Name: Molecular Profiling van de invasieve tumor micro in een 3-dimensionaal model van colorectale kanker cellen en Ex vivo Fibroblasts (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2014-04-29T14:00:00.000+00:00
Duration: 10 min 33 s
Description: Ontdek laser microdissectie voor moleculaire profilering van colorectale kankercellen en stromale cellen in een 3D organotypisch model. Deze methode onderscheidt invaderende van niet-invaderende tumorcellen.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

playerTrialDesktop

MB wordt ondersteund door subsidies van een MRC gemeenschap. KP en AHM worden ondersteund door subsidies van Wessex Medical Research en Cancer Research UK / RCS (Engeland) (C28503/A10013). Wij zijn dankbaar voor de steun van de Universiteit van Southampton Histochemistry Research Unit.

1. Vaststelling van primaire fibroblastculturen van Colonic Explantaten <ol><li> Monsters van normale humane colon mucosa weefsel direct van de chirurgische operatiekamer en schorsen 7-10 ml PBS aangevuld met 100 eenheden / ml penicilline, 100 pg / ml streptomycine, en 0,25 ug / ml Fungizone. </li><li> In het laboratorium, plaatst het monster in het midden van een 10-cm weefselkweek schotel en was 3 keer met PBS / Pen-Strep / Fungizone. Niet aspireren na de laatste wasbeurt. </li><li> Met steriele pincet en scalpel, snijd het weefsel in kleine stukjes (ongeveer 2 mm) en plaats elk stuk in het midden van een kruis getekend met de scalpel in een 12-wells plaat. Rock the scalpel voorzichtig over het weefsel om deze te hechten. </li><li> Cultuur de monsters in 750 ui primaire fibroblast groeimedium (DMEM aangevuld met 20% foetaal kalfserum (FCS), 100 U / ml penicilline, 100 pg / ml streptomycine en 292 ug / ml L-glutamine), die moet submerge het weefsel, zonder waardoor het zweven. Vermijd het verstoren van de plaat over de komende 5 dagen behalve opnieuw voeden om de 2 dagen. </li><li> Gedurende de volgende 5 dagen fibroblasten langzaam beginnen te groeien van de rand van het weefsel. Op ongeveer 7 dagen, zal dit meer zichtbaar. Na ongeveer 3-4 weken, en als er voldoende fibroblasten groeien, voeg 750 ul trypsine aan elk putje. Na cellen hebben losgemaakt, zwembad en overdracht (die 5-10 minuten kan duren) een T-25 weefselkweek kolf. </li></ol> 2. Organotypische Voorbereiding Bereiding van de fibroblast geïmpregneerde organotypische gel: <ol><li> Bereid een fibroblast celsuspensie bevattende 5 x 10 5 cellen per organotypische in DMEM gesupplementeerd met 10% FCS en 292 pg / ml L-Glutamine. </li><li> Vormen de organotypic gels op het ijs, in de volgende verhoudingen: <ul><li> 7 volumes Rat-Tail Collageen: Matrigel mix (01:01) </li><li> 1 volume gefilterde 10x DMEM </li><li> 1 volume FCS </li><li> 1 deel fibroblast celsuspensie bevattende 5 x 10 5 fibroblasten 9 gels (1 ml per gel) bereiden 10 ml en meng zachtjes om luchtbellen te vermijden. </li></ul></li><li> Voeg 1 ml aan elk putje van een 24-wells plaat en incubeer 1 uur bij 37 ° C in een vochtige atmosfeer om gels te stellen. Na 1 uur wordt 1 ml DMEM (10% FCS) / Glut bovenop de gel en overnacht terug naar de incubator. </li><li> De volgende dag, zuigen medium vanaf de bovenkant van de gels en plaat 1 ml medium dat 5 x 10 5 CRC epitheelcellen. </li></ol> Voorbereiding van de gel coating nylon lakens: <ol start="5"><li> Bereid steriele, geautoclaveerd nylon lakens meet 1,5 cm x 1,5 cm, op voorhand. </li><li> Met steriele tang, plaats het vereiste aantal nylon bladen in een 10 cm kweekschaal (meestal 4 nylon platen kunnen worden ondergebracht per schaal). </li><li> Make up gel op het ijs in de volgende volgorde (250 ul totaalvolume gewenst per nylon vel): <ul><li> 7 volumes Rat-Tail Collageen </li><li> 1 volume