Name: Verbeterde werkwijze voor de bereiding van een Human-Cell gebaseerde, Contact Model van de bloed-hersenbarrière (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2013-11-12T18:45:00.000+00:00
Duration: 8 min 40 s
Description: Leer een verbeterde cocultuurmethode voor het modelleren van de bloed-hersenbarrière met humane astrocyten en endotheelcellen. Deze techniek optimaliseert celhechting en groei voor onderzoek naar BBB-permeabiliteit.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

playerTrialDesktop

Deze studie werd gefinancierd door subsidies toegekend aan RLM van de National Health and Medical Research Council of Australia (subsidie ​​# 606658).

1. Cell Culture (3-7 dagen voor BBB Vergadering) 1.1. Primaire Human Brain microvasculaire endotheelcellen (Becs) Becs werden commercieel verkregen. De cellen werden door Dispase dissociatie van normale menselijke hersenen cortex weefsel en ontvangen van doorgang 3 (&lt;12 populatie verdubbelingen) bevroren. <ol><li> Substratum: Jas weefselkweek schepen met &quot;Attachment Factor&quot; volgens de instructies van de fabrikant. </li><li> Onderhoudscel: Handhaaf Becs in serumbevattend compleet medium. Voor experimenten, cultuur Becs in volledige serum-vrij medium. Houd de cellen in een bevochtigde 5% CO2, 21% O2 incubator bij 37 ° C Opmerking: Als alternatief voor gespecialiseerde reagentia, 0,1% (w / v) gelatine oplossing kan dienen als een bekleding reagens tijdens DMEM/F-12 aangevuld met 15 mM HEPES, 10% (v / v) foetaal kalfsserum (FCS), 2 mM L-glutamine, 50 ug/ Ml gentamycine, 20 ug / ml heparine en 20 pg / ml endotheelcellen groei supplement kan worden gebruikt voor BEC onderhoud. </li><li> Sub-kweken voor experimenten: Split confluente BEC in een verhouding van 1:03-01:06, afhankelijk van het beoogde tijd gebruiken (3-7 dagen). Verander het onderhoud medium om de 3 dagen. Gebruik Becs tot 15 passages. </li></ol> 1.2. SVG foetale astrogliale Cell-lijn SVG humane foetale astroglial cellen 22 werden oorspronkelijk afkomstig van primaire, humane foetale hersenen getransformeerd met replicatie-deficiënte simianvirus 40. <ol><li> Onderhoud: Culture SVG-cellen in minimaal essentieel medium met Earle&#39;s gebalanceerde zoutoplossing, aangevuld met 20% (v / v) FCS (zelfde serum percentage dat hun ouderlijke primaire cellen 22 te handhaven), 2 mM L-glutamine, 50 U / ml penicilline en 50 ug / ml streptomycine. Houd de cellen in een bevochtigde 5% CO2, 21% O2 </sub&gt; incubator bij 37 ° C. </li><li> Sub-kweken voor experimenten: Split confluente SVGs in een verhouding 1:5 tot 1:10, bij afhankelijk van de beoogde tijd gebruiken (3-7 dagen). Verwijdering van trypsine is niet vereist vanwege het hoge gehalte aan serum in het medium. Verander het medium om de 3 dagen. Gebruik SVGs tot 20 passages. </li></ol> 2. Montage en Coculturing van de mensenrechten in vitro BBB Model (dag 0) Commentaar: Het menselijke in vitro contact BBB model wordt bereid volgens de gepubliceerde protocollen 13,23, met wijzigingen. 2.1. Coating van Inserts <ol><li> Plaats weefselkweek inserts (6,5 mm in diameter met polyester poreus membraan, 3 urn poriegrootte) in de putjes van de geleverde 24-wells plaat. Smeer het luminale oppervlak van de inserts <s> </s> overnacht in een bevochtigde 37 ° C incubator met rat collageen I (20 ug / cm 2, 50 pi 132 pg/ Ml collageen I in 0,02% azijnzuur in Milli-Q water (MQH 2 O)). Was de inserts een keer (zowel uit de abluminale en luminale zijde) met MQH 2 O om de resterende zuur te verwijderen. Opmerking: basale membraan van de hersenen haarvaten bevat geen collageen I, maar vooral lamininen, collageen type IV isovormen, nidogens en heparansulfaatproteoglycanen 9. Daarom sommige onderzoekers gebruiken bekledingsmiddelen zoals collageen IV, fibronectine 13 of Matrigel (BD Biosciences) 16 voor een authentieke BBB modellering. </li></ol> 2.2. Zaaien SVGs aan de onderzijde (abluminale) membraanoppervlak <ol><li> Keren de insert en zachtjes passen rond de rand van het poreuze membraan een kort stuk van elastische siliconen slang (&quot;externe slang&quot;; ~ 10 mm lang, 8 mm inwendige diameter, 1,6 mm wand), waardoor in wezen een nieuw ruim boven de abluminale oppervlak (Figuur 2A). </li><li> De onderkant van het inzetstuk needs te dichten media lekkage te voorkomen. Maak eerst een plug (figuur 2A en 2B) uit een siliconenslang (zogenaamde &quot;interne tubing&quot;; ~ 8 mm lang, 3,2 mm inwendige diameter, 1,6 mm wand; Figuur 2B), afgedicht aan een einde met een kunststof afdichtconus (~ 3 mm lang, bereid door het snijden van de bodem van een 0,2 ml polymerasekettingreactie (PCR) buis; Figuur 2B). Deze conus sluit niet alleen de interne buis lumen, maar breidt de rand strakkere passend in het inzetstuk. Vervolgens wordt met behulp van een steriele pincet, steek de siliconen plug in de luminale holte en vooraf het tot het up-to ~ 1-2 mm van het membraan (Figuur 2A) bereikt. </li><li> Vervolgens zaad 4 x 10 4 SVG-cellen in 200 pi SVG onderhoud medium (sectie 1.2.2 hierboven) direct in de siliconen ruim boven de abluminale membraanoppervlak (Figuur 2A). Laat SVGs te houden gedurende ten minste 4 uur in de incubator. Opmerking: Om de steriliteit te handhaven transporteren geassembleerd inzetstukken tussen twee 6-well platen (een plaat omgekeerd via andere, figuur 2C) blootstelling aan ongefilterde lucht tijdens de procedure te minimaliseren. Silicone buisjes en pluggen worden gewassen in ethanol en geautoclaveerd voor later gebruik. Opmerking: Gebruik pluggen (paragraaf 2.2.2) alleen voor wisselplaten met membraanporie maten groter dan 1 micrometer. Membranen met poriën met een diameter ≤ 1 micrometer zelden lekken en vereisen slechts de montage van de externe siliconenslangen (paragraaf 2.2.1). Bovendien hebben sommige andere dan collageen coating agents I (zie toelichting paragraaf 2.1) kunnen lekkage te voorkomen, zelfs door 3 um poriën. Bepaal deze empirisch. </li><li> Om de hechting staat van uw astrocyten bewaken, zaad in parallel ineen standaard 