Name: Het beoordelen Fagocytische Ontruiming van celdood in Experimental Stroke door ligeerbare fluorescerende probes (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2014-05-27T13:00:00.000+00:00
Duration: 7 min 14 s
Description: Leer hoe u actieve fagocyten selectief labelt die dode cellen opruimen bij hersenischemie. Deze fluorescentiemethode met vaccinia-topoisomerase en signaalversterking biedt inzicht in hersenherstel en kan ook op andere organen worden toegepast.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

playerTrialDesktop

Dit onderzoek werd ondersteund door subsidie ​​R01NS062842 van het Nationaal Instituut voor Neurologische Aandoeningen en Stroke, National Institutes of Health (VVD) en door subsidies R21 NS064403 van het Nationaal Instituut voor Neurologische Aandoeningen en Stroke, National Institutes of Health door ARRA (VVD) en R21 EB006301 Nationaal Instituut voor Biomedische Weergave en Biotechniek, National Institutes of Health (VVD).

De methode is geschikt voor vaste formaldehyde, in paraffine ingebedde weefselcoupes. De techniek wordt hier in zijn toepassing aangetoond experimentele beroerte in ratten. 1. Voorbereiding Onderdelen voor tyramide Signal Amplification (TSA) Systeem Alhoewel TSA-gebaseerde versterking wordt gebruikt in de slotfase van etikettering voorbereiding van deze reactie kan meer dan 1 uur duren. Daarom is het handig om de TSA reagentia te maken voordat u de etikettering. <ol><li> Maak fluorofoor tyramide stamoplossing. Gebruik het in individuele flacons met de TSA labeling kit fluorophore tyramide reagens. Voeg 300 ul DMSO de tyramide reagens flacon. Fluorofoor tyramide voorraad oplossing is stabiel gedurende tenminste 3 maanden indien bewaard bij 4 ° C. </li><li> Voeg TNT wasbuffer bevattende: 0,1 M Tris-HCl, pH 7,5; 0,15 M NaCl; 0,05% Tween-20. Indien nodig 0.3% Triton X-100 kan worden vervangen door het 0,05% Tween-20. Alternattend PBS worden gebruikt als wasbuffer. </li><li> Voeg TNB blokkerende buffer die 0,1 M Tris-HCl, pH 7,5; 0,15 M NaCl; 0,5% Blocking Reagent (met kit meegeleverd). Volledig oplossen van de blokkering reagens, voeg langzaam het in kleine stappen naar de buffer onder roeren. Verwarm deze oplossing langzaam tot 55 ° C onder voortdurend roeren. Dit kan 30-60 minuten duren. De oplossing verschijnt melkachtig. Breng op kamertemperatuur voor gebruik. Aliquot en bewaar bij -20 ° C voor langdurig gebruik. </li></ol> 2. Bereiding van de punten Met dia&#39;s met gemonteerde 5 urn dikke secties gesneden uit formaline gefixeerde weefsels. <ol><li> Behandel secties met xyleen gedurende 15 minuten. </li><li> Rehydrateren secties als volgt: laten weken in 96% EtOH 2x gedurende 5 minuten elk; weken in 80% EtOH gedurende 5 minuten; wassen met water 2x gedurende 5 minuten elk. </li><li> Voeg Proteinase K werkoplossing door verdunnen Proteinase K stamoplossing tot 50 ug / ml in PBS. </li><li> Proteinase toevoegenK werkende oplossing te delen. Incubeer 15 minuten bij 23 ° C. Het volume van de oplossing en het tijdstip van digestie moet worden aangepast aan de grootte van de secties en weefseltypen. Voor een sectie klein (minder dan 5 mm in diameter) 50 ul proteïnase oplossing voldoende. Gedeelte voor een gemiddelde grootte (~ 10 mm in diameter), voeg 100 pl Proteinase K oplossing. Voor zeer grote delen van het volume van de oplossing kan worden opgeschaald. In alle gevallen zorgen voor overdigestion secties die leidt tot signaalverlies voltooien en vernietigt weefselmorfologie voorkomen. Dit gebeurt vaak als incubatietijd van meer dan 25 minuten. </li><li> Was secties in gedestilleerd water 2x gedurende 5 minuten elk. Bereid de etikettering mix die actieve sonde terwijl secties zijn in het water. </li></ol> 3. VACC TOPO-gebaseerde kleuring <ol><li> Bereid de actieve probe-oplossing door combinatie van de volgende: Water - 11.75 gl 1 M Tris-HCl, pH 7,4-1,25 μl 100 pmol van 12-base overhang zelfmoord oligonucleotide - 1 ui 100 pmol oligonucleotide adapter - 1 pi 50 pmol VACC TOPO - 10 gl </li><li> Meng voorzichtig door pipetteren. Incubeer bij kamertemperatuur (23 ° C) gedurende 15 minuten om voor activering probe. </li><li> Neem secties van wassen pot en zuig het resterende water. Vervolgens naar actieve probe bereid in stap 3.1 (25 ui per ~ 10 x 10 mm doorsnede). </li><li> Dekglaasje secties en incubeer gedurende 15 minuten bij 23 ° C. Dipslides in water om voorzichtig te verwijderen dekglaasjes. Wassen in water 3x gedurende 5 minuten elk. </li></ol> 4. TSA Signal Enhancement <ol><li> Bedek weefselsecties met TNB blokkerende buffer eerder bereid en incubeer objectglaasjes in een vochtige kamer gedurende 30 minuten bij kamertemperatuur (23 ° C). </li><li> Bereid een 1:100 verdunning van streptavidine-mierikswortelperoxidase conjugaten (SA-HRP) in TNB blokkerende buffer. Aspireren TNBblokkeringsbuffer en toepassen SA-HRP oplossing. Incubeer dia&#39;s met SA-HRP gedurende 30 minuten bij kamertemperatuur geroerd. Gebruik voldoende reagens volume op het weefsel sectie, algemeen 100 ul per sectie te dekken. </li><li> Was 3x dia gedurende 5 minuten elk in TNT wasbuffer (of PBS) bij kamertemperatuur. </li><li> Bereid een 1:50 verdunning van fluorofor tyramide voorraad in 1x Amplification Diluent van de kit. Pipetteer de fluorofoor tyramide werkende oplossing op elke dia. Gebruik voldoende werkende oplossing volledig te bedekken de sectie weefsel, meestal 100 ul per sectie. Maak fluorofoor tyramide werkende oplossing onmiddellijk voor elk etiket. De oplossing kan niet worden hergebruikt, zodat het ongebruikte gedeelte van het weggooien na labeling. </li><li> Incubeer de glaasjes bij kamertemperatuur gedurende 3 tot 10 minuten. Monitor fluorescentietoename onder microscoop totdat de eerste tekenen van structuren te zien. Snel overgaan tot stap te wassen. </li><li> Wash glijdt 3x 5 min elk in TNT wasbuffer (of PBS) bij kamertemperatuur temperature met agitatie. </li><li> Voeg de antifading oplossing met DAPI en dekglaasje. Let op onder de fluorescentiemicroscoop. Te visualiseren DAPI en FITC fluorescentie gebruik een band-pass filter set: FITC excitatie D490/40, emissie 520/10; DAPI excitatie D360/40, emissie 460/20 en dergelijke. </li></ol>

