Name: Bone Marrow-afgeleide macrofagen Productie (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2013-11-22T14:30:00.000+00:00
Duration: 7 min 6 s
Description: Leer een betrouwbare methode voor het differentiëren van macrofagen uit muizenbeenmerg voor immunologisch onderzoek. Deze techniek levert grote hoeveelheden primaire macrofagen op voor experimentele analyses.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

playerTrialDesktop

Dit werk werd ondersteund door het CNRS (PICS 2012-2014 naar EG) en door een subsidie ​​van Regione Campania (LR n.5, 28.03.2002 om Giovanna Mottola). Filippo Conti is een fellow van de wetenschappelijke samenwerking Stichting&#39;&#39; Infectiopole Sud.&#39;&#39; Nicola Boucherit is een fellow van het Franse Ministerie van Onderzoek en Technologie. De financieringsbronnen had geen rol in de onderzoeksopzet, dataverzameling, data-analyse, besluit tot publicatie of manuscript voorbereiding.

Ethiek Verklaring Het protocol voor dier administratiekosten werd goedgekeurd door onze institutionele Animal Ethics Committee &quot;Conseil Scientifique du Centre de Formation et de Recherche Experimentele Medico-Chirurgical&quot; (CFREMC, Project vergunning 10-300122013 Eric Ghigo) van Aix-Marseille University in overeenstemming met de regels van decreet nr. 87-848 van 1987/10/19. De experimenten werden uitgevoerd aan de Faculte de Medecine de la Timone (Experimenteren vergunning nummer 13,385 Eric Ghigo). 1. Materiaal en cultuur Media Voorbereiding <ol><li> Steriliseren twee tangen, twee scharen, twee chirurgische mesjes, een mortier en een stamper. </li><li> Verkrijgen compleet DMEM dat 10% foetaal kalfsserum (FCS), 2 mM glutamine, 100 U / ml penicilline en 100 ug / ml streptomycine. </li><li> Verdunnen 10x PBS in steriel gedestilleerd water om 1x PBS verkrijgen. </li><li> Verkrijgen ijskoude 1x PBS, ijskoude compleet DMEM, compleet DMEM waRmed tot 37 ° C. </li></ol> 2. Bereiding van L929 celsupernatanten <ol><li> Groeien L929 cellen tot confluentie (twintig 175 cm2 kolven) in volledige DMEM bij 37 ° C, 5% CO2. </li></ol> Opmerking: granulocyt-macrofaag kolonie stimulerende factor (GM-CSF) vereist om hematopoietische celdifferentiatie induceren in macrofagen 12. L929 cellen produceren GM-CSF. <ol start="2"><li> Bij samenloop, vervang cultuur media met verse volledige DMEM. Transfer kolven tot 32 ° C, 5% CO 2 voor 10 dagen. </li><li> Verzamelen, zwembad en centrifuge de bovenstaande vloeistoffen bij 750 xg gedurende 10 minuten. Gooi cel pellets. </li><li> WINKEL supernatanten in 15 ml buizen en bewaar bij -20 ° C. </li></ol> 3. Bone Marrow-afgeleide macrofagen (BMDM) Voorbereiding <ol><li> Sacrifice 1 muis door cervicale dislocatie. <ol><li> Gebruik steriele chirurgische mesjes gedurende het experiment. Ontsmet de huid met 70% alcoholhol. Een insnijding bovenaan elke achterpoot en trekt de huid naar beneden naar de voet naar de spier bloot. </li><li> Snijd de achterpoten, verwijder de huid met een steriele schaar en een steriel pincet. Plaats benen in een steriele petrischaal (35/10 mm) met steriele, ijskoude 1x PBS (5 ml). </li><li> Verwijder het vlees en spieren die zich houden aan de botten met een steriele schaar en pincet. </li></ol></li><li> Breng de botten in een nieuwe, steriele petrischaal (35/10 mm) met ijskoude steriele 1x PBS (5 ml). Was de botten twee keer met 5 ml ijskoude, steriele 1x PBS. </li><li> Breng de been in een steriele vijzel met 5 ml ijskoude, steriele 1x PBS. </li><li> Snijd het scheenbeen van het dijbeen bij het gewricht met een steriele schaar. Breek de botten voorzichtig