Name: Imaging Door de Pupal zaak van Drosophila melanogaster (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2014-01-23T15:15:00.000+00:00
Duration: 6 min 50 s
Description: Leer beeldvorming door het popstadium van Drosophila melanogaster met resonante confocale microscopie. Deze niet-invasieve methode maakt langdurige observatie van celdeling en morfogenese mogelijk zonder de viabiliteit aan te tasten.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

playerTrialDesktop

De auteurs willen Akira Chiba erkennen voor intellectuele steun, materiële steun, en de voorraden. Met dank aan Julia Dallman voor commentaar.

1. Vliegen Work <ol><li> Handhaaf vliegen op standaard maïsmeel-agar-melasse-gist medium bij kamertemperatuur 10. </li><li> Voor kruisen, isoleren maagden binnen 6 uur van verpopping. Na de kruising met mannen van het gewenste genotype, verandering vliegt naar nieuwe flesjes om de 3-4 dagen. </li></ol> Opmerking: Voor deze experimenten werd Gal4 lijn A9 toegepast om expressie van transgenen te rijden in de vleugel. Vliegen voorraden kan worden verkregen uit de voorraad centrum in Bloomington. Aandelen gebruikt in deze experimenten omvatten A9-Gal4 (Bl # 8761), His2Av-GFP (Bl # 5941), Sco / CYO HsCre (Bl # 1092), UAS-ChRFP-Tub (Bl # 25773), lollibow 11. 2. Selectie en montage van Poppen <ol><li> Stage poppen hetzij door het verzamelen van hen als witte prepupae (WPP) en houden ze bij 25 ° C totdat ze de juiste leeftijd hebben bereikt of met behulp van morfologische criteria 12. </li><li> Om celdelingen, selecteert pop die onlangs hebben ondergaan hoofd eversie observeren.Vanaf deze tijd tot vlak voor eclosion (bij&gt; 96 uur), poppen zijn immobiel waardoor langere time-lapse observatie. </li><li> Verwijder poppen uit de vaatjes door ze eerst aan te raken met een penseel bevochtigd met water, wachtend op een minuut om het water om de lijm los te maken en vervolgens voorzichtig porren ze op het penseel. </li><li> Voorzichtig wassen geselecteerde poppen door porren ze met een penseel in het water om de speekselklier lijm en etensresten te verwijderen. </li><li> Transfer schoon poppen aan een 25 mm petrischaal met een dekglaasje bodem (nummer 1 ½ dekglaasjes). </li><li> Met dunne stroken of klei of tandheelkundige was als drager, zet poppen zodat het weefsel van belang het dichtst bij het dekglaasje. Opmerking: In de hier beschreven studies, hebben pupal vleugels, benen, buik histoblasts of dorsale notum waargenomen. In de praktijk elk weefsel in 20 urn van het oppervlak van het popstadium waarneembaar. </li><li> Orient poppen zorgvuldig, zodat de tissue plaats evenwijdig aan de glazen dekglaasje oppervlak. </li><li> Zodra poppen zijn gemonteerd, gebruikt een penseel een dun laagje thiodiethyleenglycol (TDG) overbrengen naar de ruimte tussen de pop en het dekglaasje. </li></ol> Opmerking: TDG vermindert oppervlakte verstrooiing, overeenkomt met de brekingsindex van de olie, en kan zuurstof naar het weefsel 13 doordringen. Het gebruik van oliën wordt niet aanbevolen, omdat ze de neiging om de weefsels te beroven van zuurstof, waardoor een snelle beëindiging van de cel gedrag. 3. Imaging Opmerking: Voor grafische, van een confocale microscoop is waarschijnlijk essentieel om zo de confocaliteit verwijdert de meeste van de verduisterende achtergrond veroorzaakt door intense verlichting van het popstadium. <ol><li> Instellingen van de confocale Stel het effect van verlichting op popstadium ontwikkeling en levensvatbaarheid minimaliseren. Om dit te doen, een evenwicht tussen de intensiteit van excitatie en de gevoeligheid van de collectie. Een typische configuratie voor beeldvorming with de Leica SP5 gebruikt de resonantie scanner (8000 Hz), laservermogen te stellen op 2% (10% doorlaatbaarheid van 20% vermogen), pinhole set tot 120 micrometer, en lijn middeling ingesteld op 8. Instellingen zijn afhankelijk van experimentele omstandigheden. </li></ol> Opmerking: Om te lossen fijnschalige beschikt 40X en 63X Olievulling lenzen (0,1 mm werkafstand) zijn ook met succes gebruikt in deze methode, hoewel ze beperken de scherptediepte. 4. Analyse Om frames te analyseren, z-stacks of films de data bestanden te importeren naar Fiji, die effectieve tools voor het bekijken, meten, en het wijzigen van bestanden voor de presentatie 14 heeft. Bijvoorbeeld tijd om mitose voltooid werd gemeten met de sampling interval en multidimensionale image browser om door frames tijdens het kijken naar een cel van profase tot telofase. x-, y-is, en z-dimensies gemeten met het meetinstrument. Voor gedetailleerde instructies over de software en het gebruik ervanzie: http://fiji.sc/Fiji.

