Name: De Ondergedoken afdrukken van cellen op een gemodificeerde oppervlak met behulp van een continue stroom Microspotter (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2014-04-22T14:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 29 s
Description: Leer een 3D-microfluidische printtechniek om fibroblasten op ondergedompelde oppervlakken te printen voor drugscreening. Deze methode verbetert celviabiliteit en precisie bij cytotoxiciteitsbeoordeling.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

playerTrialDesktop

De auteurs willen graag Chris Morrow erkennen voor technische ondersteuning. De financiering werd verstrekt door NIH SBIR (R43) verlenen 1R43GM101859-01 (MPI) GRANT10940803.

1. Celcultuur Voorbereiding <ol><li> Slaan NIH/3T3 cel voorraden in vloeibare stikstof tot aan gebruik. </li><li> Bereid complete media voor NIH/3T3-cellen met Dulbecco&#39;s Modified Eagle Medium (DMEM) aangevuld met 10% foetaal runderserum, 10 mM HEPES buffer, 50 eenheden / ml penicilline en 50 ug / ml streptomycine. </li><li> Ontdooi cellen gedurende 2-3 minuten in een schuddend waterbad bij 37 ° C. </li><li> Resuspendeer cellen in 5 ml compleet medium en centrifugeer bij 1500 xg gedurende 3 minuten. </li><li> De cel bovenstaande vloeistof zonder de celpellet. </li><li> Resuspendeer de cellen in 5 ml medium en cellen tellen met een hemocytometer. <ol><li> Verwijder 10 pi van de celsuspensie en plaats in een 0,5 ml microcentrifugebuis. </li><li> Voeg 10 ul van trypan blauw aan de celsuspensie en roer met de punt van de pipet. </li><li> Pipetteer 10 ul van de gekleurde cellen in een hemocytometer kamer. </li><li> Tellen cellen hemocytometer 10xvergroting. <ol><li> Tel de levende cellen (kleine, witte ballen) voor 4 van de 9 grote pleinen. Tellen alleen de levende cellen die niet donkerblauw van de trypaanblauw vlek lijken. </li><li> Bereken het gemiddelde aantal cellen per vierkante, waardoor het aantal cellen x 10 4 cellen / ml in de oorspronkelijke celsuspensie. </li><li> Zaad cellen bij een dichtheid van 1 x 10 5 cellen / ml met een totaal van 5 ml per T25 fles. </li></ol></li><li> Kweekcellen tussen 70% en 80% confluentie voor het begin experimenten. Vernieuwen media om de 2-3 dagen of naar vereist. </li></ol></li></ol> 2. Printing Voorbereiding van de oppervlakte <ol><li> Markeer een rechthoek met markering op de bodem van een tissue-cultuur behandeld polystyreen (TCTPS) 12 wells plaat van de grootte van de printkop (7 mm x 19 mm). </li><li> Pipetteer 50 ul foetaal runderserum in de rechthoekige stippellijn verspreiden over het gehele gebied van de punt. </li><li> Laat de petrischaalin een steriele