in een steriele vijzel met 5 ml ijskoude, steriele 1x PBS met behulp van een stamper. </li><li> Verzamel de bovenstaande vloeistof in ijskoud 15 ml buizen. Herhaal deze stap 3x. </li><li> Filtreer door een 70 um Nylon cel strainer solide fragmenten te verwijderen. Centrifugeer het filtraat bij 450 xg gedurende 10 min bij 4 ° C. </li><li> Voorzichtig gooi het supernatant. Distantiëren de pellet in 10 ml rode bloedcel lysisbuffer gedurende 30 sec. Voeg 20 ml ijskoude, compleet DMEM. </li></ol> Opmerking: Het doel van deze stap is het verwijderen van verontreinigende rode bloedcellen, dus moet deze stap binnen 2 minuten worden uitgevoerd om hematopoietische cellen wijziging van de rode bloedcel lysisbuffer voorkomen. <ol start="8"><li> Centrifugeer bij 450 xg gedurende 10 min bij 4 ° C. Voorzichtig gooi het supernatant. Distantiëren de pellet in 20 ml compleet DMEM dat is verwarmd tot 37 ° C. </li><li> Breng de gedissocieerde cellen in 2 petrischaaltjes (100/20 mm). Incubeer ze gedurende 4 uur bij 37 ° C. </li><li> Verzamel de bovenstaande vloeistof in 50 ml buizen bij kamertemperatuur. Gooi de gerechten die de bewoner macrofagen bevatten. </li></ol> Opmerking: Het doel van deze stap is om de bewoner bot marro eliminerenw macrofagen door hun vermogen om zich te houden aan-cultuur behandeld kunststof. Deze resident macrofagen kunnen worden gebruikt in andere experimenten. <ol start="11"><li> Centrifugeer de verzamelde supernatanten bij 450 xg gedurende 10 min bij 4 ° C. Verwijder het supernatant. </li><li> Distantiëren voorzichtig de pellet in 10 ml compleet DMEM met 15% L929 celsupernatant. Filter de cellen door een 40 um nylon cel zeef. </li><li> Recover het filtraat. Voeg de verzamelde filtraat (10 ml) om 140 ml volledig DMEM dat is aangevuld met 15% L929 celmedium. </li><li> Verdeel 10 ml van de celsuspensie per Petrischaal (15 Petrischalen, 100/20 mm). Incubeer de cellen bij 37 ° C, 5% CO2. </li><li> Groeien cellen gedurende 3 dagen </li><li> Voeg 10 ml volledig DMEM dat is aangevuld met 15% L929. Incubeer de cellen gedurende 4 extra dagen. </li></ol> Opmerking: Monitor celgroei periodiek met een omgekeerde microscoop (stappen 3,14-3,16). Hechtende macrofagen zal wordenwaargenomen na 3 dagen van de cultuur. 4. Oogsten BMDMs <ol><li> Verwijder het supernatant. Was BMDMs 2 keer met complete DMEM </li><li> Voeg 5 ml compleet DMEM dat is verwarmd tot 37 ° C. Los BMDMs door voorzichtig schrapen met een rubberen politieman. </li><li> Verzamel BMDMs in 50 ml en centrifugeer bij 450 xg gedurende 10 minuten. Zachtjes distantiëren cel pellets in 20 ml compleet DMEM. </li><li> Telling BMDMs in aanwezigheid van trypan blauw (niet meer dan 10% sterfte in acht worden genomen). </li></ol> Opmerking: In het algemeen worden ongeveer 6-7,5 x 10 7 macrofagen verkregen uit 15 petrischalen (100/20 mm) van macrofagen. Er zijn ongeveer 4-5 x 10 6 macrofagen / petrischaal (100/20 mm). <ol start="5"><li> Bereid BMDMs zoals vereist voor het experiment. Na 16 uur in compleet medium bij 37 ° C, 5% CO2, macrofagen weer houden aan de drager. </li></ol> 5. Het opslaan BMDMs <ol><li> Verzamel geïsoleerde BMDMs (stap 4.3). Centrifugeer bij 450 xg gedurende 10 minuten. Opmerking: BMDMs kan in vloeibare stikstof worden bevroren. </li><li> Resuspendeer celpellets bevriezen medium bestaande uit 10% DMSO en 90% FCS in een uiteindelijke concentratie van 4 x 10 6 cellen / ml en 1 ml pipet in elke ampul. </li><li> Bevries de cellen bij een afkoelsnelheid van 1 ° C / min. Na 24 uur, breng de ampul een vloeibare stikstof container voor langdurige opslag. </li></ol>

