Name: Procedures voor het identificeren van Besmettelijke Prions na passage door het spijsverteringsstelsel van een vogelsoort (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2013-11-06T21:30:00.000+00:00
Duration: 12 min
Description: Leer hoe infectieuze prionen door het spijsverteringsstelsel van Amerikaanse kraaien gaan en met een muizenbioassay worden geverifieerd. Deze methode toont de rol van aaseters bij de verspreiding van overdraagbare spongiforme encefalopathieën.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Wij willen S. Werner bedanken voor de kraaien die in deze studie en USDA, APHIS, WS, NWRC dierenverzorgers voor dierlijke zorg en monitoring. Vermelden of het gebruik van een product impliceert niet USDA goedkeuring. Financiering voor deze studie werd verstrekt door USDA, APHIS, de Veterinaire Diensten.

Ons protocol is een bewerking van degene die we eerder gepubliceerde 7. Alle procedures waarbij dieren werden goedgekeurd door de Institutional Animal Care en gebruik Comite van het Amerikaanse ministerie van Landbouw (USDA), Animal and Plant Health Inspection Service (APHIS), Wildlife Services (WS), National Wildlife Research Center (NWRC). 1. Kraai Gavaging <ol><li> Schatten doorlooptijd van &#39;pseudo hersenmateriaal&#39; door het spijsverteringskanaal van de Amerikaanse kraaien. <ol><li> Meng 5 ml gekookt en roerei hele eieren met blauwe kleurstof en maagsonde 1 kraai met een 2 in maagsonde naald (figuur 1). </li><li> Controleer kraai elke 30 min, totdat blauw / groen-gekleurde ontlasting niet meer worden uitgescheiden. </li></ol></li><li> Verkrijgen geïnfecteerde en terminaal zieke RML (Chandler stam) geïnfecteerde C57BL / 6 muis hersenen. </li><li> Genereer een 20% gew / vol normale en geïnfecteerde muizen-homogenaat in een kogel mixer homogenisator met 1xfosfaat gebufferde zoutoplossing (PBS) en glaskralen, centrifugeer bij 3000 xg gedurende 1 min tot grotere deeltjes te verwijderen. Verwijder de supernatant en verdun met een gelijk volume van 1 x PBS tot een 10% gew / vol in steriele PBS genereren. Invriezen bij -80 ° C totdat het nodig is. </li><li> 17 uur voorafgaand aan de maagsonde verwijderen voedsel, maar geen water, uit kraai pennen. </li><li> Willekeurig toewijzen kraaien behandelingsgroepen en mondeling maagsonde elke kraai met 5 ml van een normaal of een besmette muis hersenhomogenaat met behulp van een 2 in maagsonde naald. </li><li> Transfer kraaien individuele kooien en het verzamelen en bundelen alle uitwerpselen binnen elke kooi voor 4 uur na maagsonde (figuur 2). </li><li> Homogeniseren samengevoegde feces voor elke kraai in een kogel blender homogeniseerder met glaskralen totdat een gelijkmatige textuur wordt bereikt. * Crow uitwerpselen zijn meestal vloeibaar en kan gemakkelijk worden gemengd. </li><li> Voor elk object, verdun 500 gl fecale homogenaat in 9,5 ml 1x PBS gedurende een totaal volume van 10 ml. </li><li> Centrifugeer de fecale homogenate gedurende 15 minuten bij 1400 xg en verwijder de bovenstaande vloeistof. </li><li> Om het gevaar van een secundaire microbiële infectie minimaliseren, behandel supernatant met 1 pl van 100 eenheden / ml penicilline en 100 ug / ml streptomycine (Invitrogen, NY) per 100 pl homogenaat dan plaats onder UV licht bij kamertemperatuur gedurende 20 minuten te verminderen risico van virale en bacteriële besmetting. Na blootstelling aan UV, ultrasone