industries, Inc</td><td>TP650</td><td></td></tr><tr><td>Verwarmingsdeken (Verwarmingskussen)</td><td>Kent Scientific Corp</td><td>TP-22G</td><td></td></tr><tr><td>Gebogen pincet</td><td>Roboz</td><td>RS-5101</td><td></td></tr><tr><td>Schaar</td><td>Fine Science Tools (FST)</td><td>FST 14063-09</td><td></td></tr><tr><td>Naaldhouder</td><td>FST</td><td>FST 12501-13</td><td></td></tr><tr><td>Elektrisch scheerapparaat</td><td>Oster</td><td>Golden A5</td><td></td></tr></tbody></table>

parabiose in muizen: een gedetailleerd protocol

Parabiosis in Mice: A Detailed Protocol

Parabiose is een chirurgische vereniging van twee organismen waardoor delen van de bloedsomloop. Bevestiging van de huid van twee dieren bevordert vorming van microvasculatuur op de plaats van ontsteking. Parabiotic partners delen hun circulerende antigenen en dus vrij zijn van ongewenste immuunreactie. Voor het eerst beschreven door Paul Bert in 1864 1, werd de parabiose operatie verfijnd door Bunster en Meyer in 1933 naar dieroverleving 2 te verbeteren. In het huidige protocol, worden twee muizen operatief verbonden na een wijziging van de Bunster en Meyer techniek. Dieren worden aangesloten via de elleboog-en kniegewrichten, gevolgd door bevestiging van de huid waardoor stevige steun die stam voorkomt op de huid gehecht. Hierin beschrijven we in detail de parabiotic verbinden van een alomtegenwoordige GFP-expressie muis om een ​​wild-type (WT) muizen. Twee weken na de ingreep, wordt het paar gescheiden en GFP positieve cellen kan worden gedetecteerd door flow cytometrische analyse in het bloion van de WT muizen. Het bloed chimerisme maakt het mogelijk om de bijdrage van de circulerende cellen van een dier van de andere onderzoeken.

De verwachte uitkomst van parabiose twee organismen gelijke bijdrage van bloedsomloop elk dier een gemeenschappelijke bloedsomloop (fig. 2). Men kan gemakkelijk controleren of de succesvolle verevening van het bloed van de parabiosed WT en GFP positieve muizen door flowcytometrische analyse. Hier, veneus bloed werd verkregen van de staarten van beide parabionts 2 weken na de operatie en werd gefractioneerd op perifere bloedcellen (erytrocyten te sluiten). De gefractioneerde-hematopoietische cellen afgel...

Parabiotic samenvoegen van twee organismen leidt tot de ontwikkeling van een gedeelde bloedsomloop. In dit protocol beschrijven we de chirurgische stappen om parabiotic verbinding tussen een wildtype muis en een constitutieve GFP-expressie muis vormen.

Parabiose in Muizen: Een gedetailleerd protocol

Parabiosis is a surgical union of two organisms allowing sharing of the blood circulation. Attaching the skin of two animals promotes formation of ...