<ol><li>Raff, J. W., Jeffers, K., Huang, J. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+roles+of+Fzy%2FCdc20+and+Fzr%2FCdh1+in+regulating+the+destruction+of+cyclin+B+in+space+and+time%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">The roles of Fzy/Cdc20 and Fzr/Cdh1 in regulating the destruction of cyclin B in space and time.</a> J. Cell Biol. 157, 1139-1149 (2002).</li>
<li>Stramer, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Live+imaging+of+wound+inflammation+in+Drosophila+embryos+reveals+key+roles+for+small+GTPases+during+in+vivo+cell+migration%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">Live imaging of wound inflammation in Drosophila embryos reveals key roles for small GTPases during in vivo cell migration.</a> J. Cell Biol. 168, 567-573 (2005).</li>
<li>Clark, I. B., Jarman, A. P., Finnegan, D. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Live+imaging+of+Drosophila+gonad+formation+reveals+roles+for+Six4+in+regulating+germline+and+somatic+cell+migration%5BTitle%5D)+AND+%22BMC+Dev.+Biol%22%5BJournal%5D)">Live imaging of Drosophila gonad formation reveals roles for Six4 in regulating germline and somatic cell migration.</a> BMC Dev. Biol. 7, 52 (2007).</li>
<li>Fuger, P., Behrends, L. B., Mertel, S., Sigrist, S. J., Rasse, T. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Live+imaging+of+synapse+development+and+measuring+protein+dynamics+using+two-color+fluorescence+recovery+after+photo-bleaching+at+Drosophila+synapses%5BTitle%5D)+AND+%22Nat.+Protoc%22%5BJournal%5D)">Live imaging of synapse development and measuring protein dynamics using two-color fluorescence recovery after photo-bleaching at Drosophila synapses.</a> Nat. Protoc. 2, 3285-3298 (2007).</li>
<li>Siller, K. H., Serr, M., Steward, R., Hays, T. S., Doe, C. Q. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Live+imaging+of+Drosophila+brain+neuroblasts+reveals+a+role+for+Lis1%2Fdynactin+in+spindle+assembly+and+mitotic+checkpoint+control%5BTitle%5D)+AND+%22Mol.+Biol.+Cell%22%5BJournal%5D)">Live imaging of Drosophila brain neuroblasts reveals a role for Lis1/dynactin in spindle assembly and mitotic checkpoint control.</a> Mol. Biol. Cell. 16, 5127-5140 (2005).</li>
<li>Roy, S., Hsiung, F., Kornberg, T. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Specificity+of+Drosophila+cytonemes+for+distinct+signaling+pathways%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Specificity of Drosophila cytonemes for distinct signaling pathways.</a> Science. 332, 354-358 (2011).</li>
<li>Gho, M., Bellaiche, Y., Schweisguth, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Revisiting+the+Drosophila+microchaete+lineage%3A+a+novel+intrinsically+asymmetric+cell+division+generates+a+glial+cell%5BTitle%5D)+AND+%22Development%22%5BJournal%5D)">Revisiting the Drosophila microchaete lineage: a novel intrinsically asymmetric cell division generates a glial cell.</a> Development. 126, 3573-3584 (1999).</li>
<li>Ninov, N., Martin-Blanco, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Live+imaging+of+epidermal+morphogenesis+during+the+development+of+the+adult+abdominal+epidermis+of+Drosophila%5BTitle%5D)+AND+%22Nat.+Protoc%22%5BJournal%5D)">Live imaging of epidermal morphogenesis during the development of the adult abdominal epidermis of Drosophila.</a> Nat. Protoc. 2, 3074-3080 (2007).</li>