<ol><li>Rutherford, M. S., Witsell, A., Schook, L. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mechanisms+generating+functionally+heterogeneous+macrophages%3A+chaos+revisited%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Leukocyte+Biol%22%5BJournal%5D)">Mechanisms generating functionally heterogeneous macrophages: chaos revisited.</a> J. Leukocyte Biol. 53, 602-618 (1993).</li>
<li>Van Furth, R. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aVan+Furth%2C+R+%22Inflammation%3A+Basic+Principles+and+Clinical+Correlates%22">Inflammation: Basic Principles and Clinical Correlates</a>. Gallin, J. I., Goldstein, I. M., Snyderman, R. 112, Raven Press. 325-336 (1992).</li>
<li>Adams, D., Halmiton, T. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aAdams%2C+D+%22Inflammation%3A+Basic+Principles+and+Clinical+Correlates%22">Inflammation: Basic Principles and Clinical Correlates</a>. Gallin, J. I., Goldstein, I. M., Snyderman, R. 112, Raven Press. 325-336 (1992).</li>
<li>Morris, L., Graham, C. F., Gordon, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Macrophages+in+haemopoietic+and+other+tissues+of+the+developing+mouse+detected+by+the+monoclonal+antibody+F4%2F80%5BTitle%5D)+AND+%22Development%22%5BJournal%5D)">Macrophages in haemopoietic and other tissues of the developing mouse detected by the monoclonal antibody F4/80.</a> Development. 112, 517-526 (1991).</li>
<li>Haas, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+phagosome%3A+compartment+with+a+license+to+kill%5BTitle%5D)+AND+%22Traffic%22%5BJournal%5D)">The phagosome: compartment with a license to kill.</a> Traffic. 8, 311-330 (2007).</li>
<li>Underhill, D. M., Ozinsky, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Phagocytosis+of+microbes%3A+complexity+in+action%5BTitle%5D)+AND+%22Annu.+Rev.+Immunol%22%5BJournal%5D)">Phagocytosis of microbes: complexity in action.</a> Annu. Rev. Immunol. 20, 825-852 (2002).</li>
<li>Castagna, A., Polati, R., Bossi, A. M., Girelli, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Monocyte%2Fmacrophage+proteomics%3A+recent+findings+and+biomedical+applications%5BTitle%5D)+AND+%22Expert+Rev.+Proteomics%22%5BJournal%5D)">Monocyte/macrophage proteomics: recent findings and biomedical applications.</a> Expert Rev. Proteomics. 9, 201-215 (2012).</li>
<li>Benoit, M., Desnues, B., Mege, J. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Macrophage+polarization+in+bacterial+infections%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Immunol%22%5BJournal%5D)">Macrophage polarization in bacterial infections.</a> J. Immunol. 181, 3733-3739 (2008).</li>
<li>Barry, A. O., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Impaired+stimulation+of+p38alpha-MAPK%2FVps41-HOPS+by+LPS+from+pathogenic+Coxiella+burnetii+prevents+trafficking+to+microbicidal+phagolysosomes%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Host+Microbe%22%5BJournal%5D)">Impaired stimulation of p38alpha-MAPK/Vps41-HOPS by LPS from pathogenic Coxiella burnetii prevents trafficking to microbicidal phagolysosomes.</a> Cell Host Microbe. 12, 751-763 (2012).</li>
<li>Henry, R. M., Hoppe, A. D., Joshi, N., Swanson, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+uniformity+of+phagosome+maturation+in+macrophages%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">The uniformity of phagosome maturation in macrophages.</a> J. Cell Biol. 164, 185-194 (2004).</li>
<li>Sundaramurthy, V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Integration+of+Chemical+and+RNAi+Multiparametric+Profiles+Identifies+Triggers+of+Intracellular+Mycobacterial+Killing%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Host+Microbe%22%5BJournal%5D)">Integration of Chemical and RNAi Multiparametric Profiles Identifies Triggers of Intracellular Mycobacterial Killing.</a> Cell Host Microbe. 13, 129-142 (2013).</li>
<li>Boltz-Nitulescu, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Differentiation+of+rat+bone+marrow+cells+into+macrophages+under+the+influence+of+mouse+L929+cell+supernatant%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Leukocyte+Biol%22%5BJournal%5D)">Differentiation of rat bone marrow cells into macrophages under the influence of mouse L929 cell supernatant.</a> J. Leukocyte Biol. 41, 83-91 (1987).</li>
</ol>