gefilterde 10x DMEM </li><li> 1 volume FCS </li><li> 1 volume DMEM 10% FCS / Glut </li></ul></li><li> Als de oplossing geel, neutraliseren door 0,1 M NaOH in 50 pi fracties tot de kleur omslaat roze. </li><li> Voeg 250 ul van deze oplossing aan elke nylon plaat en incubeer bij 37 ° C in een bevochtigde atmosfeer van 5% CO2 gedurende 30 minuten om gel te stellen. </li><li> Make up 1% glutaaraldehyde-oplossing in PBS. Voeg 10 ml elk 10 cm kweekschaal nadat de gel is vastgesteld en incuberen bij 4 ° C gedurende 1 uur. </li><li> Wash nylon vellen 3x in PBS en 1 x in DMEM (10% FCS) / Glu en incubeer overnacht in DMEM / Glu bij 4 ° C. </li></ol> Raising organotypic gels op stalen roosters voor invasie: <ol start="12"><li> Pre-bereiden steigers netten door het vouwen van roestvrijstalen platen in een statief formatie. Autoclaaf voor gebruik.</li><li> Een tang gesteriliseerd in ethanol een stalen rooster plaatst in elk putje van een zes puts plaat. </li><li> Plaats een gel-gecoat nylon blad met de collageen kant naar boven, op elk rooster. </li><li> Breng zorgvuldig de organotypic gels van de 24-wells plaat op de gestelde nylon plaat met behulp van een spatel gesteriliseerd in ethanol. </li><li> Vul het goed met DMEM 10% FCS / Glut gesupplementeerd met 10% FCS tot nylon plaat in contact met het medium maar niet ondergedompeld. Zorg ervoor dat het medium niet de organotypic gel raken. </li><li> Incubeer gedurende 14 dagen bij 37 ° C in een bevochtigde atmosfeer van 5% CO2, de vervanging van media om de 2 dagen. </li></ol> 3. Organotypische Fixation <ol><li> Verwijder gehele organotypic inclusief nylon laken van goed en leg op vershoudfolie. </li><li> Halveer organotypic en nylon blad met een schone wegwerpbistouri en bevestig beide helften in formaldehyde gedurende 24 uur bij kamertemperatuur. </li><li> Vervang formaldehyde met 70% ethanol na 24 uur en laat het een nacht voorafgaand aan de inbedding in paraffine, snijden, en vlekken. </li></ol> 4. Laser Microdissection van de Invasieve Marge <ol><li> Sectie om 10 urn-dikte op membraan gemonteerde dia&#39;s. </li><li> Deparaffinize secties door toepassing Xyleen gedurende 1 min, verwijder xyleen en oplossen in 75% ethanol gedurende nog 1 minuut. </li><li> Verwijder de ethanol en vlek met 0,125% cresylviolet oplossing gedurende 1 minuut. Cresylviolet hoogtepunten epitheelcellen en maakt een gemakkelijke discriminatie van het stroma. </li><li> Verwijder cresylviolet en toepassing van 100% ethanol nog 1 min voor spoelen met 100% ethanol. Laat dia&#39;s aan de lucht drogen gedurende 30 minuten. </li><li> Voeren laser microdissection behulp gekozen platform (bv. de Leica AS systeem). </li><li> Plaats het glaasje met de gekleurde coupe te gemicrodissecteerde gezicht naar beneden op de microscoop podium. </li><li> Monteer een 0,5 ml microcentrifugebuis in de collectie cassette en voeg 50 ulcellysis buffer (bijvoorbeeld DNA, RNA of eiwit lysisbuffer) aan de kap waarin gemicrodisseceerde weefsel verzamelen. </li><li> Onder direct zicht, gebruik de joystick om weefsel van belang te identificeren, en het gebruik van de software-interface, annoteren de gebrandschilderde organisch gedeelte, met de nadruk cellen worden gemicrodissecteerde op de tumor invasie front. </li><li> Instrueer de laser te vuren, die zowel dient knip de gemarkeerde sectie en stuwen gemicrodissecteerde weefsel in de dop van de microcentrifugebuis. </li><li> Nadat voldoende materiaal verzameld, verwijdert het verzamelen cassette, sluit de microcentrifugebuis en draai langzaam naar lysisbuffer vestigen op de bodem van de buis. </li><li> Leg monsters op ijs tot microdissection is voltooid. Proces monsters op een gepaste manier aan de analyt van belang te halen. </li></ol>