<ol><li>Jin, R., Yang, G., Li, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Inflammatory+mechanisms+in+ischemic+stroke%3A+role+of+inflammatory+cells%5BTitle%5D)+AND+%22J+Leukoc+Biol%22%5BJournal%5D)">Inflammatory mechanisms in ischemic stroke: role of inflammatory cells.</a> J Leukoc Biol. 87, 779-789 (2010).</li>
<li>Schilling, M., Besselmann, M., Müller, M., Strecker, J. K., Ringelstein, E. B., Kiefer, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Predominant+phagocytic+activity+of+resident+microglia+over+hematogenous+macrophages+following+transient+focal+cerebral+ischemia%3A+an+investigation+using+green+fluorescent+protein+transgenic+bone+marrow+chimeric+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Exp+Neurol%22%5BJournal%5D)">Predominant phagocytic activity of resident microglia over hematogenous macrophages following transient focal cerebral ischemia: an investigation using green fluorescent protein transgenic bone marrow chimeric mice.</a> Exp Neurol. 196 (2), 290-297 (2005).</li>
<li>Faustino, J. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Microglial+cells+contribute+to+endogenous+brain+defenses+after+acute+neonatal+focal+stroke%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Microglial cells contribute to endogenous brain defenses after acute neonatal focal stroke.</a> J Neurosci. 31 (36), 12992-13001 (2011).</li>
<li>Thored, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Long+term+accumulation+of+microglia+with+proneurogenic+phenotype+concomitant+with+persistent+neurogenesis+in+adult+subventricular+zone+after+stroke%5BTitle%5D)+AND+%22Glia%22%5BJournal%5D)">Long term accumulation of microglia with proneurogenic phenotype concomitant with persistent neurogenesis in adult subventricular zone after stroke.</a> Glia. 57 (8), 835-849 (2009).</li>
<li>Sierra, A., Abiega, O., Shahraz, A., Neumann, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Janus-faced+microglia%3A+beneficial+and+detrimental+consequences+of+microglial+phagocytosis%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Cell+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Janus-faced microglia: beneficial and detrimental consequences of microglial phagocytosis.</a> Front Cell Neurosci. 7 (6), (2013).</li>
<li>Samejima, K., Earnshaw, W. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Trashing+the+genome%3A+Role+of+nucleases+during+apoptosis%5BTitle%5D)+AND+%22Nat.Rev.+Mol.+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">Trashing the genome: Role of nucleases during apoptosis.</a> Nat.Rev. Mol. Cell Biol. 6 (9), 677-688 (2005).</li>
<li>Minchew, C. L., Didenko, V. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fluorescent+probes+detecting+the+phagocytic+phase+of+apoptosis%3A+enzyme-substrate+complexes+of+topoisomerase+and+DNA%5BTitle%5D)+AND+%22Molecules%22%5BJournal%5D)">Fluorescent probes detecting the phagocytic phase of apoptosis: enzyme-substrate complexes of topoisomerase and DNA.</a> Molecules. 16 (6), 4599-4614 (2011).</li>
<li>Shuman, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Two+classes+of+DNA+end-joining+reactions+catalyzed+by+vaccinia+topoisomerase%5BTitle%5D)+AND+%22Sci.+Rep%22%5BJournal%5D)">Two classes of DNA end-joining reactions catalyzed by vaccinia topoisomerase.</a> Sci. Rep. 267, 16755-16758 (1992).</li>
<li>TSA Fluorescence Systems. , Available from: 
 