bioveiligheid kap O / N om het serum plek volledig drogen. Deze platen worden bereid maximaal 2 dagen vóór gebruik. </li></ol> 3. Ondergedompeld Printing <ol><li> Spoel de printkop uit met gedestilleerd water. <ol><li> Vul een 60 mm petrischaal met gedestilleerd water en dock de printkop op het oppervlak. </li><li> Flow gedestilleerd water door elk van de leidingen gedurende 2 min bij 150 gl / min met behulp van een pneumatische pomp. </li><li> Gooi het water uit de petrischaal en vul het met schoon water. </li><li> Verplaats de printkop op en neer in het water 3 keer. </li></ol></li><li> Dock de printkop centrum over de serum-gecoate plek in de pre-bereid 12 well plaat. </li><li> Prime de printkop met voorverwarmd complete media, 300 ul per kanaal. </li><li> Print gesuspendeerde cellen bij een concentratie van 50.000 cellen / ml op het oppervlak en 60 pl / min, 100 ul per kanaal. </li><li> Plaats de printkop, links gedokt tegen deoppervlak en het verdeelstuk in een celkweek incubator ingesteld op 5% CO2 en 37 ° C gedurende 2 uur. </li><li> Na de 2 uur incubatie, verwijder de printkop en leg het deksel op de cultuur schotel. Het tijdstip waarop de printkop verwijderd wordt beschouwd als de 0 uur tijdstip. </li></ol> 4. Standaard Cell Culture <ol><li> Voeg 1 ml voorverwarmde media om een ​​van de serum-spotted TCTPS 12-well plaat bereid in stap 2. </li><li> Neem 1 ml van de resterende celsuspensie uit stap 2 en pipet in een enkel putje van een 12-wells plaat TCTPS. Dit zal een kweek die 50.000 cellen in de schaal te produceren. </li><li> Plaats de celkweek plaat in een incubator bij 37 ° C gedurende 2 uur. </li><li> Na de 2 uur incubatie beginnen timing; voor samenhang tussen gedrukte en zaaien monster, die wordt beschouwd als de 0 uur tijdstip. </li></ol> 5. Cultuur Visualisatie <ol><li> Na 0, 2, 24 en 48 uur nemen cellen van elk van de twee methoden described boven en afbeelding met behulp van een standaard omgekeerde microscoop. <ol><li> Vlekken op de cellen met propidiumjodide, een fluorescerende vlek die alleen wordt opgenomen in de kern van dode cellen. <ol><li> Voorzichtig Spoel de cellen 3 maal met 1 ml fosfaat gebufferde zoutoplossing met calcium en magnesium (PBS + +) om vuil te verwijderen. </li><li> Voeg 1 ml voorverwarmde PBS + + aan elke kweekvat. </li><li> Voeg 1 ul propidiumjodide stockoplossing (1 mg / ml) aan elk kweekvat. </li><li> Incubeer de cellen gekleurd met propidium jodide bij 37 ° C gedurende 10 minuten. </li></ol></li><li> Beeld de cellen met behulp van een omgekeerde microscoop bij 10x en 40x vergroting. </li></ol></li><li> Gooi de cellen in een geschikte biohazard container. </li></ol>