Het algemene doel van deze procedure is het uitvoeren van parabiotische koppeling van twee muizen om een gedeeld circulatiesysteem te bestuderen. Dit wordt bereikt door eerst een incisie te maken aan de aangrenzende zijden van de dieren. Nadat de fascia zijn gescheiden, worden de twee muizen stevig verbonden bij de elleboog- en kniegewrichten.De laatste stap is het verbinden van de huid van de twee dieren met een continue hechting. Uiteindelijk kan flowcytometrische analyse bloedchimerisme aantonen binnen 10 tot 14 dagen na de procedure. Het belangrijkste voordeel van deze techniek ten opzichte van bestaande methoden, zoals beenmergtransplantatie of celinjectie, is dat er geen immunosuppressie nodig is en dat het de instandhouding van de CX-circulatie gedurende een lange periode mogelijk maakt.De procedure wordt gedemonstreerd met een kaakpunctie. De dierenchirurg van mijn laboratorium heeft ten minste twee weken van tevoren verschillende kooien ingericht met muizenparen van hetzelfde geslacht, bij voorkeur vrouwtjes, met dezelfde genetica en een vergelijkbare grootte en gewicht. Zodra een harmonieus paar is geselecteerd, wordt de parabiose uitgevoerd in een schone operatiekamer voor dieren.Zorg ervoor dat alle contactoppervlakken, instrumenten en handschoenen steriel zijn. Anestheseer de muizen in een PAI-inductiekamer voor verzegeling die is aangesloten op een isofluraanverdamper. Zodra de anesthesie is geïnduceerd, moet deze gedurende de gehele procedure worden gehandhaafd.Met behulp van een neuskegel wordt een lagere concentratie isofluraan toegediend; scheer vervolgens de buikvacht aan weerszijden en breng oogzalf aan. Bereid daarna de geschoren gebieden aseptisch voor door ze grondig af te vegen met met betadine gedrenkte doekjes, gevolgd door alcoholdoekjes.Verplaats de muizen vervolgens naar een verwarmde mat die bedekt is met een steriel gaasje. Gebruik carprofen en buprenorfine voor de analgesie. Plaats de muizen op hun zij, rug tegen rug, met de geschoren delen naar boven.Dek de muizen vervolgens af met een steriel laken, waarbij alleen het operatiegebied wordt vrijgelaten. Maak met een schaar longitudinale huidincisies aan de zijkanten van elk dier, beginnend een halve centimeter onder het kniegewricht en eindigend een halve centimeter boven de elleboog. Los na de incisie de huid voorzichtig van de subcutane fascia door de huid met een gebogen pincet op te tillen en de fascia met een tweede pincet te scheiden.Om een halve centimeter vrije huid te creëren, worden de LEC's en kniegewrichten duidelijk onderscheiden. Nadat de huidincisie is gemaakt, begint men met het verbinden van de linker- en rechter-LEC's. Buig eerst de elleboog van de eerste muis en haal de naald van de 3.0 hechtdraad onder Theon door.Buig vervolgens de elleboog van de tweede muis en haal dezelfde hechtdraad eronderdoor. Bevestig de gewrichten stevig met een dubbele chirurgische knoop. Verbind daarna de kniegewrichten volgens dezelfde procedure.Nadat de gewrichten zijn vastgezet, wordt de huid van de twee dieren verbonden met een continue absorbeerbare 5-0 Vicryl-hechting. Begin ventraal vanaf de elleboog om huidruptuur en separatie te voorkomen.Voer nauwkeurige hechtingssluitingen van de huid uit in het gebied rond de ellebogen en knieën. Het verbinden van de huid van de muizen is een kritische stap in deze procedure. Het is belangrijk om ervoor te zorgen dat de muizen stevig zijn verbonden om ruptuur en scheiding na de operatie te voorkomen.Daarom controleren we elke vier tot vijf maanden of de huid stevig is gesloten. Zodra de hechting van de ventrale huid is voltooid, worden de muizen in buikligging geplaatst en wordt de hechting dorsaal voortgezet, eindigend met een dubbele chirurgische knoop. Verifieer de continuïteit van de hechting en bevestig dat er geen openingen aanwezig zijn.Sluit de operatie af door aan elk dier subcutaan een halve milliliter 0,9% natriumchloride toe te dienen om dehydratie te voorkomen. Houd de dieren op de verwarmingsmat tot ze volledig zijn hersteld. Huis elk parabiotisch paar in een schone kooi met vochtiggemaakte voedselpellets om de inspanning bij het bereiken van voedsel te minimaliseren terwijl ze wennen aan het parabiotische bestaan.Plaats de voedingspellets op de bodem van de kooi. Zorg er daarnaast voor dat er gedurende de eerste 48 postoperatieve uren nestmateriaal aanwezig is. Dien elke 24 uur carprofen toe en dien dagelijks elke 12 uur buprenorfine toe gedurende twee weken.Houd de dieren in de gaten op tekenen van pijn en stress, zoals trillen, lethargie, het kauwen op de staart, een gekromde rug, een gebrek aan verzorging, enzovoort. Om bacteriële infecties tijdens de eerste 10 dagen na de operatie te voorkomen, worden de muizen behandeld met een orale suspensie van sulfamethoxazol en trimetoprim in hun drinkfles. Bloedafname vindt 10 tot 14 dagen na de chirurgische ingreep plaats.Neem na twee weken bloed af uit de staartvenen om te bevestigen dat dit is gebeurd. Gebruik flowcytometrie om het bloed te analyseren. Verdun twee tot drie druppels in 500 µL van 10 mM EDTA.Meng de verdunning vervolgens grondig met 500 µL 2% Dextrine in PBS. Incubeer het bloedmengsel 30 minuten bij 37 °C en centrifugeer dit daarna om het supernatant te verzamelen. Voor de praktijk.Probiotische paren kunnen gedurende negen maanden samen worden gehouden en zonder complicaties worden gescheiden. Voer de omgekeerde procedure uit op een steriel chirurgisch oppervlak. Gebruik hetzelfde anesthesieprotocol als eerder beschreven en verwijder het haar rondom de initiële hechting.Nadat de geschoren huid aseptisch is voorbereid, dienen de analgetica te worden toegediend en het operatieve gebied te worden afgedekt met een afdekdoek met behulp van scharen. Scheid de muizen door middel van een longitudinale incisie langs de laterale hechting om de gewrichten te scheiden en knip de knopen van de hechting die hen verbindt bij elke muis door. Trim de huid langs de incisie om de randen glad te maken.Hecht vervolgens de huid opnieuw met een absorbeerbare continue 5-0 gecoate Vicryl-hechting om uitdroging te voorkomen, dien 0,5 mL 0,9% natriumchloride subcutaan toe en houd de dieren vervolgens op een verwarmde ondergrond tot ze zijn hersteld van de anesthesie. Gebruik dezelfde analgesische en antibacteriële postoperatieve behandelingen als eerder beschreven; de verwachte uitkomst van een parabiose van twee organismen is een gelijke bijdrage van het circulatiesysteem van elk dier aan een gemeenschappelijke bloedsomloop. De equilibratie van het bloed van parabiotische wild-type en GFP-positieve muizen werd onderzocht via flowcytometrische analyse, in overeenstemming met eerdere studies.Bloed van de wild-type muis vertoonde de aanwezigheid van chimerisme, zoals aangegeven door ongeveer half GFP-positieve en half wild-type bloedcellen. Zodra deze techniek onder de knie is, kan deze in 45 tot 60 minuten worden uitgevoerd mits correct uitgevoerd.