 <a target="_blank" href="http://www.perkinelmer.com/CMSResources/Images/44-73609man_TSAFluorescenceSystems.pdf">http://www.perkinelmer.com/CMSResources/Images/44-73609man_TSAFluorescenceSystems.pdf</a> Forthcoming.</li>
<li>Barcia, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((ROCK%2FCdc42-mediated+microglial+motility+and+gliapse+formation+lead+to+phagocytosis+of+degenerating+dopaminergic+neurons+in+vivo%5BTitle%5D)+AND+%22Sci.+Rep.+%22%5BJournal%5D)">ROCK/Cdc42-mediated microglial motility and gliapse formation lead to phagocytosis of degenerating dopaminergic neurons in vivo.</a> Sci. Rep. . 2, 809(2012).</li>
<li>Didenko, V. V., Ngo, H., Minchew, C. L., Boudreaux, D. J., Widmayer, M. A., Baskin, D. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Visualization+of+irreparable+ischemic+damage+in+brain+by+selective+labeling+of+double-strand+blunt-ended+DNA+breaks%5BTitle%5D)+AND+%22Mol.+Med%22%5BJournal%5D)">Visualization of irreparable ischemic damage in brain by selective labeling of double-strand blunt-ended DNA breaks.</a> Mol. Med. 8, 818-823 (2002).</li>
</ol>

De auteurs verklaren dat zij geen concurrerende financiële belangen.

In deze video laten we zien, in het weefsel sectie-indeling, hoe actief fagocyten etiket waarop duidelijk celdood bij focale ischemie hersenen. De gepresenteerde techniek is de eerste benadering die specifiek labels alleen die afvalbeheer cellen die overspoeld en actief te verteren cellulaire lijken. Dit maakt het voordeel ten opzichte van andere bestaande werkwijzen voor het labelen van fagocyterende cellen, die deze mogelijkheid hebben. De methode maakt gebruik van een algemene en selectie...