<ol><li>Fernandes, T. G., Diogo, M. M., Clark, D. S., Dordick, J. S., Cabral, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((High-throughput+cellular+microarray+platforms%3A+applications+in+drug+discovery%2C+toxicology+and+stem+cell+research%5BTitle%5D)+AND+%22Trends+in+Biotechnology%22%5BJournal%5D)">High-throughput cellular microarray platforms: applications in drug discovery, toxicology and stem cell research.</a> Trends in Biotechnology. 27, 342-349 (2009).</li>
<li>Michelini, E., Cevenini, L., Mezzanotte, L., Coppa, A., Roda, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cell-based+assays%3A+fuelling+drug+discovery%5BTitle%5D)+AND+%22Anal+Bioanal+Chem%22%5BJournal%5D)">Cell-based assays: fuelling drug discovery.</a> Anal Bioanal Chem. 398, 227-238 (2010).</li>
<li>Gao, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Recent+developments+in+microfluidic+devices+for+in+vitro+cell+culture+for+cell-biology+research%5BTitle%5D)+AND+%22TrAC+Trends+in+Analytical+Chemistry%22%5BJournal%5D)">Recent developments in microfluidic devices for in vitro cell culture for cell-biology research.</a> TrAC Trends in Analytical Chemistry. 35, 150-164 (2012).</li>
<li>Geysen, H. M., Schoenen, F., Wagner, D., Wagner, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Combinatorial+compound+libraries+for+drug+discovery%3A+an+ongoing+challenge%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Reviews+Drug+Discovery%22%5BJournal%5D)">Combinatorial compound libraries for drug discovery: an ongoing challenge.</a> Nature Reviews Drug Discovery. 2, 222-230 (2003).</li>
<li>Xu, Y., Shi, Y., Ding, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+chemical+approach+to+stem-cell+biology+and+regenerative+medicine%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">A chemical approach to stem-cell biology and regenerative medicine.</a> Nature. 453, 338-344 (2008).</li>
<li>Khademhosseini, A., Langer, R., Borenstein, J., Vacanti, J. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Microscale+technologies+for+tissue+engineering+and+biology%5BTitle%5D)+AND+%22Proceedings+of+the+National+Academy+of+Sciences+of+the+United+States+of+America%22%5BJournal%5D)">Microscale technologies for tissue engineering and biology.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 103, 2480-2487 (2006).</li>
<li>Bhadriraju, K., Chen, C. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Engineering+cellular+microenvironments+to+improve+cell-based+drug+testing%5BTitle%5D)+AND+%22Drug+Discovery+Today%22%5BJournal%5D)">Engineering cellular microenvironments to improve cell-based drug testing.</a> Drug Discovery Today. 7, 612-620 (2002).</li>
<li>Castel, D., Pitaval, A., Debily, M. -A., Gidrol, X. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cell+microarrays+in+drug+discovery%5BTitle%5D)+AND+%22Drug+Discov.+Today%22%5BJournal%5D)">Cell microarrays in drug discovery.</a> Drug Discov. Today. 11, 616-622 (2006).</li>
<li>Tsui, J. H., Lee, W., Pun, S. H., Kim, J., Kim, D. -H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Microfluidics-assisted+in+vitro+drug+screening+and+carrier+production%5BTitle%5D)+AND+%22Advanced+Drug+Delivery+Reviews%22%5BJournal%5D)">Microfluidics-assisted in vitro drug screening and carrier production.</a> Advanced Drug Delivery Reviews. , (2013).</li>
<li>Gottwald, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+chip-based+platform+for+the+in+vitro+generation+of+tissues+in+three-dimensional+organization%5BTitle%5D)+AND+%22Lab+on+a+Chip%22%5BJournal%5D)">A chip-based platform for the in vitro generation of tissues in three-dimensional organization.</a> Lab on a Chip. 7, 777-785 (2007).</li>
<li>Liu, R., Lee, A. P. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aLiu%2C+R+%22Integrated+Biochips+for+DNA+Analysis%22">Integrated Biochips for DNA Analysis</a>. , Springer. (2008).</li>
<li>Natarajan, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Continuous-flow+microfluidic+printing+of+proteins+for+array-based+applications+including+surface+plasmon+resonance+imaging%5BTitle%5D)+AND+%22Analytical+Biochemistry%22%5BJournal%5D)">Continuous-flow microfluidic printing of proteins for array-based applications including surface plasmon resonance imaging.</a> Analytical Biochemistry. 373, 141-146 (2008).</li>
<li>Natarajan, S., Hatch, A., Myszka, D. G., Gale, B. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Optimal+Conditions+for+Protein+Array+Deposition+Using+Continuous+Flow%5BTitle%5D)+AND+%22Anal.+Chem%22%5BJournal%5D)">Optimal Conditions for Protein Array Deposition Using Continuous Flow.</a> Anal. Chem. 80, 8561-8567 (2008).</li>
<li>Keighley, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+need+for+high+throughput+kinetics+early+in+the+drug+discovery+process%5BTitle%5D)+AND+%22%22%5BJournal%5D)">The need for high throughput kinetics early in the drug discovery process.</a> , Summer 2011. Drug Discovery World Online at:
 
