Name: Aplysia Ganglia voorbereiding voor elektrofysiologische en moleculaire analyses van enkele neuronen (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2014-01-13T13:00:00.000+00:00
Duration: 9 min 11 s
Description: Leer elektrofysiologische en moleculaire analyses van enkele neuronen in Aplysia californica. Deze methode combineert intracellulaire opnamen met RNA-isolatie en kwantitatieve PCR voor gedetailleerd onderzoek naar genexpressie.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Wij danken de Whitehall Foundation hartelijk voor hun financiële steun en startfondsen van The Scripps Research Institute voor het uitvoeren van dit werk.

1. Voorbereiding van abdominale ganglia, elektrofysiologische metingen en isolatie van enkele geïdentificeerde neuronen uit abdominale ganglion van Aplysia californica
<ol><li>Houd Aplysia in het laboratoriumaquarium met circulerend kunstmatig zeewater (ASW) bij 16 °C onder 12:12 licht:donker.</li>
	<li>Isolatie van abdominale ganglion.<ol>
<li>Verdoof dieren door 380 mM MgCl2-oplossing gedurende 5-10 minuten te injecteren (overeenkomend met 30-35% van het lichaamsgewicht van het dier).</li>
		<li>Identificeer het abdominale ganglion op basis van zijn positie in het centrale zenuwstelsel24,28.</li>
		<li>Verwijder de ganglia door chirurgische ingreep en bewaar onmiddellijk in kunstmatig zeewater bestaande uit 450 mM NaCl, 10 mM KCl, 10 mM CaCl2,55 mM MgCl2,2,5 mM NaHCO3en 10 mM HEPES (pH 7,4).</li>
	</ol>
</li>
	<li>Protease behandeling.<ol>
<li>Incubeer abdominale ganglion gedurende 30 minuten bij 34 °C±0,5 in een Petrischaal met 0,1% protease (dispase) verdund in ASW zoals hierboven beschreven. OPMERKING: De hoeveelheid van het gebruikte protease moet worden gestandaardiseerd met de leeftijd en het gewicht van de dieren. Over het algemeen zouden oudere en grotere dieren meer protease nodig hebben.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Verwijdering van gangliaschede.<ol>
<li>Na de enzymbehandeling de ganglia vastmaken aan de Sylgard Silicone-basis van een celkamer (Ø= 1 cm; vol. = 0,3 ml) en doordrenkt met ASW (debiet: 150 μl/min) bij kamertemperatuur (18 °C±2 ). OPMERKING: Om de zichtbaarheid van geïdentificeerde neuronen te vergroten, plaatst u het ganglion op de bovenkant van een polycarbonaat glazen cilinder (figuur 1) (diameter Ø = 2 mm gemodificeerde celkamer) die gemakkelijk van onderaf kan worden verlicht met behulp van een verrekijker stereomicroscoop met 20X en 40X vergroting.</li>
		<li>Verwijder voorzichtig de huls van het ganglion met behulp van tangen en microscissors.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Gelijktijdige elektrofysiologische opname van twee neuronen.<ol>
<li>Identificeer neuron van belang.</li>
		<li>Impale het neuron met een enkele intracellulaire scherpe microelectrode met weerstand 10-15 MΩ gevuld met 3 M KCl oplossing.</li>
		<li>Registreer neuronale activiteit (10 kHz-bandpas) met behulp van een intracellulair opnamesysteem.</li>
		<li>Verwerk de opnamegegevens met behulp van elektrofysiologiesoftware zoals Axograph. OPMERKING: Men kan eenvoudig opnemen vanuit meerdere neuronen. Neuronen L7, L11 of R15 en R2 zijn gemakkelijk te identificeren op basis van hun positie. Twee versterkers en twee micromanipulatoren zijn nodig voor het gelijktijdig opnemen van twee L7- en R15-neuronen (figuur 2).</li>
	</ol>
</li>
	<li>Drugstoepassing.<ol>
<li>Breng het medicijn naar keuze aan in de celkamer door voorzichtig te pipetten of injecteer rechtstreeks in neuronen.</li>
		<li>Voer elektrofysiologische metingen uit. OPMERKING: Afhankelijk van het experimentele doel kan men verschillende elektrofysiologische parameters van neuronen meten, zoals de veranderingen in membraanpotentiaal (MP) of actiepotentiaal (AP) voor, tijdens en na de toepassing van het geneesmiddel.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Isolatie van enkele neuronen.<ol>
<li>Aan het einde van de elektrofysiologische experimenten, stop de perfusie van ASW en was het ganglion met 100% ethanol.  Blootstelling aan ethanol zal de neuronen versteaaien en, met behulp van fijne tangen, het gemakkelijk maken om individuele neuronen te verwijderen zonder andere neuronen uit het ganglion te beschadigen.</li>
		<li>Verwijder enkele neuronen onder een stereomicroscoop en breng over op een kleine Eppendorf-buis met ijskoud RNA-extractiereagens van 500 μl. Geïsoleerde enkelvoudige neuronen kunnen worden opgeslagen in RNA-extractiereagens bij -80 °C voor toekomstige analyse.</li>
	</ol>
</li>
</ol>2. RNA-isolatie van enkele neuronen en genexpressieanalyse door kwantitatieve real-time PCR (qPCR)