<li>Edgar, B. A., Lehner, C. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Developmental+control+of+cell+cycle+regulators%3A+a+fly%27s+perspective%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Developmental control of cell cycle regulators: a fly's perspective.</a> Science. 274, 1646-1652 (1996).</li>
<li>Wirtz, R. A., Semey, H. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+Drosophila+kitchen%3A+equipment%2C+media+preparation%2C+and+supplies%5BTitle%5D)+AND+%22Drosophila+Information+Service%22%5BJournal%5D)">The Drosophila kitchen: equipment, media preparation, and supplies.</a> Drosophila Information Service. 58, 176-180 (1982).</li>
<li>Boulina, M., Samarajeewa, H., Baker, J. D., Kim, M. D., Chiba, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Live+imaging+of+multicolor-labeled+cells+in+Drosophila%5BTitle%5D)+AND+%22Development%22%5BJournal%5D)">Live imaging of multicolor-labeled cells in Drosophila.</a> Development. 140, 1605-1613 (2013).</li>
<li>Bainbridge, S. P., Bownes, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Staging+the+metamorphosis+of+Drosophila+melanogaster%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Embryol.+Exp.+Morphol%22%5BJournal%5D)">Staging the metamorphosis of Drosophila melanogaster.</a> J. Embryol. Exp. Morphol. 66, 57-80 (1981).</li>
<li>Staudt, T., Lang, M. C., Medda, R., Engelhardt, J., Hell, S. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((2%2C2%27-thiodiethanol%3A+a+new+water+soluble+mounting+medium+for+high+resolution+optical+microscopy%5BTitle%5D)+AND+%22Microsc.+Res.+Tech%22%5BJournal%5D)">2,2'-thiodiethanol: a new water soluble mounting medium for high resolution optical microscopy.</a> Microsc. Res. Tech. 70, 1-9 (2007).</li>
<li>Schindelin, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fiji%3A+an+open-source+platform+for+biological-image+analysis%5BTitle%5D)+AND+%22Nat.+Methods%22%5BJournal%5D)">Fiji: an open-source platform for biological-image analysis.</a> Nat. Methods. 9, 676-682 (2012).</li>
<li>Meyer, E. J., Ikmi, A., Gibson, M. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Interkinetic+nuclear+migration+is+a+broadly+conserved+feature+of+cell+division+in+pseudostratified+epithelia%5BTitle%5D)+AND+%22Curr.+Biol%22%5BJournal%5D)">Interkinetic nuclear migration is a broadly conserved feature of cell division in pseudostratified epithelia.</a> Curr. Biol. 21, 485-491 (2011).</li>
<li>Sauer, F. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mitosis+in+the+neural+tube%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Comp.+Neurol%22%5BJournal%5D)">Mitosis in the neural tube.</a> J. Comp. Neurol. 62, 377-405 (1935).</li>
<li>Livet, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Transgenic+strategies+for+combinatorial+expression+of+fluorescent+proteins+in+the+nervous+system%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Transgenic strategies for combinatorial expression of fluorescent proteins in the nervous system.</a> Nature. 450, 56-62 (2007).</li>
</ol>