trillingen monsters in een 3000 Mp sonicator bij instelling 70 gedurende 30 seconden op het membraan van de overige microben verstoren. </li></ol> 2. Muis Enten <ol><li> Willekeurig muizen kent de volgende behandelingsgroepen (tabel 1): <ol><li> Groep 1 - Positieve behandelde muizen intraperitoneaal geïnoculeerd (IP) met 1 ml van fecale homogenaat van kraaien oraal gavaged met 5 ml besmette muis hersenen. </li><li> Groep 2 - Negatieve behandelde muizen ingeënt IP met 1 ml van fecale homogenaat van kraaien oraal gavaged met 5 ml normale muis hersenen. </li><li> Verdunnen infected en normale muizenhersenen homogenaat voor groepen 3 en 4 tot 1:100 w / v in 1x PBS. </li><li> Groep 3 - positieve controle muizen geïnoculeerd IP met 1 ml geïnfecteerde muizen-hersenhomogenaat. </li><li> Groep 4 - Negatieve controle muizen geïnoculeerd IP met 1 ml normaal muizen-hersenhomogenaat. </li></ol></li></ol><table border="1"><tbody><tr><td></td><td> Behandeling Groep </td><td> Aantal dieren </td></tr><tr><td> Groep 1 </td><td> Scrapie + Crow Uitwerpselen </td><td> 100 </td></tr><tr><td> Groep 2 </td><td> Scrapie - Crow Uitwerpselen </td><td> 25 </td></tr><tr><td> Groep 3 </td><td> Scrapie + Mouse Brain </td><td> 10 </td></tr><tr><td> Groep 4 </td><td> Scrapie - Mouse Brain </td><td> 5 </td></tr></tbody></table> . Tabel 1 Scrapie status van inoculum (positief +, negatief -) en het aantal gebruikte dieren 7. <ol start="2"><li> Intraperitoneaal te enten muis: <ol><li> Nekvel muis door het dorsale nek bont met duim en wijsvinger en voorzichtig draaien om buikzijde bloot. </li><li> Elevate achterste eind van de muis, zodat het hoofd iets lager. </li><li> Steek 25 G naald 1 cm door de huid, 1 cm lateraal van de middellijn, en 1-2 cm juist voor de SI-gewricht met behulp van een naald vergrendeling spuit. </li><li> Injecteer 1 ml te enten langzaam in muis lichaamsholte. </li></ol></li></ol> 3. Muis Monitoring <ol><li> Monitor muizen dagelijks tot ze klinische symptomen van muis scrapie uit te drukken. Klinische verschijnselen kunnen zijn: kyfose, ataxie, stijve staart, gebrek aan verzorging, vermagering, en lethargie. </li><li> Score muizen voor elk van de 6 klinische symptomen als zichtbare tekenen zijn evident, waarbij 0 = geen zichtbare, 1 = matig, 2 = ernstig. </li><li> Euthanaseren muizen als totale dagelijkse scores voor elk teken bereiken ≥ 8 voor 1 dag, ≥ 6 continu gedurende 3 dagen, of 365 dagen na inoculatie (dpi). </li><li> Harvest hersenen onmiddellijk na euthanasia en bewaar bij -70 ° C. </li><li> Een scrapie diagnose te bevestigen, verteren hersenstalen met 3 pl van een 50 ug / ml proteïnase-K-oplossing (PK) als volgt verdund: 3.1. pl PK, 12,5 ui 500 mM EDTA, pH 8, 109,39 pl 1x PBS gedurende 30 min bij 45 ° C, daarna het inactiveren PK door toevoeging van 8 pi laadbuffer en incubatie monsters bij 95 ° C gedurende 5 minuten. Samples op een 12% SDS-PAGE gel, Electrophorèse transfer naar Immobilon PVDF membraan en blokkeren met 5% magere melk in 0,2% Tween 20 in PBS gedurende 1 uur bij kamertemperatuur geroerd. Sonde daarna met Bar224 anti-PrP monoklonaal antilichaam geconjugeerd aan mierikswortel peroxidase, verdund in superblok, gedurende 1 uur bij kamertemperatuur geroerd. Spoel membraan gedurende 1 uur met PBS 0,2% Tween 20. Visualiseren, incubeer Western blot 5 min met chemiluminescentiesubstraat en beeld op een G-box gel-documentatiesysteem. </li></ol>