96-well een identiek volume van de astrocyten cel-suspensie. Deze goed heeft dezelfde oppervlakte als de 6,5 mm inzetstuk (0,33 cm2) en maakt gemakkelijker visualisatie van cellen door fase-contrast microscopie dan de insert membraan. Wanneer u voldoende hechting van de astrocyten nemen in de controlegroep 96-well, de astrocyten hebben adequaat ook gehandeld op grond van de insert membraan. </li><li> Wanneer astrocyten voldoende in de controlegroep 96-goed hebben gehandeld, de overdracht van de insert vergaderingen om de weefselkweek kap (zie opmerking hierboven) en verwijder voorzichtig de externe silicone slangen en stekkers. Terug inzetstukken aan de normale (dus rechtop) oriëntatie in de meegeleverde putjes die 800 ul / putje van BEC onderhoud medium (punt 1.1.2 hierboven). </li></ol> 2.3. Zaaien van Becs in de Luminal kamer boven de Astrocytes Zaad 2x10 4 Becs in 200 ul op de collageen gecoate luminale oppervlak en de terugkeer van de inserts in de incubator. 2.4. Coculturing Coculture de SVG / BEC-geplaatste inserts voor 3 dagen in BEC medium zonder wisselen van materiaal voor experimenten. 3. Experimenteren met de Human BBB Model (dag 3) <ol><li> Om de in vitro BBB eerste wasbeurt cellen te stimuleren door het vervangen van de luminale en abluminale media met 600 ul en 100 ul serumvrij medium BEC, respectievelijk. </li><li> Zuig het medium luminale telkens vervangen door 100 ul serumvrij medium met stimulerende middelen. Opmerking: als stimulatie van de abluminale kamer wordt vereist (de in vitro BBB activeren van de astrocytaire compartiment), zuig het abluminale medium en vervangen door 600 ul serumvrij medium met stimulerende middelen. </li><li> Test elke experimentele groep in drievoud (vandaar, indien luminaal stimulatie wordt uitgevoerd, waarvan 3 x 100 ul vereist, raden we het verdunnen van de re<html> middelen hun eindconcentraties in 350 gl serumvrij medium per groep pipetteerfouten tussen putjes minimaliseren). </li><li> Voer standaard paracellulaire en / of transcellulair permeabiliteit testen van gelabelde tracers 16,24 (de laatste we fluoresceïne isothiocyanaat (FITC)-geconjugeerd albumine) en / of meting van TEER 13,16,25 zoals eerder beschreven. </li></ol> Doorlaatbaarheid (% van max) = (: Ter compensatie van schommelingen in uitgangswaarde tussen permeabiliteit experimenten, veranderingen in permeabiliteit ten opzichte van een beklede insert zonder cellen (die dient als referentie voor maximale permeabiliteit) en de met drager behandelde groep met de formule analyseren permeabiliteit waarde van experimentele insert - gemiddelde permeabiliteit waarde van het voertuig groep) / (permeabiliteit waarde van de blanco insert - gemiddelde permeabiliteit waarde van de groep voertuig) X 100. 4. Visualisatie van cellen op poreuze membranen nt &quot;&gt; Reactie: ongekleurde cellen op insert membranen zijn moeilijk waar te nemen door fase-contrast of differentieel interferentie contrast (DIC) microscopie, omdat het membraan is vrij ondoorzichtig en interfereert met lichttransmissie Om te gaan met dit probleem ontwikkelden we verschillende kleuringen van cellen op. inserts, die sterk verbeteren cel verschijning op het membraan. algemeen vlekken het inzetstuk membranen terwijl nog aan het inzetstuk in de putjes. De membranen mag alleen worden verwijderd aan het einde van de kleuring procedure voor montage doeleinden. 4.1. Hematoxylin kleuring <ol><li> Bevestig inzetstukken met ijskoude 4% (w / v) paraformaldehyde (PFA) in fosfaat gebufferde zoutoplossing (PBS, 130 mM NaCl, 10 mM Na 2 HPO 4, 10 mM NaH 2PO 4, pH 7,2) gedurende 20 minuten. Was eenmaal in PBS. </li><li> Dompel het inzetstuk in 0,1% Mayer&#39;s hematoxyline oplossing gedurende 2 minuten. </li><li> Voorzichtig wassen de insert met kraanwater (door onderdompeling de insert in een bekerglas met kraanwater en de pipet voorzichtig het overtollige water uit). Breng de insert Scott&#39;s kraanwater oplossing (2 g / L NaHCO3, 20 g / L MgSO4) voor ~ 20 seconden totdat de gewenste blauwe kleur ontstaat. Was het inzetstuk opnieuw met kraanwater (paragraaf 4.1.3). Een optionele eosinekleuring kan hier worden ingevoerd door dompelen van de insert in 1% eosine-oplossing gedurende 10 seconden gevolgd door een kraan water wassen. </li><li> Lucht-drogen de insert membraan. Met behulp van een scalpel (snijden rond het membraan rand) verwijder het membraan en monteer het op een glasplaatje voor bright-field imaging Opmerking: Als di-N-butylphthalateinxylene (DPX) fixeermiddel wordt gebruikt was het inzetstuk 100% ethanol gevolgd door xyleen alvorens en monteren membraan. </li></ol> 4.2. Scanning Electron Microscope (SEM) <ol><li> Bevestig inzetstukken met ijskoude 4% (gew / vol) PFA in PBS gedurende 20 minuten. Was drie keer in PBS. </li><li> Post-fix de membranen gedurende 30 min in 1% (w / v) Osmiumtetroxide in MQH 2 O. </li><li> Was inserts in water (paragraaf 4.1.3) en dehydrateren in een escalerende ethanol gradiënt (50%, 70%, 90% gedurende 5 min elk, vervolgens 3x met 100% ethanol gedurende 10 min per interval). </li><li> Behandel gedehydrateerd inzetstukken met een mengsel van hexamethyldisilazaan (HMDS): ethanol (01:02 daarna 02:01 gedurende 5 min). </li><li> Behandel inzetstukken 100% HMDS gedurende 5 min, drogen en opslag onder gedroogde omstandigheden. </li><li> Verwijder het membraan met behulp van een scalpel (snijden in het membraan rand). Onderzoek membranen door scanning elektronenmicroscopie. </li></ol> 4.3. Immunofluorescentie <ol><li> Bevestig inzetstukken met ijskoude 4% (gew / vol) PFA in PBS gedurende 20 minuten, eenmaal wassen in Tris-gebufferde zoutoplossing (TBS, 50 mM Tris-HCl pH 7,6, 154 mM NaCl, 0,22 urn gefiltreerd). </li><li> Voer immunokleuring van de cellen in het insert membraan zoals eerder beschreven 26. </li><li> Verwijder het membraan met behulp van een scalpel (snijden rond het membraan rand) en plak hem op aglass dia met fluorescentie montage medium. Onderzoek membraan door fluorescentie microscopie. </li></ol>