<ol><li>Voorzorgsmaatregelen om RNA-afbraak te minimaliseren: Ribonucleases (RNases) degraderen RNA en zijn zeer stabiele en actieve enzymen. Neem de volgende stappen tijdens het hanteren van RNA's.<ol>
<li>Reinig het werkgebied en de instrumenten met RNase deactiverende middelen.</li>
		<li>Draag te allen tijde handschoenen tijdens het hanteren van RNA en wissel handschoenen vaak.</li>
		<li>Gebruik alleen RNase-vrije kunststoffen om RNA's te verwerken.</li>
	</ol></li>
	<li>Isoleren van totaal RNA van enkele neuronen:<ol>
<li>Standaard Trizol protocol voor RNA isolatie kan worden gebruikt om RNA's te isoleren van enkele neuronen. Voeg kort 20% v/v chloroform toe aan Trizol, meng goed door korte vortexing.</li>
		<li>Plaats de buizen 10 min op rotator bij 4 °C. Draai de Trizol-Chloroform mix op 12.000 x g gedurende 15 min bij 4 °C.</li>
		<li>Verzamel de waterfase en breng over naar een verse buis.</li>
		<li>Voeg natriumacetaatoplossing (pH 5,5) toe aan een eindconcentratie van 0,3 M, 100 ng/ml coprecipitant GlycoBlue en 2,5 volumes 100% ethanol om RNA te precipitaten.</li>
		<li>Meng de monsters goed en incubeer 's nachts bij -80 °C.</li>
		<li>Draai de monsters op 12.000 x g gedurende 20 minuten bij 4 °C en een kleine blauwe pellet is zichtbaar aan de onderkant van de buis.</li>
		<li>Verwijder het supernatant en was de pellet met 850 μl 75% ijskoude ethanol op 12.000 x g gedurende 10 minuten bij 4 °C.</li>
		<li>Verwijder het supernatant voorzichtig en droog de RNA-pellet maximaal 7-10 minuten aan de lucht. OPMERKING: Zorg ervoor dat RNA niet lang wordt laten drogen als over-het drogen van de RNA-pellet maakt solubilisatie erg moeilijk.
</li>
		<li>Eenmaal gedroogd, resuspend de RNA pellet in 10 μl RNAse vrij water en bepaal de RNA concentratie. OPMERKING: Bepaal de RNA-concentratie met behulp van een spectrofotometer. Wanneer u RNA niet meteen gebruikt, bewaar RNA dan bij -80 °C.</li>
	</ol></li>
	<li>aRNA-synthese uit enkele neuronen:<ol>
<li>Versterk het RNA (één of twee rondes afhankelijk van de experimentele doelstelling) met behulp van een in de handel verkrijgbaar lineair RNA-versterkingssysteem. OPMERKING: Het totale RNA van enkele neuronen varieerde van ~10-60 ng. De verwachte opbrengst van de eerste versterkingsronde is ~100-300 ng en de tweede versterkingsronde is ~0,8-1,5 μg RNA.</li>
	</ol></li>
	<li>Omgekeerde transcriptie van RNA:<ol>
<li>Gebruik 1,0 μg aRNA in 20 μl van een omgekeerde transcriptiereactie om cDNA uit aRNA te genereren. Hiervoor zijn verschillende kits in de handel verkrijgbaar. OPMERKING: cDNA is gesynthetiseerd volgens het protocol van de fabrikant met behulp van de volgende instellingen op thermische cycler. 5 min bij 25 °C 30 min bij 42 °C 5 min bij 85 °C Vasthouden bij 4 °C</li>
		<li>Sla na de omgekeerde transcriptiestap de cDNA op bij -20 °C voor langdurige opslag.</li>
	</ol></li>
	<li>Primer ontwerp en standaardisatie: Verschillende uitstekende softwareprogramma's zijn gratis beschikbaar voor het ontwerpen van primers voor realtime versterkingen.<ol>
<li>Selecteer 18-24 mer oligonucleotiden die 70-110 bp amplicons produceren en synthetiseren de primers met behulp van commerciële bronnen. OPMERKING: Voor elk interessant gen moeten twee tot drie primerparen worden ontworpen. Elke primerset moet gestandaardiseerd worden door qPCR. De voorwaartse en omgekeerde primerparen die werden gebruikt voor gen CREB1 (figuur 4) staan hieronder: Primer set 1 Voorwaarts: 5'-TGATTCTGACGCAAAGAAAAGA-3' Achteruit: 5'-ACCGTGAGCAGTCAGTTGTAGA-3' Primer set 2 Voorwaarts: 5'-AGGGAATGTCGATGAAAGAAGA-3' Achteruit: 5'-GACACACAGGAAGTATGCCAAA-3'</li>
		<li>Om de beste primer te selecteren die voor de downstreamanalyses moet worden gebruikt, controleert u de Ct-waarde en de vorm van de versterkingscurve in qPCR. OPMERKING: Primers die Ct (Cycle threshold) waarden geven tussen 10-35 in de 40 ronde versterking en vloeiende curven tijdens de exponentiële fase van de PCR gevolgd door een glad plateau zijn optimaal voor genexpressieanalyses.</li>
	</ol></li>
	<li>Kwantitatieve Real Time PCR (qPCR): Opmerking: Gebruik geschikte buizen of platen die compatibel zijn met de qPCR-machine.<ol>
<li>Verdun cDNA tot 5x met nucleasevrij water.</li>
		<li>Voeg aan 2 μl verdund cDNA 8 μl van een qPCR-mastermix toe met 2 μl H2O, 5 μl 2x SYBR Green mastermix en 1,0 μl 10 μM (elk) voorwaartse en omgekeerde primer.</li>
		<li>Sluit de buizen en sluit de plaat af na het pipetten van cDNA en mastermix. Meng de inhoud door zachtjes te tikken en 30 sec. bij 1.500 tpm naar beneden te draaien.</li>
		<li>Ga verder met het instellen van de qPCR-machine.</li>
	</ol></li>
</ol>