 <a target="_blank" href="http://www.ddw-online.com/p-149288">http://www.ddw-online.com/p-149288</a> (2011).</li>
<li>Xu, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+three-dimensional+in+vitro+ovarian+cancer+coculture+model+using+a+high-throughput+cell+patterning+platform%5BTitle%5D)+AND+%22Biotechnol+J%22%5BJournal%5D)">A three-dimensional in vitro ovarian cancer coculture model using a high-throughput cell patterning platform.</a> Biotechnol J. 6, 204-212 (2011).</li>
<li>Tuckwell, D. S., Weston, S. A., Humphries, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Integrins%3A+a+review+of+their+structure+and+mechanisms+of+ligand+binding%5BTitle%5D)+AND+%22Symposia+of+the+Society+for+Experimental+Biology%22%5BJournal%5D)">Integrins: a review of their structure and mechanisms of ligand binding.</a> Symposia of the Society for Experimental Biology. 47, 107(1993).</li>
<li>Roberts, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Using+mixed+self-assembled+monolayers+presenting+RGD+and+%28EG%29+3OH+groups+to+characterize+long-term+attachment+of+bovine+capillary+endothelial+cells+to+surfaces%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+the+American+Chemical+Society%22%5BJournal%5D)">Using mixed self-assembled monolayers presenting RGD and (EG) 3OH groups to characterize long-term attachment of bovine capillary endothelial cells to surfaces.</a> Journal of the American Chemical Society. 120, 6548-6555 (1998).</li>
<li>Chandra, R. A., Douglas, E. S., Mathies, R. A., Bertozzi, C. R., Francis, M. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Programmable+cell+adhesion+encoded+by+DNA+hybridization%5BTitle%5D)+AND+%22Angewandte+Chemie%22%5BJournal%5D)">Programmable cell adhesion encoded by DNA hybridization.</a> Angewandte Chemie. 118, 910-915 (2006).</li>
<li>Hsiao, S. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Direct+cell+surface+modification+with+DNA+for+the+capture+of+primary+cells+and+the+investigation+of+myotube+formation+on+defined+patterns%5BTitle%5D)+AND+%22Langmuir%22%5BJournal%5D)">Direct cell surface modification with DNA for the capture of primary cells and the investigation of myotube formation on defined patterns.</a> Langmuir. 25, 6985-6991 (2009).</li>
<li>Black, C. B., Duensing, T. D., Trinkle, L. S., Dunlay, R. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cell-Based+Screening+Using+High-Throughput+Flow+Cytometry%5BTitle%5D)+AND+%22ASSAY+and+Drug+Development+Technologies%22%5BJournal%5D)">Cell-Based Screening Using High-Throughput Flow Cytometry.</a> ASSAY and Drug Development Technologies. 9, 13-20 (2011).</li>
<li>Derby, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Bioprinting%3A+inkjet+printing+proteins+and+hybrid+cell-containing+materials+and+structures%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Mater.+Chem%22%5BJournal%5D)">Bioprinting: inkjet printing proteins and hybrid cell-containing materials and structures.</a> J. Mater. Chem. 18, 5717-5721 (2008).</li>
<li>Onoe, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cellular+Microfabrication%3A+Observing+Intercellular+Interactions+Using+Lithographically-Defined+DNA+Capture+Sequences%5BTitle%5D)+AND+%22Langmuir%22%5BJournal%5D)">Cellular Microfabrication: Observing Intercellular Interactions Using Lithographically-Defined DNA Capture Sequences.</a> Langmuir. 28, 8120-8126 (2012).</li>
<li>Hsiao, S. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((DNA-Coated+AFM+Cantilevers+for+the+Investigation+of+Cell+Adhesion+and+the+Patterning+of+Live+Cells%5BTitle%5D)+AND+%22Angewandte+Chemie+International+Edition%22%5BJournal%5D)">DNA-Coated AFM Cantilevers for the Investigation of Cell Adhesion and the Patterning of Live Cells.</a> Angewandte Chemie International Edition. 47, 8473-8477 (2008).</li>
</ol>