<ol><li>Hawkins, B. T., Davis, T. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+blood-brain+barrier%2Fneurovascular+unit+in+health+and+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Pharmacol.+Rev%22%5BJournal%5D)">The blood-brain barrier/neurovascular unit in health and disease.</a> Pharmacol. Rev. 57, 173-185 (2005).</li>
<li>Abbott, N. J., Patabendige, A. A., Dolman, D. E., Yusof, S. R., Begley, D. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Structure+and+function+of+the+blood-brain+barrier%5BTitle%5D)+AND+%22Neurobiol.+Dis%22%5BJournal%5D)">Structure and function of the blood-brain barrier.</a> Neurobiol. Dis. 37, 13-25 (2010).</li>
<li>Zlokovic, B. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+blood-brain+barrier+in+health+and+chronic+neurodegenerative+disorders%5BTitle%5D)+AND+%22Neuron%22%5BJournal%5D)">The blood-brain barrier in health and chronic neurodegenerative disorders.</a> Neuron. 57, 178-201 (2008).</li>
<li>Vivien, D., Gauberti, M., Montagne, A., Defer, G., Touze, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Impact+of+tissue+plasminogen+activator+on+the+neurovascular+unit%3A+from+clinical+data+to+experimental+evidence%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Cereb.+Blood+Flow+Metab%22%5BJournal%5D)">Impact of tissue plasminogen activator on the neurovascular unit: from clinical data to experimental evidence.</a> J. Cereb. Blood Flow Metab. 31, 2119-2134 (2011).</li>
<li>Stewart, P. A., Wiley, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Developing+nervous+tissue+induces+formation+of+blood-brain+barrier+characteristics+in+invading+endothelial+cells%3A+a+study+using+quail--chick+transplantation+chimeras%5BTitle%5D)+AND+%22Dev.+Biol%22%5BJournal%5D)">Developing nervous tissue induces formation of blood-brain barrier characteristics in invading endothelial cells: a study using quail--chick transplantation chimeras.</a> Dev. Biol. 84, 183-192 (1981).</li>
<li>Janzer, R. C., Raff, M. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Astrocytes+induce+blood-brain+barrier+properties+in+endothelial+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Astrocytes induce blood-brain barrier properties in endothelial cells.</a> Nature. 325, 253-257 (1987).</li>
<li>Abbott, N. J., Ronnback, L., Hansson, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Astrocyte-endothelial+interactions+at+the+blood-brain+barrier%5BTitle%5D)+AND+%22Nat.+Rev.+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Astrocyte-endothelial interactions at the blood-brain barrier.</a> Nat. Rev. Neurosci. 7, 41-53 (2006).</li>
<li>Dalkara, T., Gursoy-Ozdemir, Y., Yemisci, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Brain+microvascular+pericytes+in+health+and+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Acta+Neuropathol%22%5BJournal%5D)">Brain microvascular pericytes in health and disease.</a> Acta Neuropathol. 122, 1-9 (2011).</li>
<li>Engelhardt, B., Sorokin, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+blood-brain+and+the+blood-cerebrospinal+fluid+barriers%3A+function+and+dysfunction%5BTitle%5D)+AND+%22Semin.+Immunopathol%22%5BJournal%5D)">The blood-brain and the blood-cerebrospinal fluid barriers: function and dysfunction.</a> Semin. Immunopathol. 31, 497-511 (2009).</li>
<li>Girouard, H., Iadecola, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neurovascular+coupling+in+the+normal+brain+and+in+hypertension%2C+stroke%2C+and+Alzheimer+disease%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Appl.+Physiol%22%5BJournal%5D)">Neurovascular coupling in the normal brain and in hypertension, stroke, and Alzheimer disease.</a> J. Appl. Physiol. 100, 328-335 (2006).</li>
<li>Deli, M. A., Abraham, C. S., Kataoka, Y., Niwa, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Permeability+studies+on+in+vitro+blood-brain+barrier+models%3A+physiology%2C+pathology%2C+and+pharmacology%5BTitle%5D)+AND+%22Cell.+Mol.+Neurobiol%22%5BJournal%5D)">Permeability studies on in vitro blood-brain barrier models: physiology, pathology, and pharmacology.</a> Cell. Mol. Neurobiol. 25, 59-127 (2005).</li>
<li>Booth, R., Kim, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Characterization+of+a+microfluidic+in+vitro+model+of+the+blood-brain+barrier+%28muBBB%29%5BTitle%5D)+AND+%22Lab+Chip%22%5BJournal%5D)">Characterization of a microfluidic in vitro model of the blood-brain barrier (muBBB).</a> Lab Chip. 12, 1784-1792 (2012).</li>
<li>Gaillard, P. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Establishment+and+functional+characterization+of+an+in+vitro+model+of+the+blood-brain+barrier%2C+comprising+a+co-culture+of+brain+capillary+endothelial+cells+and+astrocytes%5BTitle%5D)+AND+%22Eur.+Pharm.+Sci%22%5BJournal%5D)">Establishment and functional characterization of an in vitro model of the blood-brain barrier, comprising a co-culture of brain capillary endothelial cells and astrocytes.</a> Eur. Pharm. Sci. 12, 215-222 (2001).</li>
<li>Hurwitz, A. A., Berman, J. W., Rashbaum, W. K., Lyman, W. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Human+fetal+astrocytes+induce+the+expression+of+blood-brain+barrier+specific+proteins+by+autologous+endothelial+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Brain+Res%22%5BJournal%5D)">Human fetal astrocytes induce the expression of blood-brain barrier specific proteins by autologous endothelial cells.</a> Brain Res. 625, 238-243 (1993).</li>