Ischemische beroerte veroorzaakt diepgaande veranderingen in de getroffen hersenweefsel. Het initieert massale celdood, hetgeen leidt tot een snelle activering van inwoner fagocytische cellen van microgliale oorsprong. Ook worden af infiltratie van ischemische hersenen door verschillende soorten op basis van bloed professionele fagocyten waaronder neutrofielen, macrofagen, dendritische, en mestcellen 1,2. Het wordt nog steeds gediscussieerd of deze reactie op ischemische schade speelt een positieve of een negatieve rol. Hoewel fagocytose na slag voordelig kan zijn omdat het ruimt dode cellen en onderdrukt ontstekingen, het genereert ook toxische zuurstofradicalen die neuronale overleving en verergeren weefselschade 1-5. Terwijl verschillende soorten fagocytcellen infiltreren ischemische hersenen, niet allemaal deelnemen aan afval-beheer door engulfing cel lijken en de weg vrijmaken voor regeneratieve processen 1-3. Deze creates een vereiste voor selectieve identificatie van afvalbeheer cellen die het uitvoeren van fagocytische klaring van celdood in een beroerte. Wanneer de beeldvorming dergelijke actieve afvalbeheer cellen, is het ook belangrijk om de vraag hoe efficiënt ze degraderen de verzwolgen cel lijken te beantwoorden. De efficiënte en volledige afbraak van DNA de stervende cel in fagocytose is essentieel omdat het voorkomt zelf-immunisatie en het vrijkomen van pathologische kernmateriaal 6. Hier presenteren we nieuwe probes die specifiek DNA breuken als merkers van actieve fagocyten. Deze handtekening pauzes zijn uitsluitend geproduceerd tijdens afbraak van verzwolgen kernen binnen functionele afvalbeheer cellen. Daarom is de sondes selectief alleen die fagocyten die overspoelen label en actief te verteren cellulaire lijken. Zij laten ook het observeren van de intensiteit en de voltooiing van DNA afbraak na het afblazen. De sondes zijn nuttig in evaluaties van intensiteit en efficirantie van fagocytaire klaring. De nieuwe probes steunen op een niet-eiwit-gebaseerde merker en kan daarom bijzonder voordelig zijn in studies van slag waarbij grote ischemische celmorfologie kunnen verstoren of afbreken van eiwitten merkers, vooral in de kern ischemische zone. Het principe van de techniek is weergegeven in figuur 1. Figuur toont haarspeldvormige oligonucleotideprobes geligeerd door het enzym topoisomerase vaccinia (VACC TOPO) om 5&#39;OH DNA-uiteinden gegenereerd door lysosomale DNase II in DNA digestie 7.

<table><tbody><tr><td>Xyleen</td><td>JT Baker</td><td>9490-22</td><td></td></tr><tr><td>Ethanol</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Proteinase K</td><td>Roche</td><td>3115879001</td><td></td></tr><tr><td>PBS Buffer</td><td>Invitrogen</td><td>AM9624</td><td></td></tr><tr><td>Vaccinia Topoisomerase I</td><td>Vivid Technologies</td><td></td><td>5 pmol/&mu;l stock</td></tr><tr><td>12-Base Overhang Suicide Oligonucleotide</td><td>IDT DNA</td><td></td><td>5&rsquo;-AAG GGA CCT GCB GCA GGT CCC TTG ATA CGA TTC TA -3&rsquo;; B &ndash; Biotin-dT; 100 pmol/&mu;l stock in ddH2O&nbsp;&nbsp;</td></tr><tr><td>Adapter Oligonucleotide</td><td>IDT DNA</td><td></td><td>5&rsquo;-TAG AAT CGT ATC-3&rsquo;; 100 pmol/&mu;l stock in ddH2O</td></tr><tr><td>1 M Tris-HCl, PH 7.4</td><td>Lonza</td><td>51237</td><td></td></tr><tr><td>TSA, Fluorescein System&nbsp;</td><td>PerkinElmer&nbsp;</td><td>NEL701A001KT</td><td></td></tr><tr><td>1 M NaCl</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>DMSO&nbsp;</td><td>Sigma</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Tween-20&nbsp;</td><td>Sigma</td><td>P9416-50ML</td><td></td></tr><tr><td>Vectashield met DAPI</td><td>Vector Laboratories</td><td>H-1200</td><td></td></tr><tr><td>Dekglasjes</td><td></td><td></td><td>22 x 22 mm of 22 x 40 mm glazen of kunststof dekglasjes. Kunststof dekglasjes zijn te verkiezen tijdens de reactie, omdat ze gemakkelijker van de sectie te verwijderen zijn.</td></tr><tr><td>Rattenhersensecties</td><td></td><td></td><td>Rattenhersenen genomen 48 uur na reproductie van ischemische beroerte zoals beschreven in Didenko et al11. 5-6 &mu;m dikke secties gesneden uit paraformaldehyde-gefixeerde, paraffine-ingebedde weefselblokken. Gebruik geladen en voorgereinigde slides.&nbsp;</td></tr><tr><td>Inverteer Microscoop</td><td>Olympus</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Digitale videocamera en software</td><td>Micromax</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Software</td><td>Metamorph</td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

het beoordelen fagocytische ontruiming van celdood in experimental stroke door ligeerbare fluorescerende probes