De auteurs hebben niets te onthullen.

Visualiseren, meten en kwantificeren kenmerken van delende cellen, vereist de ontwikkeling van een eenvoudige voorbereiding voor het observeren van mitose in de levende pupal vleugel van Drosophila door middel van confocale analyse van His2AvGFP expressie cellen. Deze methode werd gebruikt om te documenteren dat de celcyclus in het popstadium vleugel draagt ​​sterke gelijkenissen met cycli cel in pseudostratified epitheel in die kernen verhuizing naar de apicale oppervlak van het epitheel waar ze mitose voeren....

<html> De azijn Drosophila melanogaster, is een goed uitgewerkt model voor het bestuderen van vele aspecten van de biologie. Drosophila onderzoek heeft een rijke geschiedenis van genetische experimenten die verfijnde vormen van genetische manipulatie, waaronder expressie, knock-down en mutatie maakt. Met de komst van fluorescente proteïne labels, heeft dit repertoire uitgebreid onderzoek van cellen en eiwitten omvatten in levende dieren. De vlieg embryo is een uitstekend systeem voor dergelijke studies zoals het is klein en optisch helder waardoor diepe, hoge-resolutie imaging in vivo 1-3. Andere stadia van vliegen ontwikkeling hebben bewezen minder handelbaar te zijn, die voor pijn 4, dissectie en korte termijn cultuur 5,6, of de creatie van de ramen in de cuticula voor de beeldvorming 7,8. Deze manipulaties meestal compromis dierlijke ontwikkeling op lange termijn, noch de dieren op een manier die beeldvorming beperken tot korte perioden. ent &quot;&gt; Om nieuwe mutaties te bestuderen in genen die de celcyclus regulatoren lijken, was het essentieel om een ​​passende voorbereiding op de timing en de trouw van de celcyclus te bestuderen vinden. Aangezien de meeste embryonale cel cycli worden afgekapt (SM of S-G2-M) en mutanten onderzochte geen afwijkingen vertonen pas later stadium, was het belangrijk om de celcyclus in acht popstadium weefsels. epitheelcellen in de pop een meer typische G1-S-G2-M celcyclus en poppen van deze fase zijn niet in staat spierbewegingen 9 De eerste uitgangspunt manipulaties opgenomen intacte hele poppen expressie Histone2AV-GFP. Ondanks de schijnbare dichtheid van het popstadium. Deze intacte preparaat bleek uitstekende lange termijn in vivo beeldvorming zijn. Deze techniek is eenvoudig genoeg dat undergraduate onderzoekers gebruiken routinematig om aspecten van cel-en ontwikkelingsbiologie in Drosophila studeren en toch de resolutie is fijn genoeg om discriminatie van micrometer schaal functies kunt. Met deze methode, observaties van gebeurtenissen dan uren, minuten of seconden zijn mogelijk gewoon door het aanpassen van tijdreeksen parameters. Video behulp van blauw, groen, geel, oranje en rood fluorescerende eiwitten, of combinaties daarvan, zijn gemaakt. Belangrijk is wanneer getracht het laserintensiteit minimaliseren, zelfs op lange termijn beeldvorming heeft geen effect op de ontwikkeling of de levensvatbaarheid van de dieren.