<ol><li>Prusiner, S. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Novel+proteinaceous+infectious+particles+cause+scrapie%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Novel proteinaceous infectious particles cause scrapie.</a> Science. 216 (4542), 136-144 (1982).</li>
<li>Miller, M. W., Williams, E. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Epizootiology+of+chronic+wasting+disease+in+free-ranging+cervids+in+Colorado+and+Wyoming%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Wildlife+Diseases%22%5BJournal%5D)">Epizootiology of chronic wasting disease in free-ranging cervids in Colorado and Wyoming.</a> Journal of Wildlife Diseases. 36 (4), 676-690 (2000).</li>
<li>Miller, M. W., Williams, E. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Horizontal+prion+transmission+in+mule+deer%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Horizontal prion transmission in mule deer.</a> Nature. 425 (6953), 35-36 (2003).</li>
<li>Sigurdson, C. J., Adriano, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Chronic+Wasting+Disease%5BTitle%5D)+AND+%22Biochimica+et+Biophysica+Acta%22%5BJournal%5D)">Chronic Wasting Disease.</a> Biochimica et Biophysica Acta. 1772 (6), 610-618 (2007).</li>
<li>Miller, M. W., Williams, E. S., Hobbs, N. T., Wolfe, L. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Environmental+sources+of+prion+transmission+in+mule+deer%5BTitle%5D)+AND+%22Emerging+Infectious+Diseases%22%5BJournal%5D)">Environmental sources of prion transmission in mule deer.</a> Emerging Infectious Diseases. 10 (6), 1003-1006 (2004).</li>
<li>Mathiason, C. K., Hays, S. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Infectious+prions+in+pre-clinical+deer+and+transmission+of+chronic+wasting+disease+solely+by+environmental+exposure%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+ONE%22%5BJournal%5D)">Infectious prions in pre-clinical deer and transmission of chronic wasting disease solely by environmental exposure.</a> PLoS ONE. 4 (6), e5916(2009).</li>
<li>VerCauteren, K. C., Pilon, J. L., Nash, P. B., Phillips, G. E., Fischer, J. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Prion+remains+infectious+after+passage+through+digestive+system+of+American+crows+%28Corvus+crachyrhunchos%29%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+ONE%22%5BJournal%5D)">Prion remains infectious after passage through digestive system of American crows (Corvus crachyrhunchos).</a> PLoS ONE. 7 (10), e45774(2012).</li>
<li>Imran, M., Mahmood, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+overview+of+animal+prion+diseases%5BTitle%5D)+AND+%22Virology+Journal%22%5BJournal%5D)">An overview of animal prion diseases.</a> Virology Journal. 8 (493), (2011).</li>
<li>Watts, J. C., Balachandran, A., Westaway, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+expanding+universe+of+prion+disease%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+PATHOGENS%22%5BJournal%5D)">The expanding universe of prion disease.</a> PLoS PATHOGENS. 2 (3), e26(2006).</li>
<li>Bruce, M. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Transmissions+to+mice+indicate+that+%27new+variant%27+CJD+is+caused+by+the+BSE+agent%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Transmissions to mice indicate that 'new variant' CJD is caused by the BSE agent.</a> Nature. 389 (6650), 498-501 (1997).</li>
<li>Ryder, S., Dexter, G., Bellworty, S., Tongue, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Demonstration+of+lateral+transmission+of+scrapie+between+sheep+kept+under+natural+conditions+using+lymphoid+tissue+biopsy%5BTitle%5D)+AND+%22Research+in+Veterinary+Science%22%5BJournal%5D)">Demonstration of lateral transmission of scrapie between sheep kept under natural conditions using lymphoid tissue biopsy.</a> Research in Veterinary Science. 76 (2004), 211-217 (2004).</li>
<li>Collinge, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+risk+of+prion+zoonoses%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">The risk of prion zoonoses.</a> Science. 335 (6067), 411-413 (2012).</li>
<li>Beringue, V., Vilotte, J. L., Laude, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Prion+agent+diversity+and+species+barrier%5BTitle%5D)+AND+%22Veterinary+Research%22%5BJournal%5D)">Prion agent diversity and species barrier.</a> Veterinary Research. 39 (47), (2008).</li>
<li>Harrington, R. D., Baszler, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+species+barrier+limits+transmission+of+chronic+wasting+disease+to+mink+%28Mustela+vison%29%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+General+Virology%22%5BJournal%5D)">A species barrier limits transmission of chronic wasting disease to mink (Mustela vison).</a> The Journal of General Virology. 89 (4), 1086-1096 (2008).</li>
<li>Wisniewski, H. M., Sigurdarson, S., Rubenstein, R., Kascsak, R. J., Carp, R. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mites+as+vectors+for+scrapie%5BTitle%5D)+AND+%22Lancet%22%5BJournal%5D)">Mites as vectors for scrapie.</a> Lancet. 347 (9008), 1114(1996).</li>
<li>Post, K., Riesner, D., Walldorf, V., Mehlhorn, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fly+larvae+and+pupae+as+vectors+for+scrapie%5BTitle%5D)+AND+%22Lancet%22%5BJournal%5D)">Fly larvae and pupae as vectors for scrapie.</a> Lancet. 354 (9194), 1969-1970 (1999).</li>
<li>Matthews, D., Cooke, B. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+potential+for+transmissible+spongiform+encephalopathies+in+non-ruminant+livestock+and+fish%5BTitle%5D)+AND+%22Revue+Scientifique+Et+Technique-Office+International+Des+Epizooties%22%5BJournal%5D)">The potential for transmissible spongiform encephalopathies in non-ruminant livestock and fish.</a> Revue Scientifique Et Technique-Office International Des Epizooties. 22 (1), 283-296 (2003).</li>