Er zijn geen verklaarde belangenconflicten.

De hierin beschreven protocol detailleert een methode om grote aantallen BMDMs produceren. BMDM primaire cellen en de biologische werking en eigenschappen van macrofagen gedifferentieerd uit monocyten omdat er volwassen, in tegenstelling tot macrofaag cellijnen die onvolwassen zijn. BMDMs kunnen worden gebruikt voor genetische screening (RNAi), drug discovery, functionele studies, gastheer-pathogeen interactie studies en vele andere gebieden van onderzoek. De hierin voorgestelde procedure is...

Een belangrijk aspect van macrofagen is hun rol bij aangeboren en adaptieve immuniteit. Vanwege hun vermogen om inerte deeltjes, bacteriën of parasieten fagocyteren, macrofagen zijn een eerste lijn van verdediging tegen vreemde indringers. Eenmaal geïnternaliseerd, zijn microben afgebroken binnen phagolysosomes. Macrofagen ook werving signalen voor en presenteren antigenen sturen naar andere afweercellen, zoals T-lymfocyten. Macrofagen zijn afgeleid van monocyten. Monocyten ontstaan ​​in het beenmerg van myeloïde stamcellen en migreren naar perifere bloed en diverse weefsels waar ze differentiëren tot macrofagen. Geschat wordt dat een gezonde volwassen muis bevat ongeveer 10 8 macrofagen die zijn verdeeld over het lichaam in diverse organen en weefsels (Tabel 1) 1.2. Macrofagen weer grote fenotypische en functionele diversiteit vanwege hun vermogen aan te passen aan hun micromilieu 3,4. De belangrijkste macrophage eigenschap is hun microbicide activiteit, die wordt gedefinieerd door hun vermogen om microben fagocyteren en vernietigen. De fagocytische wordt gedefinieerd door de activering van complexe signaalnetwerken die worden gestimuleerd door microbiële contact, dus macrofagen moduleren genexpressie adequaat in reactie op verschillende stimuli. Na fagocytose worden geëlimineerd microben in een structuur die de fagolysosoom, maar hebben veel pathogene microben strategieën ontwikkeld om de microbicide werking van de macrofagen 5 ondermijnen. De diversiteit van subversie mechanismen die worden gebruikt door verschillende microbiële species is een bewijs van de complexiteit van het proces fagocytaire 6 en fagolysosoom biogenese. Infectieziekten zijn belangrijke problemen voor de volksgezondheid, en tal van mechanismen en moleculen deelnemen aan macrofaag antimicrobiële activiteiten. Verder zijn de doelstellingen van de microbicidal eigenschappen die worden gekaapt door microben blijven onbekend, dus is er een eXplosion van belang in de evolutionaire, genetische en biochemische aspecten van gastheer-pathogeen interacties die wetenschappelijke aandacht met betrekking tot macrofagen heeft vernieuwd. Momenteel wordt het grootste deel van het onderzoek in het veld gedaan op macrofagen cellijnen, die verschillen van primaire macrofagen in de fagocytoseactiviteit, de cytokinen productie en de regulering van de oxidatieve burst. Bovendien zijn ze minder geschikt voor microscopie. Om de interactie macrofagen-pathogenen te onderzoeken is het aanbevolen om de primaire macrofagen, zoals beenmerg afgeleide macrofagen (BMDMs), die meer fysiologische kenmerken vertonen gebruiken. Bovendien is het mogelijk om te werken aan genetisch gemodificeerde BMDMs, omdat deze direct macrofagen kunnen worden geïsoleerd uit transgene muizen en, met de beschikbaarheid van nieuwe technologieën zoals lentivirale transfectie hun genexpressie profiel kan worden veranderd door overexpressie van de genen of RNA interferentie. Hier beschrijven we een werkwijze murine bone m differentiërenpijl in macrofagen die grote aantallen macrofagen zal 7 dagen voor verschillende functionele analyses uitgevoerd, zoals proteomics 7, transcriptomics 8, intracellulair verkeer bestudeert 9, dynamische studies 10, genetische screens (RNAi) en drug screening 11.