De auteurs zijn werknemer en aandeelhouders van Wasatch Microfluidics dat reagentia en / of instrumenten die in dit manuscript produceert.

De 3D microfluïdische printtechnologie hier beschreven is uniek in staat microfluidically drukken arrays van cellen in een vloeistof goed gevuld, dat wil zeggen een verzonken oppervlak. Door drukken op oppervlakken onder water kunnen microarrays cellen worden geproduceerd die de fysiologisch relevante cellulaire fenotype van cellen en het vermogen om cellen multiplexen in de bodem van een put Figuur 4 behouden. De resultaten van deze studie tonen aan dat microfluidically druktechnieken cellen r...

Recente ontwikkelingen in de farmaceutische industrie hebben geleid tot een toegenomen belangstelling voor het gebruik van cellulaire microarrays in de drug discovery proces voor drug discovery en cytotoxicological analyse 1,2,3. De ontwikkeling van in vitro high-throughput testen en screening methoden met behulp van microarrays cel zou de snelle en kosteneffectieve ontwikkeling van kandidaat-geneesmiddelen, alsook van tevoren het fundamenteel begrip van de cel 1,4 vergemakkelijken. De traditionele benadering van screening met cellen maakt gebruik van conventionele goed plaat platforms; maar deze benadering is beperkt vanwege de hoge kosten, beperkte verwerkingscapaciteit en beperkt vermogen om kwantitatieve informatie over celfunctie 1,5. Vanwege deze beperkingen, is het onderzoek in cellulaire microarray technologie ontluikende voor moleculair biologische karakterisering, tissue engineering, en drug screening 1,6. De voordelen van cellulaire microarrays omvatten kleinere steekproef gebruik, minimale effecten vancellulaire fenotype heterogeniteit maskeren informatie, en vooral de mogelijkheid om te testen automatiseren voor meer high-throughput toepassingen 1,7,8. De farmaceutische industrie maakt gebruik momenteel high-throughput-cel-gebaseerde Screeningtesten met 2D cel monolaagculturen voor drug discovery in microtiterputje platen 9. Multiplexing cellen in putjes van microtiterplaten biedt het potentieel voor hogere doorvoer met unieke experimenten opties. Verder zijn de huidige technologieën voor cellulaire microarrays laat de cellen drogen die drastisch kunnen wijzigen fenotype van de cellen van in vivo 10,11. Om deze problemen te overwinnen, werd de MFCA ontworpen en wordt getoond in Figuur 1. Het ontwerp van de MFCA 3D fluïdica kan de printkop punt in figuur 1 worden neergelaten in een bad en samengeperst tegen een oppervlak om een afdichting te vormen. De zachte siliconen tip van de printkop zich gedraagt ​​als eenpakking en vormt een omkeerbare afdichting. De MFCA technologie is uniek geschikt om met ondergedompelde oppervlakken, die nodig is voor zowel celculturen en weefselplak systemen en moeilijk of onmogelijk met de meeste andere benaderingen. Pinnen of inkt-jet printen zal niet werken, en 2D microfluïdische apparaten zijn niet geschikt voor afzetting of interfacing met grote arrays van discrete plekken. Verder, door miniaturisering en lokaliseren van het experiment - de cellulaire microarray - de MFCA overwint de belangrijkste problemen geassocieerd met high-throughput cel-gebaseerde screeningtesten. De CFM maakt gebruik van 3D-kanaal netwerken te fietsen klein volume vloeistof monsters na microscopisch spot locaties op een oppervlak 12,13. Door druk met stroom worden biomoleculen, cellen en andere reagentia gehandhaafd in een vloeibare omgeving gedurende het printproces, waardoor de drukken van gevoelige biomoleculen en cellen zonder blootstelling aan lucht, waarbij de huidige cel druktechnieken belemmert. Het is ook mogelijk om afdrukken uit ruw materiaal zoals hybridoma supernatanten of mits er een opname mechanisme op de array oppervlak. Het doel van dit manuscript is in detail de ondergedompelde drukken van twee celtypen op een oppervlak.