<li>Jennelle, C. S., Samuel, M. D., Nolden, C. A., Berkley EA, <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Deer+carcass+decomposition+and+potential+scavenger+exposure+to+chronic+wasting+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Wildlife+Management%22%5BJournal%5D)">Deer carcass decomposition and potential scavenger exposure to chronic wasting disease.</a> Journal of Wildlife Management. 73 (5), 655-662 (2009).</li>
<li>Scherbel, C., Pichner, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Degradation+of+scrapie+associated+prion+protein+%28PrPSc%29+by+the+gastrointestinal+microbiota+of+cattle%5BTitle%5D)+AND+%22Veterinary+Research%22%5BJournal%5D)">Degradation of scrapie associated prion protein (PrPSc) by the gastrointestinal microbiota of cattle.</a> Veterinary Research. 37 (5), 695-703 (2006).</li>
<li>Jeffrey, M., Gonzaález, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Transportation+of+prion+protein+across+the+intestinal+mucosa+of+scrapie+susceptible+and+scrapie-resistant+sheep%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Pathology%22%5BJournal%5D)">Transportation of prion protein across the intestinal mucosa of scrapie susceptible and scrapie-resistant sheep.</a> Journal of Pathology. 209 (1), 4-14 (2006).</li>
<li>Nicholson, E. M., Richt, J. A., Rasmussen, M. A., Hamir, A. N., Lebepe-Mazur, S., Horst, R. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Exposure+of+sheep+scrapie+brain+homogenate+to+rumen-simulating+conditions+does+not+result+in+a+reduction+of+PrP%28Sc%29+levels%5BTitle%5D)+AND+%22Letters+in+Applied+Microbiology%22%5BJournal%5D)">Exposure of sheep scrapie brain homogenate to rumen-simulating conditions does not result in a reduction of PrP(Sc) levels.</a> Letters in Applied Microbiology. 44 (6), 631-636 (2007).</li>
<li>Motes C, M. aluquerde, Grassi, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Excretion+of+BSE+and+scrapie+prions+in+stools+from+murine+models%5BTitle%5D)+AND+%22Veterinary+Microbiology%22%5BJournal%5D)">Excretion of BSE and scrapie prions in stools from murine models.</a> Veterinary Microbiology. 131 (1-2), 205-211 (2008).</li>
<li>Kruger, D., Thomzig, A., Lenz, G., Kampf, K., McBride, P., Beekes, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Faecal+shedding%2C+alimentary+clearance+and+intestinal+spread+of+prions+in+hamsters+fed+with+scrapie%5BTitle%5D)+AND+%22Veterinary+Research%22%5BJournal%5D)">Faecal shedding, alimentary clearance and intestinal spread of prions in hamsters fed with scrapie.</a> Veterinary Research. 40 (1), 4(2009).</li>
<li>Mathiason, C. K., Nalls, A. V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Susceptibility+of+domestic+cats+to+chronic+wasting+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Virology%22%5BJournal%5D)">Susceptibility of domestic cats to chronic wasting disease.</a> Journal of Virology. 87 (4), 1947-1956 (2013).</li>
<li>Bjorndal, K. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Flexibility+of+digestive+responses+in+two+generalist+herbivores%2C+the+tortoises+Geochelone+carbonaria+and+Geochelone+denticulate%5BTitle%5D)+AND+%22Oecologia%22%5BJournal%5D)">Flexibility of digestive responses in two generalist herbivores, the tortoises Geochelone carbonaria and Geochelone denticulate.</a> Oecologia. 78 (3), 317-321 (1989).</li>
<li>Clark, R. G., Gentle, G. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Estimates+of+grain+passage+time+in+captive+mallards%5BTitle%5D)+AND+%22Canadian+Journal+of+Zoology%22%5BJournal%5D)">Estimates of grain passage time in captive mallards.</a> Canadian Journal of Zoology. 68 (11), 2275-2279 (1990).</li>
<li>Dierenfeld, E. S., Koontz, F. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Feed+intake%2C+digestion+and+passage+of+proboscis+monkey+%28Nasalis+larvatus%29+in+captivity%5BTitle%5D)+AND+%22Primates%22%5BJournal%5D)">Feed intake, digestion and passage of proboscis monkey (Nasalis larvatus) in captivity.</a> Primates. 33 (3), 399-405 (1992).</li>
<li>Thompson, A. K., Samuel, M. D., Van Deelen, T. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Alternative+feeding+strategies+and+potential+disease+transmission+in+Wisconsin+white-tailed+deer%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Wildlife+Management%22%5BJournal%5D)">Alternative feeding strategies and potential disease transmission in Wisconsin white-tailed deer.</a> Journal of Wildlife Management. 72 (2), 416-421 (2008).</li>
<li>Pulford, B., Spraker, T. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Detection+of+PrPCWD+in+feces+from+naturally+exposed+Rocky+Mountain+elk+%28Cervus+elaphus+nelsoni%29+using+protein+misfolding+cyclic+amplification%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Wildlife+Diseases%22%5BJournal%5D)">Detection of PrPCWD in feces from naturally exposed Rocky Mountain elk (Cervus elaphus nelsoni) using protein misfolding cyclic amplification.</a> Journal of Wildlife Diseases. 48 (2), 425-433 (2012).</li>
<li>Hicks, R. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Guano+deposition+in+an+Oklahoma+crow+roost%5BTitle%5D)+AND+%22Condor%22%5BJournal%5D)">Guano deposition in an Oklahoma crow roost.</a> Condor. 81 (3), 247-250 (1979).</li>
<li>Aldous, S. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Winter+habits+of+crows+in+Oklahoma%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Wildlife+Management%22%5BJournal%5D)">Winter habits of crows in Oklahoma.</a> Journal of Wildlife Management. 73 (4), 290-295 (1944).</li>
</ol>