<li>Demeuse, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Compartmentalized+coculture+of+rat+brain+endothelial+cells+and+astrocytes%3A+a+syngenic+model+to+study+the+blood-brain+barrier%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Neurosci.+Methods%22%5BJournal%5D)">Compartmentalized coculture of rat brain endothelial cells and astrocytes: a syngenic model to study the blood-brain barrier.</a> J. Neurosci. Methods. 121, 21-31 (2002).</li>
<li>Coisne, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mouse+syngenic+in+vitro+blood-brain+barrier+model%3A+a+new+tool+to+examine+inflammatory+events+in+cerebral+endothelium%5BTitle%5D)+AND+%22Lab.+Invest%22%5BJournal%5D)">Mouse syngenic in vitro blood-brain barrier model: a new tool to examine inflammatory events in cerebral endothelium.</a> Lab. Invest. 85, 734-746 (2005).</li>
<li>Cohen-Kashi Malina, K., Cooper, I., Teichberg, V. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Closing+the+gap+between+the+in+vivo+and+in+vitro+blood-brain+barrier+tightness%5BTitle%5D)+AND+%22Brain+Res%22%5BJournal%5D)">Closing the gap between the in vivo and in vitro blood-brain barrier tightness.</a> Brain Res. 1284, 12-21 (2009).</li>
<li>Kroll, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Control+of+the+blood-brain+barrier+by+glucocorticoids+and+the+cells+of+the+neurovascular+unit%5BTitle%5D)+AND+%22Ann.+N.+Y.+Acad.+Sci%22%5BJournal%5D)">Control of the blood-brain barrier by glucocorticoids and the cells of the neurovascular unit.</a> Ann. N. Y. Acad. Sci. 1165, 228-239 (2009).</li>
<li>Cucullo, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Immortalized+human+brain+endothelial+cells+and+flow-based+vascular+modeling%3A+a+marriage+of+convenience+for+rational+neurovascular+studies%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Cereb.+Blood+Flow+Metab%22%5BJournal%5D)">Immortalized human brain endothelial cells and flow-based vascular modeling: a marriage of convenience for rational neurovascular studies.</a> J. Cereb. Blood Flow Metab. 28, 312-328 (2008).</li>
<li>Li, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Permeability+of+endothelial+and+astrocyte+cocultures%3A+in+vitro+blood-brain+barrier+models+for+drug+delivery+studies%5BTitle%5D)+AND+%22Ann.+Biomed.+Eng%22%5BJournal%5D)">Permeability of endothelial and astrocyte cocultures: in vitro blood-brain barrier models for drug delivery studies.</a> Ann. Biomed. Eng. 38, 2499-2511 (2010).</li>
<li>Antonic, A., Sena, E., Donnan, G., Howells, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Human+In+Vitro+Models+of+Ischaemic+Stroke%3A+a+Test+Bed+for+Translation%5BTitle%5D)+AND+%22Transl.+Stroke+Res%22%5BJournal%5D)">Human In Vitro Models of Ischaemic Stroke: a Test Bed for Translation.</a> Transl. Stroke Res. 3, 306-309 (2012).</li>
<li>Major, E. O., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Establishment+of+a+line+of+human+fetal+glial+cells+that+supports+JC+virus+multiplication%5BTitle%5D)+AND+%22Proc.+Natl.+Acad.+Sci.+U.S.A%22%5BJournal%5D)">Establishment of a line of human fetal glial cells that supports JC virus multiplication.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 82, 1257-1261 (1985).</li>
<li>Eugenin, E. A., Berman, J. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Chemokine-dependent+mechanisms+of+leukocyte+trafficking+across+a+model+of+the+blood-brain+barrier%5BTitle%5D)+AND+%22Methods%22%5BJournal%5D)">Chemokine-dependent mechanisms of leukocyte trafficking across a model of the blood-brain barrier.</a> Methods. 29, 351-361 (2003).</li>
<li>Dehouck, M. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Drug+transfer+across+the+blood-brain+barrier%3A+correlation+between+in+vitro+and+in+vivo+models%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Neurochem%22%5BJournal%5D)">Drug transfer across the blood-brain barrier: correlation between in vitro and in vivo models.</a> J. Neurochem. 58, 1790-1797 (1992).</li>
<li>Perriere, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Puromycin-based+purification+of+rat+brain+capillary+endothelial+cell+cultures.+Effect+on+the+expression+of+blood-brain+barrier-specific+properties%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Neurochem%22%5BJournal%5D)">Puromycin-based purification of rat brain capillary endothelial cell cultures. Effect on the expression of blood-brain barrier-specific properties.</a> J. Neurochem. 93, 279-289 (2005).</li>
<li>Niego, B., Samson, A. L., Petersen, K. U., Medcalf, R. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Thrombin-induced+activation+of+astrocytes+in+mixed+rat+hippocampal+cultures+is+inhibited+by+soluble+thrombomodulin%5BTitle%5D)+AND+%22Brain+Res%22%5BJournal%5D)">Thrombin-induced activation of astrocytes in mixed rat hippocampal cultures is inhibited by soluble thrombomodulin.</a> Brain Res. 1381, 38-51 (2011).</li>
<li>Ma, S. H., Lepak, L. A., Hussain, R. J., Shain, W., Shuler, M. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+endothelial+and+astrocyte+co-culture+model+of+the+blood-brain+barrier+utilizing+an+ultra-thin%2C+nanofabricated+silicon+nitride+membrane%5BTitle%5D)+AND+%22Lab+Chip%22%5BJournal%5D)">An endothelial and astrocyte co-culture model of the blood-brain barrier utilizing an ultra-thin, nanofabricated silicon nitride membrane.</a> Lab Chip. 5, 74-85 (2005).</li>
<li>Niego, B., Freeman, R., Puschmann, T. B., Turnley, A. M., Medcalf, R. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((t-PA-specific+modulation+of+a+human+BBB+model+involves+plasmin-mediated+activation+of+the+Rho-kinase+pathway+in+astrocytes%5BTitle%5D)+AND+%22Blood%22%5BJournal%5D)">t-PA-specific modulation of a human BBB model involves plasmin-mediated activation of the Rho-kinase pathway in astrocytes.</a> Blood. , (2012).</li>