<ol><li>Nystrom, M. L., Thomas, G. J., Stone, M., Mackenzie, I. C., Hart, I. R., Marshall, J. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Development+of+a+quantitative+method+to+analyse+tumour+cell+invasion+in+organotypic+culture%5BTitle%5D)+AND+%22J+Pathol%22%5BJournal%5D)">Development of a quantitative method to analyse tumour cell invasion in organotypic culture.</a> J Pathol. 205 (4), 468-475 (2005).</li>
<li>Zhang, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((miR-153+supports+colorectal+cancer+progression+via+pleiotropic+effects+that+enhance+invasion+and+chemotherapeutic+resistance%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Res%22%5BJournal%5D)">miR-153 supports colorectal cancer progression via pleiotropic effects that enhance invasion and chemotherapeutic resistance.</a> Cancer Res. , (2013).</li>
<li>Bullock, M. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pleiotropic+actions+of+miR-21+highlight+the+critical+role+of+deregulated+stromal+microRNAs+during+colorectal+cancer+progression%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Death+Dis%22%5BJournal%5D)">Pleiotropic actions of miR-21 highlight the critical role of deregulated stromal microRNAs during colorectal cancer progression.</a> Cell Death Dis. 20 (4), (2013).</li>
<li>Jenei, V., Nystrom, M. L., Thomas, G. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Measuring+invasion+in+an+organotypic+model%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+Mol+Biol%22%5BJournal%5D)">Measuring invasion in an organotypic model.</a> Methods Mol Biol. 769, 223-232 (2011).</li>
<li>De Wever, O., Demetter, P., Mareel, M., Bracke, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Stromal+myofibroblasts+are+drivers+of+invasive+cancer+growth%5BTitle%5D)+AND+%22Int+J+Cancer%22%5BJournal%5D)">Stromal myofibroblasts are drivers of invasive cancer growth.</a> Int J Cancer. 123 (10), 2229-2238 (2008).</li>
<li>Fries, K. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Evidence+of+fibroblast+heterogeneity+and+the+role+of+fibroblast+subpopulations+in+fibrosis%5BTitle%5D)+AND+%22Clin+Immunol+Immunopathol%22%5BJournal%5D)">Evidence of fibroblast heterogeneity and the role of fibroblast subpopulations in fibrosis.</a> Clin Immunol Immunopathol. 72 (3), 283-292 (1994).</li>
<li>Moutasim, K. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Betel-derived+alkaloid+up-regulates+keratinocyte+alphavbeta6+integrin+expression+and+promotes+oral+submucous+fibrosis%5BTitle%5D)+AND+%22J+Pathol%22%5BJournal%5D)">Betel-derived alkaloid up-regulates keratinocyte alphavbeta6 integrin expression and promotes oral submucous fibrosis.</a> J Pathol. 223 (3), 366-377 (2011).</li>
<li>Winter, J., Jung, S., Keller, S., Gregory, R. I., Diederichs, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Many+roads+to+maturity%3A+microRNA+biogenesis+pathways+and+their+regulation%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">Many roads to maturity: microRNA biogenesis pathways and their regulation.</a> Nat Cell Biol. 11 (3), 228-234 (2009).</li>
<li>Li, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comparison+of+miRNA+expression+patterns+using+total+RNA+extracted+from+matched+samples+of+formalin-fixed+paraffin-embedded+%28FFPE%29+cells+and+snap+frozen+cells%5BTitle%5D)+AND+%22BMC+Biotechnol%22%5BJournal%5D)">Comparison of miRNA expression patterns using total RNA extracted from matched samples of formalin-fixed paraffin-embedded (FFPE) cells and snap frozen cells.</a> BMC Biotechnol. 7 (36), (2007).</li>
<li>Szafranska, A. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Accurate+molecular+characterization+of+formalin-fixed%2C+paraffin-embedded+tissues+by+microRNA+expression+profiling%5BTitle%5D)+AND+%22J+Mol+Diagn%22%5BJournal%5D)">Accurate molecular characterization of formalin-fixed, paraffin-embedded tissues by microRNA expression profiling.</a> J Mol Diagn. 10 (5), 415-423 (2008).</li>
</ol>

Beschrijven de auteurs geen potentiële belangenconflicten.

Hier beschrijven we een methode om specifiek te isoleren en karakteriseren van tumorcellen die het vermogen om kanker geassocieerde stroma binnendringen in de vroegste stadia van metastatische progressie in een 3-dimensionale co-cultuur construct van epitheliale en stromale cellen verkregen. Co-cultuur modellen uit CRC epitheelcellen afgewisseld met een synthetisch stroma die ex vivo humane colon fibroblasten werden gebruikt om CRC invasie studeren in 3 dimensies. Deze fysiologisch ...