Geen belangenconflicten verklaard.

We tonen een procedure om doorgang van PrP Res materiaal te documenteren door het spijsverteringsstelsel van kraaien. We gebruikten gebruikelijke werkwijzen om te bepalen of kraaien de mogelijkheid om PrP Res materiaal verplaatsen naar ziektevrije geografische gebieden. Anderen hebben weerstand van PrP Res geëvalueerd om 19-21 en knaagdieren 22,23 spijsverteringssappen, die beide niet in geslaagd om het te elimineren herkauwers. Toekomstige toepassing van deze techn...

Overdraagbare spongiforme encefalopathieën (TSE) zijn fatale besmettelijke neurodegeneratieve aandoeningen die dieren beïnvloeden, huisdieren en mensen. De ziekteverwekker van TSE-ziekten lijkt verkeerd gevouwen of pathogene isovormen (PrP Res) van prion-eiwitten 1 zijn. Dierlijke TSE-ziekten omvatten Chronic Wasting Disease (CWD) bij muildierhert (Odocoileus hemionus), wit-staart hert (virginianus), elanden (Cervus elaphus), en elanden (Alces Alces), scrapie bij schapen en geiten, boviene spongiforme encefalopathie ( BSE) in vee; overdraagbare encefalopathie van de nerts in gekweekte nertsen; katachtige spongiforme encefalopathie bij katten; exotische hoefdieren spongiforme encefalopathie in exotische dierentuin herkauwt van de familie Bovidae, en spongiforme encefalopathie bij niet-humane primaten 8. De single menselijke ziekte TSE, variant van de ziekte van Creutzfeldt-Jakob, is zeldzaam en gedacht te worden overgenomen door het consumeren van PrP Res-Contaminated eten 9. Op dezelfde manier kan BSE mensen besmetten als besmet rundvlees wordt verbruikt 10. Van alle TSE-ziekten, scrapie en CWD zijn de enige twee met zelfdragende epidemieën en de bronnen van infectie word aangenomen dat van dier tot dier 2,3,11 en uit omgevingsbronnen 4-6. Uit onderzoek blijkt dat de meeste TSE-ziekten vereisen opmerkelijk langere incubatie door natuurlijke blootstelling gebeurtenissen van PrP Res materiaal manifestatie van klinische symptomen 2-4,6,8 en schijnbare soort barrières te minimaliseren, maar het potentieel voor, tussen soorten transmissie 12-14 niet elimineren . Het identificeren van mechanismen voor de verspreiding van besmettelijke prion (PrP Res) materiaal is uiterst belangrijk voor het beantwoorden van vragen over het TSE-ziekten bewegen over het landschap. Experimentele onderzoeken hebben gesuggereerd dat 15,16, pluimvee en varkens 17, en Amerikaanse kraaien (Corvus brac insectenhyrhynchos) 7,18 zijn passieve dragers of Verspreiders van PrP Res materiaal. Passage van PrP Res materiaal door het spijsverteringsstelsel van kraaien is onlangs gedocumenteerd, het aantonen van de rol die zij kunnen spelen bij de verspreiding van TSE-ziekten 7. Deze resultaten maken het aannemelijk dat kraaien, een aaseter, zou kunnen tegenkomen, consumeren, en transporteren infectieus materiaal via uitwerpselen depositie, naar ziektevrije gebieden. De procedures die we hier laten zien werden gebruikt om de passage van PrP Res materiaal te documenteren door het spijsverteringsstelsel van kraaien en zal de toepassing van deze methoden om andere aaseter en carnivoor soortspecifieke modellen in gerelateerde toekomstig onderzoek aanzienlijk vergemakkelijken. In deze studie werden conventionele methoden gebruikt om een onconventionele middelen van mensenhandel PrP Res materiaal, die kunnen bijdragen tot de verspreiding en de totale lasten van PrP Res materiaal te onderzoeken.