<table><tbody><tr><td>Continuous flow microspotter</td><td>Wasatch Microfluidics</td><td></td><td></td></tr><tr><td>NIH/3T3 cellen</td><td>ATCC</td><td>CRL-1658</td><td></td></tr><tr><td>Dubbleco's Gemodificeerd Eagle Medium</td><td>Invitrogen</td><td>11965-092</td><td>Basismedium voor cellen</td></tr><tr><td>HEPES buffer</td><td>Invitrogen</td><td>15630-080</td><td>Additief voor celmedium (controle pH)</td></tr><tr><td>Natriumpyrovaat</td><td>Invitrogen</td><td>11360-070</td><td>Additief voor celmedium</td></tr><tr><td>Penicilline-streptomycine&nbsp;</td><td>Invitrogen</td><td></td><td>Additief voor celmedium</td></tr><tr><td>Trypanblauw</td><td>Invitrogen</td><td>15250-061</td><td>Kleuren van cellen voor telling</td></tr><tr><td>Hemocytometer</td><td>Fisher</td><td>267110</td><td>Cellenkamer voor het tellen van cellen</td></tr><tr><td>Nikon Eclipse TS100</td><td>Nikon</td><td></td><td>Gebruikt om cellen te controleren</td></tr><tr><td>Nikon Eclipse TE2000-U</td><td>Nikon</td><td></td><td>Gebruikt voor het verzamelen van afbeeldingen</td></tr><tr><td>Fosfaat gebufferd zout (met calcium en magnesium)</td><td>Invitrogen</td><td>14040-133</td><td>Cellen spoelen voor het passeren en voor het kleuren met PI</td></tr><tr><td>TrypLE Express&nbsp;</td><td>Invitrogen</td><td>A12177-01</td><td>Gebruikt om cellen van het oppervlak te verwijderen</td></tr></tbody></table>

de ondergedoken afdrukken van cellen op een gemodificeerde oppervlak met behulp van een continue stroom microspotter

The Submerged Printing of Cells onto a Modified Surface Using a Continuous Flow Microspotter

Het afdrukken van cellen voor microarray-toepassingen brengt aanzienlijke uitdagingen met zich mee, waaronder het probleem van het behouden van een fysiologisch relevante celfenotype na het afdrukken, slechte organisatie en verspreiding van gewenste cellen, en de onmogelijkheid om medicijnen en/of voedingsstoffen af te leveren op doelgerichte gebieden in de array. Onze 3D-microfluïdische afdruktechnologie is uniek in staat om arrays van cellen op een geautomatiseerde en multiplexe manier op ondergedompelde oppervlakken af te drukken en te verzegelen. Het ontwerp van de microfluïdische celarray (MFCA) 3D-fluidics maakt het mogelijk om de printkoppunt in een met vloeistof gevulde kuip of schaal te laten zakken en tegen een oppervlak te drukken om een afdichting te vormen. De zachte siliconen punt van de printkop gedraagt zich als een pakking en kan een omkeerbare afdichting vormen door druk uit te oefenen of terug te trekken. Andere celprinttechnologieën, zoals pen- of inkjetprinters, zijn niet in staat om in ondergedompelde toepassingen af te drukken. Ondergedompeld oppervlakteafdrukken is essentieel om fenotypen van cellen te behouden en deze cellen op een oppervlak te monitoren zonder de materiaaloppervlaktekenmerken te verstoren. Door op ondergedompelde oppervlakken af te drukken, worden celmicroarrays geproduceerd die geneesmiddelenscreening en cytotoxiciteitsbeoordeling mogelijk maken op een veelvoud van gebieden, waaronder kanker, diabetes, ontsteking, infecties en hart- en vaatziekten.