Assessing Phagocytic Clearance of Cell Death in Experimental Stroke by Ligatable Fluorescent Probes

We beschrijven een nieuwe histochemische aanpak voor visualisatie van fagocyterende klaring bij focale ischemie hersenen. De aanpak maakt de studie van de eliminatie van dode cellen in slag door afval-beheer fagocyten van een mobiele lijn. Hoewel een groot aantal cellen van verschillende oorsprong die in staat fagocytose aanwezig in ischemische hersenen, slechts een deel daarvan actief overspoelen en verteren cellen lijken. De selectieve visualisatie, kwantificering en analyse van dergelijke actieve fagocytaire afval-management zijn nuttig bij het beoordelen van de hersenen reactie op ischemie. Efficiënte celdood klaring is belangrijk voor de hersenen herstel van ischemische schade, want het opent de weg voor de latere regeneratieve processen. De niet lijken reinigen zou resulteren in een toxische reactie veroorzaakt door niet-afgebroken DNA en eiwitten. De beschreven procedure wordt fluorescente probes selectief geligeerd door een virale topoisomerase karakteristieke DNA-breuken die in alle fagocyten tijdens afblazenen digestie van cellen onherstelbaar beschadigd door ischemie. De methode is een nieuw instrument voor het onderzoeken van hersenen reactie op ischemie.

Het principe van deze techniek voor het labelen actieve afvalbeheer fagocyten wordt getoond in Figuur 1. Het schema toont dat de detectie verloopt in drie stappen. De eerste stap omvat activatie probe (Figuur 1A); in de tweede stap de actieve probe geligeerd aan specifieke DNA breuken in weefselcoupes (figuur 1C); de derde stap omvat fluorescerende signaalversterking (figuur 1D). In een meer gedetailleerde uitleg, de detectie gaat als volgt: <p clas...

We presenteren een nieuw fluorescentie techniek voor het selectief in situ labeling van actieve fagocyterende cellen, die duidelijk uit cel lijken in een beroerte. De aanpak is van belang voor de beoordeling hersenen reactie op ischemie omdat slechts een klein deel van fagocyten aanwezig in ischemische hersenen deelnemen klaring van celdood.

Het beoordelen Fagocytische Ontruiming van celdood in Experimental Stroke door ligeerbare fluorescerende probes

We describe a new histochemical approach for visualization of phagocytic clearance in focal brain ischemia. The approach permits the study of elimination ...

Het algemene doel van deze procedure is om selectief actieve fagocytische cellen te labelen, die celresten na een beroerte opruimen. Dit wordt bereikt door eerst de componenten voor de Tite-gebaseerde signaalversterkingsreactie voor te bereiden. De tweede stap is het voorbereiden van de coupes.Vervolgens wordt de labelingsreactie uitgevoerd met behulp van het enzym vaccinia-topoisomerase en labiele fluorescerende probes. De laatste stap is fluorescentiesignaalversterking op basis van IDE. Ten slotte wordt fluorescentiemicroscopie gebruikt om de fagocytische klaring van dode cellen in weefselsneden van focale hersenischemie te beoordelen.De klaring van dode cellen door fagocyten speelt een belangrijke rol bij het herstel van de hersenen na ischemie. De gepresenteerde methode bepaalt de efficiëntie van dit proces door uitsluitend die fagocyten te labelen die actief dode cellen verwijderen. Hoewel deze methode inzicht biedt in de ischemische hersenen, kan zij ook worden gebruikt om ischemische schade in andere organen en weefsels te bestuderen.Wanneer de zure FA-klaring van dode cellen belangrijk is. Hoewel de IDE-signaalversterking of TSA-stap in de laatste fase van de labeling plaat

assessing-phagocytic-clearance-cell-death-experimental-stroke

Research

JoVE Journal

Medicine

Geneeskunde

In this video, we demonstrate the efferocytosis assay to study the clearance of apoptotic cells using confocal microscopy. Efferocytosis is a multi-step process where apoptotic cells are engulfed by phagocytes and degraded within vesicles called efferosomes. This protocol provides a method to visualize internalized and non-internalized portions of individual apoptotic cells and quantify efferocytosis.