<table><tbody><tr><td>RML Chandler strain mouse-adapted scrapie</td><td>Rocky Mountain Laboratories</td><td></td><td></td></tr><tr><td>RC57BL/6 muizen</td><td>Hilltop Lab Animals</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Amerikaanse kraaien</td><td>in het wild gevangen</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Pen/Strep</td><td>Invitrogen</td><td>15140-122</td><td></td></tr><tr><td>Fosfaat gebufferde Saline</td><td>Invitrogen</td><td>70011-044</td><td></td></tr><tr><td>Sonicator</td><td>Misonix</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Proteinase-K oplossing</td><td>Roche</td><td>3115887001</td><td></td></tr><tr><td>Loading buffer</td><td>Invitrogen</td><td>NP0007 en 0009</td><td></td></tr><tr><td>Bis-tris SDS PAGE 12% gel</td><td>Invitrogen</td><td>NP0342</td><td></td></tr><tr><td>Immobilon PVDF membraan</td><td>Millipore</td><td>1SEQ00010</td><td></td></tr><tr><td>Tween 20</td><td>Sigma Aldrich</td><td>P2287</td><td></td></tr><tr><td>Bullet blender homogenisator</td><td>Braintree Scientific</td><td>BBX24B</td><td></td></tr><tr><td>2,3 mm Zirconia/silica kralen</td><td>BioSpec Products</td><td>11079125Z</td><td></td></tr><tr><td>Bar224 anti-PrP monoklonaal antilichaam</td><td>Cayman Chemical</td><td>10009035</td><td></td></tr><tr><td>Superblock</td><td>Thermo Scientific</td><td>37517</td><td></td></tr><tr><td>chemiluminescent substraat</td><td>Millipore</td><td>WBKLS0500</td><td></td></tr><tr><td>G-box gel documentatie systeem</td><td>Syngene</td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

procedures voor het identificeren van besmettelijke prions na passage door het spijsverteringsstelsel van een vogelsoort

Procedures for Identifying Infectious Prions After Passage Through the Digestive System of an Avian Species