Auteurs hebben geen concurrerende financiële belangen.

Het neuron R15 is betrokken bij het reguleren van cardiovasculaire, spijsverterings-, ademhalings- en voortplantingssystemen30. Een regelmatig ritmische barstende activiteit van de AP is een kenmerk van R15. Zoals getoond in de resultatensectie, laten gekoppelde opnames van R15 en L7 zien dat het gangliapreparaat de activiteit van R15-neuronen heeft behouden. R15- en L7-neuronen reageerden adequaat op Ach. Dit gangliapreparaat kon tot 8-10 uur worden gehandhaafd en elektrofysiologische activiteit kon continu w...

Het menselijk brein is buitengewoon complex met bijna 100 miljard neuronen en biljoenen synaptische verbindingen. Er zijn bijna een gelijk aantal niet-neuronale cellen die interageren met neuronen en hun functie in de hersenen reguleren. Neuronen zijn georganiseerd in circuits die specifiek gedrag reguleren. Ondanks de vooruitgang in ons begrip van hersenfuncties en neurale circuits, is er weinig bekend over de identiteit van circuitcomponenten die een specifiek gedrag controleren. Kennis van de identiteiten van verschillende componenten van een circuit zal ons begrip van zowel cellulaire als moleculaire basis van gedrag aanzienlijk vergemakkelijken en helpen bij het ontwikkelen van nieuwe therapeutische strategieën voor neuropsychiatrische aandoeningen.
De zeeslak Aplysia californica is een werkpaard geweest voor het bepalen van neuronale circuits die ten grondslag liggen aan specifiek gedrag1-14. Het Aplysia zenuwstelsel bevat ongeveer 20.000 neuronen die zijn georganiseerd in 9 verschillende ganglia. De neuronen van Aplysia zijn groot en kunnen gemakkelijk worden geïdentificeerd op basis van hun grootte, elektrische eigenschappen en positie in de ganglia. Aplysia heeft een rijk repertoire aan gedragingen die bestudeerd kunnen worden. Een van de goed bestudeerde gedragingen is de kieuwontwenningsreflex (GWR). De centrale componenten van deze reflex bevinden zich in abdominale ganglia. Onderdelen van de GWR-circuits zijn in kaart gebracht en bijdragen van verschillende componenten zijn bepaald. Belangrijk is dat GWR-circuits associatief en niet-associatief leren ondergaan5,6,15-19. Tientallen jaren van onderzoek naar deze reflex hebben ook verschillende signaleringsroutes geïdentificeerd die een sleutelrol spelen in leren en geheugen20-24.
Verschillende preparaten van Aplysia werden gebruikt om cellulaire en moleculaire basis van geheugenopslag te bestuderen. Deze omvatten het intacte dier2,3, semi-intact preparaat1,7,13,14,16 en reconstitutie van belangrijke componenten van neurale circuits25-29. Een verminderde voorbereiding voor het verkennen van Aplysia ganglia voor de elektrofysiologische en moleculaire analyses van geïdentificeerde neuronale circuits wordt hier beschreven. De volgende vier geïdentificeerde neuronen werden bestudeerd. R15, een barstend neuron, L7 en L11, twee verschillende motorneuronen en R2, een cholinerge neuron werden bestudeerd. R2 is het grootste neuron beschreven in