<table><tbody><tr><td>DMEM</td><td>Gibco Life Technologies</td><td>21969-035</td><td></td></tr><tr><td>Fetal Calf Serum</td><td>Gibco Life Technologies</td><td>10270</td><td></td></tr><tr><td>Penicillin/Streptomycin</td><td>Gibco Life Technologies</td><td>15070</td><td></td></tr><tr><td>Glutamine</td><td>Gibco Life Technologies</td><td>25030-024</td><td></td></tr><tr><td>PBS (10x)</td><td>Lonza</td><td>BEM515F</td><td></td></tr><tr><td>Red Blood Cell Lysis buffer</td><td>Sigma</td><td>R7757</td><td></td></tr><tr><td>Cell strainer 70 &mu;m Nylon</td><td>BD Falcon</td><td>352350</td><td></td></tr><tr><td>Cell strainer 40 &mu;m Nylon</td><td>BD Falcon</td><td>352340</td><td></td></tr><tr><td>50 ml tubes</td><td>any supplier</td><td>n/a</td><td></td></tr><tr><td>15 ml tubes</td><td>any supplier</td><td>n/a</td><td></td></tr><tr><td>Petri dishes (100/20 mm)</td><td>any supplier</td><td>n/a</td><td>culture treated</td></tr><tr><td>Petri dishes (35/10 mm)</td><td>any supplier</td><td>n/a</td><td></td></tr></tbody></table>

bone marrow-afgeleide macrofagen productie

Bone Marrow-derived Macrophage Production

Macrofagen zijn kritische componenten van het aangeboren en adaptieve immuunrespons, en zij zijn de eerste lijn van verdediging tegen vreemde indringers vanwege hun krachtige microbicidal activiteiten. Macrofagen zijn ruim verdeeld door het lichaam en in de lymfoïde organen, lever, longen, maagdarmkanaal, centraal zenuwstelsel, botten en huid. Door hun verdeling, zij aan diverse fysiologische en pathologische processen. Macrofagen zijn zeer veelzijdig cellen die in staat zijn de micro-omgeving veranderingen herkennen en om weefsel homeostase te behouden zijn. Vele pathogenen mechanismen ontwikkeld om macrofagen als Trojaanse paarden overleven repliceren en infecteren mens en dier en verspreiden door het hele lichaam. De recente explosie van interesse in evolutionaire, genetische en biochemische aspecten van gastheer-pathogeen interacties heeft wetenschappelijke aandacht met betrekking tot macrofagen vernieuwd. Hier beschrijven we eenprocedure voor het isoleren en kweken van murine macrofagen beenmerg dat grote aantallen macrofagen zal voor het bestuderen gastheer-pathogeen interacties en andere processen.