Infectieuze prion (PrP Res) materiaal is waarschijnlijk de oorzaak van fatale, neurodegeneratieve overdraagbare spongiforme encefalopathieën (TSE) ziekten 1. Overdracht van TSE ziekten, zoals chronische wasting disease (CWD), wordt geacht te zijn van dier tot dier 2,3 en uit omgevingsbronnen 4-6. Aaseters en carnivoren hebben potentieel om PrP Res materiaal translocatie door de consumptie en de uitscheiding van CWD-besmette kadavers. Recent werk heeft passage van PrP Res materiaal gedocumenteerd door het spijsverteringsstelsel van de Amerikaanse kraaien (Corvus brachyrhynchos), een gemeenschappelijke Noord-Amerikaanse scavenger 7. We beschrijven procedures die gebruikt worden om de doorgang van PrP Res materiaal documenteren door Amerikaanse kraaien. Kraaien werden gavaged met RML-stam-muis aangepast scrapie en hun uitwerpselen werden verzameld 4 uur na maagsonde. Crow ontlasting werden vervolgens samengevoegd en intraperitoneaal geïnjecteerdC57BL / 6 muizen. Muizen werden dagelijks gecontroleerd totdat ze uitgedrukt klinische symptomen van muis scrapie en werden daarna gedood. Asymptomatische muizen werden gevolgd tot 365 dagen na de inenting. Western blot analyse werd uitgevoerd om ziektestatus bevestigen. Resultaten bleek dat prionen infectieus blijven na een reis door het spijsverteringsstelsel van kraaien en aanwezig in de ontlasting zijn, waardoor de ziekte in de test muizen.

De procedures die aantonen dat het spijsverteringsstelsel kraaien PrP Res infectiviteit 4 uur niet elimineert na orale gavage van scrapie hersenhomogenaat 7. Alle twintig kraaien die werden gavaged met PrP Res materiaal vervolgens overgebracht PrP Res materiaal via ontlasting te muizen. Zieke muizen werden geïdentificeerd door manifestatie van klinische muis scrapie symptomen en bevestiging ziekte werd voltooid door Western blotanalyse. Onderzoek v...

Aaseters hebben potentieel om besmettelijke overdraagbare spongiforme encefalopathie prionen translokeren in hun uitwerpselen te ziektevrije gebieden. We detail methoden die worden gebruikt om te bepalen of de muis aangepast scrapie prionen infectieus blijven na passage al is het spijsverteringskanaal van de Amerikaanse kraaien (Corvus brachyrhynchos), een gemeenschappelijke consument van dode dieren.

Procedures voor het identificeren van Besmettelijke Prions na passage door het spijsverteringsstelsel van een vogelsoort

Infectious prion (PrPRes) material is likely the cause of fatal, neurodegenerative transmissible spongiform encephalopathy (TSE) diseases1. Transmission ...

Het algemene doel van deze procedure is om het passeren van besmettelijk PreOn-materiaal door het spijsverteringsstelsel van Amerikaanse kraaien te documenteren. Dit wordt bereikt door eerst kraaien te voeren met besmettelijk PreOn-materiaal. De tweede stap is om het uitwerpsel van de kraaien gedurende vier uur na het voeren te verzamelen en voor te bereiden voor injectie in muizen.Vervolgens worden muizen intraperitoneaal geïnoculeerd met één milliliter van het kruishomogenaat. De laatste stap is om muizen dagelijks te controleren totdat ze klinische tekenen van muis scrapy vertonen. Uiteindelijk wordt western blot-analyse gebruikt om de aanwezigheid van besmettelijk PreOn in het muismodel te bevestigen en de ziekteoverdracht te verifiëren.Het idee dat kraaien CWD kunnen vervoeren, kwam op een winterdag bij ons toen we op weg waren naar een faciliteit met gevangen elanden waar we onderzoek deden en zagen dat elanden op de weg werden opgegeten door kraaien, en later die dag kwamen kraaien uit de lucht vanuit het niets, landden in de voerbakken, recht naast de elanden, poepten op het graan dat de elanden aten. Bovendien blijkt uit de literatuur dat veel kraaien die in de zomer door

procedures-for-identifying-infectious-prions-after-passage-through

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Immunologie en Infectie

Hier beschrijven we een nieuwe test voor het toezicht op prion opname en-handel door immuuncellen onmiddellijk na intraperitoneale inoculatie door het zuiveren en fluorescent etikettering geaggregeerde prion staven van geïnfecteerde hersenen materiaal dan het toezicht op hun opname en beweging van de injectieplaats en het karakteriseren van de cellen te bemiddelen deze gebeurtenissen.

Monitoring immuuncellen Trafficking TL-Prion Rods uur na intraperitoneale infectie

Deze studie beschrijft diagnose van aviaire influenza bij wilde vogels met behulp van een draagbare RRT-PCR-systeem. De methode maakt gebruik van gevriesdroogde reagentia om het scherm wilde vogels in een niet-laboratorium setting, typisch voor een uitbraak scenario. Het gebruik van moleculaire technieken biedt nauwkeurige en gevoelige alternatieven voor een snelle diagnose.