De fibroblastcellijn NIH/3T3-cellen werden afgedrukt of gezaaid op een verzonken oppervlak. De cellen werden gekweekt tot een dichtheid van 5 x 10 4 cellen per ml. Cellen werden gezaaid met behulp van traditionele celcultuur technieken. Cellen werden afgedrukt met een groot-formaat, twaalf-flow cell printkop waar de kanalen zijn groter (~ 500 micrometer) dan de CFM gebruikt voor eiwitten en andere biomoleculen. De cellen werden afgedrukt of geënt op een oppervlak serum gecoat. Het drukproces wordt getoond in ...

Deze 3D microfluïdische printtechnologie drukt arrays van cellen op ondergedompelde oppervlakken af. We beschrijven hoe arrays van cellen microfluïdisch in 3D-stroomcellen op ondergedompelde oppervlakken worden afgeleverd. Door op ondergedompelde oppervlakken te printen, werden celmicroarrays geproduceerd die geneesmiddelscreening en cytotoxiciteitsbeoordeling mogelijk maken op een veelvoud van gebieden.

De Ondergedoken afdrukken van cellen op een gemodificeerde oppervlak met behulp van een continue stroom Microspotter

The printing of cells for microarray applications possesses significant challenges including the problem of maintaining physiologically relevant cell ...

Het algemene doel van deze procedure is om drie T three fibroblasten op een serumgecoat oppervlak te printen. Dit wordt bereikt door eerst serum voor te adsorberen op een weefselkweekoppervlak. De tweede stap is het printen van een suspensie van fibroblasten op het oppervlak met behulp van een continuous flow micro spotter, gevolgd door incubatie van de cellen bij 37 °C gedurende twee uur.Vervolgens worden zowel de geprinte cellen als cellen die via standaardcelkweek zijn uitgezaaid, gekleurd met propidiumjodide en gevisualiseerd onder een omgekeerde microscoop voor vergelijking. Uiteindelijk wordt fluorescentiemicroscopie gebruikt om de celviabiliteit, dichtheid en morfologie op relevante tijdstippen te beoordelen. Het belangrijkste voordeel van deze techniek ten opzichte van bestaande methoden, zoals pin-printing, is dat de printhoofd een afdichting over het oppervlak vormt, waardoor cellen kunnen worden geprint terwijl ze ondergedompeld zijn in celmedium.Hoewel het ondergedompelde printen van cellen nuttig is voor het screenen van nieuwe kandidaat-geneesmiddelen op veiligheid en werkzaamheid, is ondergedompeld printen in het algemeen ook nuttig voor andere toepassingen. We kunne

the-submerged-printing-cells-onto-modified-surface-using-continuous

Research

JoVE Journal

Bioengineering

Bio-engineering

Microcontact afdrukken wordt op grote schaal gebruikt voor het patroon eiwitten en andere moleculen op materiaal oppervlakken. Tonen we de basisstappen van dit proces, stempelen patronen van fibronectine op glas.

Microcontact afdrukken van eiwitten voor Celbiologie

Zelf-geassembleerde monolagen (SAM) gevormd uit lange keten alkaan thiolen op goud bieden goed gedefinieerde substraten voor de vorming van eiwit patronen en cel opsluiting. Microcontact printen van hexadecanethiol met behulp van een polydimethylsiloxaan (PDMS), stempel, gevolgd door opvulling met een glycol-beëindigde alkaan thiol monomeer produceert een patroon waarbij eiwitten en cellen adsorberen alleen aan de gestempelde hexadecanethiol regio.

Het creëren van twee-dimensionale Patterned Substraten voor eiwit en Cell opsluiting

Een beschrijving van de methoden die worden gebruikt om een ​​HP DeskJet 500-printer te zetten in een bioprinter. De printer kan verwerken levende cellen die transient poriën veroorzaakt in het membraan. Deze poriën kan worden gebruikt om kleine moleculen zoals fluorescerende G-actine nemen in de gedrukte cellen.