<li>Deli, M. A., Abraham, C. S., Niwa, M., Falus, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((N%2CN-diethyl-2-%5B4-%28phenylmethyl%29phenoxy%5Dethanamine+increases+the+permeability+of+primary+mouse+cerebral+endothelial+cell+monolayers%5BTitle%5D)+AND+%22Inflamm.+Res%22%5BJournal%5D)">N,N-diethyl-2-[4-(phenylmethyl)phenoxy]ethanamine increases the permeability of primary mouse cerebral endothelial cell monolayers.</a> Inflamm. Res. 52, 39-40 (2003).</li>
<li>Su, E. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Activation+of+PDGF-CC+by+tissue+plasminogen+activator+impairs+blood-brain+barrier+integrity+during+ischemic+stroke%5BTitle%5D)+AND+%22Nat.+Med%22%5BJournal%5D)">Activation of PDGF-CC by tissue plasminogen activator impairs blood-brain barrier integrity during ischemic stroke.</a> Nat. Med. 14, 731-737 (2008).</li>
<li>Yepes, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tissue-type+plasminogen+activator+induces+opening+of+the+blood-brain+barrier+via+the+LDL+receptor-related+protein%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Clin.+Invest%22%5BJournal%5D)">Tissue-type plasminogen activator induces opening of the blood-brain barrier via the LDL receptor-related protein.</a> J. Clin. Invest. 112, 1533-1540 (2003).</li>
<li>Abu Fanne, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Blood-brain+barrier+permeability+and+tPA-mediated+neurotoxicity%5BTitle%5D)+AND+%22Neuropharmacology%22%5BJournal%5D)">Blood-brain barrier permeability and tPA-mediated neurotoxicity.</a> Neuropharmacology. 58, 972-980 (1016).</li>
<li>Wang, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Lipoprotein+receptor-mediated+induction+of+matrix+metalloproteinase+by+tissue+plasminogen+activator%5BTitle%5D)+AND+%22Nat.+Med%22%5BJournal%5D)">Lipoprotein receptor-mediated induction of matrix metalloproteinase by tissue plasminogen activator.</a> Nat. Med. 9, 1313-1317 (2003).</li>
<li>Wang, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mechanisms+of+hemorrhagic+transformation+after+tissue+plasminogen+activator+reperfusion+therapy+for+ischemic+stroke%5BTitle%5D)+AND+%22Stroke%22%5BJournal%5D)">Mechanisms of hemorrhagic transformation after tissue plasminogen activator reperfusion therapy for ischemic stroke.</a> Stroke. 35, 2726-2730 (2004).</li>
<li>Donnan, G. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((How+to+make+better+use+of+thrombolytic+therapy+in+acute+ischemic+stroke%5BTitle%5D)+AND+%22Nat.+Rev.+Neurol%22%5BJournal%5D)">How to make better use of thrombolytic therapy in acute ischemic stroke.</a> Nat. Rev. Neurol. 7, 400-409 (2011).</li>
<li>Acheampong, P., Ford, G. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pharmacokinetics+of+alteplase+in+the+treatment+of+ischaemic+stroke%5BTitle%5D)+AND+%22Expert+Opin.+Drug+Metab.+Toxicol%22%5BJournal%5D)">Pharmacokinetics of alteplase in the treatment of ischaemic stroke.</a> Expert Opin. Drug Metab. Toxicol. 8, 271-281 (2012).</li>
<li>Derex, L., Nighoghossian, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intracerebral+haemorrhage+after+thrombolysis+for+acute+ischaemic+stroke%3A+an+update%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Neurol.+Neurosurg.+Psychiatry%22%5BJournal%5D)">Intracerebral haemorrhage after thrombolysis for acute ischaemic stroke: an update.</a> J. Neurol. Neurosurg. Psychiatry. 79, 1093-1099 (2008).</li>
<li>Garber, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Stroke+treatment--light+at+the+end+of+the+tunnel%5BTitle%5D)+AND+%22Nat.+Biotechnol%22%5BJournal%5D)">Stroke treatment--light at the end of the tunnel.</a> Nat. Biotechnol. 25, 838-840 (2007).</li>
<li>Liebeskind, D. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Reversing+Stroke+in+the+2010s%5BTitle%5D)+AND+%22Stroke%22%5BJournal%5D)">Reversing Stroke in the 2010s.</a> Stroke. 40, 3156-3158 (2009).</li>
<li>Weksler, B. B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Blood-brain+barrier-specific+properties+of+a+human+adult+brain+endothelial+cell+line%5BTitle%5D)+AND+%22FASEB+J%22%5BJournal%5D)">Blood-brain barrier-specific properties of a human adult brain endothelial cell line.</a> FASEB J. 19, 1872-1874 (2005).</li>
<li>Song, L., Pachter, J. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Culture+of+murine+brain+microvascular+endothelial+cells+that+maintain+expression+and+cytoskeletal+association+of+tight+junction-associated+proteins%5BTitle%5D)+AND+%22In+Vitro+Cell.+Dev.+Biol.+Anim%22%5BJournal%5D)">Culture of murine brain microvascular endothelial cells that maintain expression and cytoskeletal association of tight junction-associated proteins.</a> In Vitro Cell. Dev. Biol. Anim. 39 (2003), 313-320 (2003).</li>
<li>Steiner, O., Coisne, C., Engelhardt, B., Lyck, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comparison+of+immortalized+bEnd5+and+primary+mouse+brain+microvascular+endothelial+cells+as+in+vitro+blood-brain+barrier+models+for+the+study+of+T+cell+extravasation%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Cereb.+Blood+Flow+Metab%22%5BJournal%5D)">Comparison of immortalized bEnd5 and primary mouse brain microvascular endothelial cells as in vitro blood-brain barrier models for the study of T cell extravasation.</a> J. Cereb. Blood Flow Metab. 31, 315-327 (2011).</li>
</ol>