Research

JoVE Journal

Medicine

Geneeskunde

Dit protocol laat zien methoden voor de extractie van sperma van de testikels van de mannetjes en daarna inseminatie vrouwelijke muizen. Deze procedure is handig wanneer precieze tijd nodig is in ontwikkeling studies als transgene werken.

Oogsten Sperma en kunstmatige inseminatie van Muizen

Dit protocol geeft stap-voor-stap instructies over hoe je parabiotische zebravis-embryo's van verschillende genetische achtergronden kunt genereren. In combinatie met de ongeëvenaarde beeldvormingscapaciteiten van het zebravis-embryo biedt deze methode een uniek krachtig middel om cel-autonome versus niet-cel-autonome functies voor kandidaat-genen van belang te onderzoeken.

Generatie Parabiotic zebravis embryo&#39;s door Surgical Fusion of Developing Blastulae

Sperma vloeibaar is vereist voor sperma worden bevrijd van de rudimentaire gel. Deze studie bevat de procedures voor het verzamelen van sperma van de vrouwelijke voortplantingssysteem na coïtus en sperma vloeibaar tijdmeting.

Verzameling na paring sperma van de vrouwelijke voortplantingssysteem en de waardering van sperma vloeibaar in muizen

Dit protocol beschrijft een muismodel van de orthopedische chirurgie die is gebruikt voor het bestuderen van de mechanismen van postoperatieve neuroinflammation en gedragsveranderingen, en wanneer deze wordt gecombineerd met parabiosis, om te studeren weefselregeneratie tijdens veroudering.

Een muismodel van orthopedische chirurgie te bestuderen Weefselregeneratie en postoperatieve cognitieve dysfunctie

Hier presenteren we een protocol ter bevordering van de integratie van transgenic en productie van oprichter transgene muizen met hoge doeltreffendheid door een eenvoudige injectie van een lentivirale vector in de ruimte van de perivitelline van een bevruchte oöcyt.

Lentivirale gemedieerde productie van transgene muizen: een eenvoudige en zeer efficiënte methode voor directe studie van oprichters

Hier beschrijven we een nieuwe methode voor het opsporen van een succesvolle vaststelling van gedeelde bloedcirculatie van twee parabionten door middel van een caudale ader injectie van glucose, die minimale schade veroorzaakt en is niet fataal voor de parabionts.

Detecteren van de totstandbrenging van gedeelde bloedtoevoer in parabiotische muizen door Caudal Vein Glucose Injection

Dit artikel is bedoeld om het gebruik van parthenogenetische haploïde embryonale stamcellen aan te tonen als vervanging voor sperma voor de bouw van semi-gekloonde embryo's.

Toepassing van muis parthenogenetische haploïde embryonale stamcellen als een substituut van sperma

De gepresenteerde cervicale manipulatiemethode kan pseudozwangerschap bij muizen induceren zonder dat het nodig is om vrouwtjes te fokken met vasectomie mannetjes. De inductie van pseudozwangerschap is vereist voor het succes van niet-chirurgische embryotransfer en niet-chirurgische kunstmatige inseminatie, die beide ook worden gepresenteerd.

Het induceren van pseudopregnancy bij vrouwelijke muizen zonder de noodzaak van vasectomie bij mannen voorafgaand aan niet-chirurgische embryotransfer of kunstmatige inseminatie

Hier presenteren we een protocol om specifieke hypothalamische celsubtypen in cultuur te laten groeien. De cellen kunnen worden geselecteerd op basis van opportune / unieke membraanmarkers en worden gebruikt in vele toepassingen, waaronder immunofluorescentie, elektrofysiologische en biochemische assays.

Isolatie van gerichte hypothalamus neuronen voor studies van hormonale, metabole en elektrische regulatie

Dit artikel stelt een pijplijn op voor hoogwaardige eencellige en kernsuspensies van gastrulerende muizenembryo's voor sequencing van individuele cellen en kernen.

Single-cell RNA-sequencing van gemuteerde hele muizenembryo's: van de epiblast tot het einde van de gastrulatie

Leer het parabioseprotocol voor muizen om een gedeeld circulatiesysteem te creëren. Deze chirurgische techniek maakt bloedchimerisme binnen 10 tot 14 dagen mogelijk zonder immunosuppressie.

Parabiose in Muizen: Een gedetailleerd protocol

Meer video's verkennen