Het creëren van voorbijgaande celmembraan poriën met een standaard inkjetprinter

Werkwijze voor de montage van lijm en oplosbaar gradiënten in een kamer microscopie voor levende celmigratie studies beschreven. De kunstmatige omgeving combineert aangroeiwerende oppervlakken en lijm tracks met oplossing hellingen en daarom maakt het mogelijk om te bepalen van het relatieve belang van begeleiding cues.

Het maken van lijm en Oplosbare verlopen for Imaging Cell Migration met fluorescentie microscopie

In dit artikel presenteren we een microfluïdische chip voor single cell analyse. Het maakt de kwantificering van intracellulaire eiwitten, enzymen, cofactoren, en tweede boodschappers via fluorescentie assays of immunoassays.

Een Microfluïdische Chip voor de Versatile chemische analyse van enkele cellen

Celcultuur substraten die gefunctionaliseerd zijn met microscopische patronen van biologische liganden hebben een immense bruikbaarheid op het gebied van weefselengineering. Hier demonstreren we de veelzijdige en geautomatiseerde productie van celcultuur substraten met meerdere, microgepatteerde poly(ethyleenglycol) borstels die orthogonale chemieën presenteren die ruimtelijk nauwkeurige en locatiespecifieke immobilisatie van biologische liganden mogelijk maken.

Fabriceren Complex Cultuur Substrates behulp Robotic Microcontact Printing (R-μCP) en Sequential Nucleofiele Substitutie

We presenteren een protocol om subtractieve patterning van levende celmonolagen op een oppervlak uit te voeren. Dit wordt bereikt door lokale en selectieve lysis van adherende cellen met behulp van een microfluïdische sonde (MFP). Het cellysaat dat uit lokale gebieden wordt verkregen, kan worden gebruikt voor downstream-analyse, waardoor moleculaire profileringsstudies mogelijk worden.

Rapid Subtractieve patroonvorming van Live-Cell Lagen met een microfluïdische Probe

Dit protocol beschrijft een bioprinting-methodologie met behulp van een geautomatiseerd robotsysteem voor het afzetten dat geëtste topografische geleidingssignalen combineert met de nauwkeurige afzetting van een hydrogel bio-inkt dat cellen bevat. De gedrukte cellen worden direct afgeleverd bij de geëtste kenmerken en kunnen deze waarnemen en er zich op oriënteren.

Geautomatiseerde Robotic Dispensing Techniek voor Surface Oriëntatie- en Bioprinting van Cellen

Dit rapport beschrijft een eenvoudige, gemakkelijk uit te voeren techniek, met behulp van lagedrukvacuüm, om microfluïdische kanalen te vullen met cellen en substraten voor biologisch onderzoek.

Een veelzijdige methode van patroonvorming Eiwitten en cellen

Op een ondergrond, die kan worden gebruikt voor het uitvoeren van cel-vrije gen expressie experimenten op biochips beschrijven we een eenvoudige lithografische procedure voor de immobilisatie van gen-lengte DNA moleculen.

Functionele oppervlak-immobilisatie van genen met behulp van meerstaps Strand Displacement lithografie

Deze methodologie heeft tot doel de mechanismen te illustreren waarmee extracellulaire matrixsignalen zoals substraatstijfheid, eiwitsamenstelling en celmorfologie het fenotype van Schwann-cel (SC) reguleren.

Voorbereiding van Tunable Extracellular Matrix Microenvironments om Schwann Cell Phenotype Specification te evalueren

Leer een 3D-microfluidische printtechniek om fibroblasten op ondergedompelde oppervlakken te printen voor drugscreening. Deze methode verbetert celviabiliteit en precisie bij cytotoxiciteitsbeoordeling.

De Ondergedoken afdrukken van cellen op een gemodificeerde oppervlak met behulp van een continue stroom Microspotter

Meer video's verkennen