Het doel van deze methode grote aantallen macrofagen gemakkelijk te vinden in een paar dagen. De beenmergcelinjectie bereiding wordt geïllustreerd in Figuur 1. Beenderen van het achterbeen werden verzameld en sloeg in een vijzel. Zodra de bewoner macrofagen werden uit het beenmerg celpreparaat, beenmergcellen werden geïncubeerd met GM-CSF (Dag 0). Na 3 dagen, de cellen, die rond en hechtende voor cultuur waren, beginnen te differentiëren tot macrofagen en hechten (figuur 1A). Cytometrie...

Macrofagen zijn lang erkend als een kritische component van het aangeboren en adaptieve immuunsysteem. De recente explosie van kennis met betrekking tot evolutionaire, genetische en biochemische aspecten van de interactie tussen macrofagen en microben heeft wetenschappelijke aandacht vernieuwd macrofagen. Dit artikel beschrijft een methode om macrofagen te onderscheiden van muizen beenmerg.

Bone Marrow-afgeleide macrofagen Productie

Macrophages are critical components of the innate and adaptive immune responses, and they are the first line of defense against foreign invaders because ...

Het algemene doel van deze procedure is om macrofagen te genereren uit beenmergcellen. Dit wordt eerst bereikt door het beenmerg uit de achterpoten van muizen te extraheren. In de tweede stap worden de residente macrofagen in het beenmerg verwijderd, waarna de beenmergcellen verder worden gekweekt onder macrophage-differentierende omstandigheden.Wanneer de beenmergcellen vervolgens zijn gedifferentieerd tot macrofagen, kunnen ze worden verzameld voor experimentele analyse. Uiteindelijk kan confocale microscopie worden gebruikt om de lokalisatie van bacteriële LPS aan te tonen binnen zure compartimenten van macrofagen afgeleid uit beenmerg. Het belangrijkste voordeel van deze techniek ten opzichte van bestaande methoden, zoals het kweken van macrofaag-cellijnen, is dat er een groot aantal primaire macrofagen verkregen kan worden.Een visuele demonstratie van de methode is essentieel, aangezien de stappen voor zelfproductie moeilijk te leren zijn en oefening vereisen. Om succes te behalen, wordt de huid van een geëuthanaseerde muis gedesinfecteerd met 70%ethanol. Maak een incisie aan de bovenzijde van elk achterbeen en trek de huid naar de voet toe om de spier bloot te leggen. Snijd v

bone-marrow-derived-macrophage-production

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Immunologie en Infectie

In this video, we demonstrate the activation of bone marrow-derived macrophages in response to bacterial lipopolysaccharide and intravenous immunoglobulin.

Activation of Mouse Bone Marrow-Derived Macrophages in Response to Antibodies

Het artikel beschrijft een gemakkelijk gemakkelijk...

Onderzoek van Macrophage Polarisatie behulp beenmerg afgeleide Macrofagen

Wij presenteren een eenvoudig en efficiënt protocol voor het genereren van humane macrofagen. Buffy coats worden door dubbele dichtheidsgradiënt centrifugatie en geïsoleerde monocyten worden vervolgens gedifferentieerd macrofagen in met Teflon beklede celkweek zakken. Dit maximaliseert macrofaag opbrengst en vergemakkelijkt cel oogsten voor volgende experimenten.

Isolatie van humane monocyten door Double gradiëntcentrifugering en hun differentiatie tot macrofagen in Teflon-coating Cell Culture Tassen

We beschrijven hier een eenvoudig protocol om muis-peritoneale macrofagen te isoleren. Deze procedure wordt gevolgd door RNA-extractie om genexpressieanalyse uit te voeren na stimulatie van Toll-achtige receptoren.