het ongewervelde zenuwstelsel. Kortom, deze methodologie omvat proteasebehandeling van ganglia, elektrofysiologische metingen voor en na farmacologische behandelingen en isolatie van enkele neuronen voor kwantitatieve analyse van genexpressie. Deze methodologie stelt ons in staat om moleculaire analyses te combineren met gelijktijdige opname van meerdere neuronen. Deze methodologie werd met succes gebruikt om reacties van R15- en L7-neuronen op acetylcholine (Ach) te bestuderen door gepaarde intracellulaire opnames. Na elektrofysiologische metingen werden R15 en L7 en andere geïdentificeerde neuronen zoals L11 en R2 geïsoleerd voor kwantitatieve polymerasekettingreactie (qPCR) analyse van expressie van CREB1, een transcriptiefactor die belangrijk is voor geheugenopslag.

<table><tbody><tr><td>Aplysia</td><td>National Aplysia Resource Facility, University of Miami</td><td></td><td></td></tr><tr><td>NaCl</td><td>SIGMA</td><td>S 3014-1KG</td><td></td></tr><tr><td>KCl</td><td>SIGMA</td><td>P 9333-500G</td><td></td></tr><tr><td>CaCl2&bull;2H2O</td><td>SIGMA</td><td>C5080- 500G</td><td></td></tr><tr><td>MgCl2&bull;6H2O</td><td>Fisher Scientific</td><td>BP 214-501</td><td></td></tr><tr><td>NaHCO4</td><td>SIGMA</td><td>S 6297-250G</td><td></td></tr><tr><td>HEPES</td><td>SIGMA</td><td>H 3375-500G</td><td></td></tr><tr><td>Protease</td><td>GIBCO</td><td>17105-042</td><td></td></tr><tr><td>Trizol</td><td>Ambion</td><td>15596-026</td><td></td></tr><tr><td>Chloroform</td><td>MP Biomedicals</td><td>2194002</td><td></td></tr><tr><td>100% Ethanol</td><td>ACROS</td><td>64-17-5</td><td></td></tr><tr><td>GlycoBlue</td><td>Ambion</td><td>AM9515</td><td></td></tr><tr><td>3 M NaOAc, pH 5.5</td><td>Ambion</td><td>AM9740</td><td></td></tr><tr><td>Nuclease free water</td><td>Ambion</td><td>AM9737</td><td></td></tr><tr><td>MessageAmp II aRNA Amplification Kit</td><td>Ambion</td><td>AM1751</td><td></td></tr><tr><td>qScript cDNA SuperMix</td><td>Quanta Biosciences</td><td>95048-100</td><td></td></tr><tr><td>Power SYBR Green PCR Master Mix</td><td>Applied Biosystems</td><td>4367659</td><td></td></tr><tr><td>Forceps</td><td>Fine Science Tools</td><td>11252-20</td><td></td></tr><tr><td>Scissors</td><td>Fine Science Tools</td><td>15000-08</td><td></td></tr><tr><td>Stainless Steel Minutien Pins&nbsp;</td><td>Fine Science Tools</td><td>26002-10 of</td><td></td></tr><tr><td>26002-20</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Veriti Thermal Cycler</td><td>Applied Biosystems</td><td>Veriti Thermal Cycler</td><td></td></tr><tr><td>5430R Centrifuge</td><td>Eppendorf</td><td>5430R Centrifuge</td><td></td></tr><tr><td>7900HT Fast Real-Time PCR</td><td>Applied Biosystems</td><td>7900HT Fast Real-Time PCR</td><td></td></tr><tr><td>Amplifier</td><td>BRAMP-01R</td><td>NPI Electronics</td><td></td></tr><tr><td>Digidata Converter</td><td>Instrutech ITC-18</td><td>HEKA ELEKTRONIK</td><td></td></tr><tr><td>Micro Manipulator</td><td>Patch Star</td><td>Scientifica</td><td></td></tr></tbody></table>