Auteurs hebben niets te onthullen.

Medisch onderzoek naar hersenen pathologieën lijdt veel translationeel moeite. Op het gebied van acute ischemische beroerte, bijvoorbeeld veel geneesmiddelen die grote belofte in diermodellen bleek niet in de kliniek 38,39. De redenen voor deze teleurstellende resultaten zijn divers en omvatten ontrouw van de preklinische testsystemen om de menselijke beroerte scenario en overwaardering van de resultaten verkregen uit dierproeven 21. Een strategie om de voorspellende waarde van preklinische bevindi...

De BBB is een gespecialiseerde interface tussen de perifere bloedsomloop en het centrale zenuwstelsel, cruciaal verantwoordelijk voor het onderhoud van hersenen hemostase. Het bestaat uit verschillende hersenen microvasculaire endotheelcellen (BEC) die functioneel worden beïnvloed door enkele cellulaire en acellulaire componenten (hieronder) om een ​​strakke en dynamische gateway in de hersenen vormen. Onder fysiologische omstandigheden de BBB beperkt de doorgang van bloedcellen, plasma componenten en schadelijke stoffen, alle potentieel neurotoxische, in de hersenen. Tegelijkertijd heeft de BBB wisselt selectief sleutel ionen en voedingsstoffen (glucose en aminozuren) en metabolische afvalproducten tussen de hersenen en de circulatie naar de hersenen milieu 1,2 nauwkeurig te behouden. De laatste jaren is het steeds duidelijk dat de mislukking van BBB voorkomt in een verscheidenheid van chronische hersen aandoeningen zoals neurodegeneratieve en inflammatoire ziekten (Alzheimer en multiple sclerose, respectievelijk) 3, en bij acute aandoeningen zoals ischemische beroerte 4. De unieke eigenschappen BBB hersenen endotheelcellen (BEC) worden grotendeels veroorzaakt door de omgeving cerebrale 5, en met name door astrocyten 6,7. Er is een groeiend besef dat andere celtypen, zoals pericyten 8, neuronen en microglia 1,3, en de basale membraan 9, ondersteunt BEC en samen een functionele eenheid zogenaamde &quot;neurovasculaire eenheid&quot; (NVU) die tegelijkertijd koppels neuronale metabole eisen aan hen leveren, haarvaten 10. De betrokkenheid van de BBB in pathologische situaties ten grondslag talrijke pogingen om de ontwikkeling van in vitro BBB-modellen ten behoeve van BBB-gerelateerd onderzoek 11,12. Deze modellen doel zo dicht mogelijk na te bootsen in vivo BBB kenmerken volgens het beginsel NVU. In vitro </em&gt; BBB-modellen over het algemeen rekenen op een monolaag van-tight-junction vormen Becs (vooral van runderen 13, menselijk 14, 15 rat, muis 16, en varkens 17,18 afkomst), gekweekt op een poreus membraan alsmede ondersteunend astrocyten (uitgebreid beoordeeld door Deli et al.. 2005 11). Astrocyten kunnen worden gekweekt in contactloze omstandigheden op de bodem van een weefselkweek goed gescheiden van BEC (gekweekt op het bovenoppervlak van het membraan) van het kweekmedium Nog communiceren met BEC via oplosbare factoren 16. In meer geavanceerde modellen die beter te lijken de anatomische structuur van de BBB in vivo worden astrocyten in contact gehouden omstandigheden gekweekt en direct aan de andere zijde van het membraan dicht bij BEC 13,15,17 (figuur 1). Deze configuratie maakt het mogelijk fysiek contact tussen Becs en astrocyten, opgericht als astrocyten projecthun processen door het poreuze membraan. Belangrijk, voor een echt contact te komen de poriën dient ≥ 1 urn in diameter, omdat astrocytaire end-voeten niet kan passeren kleinere poriën (dwz 0,4 micrometer) 14,15. Met name worden contact BBB systemen aangetoond in sommige studies superieur aan hun contactloze tegenhangers over hun trans endotheliale elektrische weerstand (TEER) en endotheliale permeabiliteit van verschillende tracers 13,17,18 te zijn. Een extra dimensie van doorstroming werd onlangs toegevoegd in een aantal in vitro BBB modellen afschuifkrachten toepassing op het endotheel nauwere simulatie van de hersenen vasculatuur 12,19. Een technische hindernis te overwinnen bij het genereren van een contact BBB model is het zaaien van astrocyten tegen de zwaartekracht op het abluminale oppervlak van het poreuze membraan. Eerdere protocollen 13,20, waar astrocyten eenvoudigweg werden gezaaid in een druppel media bovenop een inomgezet insert, alleen toegestaan ​​korte zaaien tijden (dwz 10 min 13 of 2 uur 20), die werden gevonden in onze handen onvoldoende voor een goede hechting van cellen te zijn. Uitgaande van deze eerste methode, een langer astrocyten bevestiging vereist constante monitoring van de inserts door frequent openen van de incubator (waardoor schommelingen in temperatuur, pH en vocht) en is ook gevoelig voor ongelijkmatige zaaien van cellen door lekkage van media door de poriën, met name indien poriën groter dan 1 micrometer in dienst zijn. We beschrijven hier een algemeen protocol voor de bereiding van een contact BBB-model. Onze werkwijze omvat een alternatieve werkwijze voor cel-enten op omgekeerde inserts, welke de bovenvermelde beperkingen richt. De werkwijze maakt ongestoorde hechting van astrocyten op het abluminale membraanoppervlak, per evenwicht incubator voor langere tijd. Hierdoor wordt een gelijkmatige zaaien van astrocyten bereikt die barrière kwaliteit toeneemten minimaliseert basale doorlaatbaarheid verschillen tussen de inserts. Aangezien het gebruik van menselijke cellen is belangrijk voor het menselijk-relevant onderzoek 21, we bovendien aantonen in dit artikel het specifieke gebruik van een nieuwe combinatie van primaire menselijke Becs en onsterfelijke, menselijke astrocyten voor de oprichting van een contact menselijk BBB-model met een high throughput screening capaciteit . Sinds het bekijken van cellen op poreuze membranen kan moeilijk zijn, we ook detail kleuring technieken die kunnen helpen bij het bepalen van samenloop en cel morfologie op de poreuze membranen. Tenslotte hebben we een voorbeeld hoe onze menselijke BBB model kan worden gebruikt om het effect van weefsel-type plasminogeen activator (t-PA) onderzoeken - een stolsel busting enzym dat als enige behandelingsoptie voor acute ischemische beroerte - de BBB.