<table><tbody><tr><td>Fly stuff fly pad</td><td>Genesee Scientific</td><td>59-114</td><td>voor vlieg anesthetisatie</td></tr><tr><td>CO2 gas</td><td>Airgas South</td><td>CD50</td><td>Voor vlieg anesthetisatie</td></tr><tr><td>Regulator</td><td>Airgas South</td><td></td><td>CO2 regulator</td></tr><tr><td>Fly vials</td><td>Genesee Scientific</td><td>32-113RLBF</td><td>Vliegcultuur</td></tr><tr><td>Drosophila lijnen:A9-Gal4 (Bl#8761), His2Av-GFP (Bl#5941), Sco/CyO HsCre (Bl#1092), UAS-ChRFP-Tub (Bl#25773)</td><td>Bloomington Stock Center</td><td></td><td>&nbsp;</td></tr><tr><td>Glazen bodem schotels #1 1/2</td><td>WillCo Wells BV</td><td></td><td>Voor microscopie</td></tr><tr><td>Thiodiethyleen Glycol</td><td>Fluka</td><td>88559</td><td>Mountant</td></tr><tr><td>Modelklei</td><td>kunstbenodigdhedenwinkel</td><td></td><td>Ondersteuning om poppen te positioneren tegen</td></tr><tr><td>Schilderkwasten</td><td>kunstbenodigdhedenwinkel</td><td></td><td>Om vliegen te manipuleren</td></tr><tr><td>Fijne pincetten, Inox #5</td><td>Fine Science Tools</td><td>11252-20</td><td>Dumont #5</td></tr><tr><td>computer</td><td>elke</td><td></td><td>8 Gb RAM voor beeld-/filmanalyse</td></tr><tr><td>Fiji software</td><td></td><td>Gratisware http://fiji.sc/Fiji</td><td>Beeldanalysesoftware</td></tr><tr><td>Confocale microscoop</td><td></td><td></td><td>Elke snelle scanconfocale zou voldoende moeten zijn</td></tr><tr><td>20X droog en 40X of 63X olie-immersie lenzen</td><td>elke</td><td></td><td>Voor beeldvorming van weefsel-, cellulaire en subcellulaire kenmerken</td></tr><tr><td>Immersielijm (niet-fluorescent)</td><td></td><td></td><td>&nbsp;</td></tr><tr><td>Stereomicroscoop</td><td>elke</td><td></td><td>Voor vliegmanipulatie</td></tr></tbody></table>

imaging door de pupal zaak van<em&gt; drosophila melanogaster</em

Imaging Through the Pupal Case of Drosophila melanogaster

Het langdurig gebruik van Drosophila als model voor cel-en ontwikkelingsbiologie heeft een scala aan instrumenten opgeleverd. Samen hebben deze technieken analyse van cel en ontwikkelingsbiologie vanuit verschillende methodologische invalshoeken mogelijk. Live-Imaging is een nieuwe methode voor het observeren van dynamische cellulaire processen zoals celdeling en cel beweeglijkheid. Na geïsoleerd mutaties in ongekarakteriseerde vermeende celcycluseiwitten werd het essentieel om mitose observeren in situ met behulp van live beeldvorming. De meeste levende imaging studies in Drosophila hebben geconcentreerd op de embryonale stadia die toegankelijk is voor manipulatie en observatie zijn vanwege hun kleine formaat en optische helderheid. In deze fasen de celcyclus ongebruikelijk, dat geen een van de spleet fasen of beide. Daarentegen cellen van het popstadium vleugel van Drosophila hebben een typische celcyclus ondergaan een periode van snelle mitose uitstrekt over ongeveer 20 hr popstadium ontwikkeling. Het is gemakkelijk om identify en isoleren poppen van de juiste fase om mitose te vangen in situ. Montage intact poppen voorwaarde dat de beste combinatie van volgzaamheid en duurzaamheid tijdens de beeldvorming, waardoor experimenten uit te voeren voor een aantal uren met een minimale impact op de cel en dierlijke levensvatbaarheid. De methode maakt observatie van functies zo klein als of kleiner dan, vliegen chromosomen. Aanpassing microscoop instellingen en de bevestiging, toegestane verlenging van het preparaat membraan dynamica van aangrenzende cellen en fluorescent gelabelde eiwitten zoals tubuline visualiseren. Deze methode werkt voor alle geteste fluorescerende eiwitten en kan submicron schaal functies over een verscheidenheid van tijdschalen vangen. Terwijl beperkt tot de buitenste 20 urn van de pop met een conventionele confocale microscoop kan deze benadering observeren eiwitten en cellulaire dynamiek pupal weefsels in vivo algemeen bruikbaar in de studie van cel en ontwikkelingsbiologie in deze weefsels.