Isolatie van muizen peritoneale macrofagen uit te voeren analyse van genexpressie Bij Toll-like receptoren Stimulatie

Metabolische herprogrammering is een kenmerkend en vereist kenmerk voor M1 en M2 macrofaagpolarisatie. Dit manuscript beschrijft een test voor de meting van fundamentele parameters van glycolyse en mitochondriale functie in muis-beenmerg-afgeleide macrofagen. Deze tool kan worden toegepast om te onderzoeken hoe bepaalde factoren het metabolisme en fenotype van macrofagen beïnvloeden.

Metabole karakterisering van gepolariseerde M1 en M2 Bone Marrow-afgeleide macrofagen met behulp van real-time extracellulaire Flux Analysis

Beendermergcellen gekweekt met granulocyte macrophage colony stimulerende factor (GM-CSF) genereren een heterogene cultuur die macrofagen en dendritische cellen (DC's) bevat. Deze methode benadrukt het gebruik van MHCII en hyaluronan (HA) binding om macrofagen te onderscheiden van de DC's in de GM-CSF cultuur. Macrofagen in deze cultuur hebben veel overeenkomsten met alveolaire macrofagen.

Generatie en identificatie van GM-CSF Afgeleide alveolaire-achtige macrofagen en dendritische cellen van de muis beenmerg

Er wordt een protocol gepresenteerd voor celcultuur van macrofaagkoloniestimulerend factor (M-CSF) gedifferentieerde humane monocyt-afgeleide macrofagen. Het protocol maakt gebruik van cryopreservatie van monocyten gekoppeld aan hun bulkdifferentiatie in macrofagen. Vervolgens kunnen de geoogste macrofagen worden gezaaid in kweekputjes bij de vereiste celdichtheden voor het uitvoeren van experimenten.

Cultuur van macrofaag kolonie-stimulerende factor Gedifferentieerde Human monocyt-afgeleide macrofagen

Dit protocol beschrijft de robuuste generatie van macrofagen uit door de mens geïnduceerde pluripotente stamcellen, en methoden voor hun latere karakterisering. Celoppervlaktemarkerexpressie, genexpressie en functionele tests worden gebruikt om het fenotype en de functie van deze iPSC-afgeleide macrofagen te beoordelen.

Productie en karakterisering van menselijke macrofagen uit pluripotente stamcellen

Dit protocol is vastgesteld voor het kweken van tetrahydrobiopterine (BH4) - en induceerbare stikstofmonoxidesynthase (iNOS) - deficiënte primaire murine macrofagen om NO-redox biologie te bestuderen. De studie richt zich op het verminderen van potentiële besmetting van BH4 en andere artefacten gevonden in traditionele isolatie- en kweekmethoden die experimentele uitkomsten en interpretatie van resultaten kunnen verstoren.

Isolatie en in vitro kweek van beenmerg-afgeleide macrofagen voor de studie van NO-redox biologie

Het huidige protocol beschrijft de isolatie en kweek van beenmerg-afgeleide macrofagen van muizen.

Isolatie en cultuur van beenmerg-afgeleide macrofagen van muizen

Dit protocol beschrijft een niet-enzymatische en eenvoudige methode voor het isoleren van 7-9 dagen oude neonatale beenmergcellen van muizen en het genereren van gedifferentieerde macrofagen met behulp van een supernatans van L929-cellen als bron van granulocytkoloniestimulerende factor (M-CSF). De van beenmerg afgeleide macrofagen werden verder geanalyseerd op oppervlakteantigenen F4/80, CD206, CD11b en functionele competentie.

Neonatale beenmergisolatie bij muizen en bereiding van van beenmerg afgeleide macrofagen

Leer een betrouwbare methode voor het differentiëren van macrofagen uit muizenbeenmerg voor immunologisch onderzoek. Deze techniek levert grote hoeveelheden primaire macrofagen op voor experimentele analyses.

Bone Marrow-afgeleide macrofagen Productie

Meer video's verkennen