<table><tbody><tr><td>Attachment Factor</td><td>Cell-Systems Corporation</td><td>4Z0-210</td><td></td></tr><tr><td>Brain microvascular endothelial cells (BECs), primary, human</td><td>Cell-Systems Corporation</td><td>ACBRI 376</td><td></td></tr><tr><td>Complete medium</td><td>Cell-Systems Corporation</td><td>4Z0-500</td><td>Supplemented with CSC JetFuel</td></tr><tr><td>Complete serum-free medium</td><td>Cell-Systems Corporation</td><td>SF-4Z0-500</td><td>Supplemented with CSC RocketFuel</td></tr><tr><td>DMEM/F-12 with 15 mM HEPES</td><td>Life Technologies</td><td>11330-032</td><td></td></tr><tr><td>Endothelial cells growth supplement (from bovine origin)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>E2759-15MG</td><td></td></tr><tr><td>External silicone tubing</td><td>Watson-Marlow</td><td>913.A080.016</td><td>Pumpsil merk, 8 mm interne diameter, 1,6 mm wand</td></tr><tr><td>Foetal calf serum</td><td>Lonza</td><td>14-501F</td><td></td></tr><tr><td>Gentamycin sulfate</td><td>Life Technologies</td><td>15750-060</td><td></td></tr><tr><td>Heparin sodium</td><td>Pfizer</td><td></td><td>1.000 U/ml</td></tr><tr><td>Hexamethyldisilazane (HMDS)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>H4875</td><td></td></tr><tr><td>Human brain microvascular endothelial cells</td><td>Cell-Systems Corporation</td><td>ACBRI 376</td><td></td></tr><tr><td>Internal silicone tubing</td><td>Watson-Marlow</td><td>913.A032.016</td><td>Pumpsil merk, 3,2 mm interne diameter, 1,6 mm wand</td></tr><tr><td>L-Glutamine</td><td>Life Technologies</td><td>25030</td><td></td></tr><tr><td>Mayer&rsquo;s hematoxylin solution</td><td>Amber Scientific</td><td>MH</td><td></td></tr><tr><td>Minimum essential medium with Earle&rsquo;s balanced salt solution</td><td>HyClone Laboratories</td><td>SH30244.01</td><td></td></tr><tr><td>Penicillin/Streptomycin</td><td>Life Technologies</td><td>15140</td><td></td></tr><tr><td>Rat collagen I</td><td>Trevigen</td><td>3440-100-01</td><td>Cultrex merk</td></tr><tr><td>Tissue culture inserts</td><td>Corning Life Sciences</td><td>3472</td><td>Transwell merk, 6,5 mm in diameter, met polyester poreuze membraan, 3 &micro;m poriëngrootte</td></tr></tbody></table>

verbeterde werkwijze voor de bereiding van een human-cell gebaseerde, contact model van de bloed-hersenbarrière

Improved Method for the Preparation of a Human Cell-based, Contact Model of the Blood-Brain Barrier

De bloed-hersenbarrière (BBB) ​​bestaat uit ondoordringbare maar aanpasbare hersenen haarvaten die streng te controleren, de hersenen milieu. Niet de BBB is geïmpliceerd in de etiologie van vele hersenen pathologieën, noopt tot de ontwikkeling van humane in vitro modellen BBB helpt bij klinisch relevante onderzoek. Onder de talrijke BBB modellen dusver beschreven, een statische (zonder stroom), contact BBB model, waarbij astrocyten en de hersenen endotheelcellen (BEC) worden gekweekt samen aan weerszijden van een poreus membraan, ontwikkeld tot een vereenvoudigde, doch authentieke systeem het simuleren BBB met high throughput screening capaciteit. Toch is de generatie van dergelijk model geeft weinig technische uitdagingen. Hier beschrijven we een protocol voor de bereiding van een contact menselijk BBB model gebruik te maken van een nieuwe combinatie van primaire menselijke Becs en onsterfelijke, menselijke astrocyten. Concreet, we detail een innovatieve methode voor cel-zaaien op omgekeerde inserts evenals specificeren insertiet kleurtechnieken en illustreren hoe we ons model voor BBB-gerelateerd onderzoek.

Om menselijk contact BBB model moesten we SVGs en BEC op poreuze membranen cultiveren met een 3 micrometer poriegrootte, aangetoond passage van astrocyten end-voeten mogelijk voor contact met endotheelcellen 14,15,27,28 stellen. Een schematische weergave van de volledige contactmodel wordt geïllustreerd in figuur 1 (linker afbeelding). De belangrijkste technische uitdaging van een contactsysteem is de noodzaak om astrocyten zaad tegen de zwaartekracht op het abluminale oppervlak van het membr...

Oprichting van menselijke modellen van de bloed-hersenbarrière (BBB) ​​kan profiteren onderzoek naar hersenen voorwaarden in verband met BBB mislukking. We beschrijven hier een verbeterde techniek voor de bereiding van een contact BBB model dat coculturing menselijke astrocyten en brein endotheelcellen maakt aan de tegenovergestelde zijden van een poreus membraan.

Verbeterde werkwijze voor de bereiding van een Human-Cell gebaseerde, Contact Model van de bloed-hersenbarrière

The blood-brain barrier (BBB) comprises impermeable but adaptable brain capillaries which tightly control the brain environment. Failure of the BBB has ...