Cellen in pseudo-epitheel, zoals de ontwikkeling van Drosophila oog of de ventriculaire laag van de zich ontwikkelende gewervelde centrale zenuwstelsel ondergaan nucleaire bewegingen genoemd interkinetic nucleaire migratie in de tijd met de celcyclus. DNA replicatie als kernen in of nabij het ​​basale oppervlak en cellen binnen mitose wanneer de kernen zo het apicale oppervlak 15,16. De pupal vleugel cellen vormen een snel delende monolaag epitheel gedurende de eerste paar uur na kop eversie. De gege...

Dit document toont het gebruik van een snelle scanning confocale microscoop om het celgedrag rechtstreeks via puparium. Bij het verlaten van het popstadium intact, kan deze methode waarneming en meting van dynamische celprocessen in een stadium van Drosophila ontwikkeling die moeilijk rechtstreeks te bestuderen.

Imaging Door de Pupal zaak van<em&gt; Drosophila melanogaster</em

The longstanding use of Drosophila as a model for cell and developmental biology has yielded an array of tools. Together, these techniques have enabled ...

In deze video demonstreren we nieuwe technieken waarmee we de pop van Drosophila melanogaster kunnen afbeelden zonder de structurele integriteit van de pop in gevaar te brengen. Door de popenhuls intact te houden, minimaliseren we de impact van de beeldvorming op de ontwikkeling en levensvatbaarheid van de pop. Voor de beeldvorming maken we gebruik van een resonante scannende confocale microscoop van 8.000 hertz.Belangrijk is dat de zeer hoge scansnelheid en hoge gevoeligheid van deze microscoop bleaching sterk verminderen, waardoor langdurige observatieperioden mogelijk zijn. Met deze methode zijn we in staat geweest diverse celbiologische processen te visualiseren, waaronder het gedrag, fop, podia, morfogenese, fagocytose en mitose. Met deze techniek kunnen we gebeurtenissen in situ gedurende lange tijd observeren zonder het organisme te beschadigen.De waarnemingen die met deze methoden zijn verkregen, kunnen worden gebruikt om diverse biologische fenomenen te begrijpen in dit relatief ontoegankelijke stadium van de drosophila-ontwikkeling. Op het juiste stadium onderzoeken we ze terwijl ze nog in het vial zitten, zoekend naar belangrijke indicatoren van de ontwikkelingsfase om c

imaging-through-the-pupal-case-of-drosophila-melanogaster

Research

JoVE Journal

Biology

Biologie

Mesoscopische fluorescentie tomografie opereert buiten de grenzen van de penetratie-weefsel snijden fluorescentie microscopie. De techniek is gebaseerd op multi-projectie verlichting en een foton transport beschrijving. Tonen we aan in-vivo het hele lichaam 3D-visualisatie van de morfogenese van GFP-expressie vleugel imaginaire schijven...

Mesoscopische Fluorescentie Tomografie voor In-vivo Imaging van de ontwikkelingslanden Drosophila</em

De voorbereiding van de ontwikkeling en Adult Drosophila Hersenen en retinae voor Live Imaging

In deze video, beschrijven we een methode voor het live-cell imaging van asymmetrisch te verdelen zintuig progenitor cellen en epidermale cellen in...