Fixed Cell Efferocytosis Assay: A Method to Study Efferocytic Uptake of Apoptotic Cells by Macrophages Using Fluorescence Microscopy

Phagocytic cells play a major role in the innate immune system by removing and eliminating invading microorganisms in their phagosomes. Phagosome ...

Studie van fagolysosoom Biogenesis Live macrofagen

Microglia vormen de bewoner immuuncellen van het centrale zenuwstelsel (CZS) met een hoge capaciteit te fagocyteren of overspoelen materiaal in hun extracellulaire omgeving. Hier wordt een breed toepasbare, betrouwbaar en zeer kwantitatieve assay voor het visualiseren en meten-gemedieerde microglia afblazen van synaptische componenten beschreven.

Een Engulfment Assay: Een protocol bij interacties tussen CNS Fagocyten en Neuronen Assess

Microgliale fagocytose is essentieel voor het behoud van weefselhomeostase en onvoldoende fagocytosefunctietesten is betrokken bij pathologie. Echter, het beoordelen van microglia functie in vivo is technisch uitdagend. We hebben een eenvoudige maar robuuste techniek ontwikkeld voor het nauwkeurig bewaken en kwantificeren van de fagocytische potentieel van microglia in een fysiologische omgeving.

Het beoordelen van het netvlies Microgliale fagocytosefunctietesten<em&gt; In Vivo</em&gt; Met behulp van een flowcytometrie-gebaseerde test

We presenteren de methoden voor de beoordeling van de fagocytische capaciteit van primaire lymfkliertest beenmerg-afgeleide macrofagen met behulp van fluorescently geëtiketteerde myeline puin en intracellulaire lipide druppel kleuring.

In Vitro Fagocytose van myeline puin door macrofagen beenmerg-afgeleide

Efferocytosis, de fagocytische verwijdering van apoptotic cellen, is nodig om de homeostase te handhaven en wordt vergemakkelijkt door de receptoren en signaalroutes waarmee voor de erkenning, de engulfment, en de internalisering van de apoptotic cellen. Hierin presenteren wij een fluorescentie microscopie protocol voor de kwantificering van efferocytosis en de activiteit van efferocytic signaalroutes.

Kwantificering van Efferocytosis door eencellige fluorescentie microscopie

Neurodegeneratieve ziekten worden geassocieerd met ontregelde microgliafuncties. Dit artikel schetst een in vitro test van fagocytose van neuroblastoomcellen door iPSC-macrofagen. Kwantitatieve microscopie-uitleingen worden beschreven voor zowel live-cell time-lapse imaging als fixed-cell high-content imaging.

In vitro kwantitatieve beeldvormingstest voor fagocytose van dode neuroblastoomcellen door iPSC-macrofagen

In vivo modellen van ratten zijn onmisbare hulpmiddelen om de pathologische mechanismen en therapeutische doelen voor ischemische beroerte te onderzoeken. Dit werk beschrijft het uitvoeren van immunofluorescentiekleuring in hersenplakjes met een infarct na occlusie van de middelste hersenslagader (MCAO) bij ratten.

Evaluatie van celdoodsignalering door immunofluorescentie in een rattenmodel van ischemische beroerte

Hier presenteren we een protocol om de immuuncelfunctie na een ischemische beroerte te beoordelen met behulp van flowcytometrische analyse in een mini-beroertemodel. Deze methode maakt gedetailleerd onderzoek van neuro-immuuninteracties mogelijk en kan worden aangepast voor het bestuderen van andere neurodegeneratieve ziekten, waardoor ons begrip van immuunresponsen bij beroertepathologie wordt vergroot.

Isolatie en flowcytometrische beoordeling van neuro-immuuninteracties in een mini-beroerte muizenmodel

Filamenteuze occlusie van het Midden-cerebrale slagader is een gemeenschappelijk model voor het bestuderen van ischemische beroerte in muizen.

Modellering Stroke in Muizen - midden cerebrale slagader occlusie met de gloeidraad Model

Leer hoe u actieve fagocyten selectief labelt die dode cellen opruimen bij hersenischemie. Deze fluorescentiemethode met vaccinia-topoisomerase en signaalversterking biedt inzicht in hersenherstel en kan ook op andere organen worden toegepast.

Het beoordelen Fagocytische Ontruiming van celdood in Experimental Stroke door ligeerbare fluorescerende probes

Meer video's verkennen