Deze procedure beoogt een in vitro simulatie van de bloed-hersenbarrière door middel van co-cultivering van astrocyten en endotheelcellen aan weerszijden van een poreus membraan. Coat eerst het luminale oppervlak van het poreuze membraan met een extracellulaire matrix. Proteïnen zoals collageen passen de omgekeerde insert met een externe siliconen slang en een interne siliconen plug om een verwijderbare put boven het abluminale oppervlak van het membraan te creëren.Zaai nu de astrocytcellen op de omgekeerde insert, zodat ze hechten aan het abluminale oppervlak. Verwijder vervolgens de slang en plaats de insert in de normale oriëntatie in een met medium gevulde well. Zaai daarna de endotheelcellen in het luminale compartiment van de insert en kweek deze samen met de tegenoverliggende astrocyten.Uiteindelijk wordt de passage van fluorescente tracers of de registratie van de trans-endotheliale elektrische weerstand gebruikt om permeabiliteitsveranderingen in de in vitro BBB te meten als reactie op verschillende stimulerende agentia. Deze procedure wordt gedemonstreerd door Mr. Barry Nigo, een postdoc in mijn laboratorium, die tijdens zijn PhD dit aangepaste zaaiprotocol heeft ontwikke

improved-method-for-preparation-human-cell-based-contact-model-blood

Research

JoVE Journal

Bioengineering

Bio-engineering

This video demonstrates the co-culturing of human brain pericyte, astrocyte, and endothelial cells. Each cell layer is formed separately and then cultured together, creating a three-layered system that mimics the cellular arrangement of the blood-brain...

Developing a Triple Cell Culture Model of the Human Blood-Brain Barrier

De epitheliale cellen van de choroïdale plexus (CP) vormen de bloed-hersenwaterbarrière (BCSFB). Een in vitro model van de BCSFB gebruikt humane choroïdale plexuspapilloom (HIBCPP) cellen. Dit artikel beschrijft het kweken en basolaterale infectie van HIBCPP cellen met behulp van een cellencultuur filterinzetsysteem.

Een Choroid Plexus Epitheliale-Cell gebaseerde model van het menselijk bloed-cerebrospinale vloeistof Barrier om bacteriële infectie studie uit het basolaterale Side

Hier beschrijven we een in vitro muismodel van de bloed-hersenbarrière dat gebruik maakt van impedantiecelspectroscopie, met een focus op de gevolgen voor de integriteit en permeabiliteit van endotheelcellen na interactie met geactiveerde T-cellen.

Een<em&gt; In Vitro</em&gt; Model van de bloed-hersen barrière met behulp van Impedantiespectroscopie: een focus op T-cel-endotheelcellen Interaction

Het doel van het protocol is te presenteren van een geoptimaliseerde procedure tot vaststelling van een in vitro bloed - hersenbarrière (BBB) model gebaseerd op primaire varkens endothelial hersencellen (pBECs). Het model toont hoge reproduceerbaarheid, hoge dichtheid, en is geschikt voor studies van vervoer en intracellulaire drugontdekking mensenhandel.

Verbeterde methode voor de vaststelling van een In Vitro bloed - hersenbarrière Model gebaseerd op varkens Endothelial hersencellen

Geïsoleerde hersenen haarvaten van menselijk hersenweefsel kunnen worden gebruikt als een preklinische model om te studeren barrièrefunctie fysiologische en pathofysiologische omstandigheden. Hier presenteren we een geoptimaliseerde protocol om te isoleren van de hersenen haarvaten van verse menselijk hersenweefsel.

Isolatie van cerebrale haarvaten van verse menselijk hersenweefsel

Hier presenteren we een protocol met een beschrijving van de instelling van een in gnudles BBB (bloed-hersenbarrière)-Minibrain polyester poreuze membraan cultuur invoegen systeem teneinde het vervoer van biomoleculen of infectieuze agentia via een menselijke BBB en hun fysiologische effect op de naburige hersencellen.

Een Model Interface menselijke Blood-Brain barrière kruisingen door ziekteverwekkers of geneesmiddelen en hun interacties met de hersenen bestuderen

De bloed-hersenbarrière (BBB) is een meercellige neurovasculaire eenheid die hersenhomeostase strak regugugaat. Door menselijke iPSCs en organ-on-chip technologieën te combineren, hebben we een gepersonaliseerde BBB-chip gegenereerd, geschikt voor ziektemodellering en CNS-voorspellingen voor medicijndoordring. Een gedetailleerd protocol wordt beschreven voor de productie en werking van de BBB-chip.

Generatie van een menselijke iPSC-gebaseerde bloed-hersenbarrière chip

Dit protocol beschrijft een methode om een menselijk bloed-hersenbarrière (BBB) in vitro model vast te stellen. De endotheelcellen en pericyten worden aan elke kant van een insertfilter (bloedcompartiment) gezaaid en astrocyten worden in de onderste put (hersencompartiment) gezaaid. Het gekarakteriseerde model werd gebruikt voor nanodeeltjestransportexperimenten.

Een drievoudig kweekcelsysteem dat de menselijke bloed-hersenbarrière modelleert

Hier beschrijven we de methode voor het vaststellen van een drievoudig celkweekmodel van de bloed-hersenbarrière op basis van primaire microvasculaire endotheelcellen, astrocyten en pericyten van de menselijke hersenen. Dit meercellige model is geschikt voor studies van neurovasculaire eenheidsdisfunctie tijdens ischemische beroerte in vitro of voor de screening van kandidaat-geneesmiddelen.

Een drievoudig primair celkweekmodel van de menselijke bloed-hersenbarrière voor het bestuderen van ischemische beroerte in vitro

Dit protocol beschrijft een werkwijze voor het bereiden extrusie lipide vesicles van sub-micron afmetingen met een hoge mate van homogeniteit. Deze methode maakt gebruik van een druk-gecontroleerd systeem met gecontroleerde stikstofstroom tarieven voor liposoom voorbereiding. De lipide...

Constant Pressure-gecontroleerde Extrusie werkwijze voor de bereiding van Nano-sized lipide bolletjes

Leer een verbeterde cocultuurmethode voor het modelleren van de bloed-hersenbarrière met humane astrocyten en endotheelcellen. Deze techniek optimaliseert celhechting en groei voor onderzoek naar BBB-permeabiliteit.

Verbeterde werkwijze voor de bereiding van een Human-Cell gebaseerde, Contact Model van de bloed-hersenbarrière

Meer video's verkennen