Live-cell imaging van zintuig voorloper cellen in Intact Drosophila Poppen

Source: Hellerman, M. B., et al. Live-imaging of the Drosophila Pupal Eye. J. Vis. Exp. (2015)The video demonstrates a live-imaging technique to study eye patterning in a Drosophila melanogaster pupa. Green fluorescent protein (GFP)-tagged markers enable visualization of cellular organization and differentiation during the formation of the developing eye structure.

Live Imaging of the Drosophila Pupal Eye Using Fluorescence Microscopy

Dit protocol presenteert een efficiënte methode voor het beeldvormen van het levende Drosophila pupale oogneuro-epitheel. Deze methode compenseert voor weefselbeweging en ongelijke topologie, verbetert de visualisatie van celgrenzen door het gebruik van meerdere GFP-gelabelde junctie-eiwitten en maakt gebruik van een eenvoudig te monteren beeldvormingsopstelling.

Live-beeldvorming van de Drosophila Pupal Eye

Hier worden de experimentele protocollen beschreven voor het voorbereiden van Drosophila in verschillende ontwikkelingsstadia en het uitvoeren van longitudinale optische beeldvorming van Drosophila hartslagen met behulp van een aangepast systeem voor optische coherentiemicroscopie (OCM). De morfologische en dynamische veranderingen in het hart kunnen kwantitatief worden gekenmerkt door het analyseren van de structurele en functionele parameters van het hart uit OCM-beelden.

Drosophila Voorbereiding en longitudinale beeldvorming van het hart functie in vivo met behulp van Optical Coherence Microscopy (OCM)

Hier presenteren we een easy-to-use en veelzijdige methode om uit te voeren levende beeldvorming van ontwikkelings processen in algemene en spier-pees genuitdrukking met name in levende Drosophila poppen.

In Vivo Beeldvorming van de spier-pees morfogenese in Drosophila poppen

Dit protocol is ontworpen voor de beeldvorming en analyse van de dynamiek van celoriëntatie en weefselgroei in de Drosophila abdominale epithelia terwijl de fruitvlieg een metamorfose ondergaat. De hier beschreven methodologie kan worden toegepast op de studie van verschillende ontwikkelingsstadia, weefsels en subcellulaire structuren in Drosophila of andere modelorganismen.

Beeldvorming en analyse van weefseloriëntatie en groeidynamiek in de ontwikkeling van Drosophila Epithelia tijdens pupale stadia

Hier bespreken we een workflow om levende explant-hersenen van Drosophila melanogaster derde instarlarven voor te bereiden, te ontleden, te monteren en in beeld te brengen om de cellulaire en subcellulaire dynamiek onder fysiologische omstandigheden te observeren.

Live-Cell Imaging van Drosophila melanogaster Derde Instar Larvale Hersenen

Hier wordt een protocol gepresenteerd voor langdurige live beeldvorming van de Drosophila-poot tijdens het popstadium, waarbij het puparium volledig wordt verwijderd. Dit protocol kan ook op andere weefsels worden toegepast.

Langdurige live beeldvorming van de ontwikkeling van de poppoot van Drosophila na verwijdering van Puparium

Drosophila is een krachtig model om fundamentele mechanismen van myogenese te begrijpen. Dit protocol voor de dissectie en voorbereiding van thorax hemi-secties maakt microscopie-analyse mogelijk van indirecte vliegspier van zowel pop- als volwassen stadia. Dit protocol maakt confocale beeldvorming mogelijk van cellulaire morfologie, eiwitlokalisatie, spierstructuur en meerdere andere aspecten van myogenese.

Dissectie van Drosophila melanogaster indirecte vluchtspieren voor microscopiebenaderingen

Leer beeldvorming door het popstadium van Drosophila melanogaster met resonante confocale microscopie. Deze niet-invasieve methode maakt langdurige observatie van celdeling en morfogenese mogelijk zonder de viabiliteit aan te tasten.

Imaging Door de Pupal zaak van

Meer video's verkennen