Een snelle diagnose van aviaire influenza virus bij wilde vogels: Het gebruik van een Portable RRT-PCR en gevriesdroogd reagentia in het veld

Een methode om te bewaren, op te sporen en de volgorde RNA virussen van aviaire influenza werd gevalideerd en uitgebreid met behulp van natuurlijke fecesmonsters van vogels. Deze techniek verwijdert de noodzaak van het handhaven van een koelketen en behandeling van besmettelijke virussen en kan worden toegepast in een 96-wells high-throughput setup.

Aviaire Influenza Surveillance met FTA Kaarten: Field Methods, bioveiligheid, en transport problemen opgelost

Source: Brauer, R. et al., Influenza Virus Propagation in Embryonated Chicken Eggs. J. Vis. Exp. (2015)This video demonstrates the synthesis and harvest of the influenza virus in fertilized chicken eggs. The virus is inoculated into the allantoic cavity, where it replicates in epithelial cells and buds into the allantoic fluid, which is then collected and stored for downstream applications.

Propagation and Harvest of Influenza Virus from a Fertilized Chicken Egg

This video demonstrates a technique to detect misfolded prion protein in brain sections using immunohistochemistry. Upon treating the brain section with formic acid to denature prions and minimize infection risk, as well as unmasking the prion aggregates using heat-induced epitope retrieval, the sections are immunolabeled for the misfolded prion protein aggregates and observed under a microscope.

Detecting Abnormal Prion Proteins in Brain Tissue Using Immunohistochemistry

Een kort protocol voor klinisch onderzoek wordt gepresenteerd om te helpen bij de detectie van klassieke en atypische scrapie bij schapen en geiten.

Klinisch onderzoeksprotocol om atypische en klassieke scrapie bij schapen op te sporen

Het meten van de barrière voor de overdracht van prionziekten tussen soorten is een uitdaging en omvat meestal dierproeven of biochemische analyses. Hier presenteren we een in vitro prion-eiwitconversietest met de mogelijkheid om soortenbarrières te voorspellen.

Het beoordelen van overdraagbare spongiforme encefalopathie Soort Barrières met een<em&gt; In Vitro</em&gt; Prioneiwit Conversie Assay

Hier presenteren we een protocol om te beschrijven van een eenvoudige, snelle en efficiënte prion amplificatie techniek, de real-time schokkend-geïnduceerde conversie (RT-QuIC) methode.

Real-time schokkend-geïnduceerde conversie Assay voor het opsporen van CWD prionen in fecaal materiaal

Hier presenteren we een protocol om te 'intestinale ligaturen loops' in kip dunne darmen operatief te maken. Deze procedure kan voor het vergelijken van meerdere Clostridium perfringens stammen virulentie in situ in één host. Deze methode vermindert aanzienlijk het aantal kippen meestal nodig voor soortgelijke in vivo experimenten.

Een Model van de ligaturen intestinale lus in narcose van specifieke pathogenen vrije kippen te bestuderen van Clostridium Perfringens virulentie

Immunolabeling van abnormaal prioneiwit met behulp van immunohistochemieprotocollen vereist specifieke monster- en anti-PrP-antilichaamvoorbereidingsmethoden. Het huidige protocol beschrijft de belangrijkste stappen in epitoopontmaskering om te zorgen voor een goede PrP-immunolabeling en om niet-specifieke achtergrondkleuring te minimaliseren. Ook houdt deze benadering rekening met bioveiligheidsmaatregelen bij het uitvoeren van immunohistochemische studies met de prion-geïnfecteerde weefsels.

Detectie van abnormaal prioneiwit door immunohistochemie

Een methode om veelgebruikte gebieden in laboratoriumomgevingen te beoordelen op prionverontreiniging en effectieve ontsmetting ontbreekt. Het hier beschreven protocol biedt de belangrijkste basisprincipes voor het implementeren van een prionveiligheidstest in het laboratorium die eenvoudig kan worden aangepast aan de individuele behoeften van specifieke laboratoria.

Prion Veiligheid Laboratorium Swipe-test

Leer hoe infectieuze prionen door het spijsverteringsstelsel van Amerikaanse kraaien gaan en met een muizenbioassay worden geverifieerd. Deze methode toont de rol van aaseters bij de verspreiding van overdraagbare spongiforme encefalopathieën.

Procedures voor het identificeren van Besmettelijke Prions na passage door het spijsverteringsstelsel van een vogelsoort

Meer video's verkennen