aplysia ganglia voorbereiding voor elektrofysiologische en moleculaire analyses van enkele neuronen

Aplysia Ganglia Preparation for Electrophysiological and Molecular Analyses of Single Neurons

Een grote uitdaging in de neurobiologie is het begrijpen van de moleculaire onderbouwing van neurale circuits die een specifiek gedrag bepalen. Zodra de specifieke moleculaire mechanismen zijn geïdentificeerd, kunnen nieuwe therapeutische strategieën worden ontwikkeld om afwijkingen in specifiek gedrag veroorzaakt door degeneratieve ziekten of veroudering van het zenuwstelsel te behandelen. De zeeslak Aplysia californica is zeer geschikt voor het onderzoeken van cellulaire en moleculaire gedragsbasis, omdat neurale circuits die ten grondslag liggen aan een specifiek gedrag gemakkelijk kunnen worden bepaald en de afzonderlijke componenten van het circuit gemakkelijk kunnen worden gemanipuleerd. Deze voordelen van Aplysia hebben geleid tot verschillende fundamentele ontdekkingen van neurobiologie van leren en geheugen. Hier beschrijven we een voorbereiding van het Aplysia zenuwstelsel voor de elektrofysiologische en moleculaire analyses van individuele neuronen. Kortom, ganglion ontleed uit het zenuwstelsel wordt blootgesteld aan protease om de ganglionschede te verwijderen, zodat neuronen worden blootgesteld, maar neuronale activiteit behouden zoals bij het intacte dier. Dit preparaat wordt gebruikt om elektrofysiologische metingen van enkele of meerdere neuronen uit te voeren. Belangrijk is dat na de opname met behulp van een eenvoudige methodologie, de neuronen rechtstreeks van de ganglia kunnen worden geïsoleerd voor genexpressieanalyse. Deze protocollen werden gebruikt om gelijktijdige elektrofysiologische opnames uit te voeren van L7- en R15-neuronen, hun reactie op acetylcholine te bestuderen en de expressie van creb1-gen te kwantificeren in geïsoleerde enkelvoudige L7-, L11-, R15- en R2-neuronen van Aplysia.

De gewichten van dieren die in deze studie werden gebruikt, varieerden van 100-200 g. Volgens de beschreven protocollen voerden we elektrofysiologische metingen en moleculaire analyse uit van neuronen van abdominale ganglia geïsoleerd van dieren variërend van 2-5 g tot 200-300 g.
Standaardisatie van proteasebehandeling is belangrijk voor succesvolle elektrofysiologische metingen van neuronen in de ganglia. Aanvankelijk werden meerdere proteaseconcentraties (Dispase) en duur gebruikt en burstin...

Zeeslak Aplysia californica is veel gebruikt als een neurobiologisch model voor de studies op cellulaire en moleculaire basis van gedrag. Hier wordt een methodologie beschreven voor het verkennen van het zenuwstelsel van Aplysia voor de elektrofysiologische en moleculaire analyses van enkele neuronen van geïdentificeerde neurale circuits.

Aplysia Ganglia voorbereiding voor elektrofysiologische en moleculaire analyses van enkele neuronen

A major challenge in neurobiology is to understand the molecular underpinnings of neural circuitry that govern a specific behavior. Once the specific ...

Het algemene doel van deze procedure is het bestuderen van genexpressie en elektrofysiologische veranderingen in individuele geïdentificeerde neuronen. Dit wordt bereikt door eerst zorgvuldig de neuronen van belang te identificeren in het ganglion van plegia, na de proteasebehandeling en het verwijderen van de omhulling van het ganglion om de neuronen bloot te leggen. De tweede stap bestaat uit het registreren van de elektrofysiologische eigenschappen van de geïdentificeerde neuronen.Isoleer vervolgens individuele neuronen na de elektrofysiologische metingen en isoleer daarna RNA's uit deze neuronen voor lineaire amplificatie. De laatste stap is het karakteriseren van de genexpressie via kwantitatieve PCR. Analyseer uiteindelijk de elektrofysiologische gegevens en de genexpressiedata van de behandelingen en controles om specifieke veranderingen te identificeren.Het belangrijkste voordeel van deze techniek ten opzichte van bestaande methoden, zoals analyse van organen, weefsels of ganglia, is dat deze analyse op het niveau van een enkel neuron mogelijk maakt. Deze methode kan helpen bij het beantwoorden van kernvragen binnen de cognitieve neurowetenschappen, zoals de manier waarop g

aplysia-ganglia-preparation-for-electrophysiological-molecular

Research

JoVE Journal

Bioengineering

Bio-engineering

Aplysia californica neuronen ontwikkelen van grote groei van kegels in de cultuur die zijn uitstekend geschikt voor hoge-resolutie beeldvorming van groeikegel motiliteit en begeleiding. Hier presenteren we een protocol voor dissectie en plating van Aplysia zak cel neuronen, alsook voor het opzetten van een kamer voor live cell imaging.

Neuronale celkweken van Aplysia voor High-Resolution Imaging van Groei Cones

De voorbereiding van Aplysia Sensory-motor Neuronale Cell Cultures

Een techniek is beschreven voor het implanteren van...

Elektrode Fabrication en Implantatie in Aplysia californica Voor Multi-channel Neurale en gespierd Recordings in Intact, Vrij Behaving Dieren

We laten zien hoe vlakke patch-clamp chips gefabriceerd op de National Research Council of Canada worden gesteriliseerd, gegrond, geladen met medium, bedekt met cellen, en gebruikt voor elektrofysiologische opnamen.

Kweken en Elektrofysiologie van cellen op NRCC Patch-clamp Chips

We zien hoe veranderingen in de intracellulaire vrije calciumconcentratie en synaptische werkzaamheid kan gelijktijdig monitoren in een ganglion bereiding...

Volgen van veranderingen in de intracellulaire calciumconcentratie en Synaptic werkzaamheid in de Mollusc<em&gt; Aplysia</em

We beschrijven een techniek om extracellulair op te nemen en te stimuleren van zenuwen, spieren, en individuele geïdentificeerde...

Een<em&gt; In Vitro</em&gt; Voorbereiding voor het uitlokken en opnemen Feeding Motor Programma&#39;s met Fysiologische Mutaties in<em&gt; Aplysia californica</em

In dieren met grote geïdentificeerde neuronen...

Extracellulair Het identificeren van Motor Neuronen voor een Muscle Motor Pool in<em&gt; Aplysia californica</em

We beschrijven de ontleding van het zenuwstelsel van het mariene...

Isolatie van sensorische neuronen van<em&gt; Aplysia californica</em&gt; Voor Patch Clamp Recordings van Glutamaterge Currents

Dit protocol presenteert een methode voor het weergeven van neuronale populatieactiviteit met eencellige resolutie bij niet-transgene ongewervelde soorten met behulp van absorptiespanningsgevoelige kleurstoffen en een fotodiode array. Deze aanpak maakt een snelle workflow mogelijk, waarbij beeldvorming en analyse in één dag kunnen worden nagestreefd.

Op fotodiode gebaseerde optische beeldvorming voor het opnemen van netwerkdynamica met single-neuronresolutie in niet-transgene ongewervelde dieren

Post-transcriptionele modificaties van RNA vertegenwoordigen een onderbelichte laag van translatieregulatie die onlangs is gekoppeld aan de plasticiteit van het centrale zenuwstelsel. Hier wordt de monstervoorbereiding en vloeistofchromatografie-tandem massaspectrometriebenadering beschreven voor gelijktijdige karakterisering van talrijke RNA-modificaties in afzonderlijke neuronen.

Karakterisering van RNA-modificaties in enkele neuronen met behulp van massaspectrometrie

Leer elektrofysiologische en moleculaire analyses van enkele neuronen in Aplysia californica. Deze methode combineert intracellulaire opnamen met RNA-isolatie en kwantitatieve PCR voor gedetailleerd onderzoek naar genexpressie.

Aplysia Ganglia voorbereiding voor elektrofysiologische en moleculaire analyses van enkele neuronen

Meer video's verkennen