Organotypische co-culturen zijn tissue-engineered modellen die helpen bij de wederopbouw van de in vivo tumormicromilieu in 3-dimensies door naast elkaar maligne epitheliale en stromale cellen in een collageen gel met essentiële extracellulaire matrix componenten 1-3. Voornamelijk opgevat als meetmethode tumorinvasie, organotypics minder afhankelijk van in vivo diermodellen, en voorkomen dat de tekortkomingen van andere in vitro technieken zoals Transwell assays, waarbij binnendringende cellen kunstmatig gedwongen tot een mono-gedispergeerde toestand 2-4. De opname van stromale cellen in deze modellen, zoals fibroblasten, weerspiegelt de essentiële rol van de tumor micro reguleren kwaadaardige invasie en metastase 3-4, maar de fenotypische heterogeniteit van het stroma zodanig dat om de fysiologische relevantie van organotypische maximaliseren modellen, orgaan-specifieke, anatomisch correcte ex vivofibroblasten moeten worden opgenomen waar mogelijk 3,6. Organotypics zijn een veelzijdig platform om interactie tussen tumorcellen en stromale cellen te bestuderen en worden steeds meer gebruikt in nieuwe manieren om de impact op de tumor invasie van chemische remmers en gerichte gen 7,8 veranderingen te onderzoeken. Het bestuderen van de invasieve tumor marge is een bijzonder spannend vooruitzicht. In organotypische modellen vastgesteld colorectale kanker (CRC) cellijnen meestal een goed gestratificeerde epitheel laag en in dwarsdoorsnede, cellen die het vermogen om de extracellulaire matrix (ECM) binnendringen verworven zijn gemakkelijk te onderscheiden. In het licht van de micro-topografische heterogeniteit van tumoren en tumor geassocieerde stromale cellen in vivo, extraheren deze cellen via Laser microdissectie en het bestuderen ze afzonderlijk kunnen belangrijke biologische inzichten over het ontstaan ​​van colorectale kanker metastase onthullen hoe efficiënter kan gericht. Ikn de volgende methode, alle patiënten die weefselmonsters gaven schriftelijk toestemming, en de studie geschonken werd goedgekeurd door de instellingen regionale-ethische toetsingscommissie.

<table><tbody><tr><td>Colorectaal kanker cellijnen - voorbeeld getoond SW480</td><td>ATCC</td><td>ATCC CCL-228</td><td></td></tr><tr><td>Collageen</td><td>BD Biosciences</td><td>354265</td><td></td></tr><tr><td>Matrigel</td><td>BD Biosciences</td><td>354234</td><td></td></tr><tr><td>Nylon membraan</td><td>Merck Millipore</td><td>VVLP01300</td><td></td></tr><tr><td>Metaal rooster</td><td>The Mesh Company</td><td>WSS20-A4</td><td>themeshcompany.com</td></tr><tr><td>Laser microdissectie platform</td><td>Leica Microsystems</td><td>Leica AS LMD</td><td></td></tr><tr><td>Membraan gemonteerde slides</td><td>Molecular devices</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Cresyl Violet</td><td>Merck Millipore</td><td>1052350025</td><td></td></tr></tbody></table>

molecular profiling van de invasieve tumor micro in een 3-dimensionaal model van colorectale kanker cellen en<em&gt; ex vivo</em&gt; fibroblasts

Molecular Profiling of the Invasive Tumor Microenvironment in a 3-Dimensional Model of Colorectal Cancer Cells and Ex vivo Fibroblasts

Binnenvallende colorectale kanker (CRC) cellen hebben het vermogen om los te breken uit hun zus cellen, infiltreren het stroma, en de vorm van de extracellulaire matrix (ECM) verworven. Karakteriseren van de biologie van deze fenotypisch verschillende groep cellen kan ons begrip van de vroege gebeurtenissen tijdens de metastatische cascade te verbeteren. Tumor invasie is een dynamisch proces vergemakkelijkt door bidirectionele interactie tussen kwaadaardige epitheel en kanker-geassocieerde stroma. Om cel-specifieke antwoorden te onderzoeken op de tumor stroma-koppeling die we hebben organotypische co-cultuur en laser micro-dissectie technieken gecombineerd. Organotypische modellen waarin belangrijke stromale bestanddelen zoals fibroblasten 3-dimentioanally samen gekweekt met kanker epitheelcellen, zeer manipuleerbaar experimentele instrumenten die invasie en kanker-stroma interacties kunnen worden onderzocht in het bijna physiological voorwaarden. Laser microdissectie (LMD) is een techniek die de chirurgische dissectie en extractie van de verschillende lagen in tumorweefsel, met micron-niveau nauwkeurig meebrengt. Door het combineren van deze technieken met genomic, transcriptomische en epigenetische profilering willen we een beter begrip van de moleculaire kenmerken van binnenvallende tumorcellen en stromale omliggende weefsel te ontwikkelen, en daarmee potentieel te onthullen nieuwe biomarkers en de mogelijkheden voor de ontwikkeling van geneesmiddelen in CRC.

We hebben de bovenstaande methode toegepast om meerdere combinaties van CRC cellijnen en stromale cellen. Een voorbeeld hier gepresenteerd is SW480 epitheliale CRC cellijnen met primaire menselijke ex vivo colon fibroblasten. 3-dimensionale co-kweken worden geconstrueerd (Figuur 1), onderworpen aan microscopie en laser capture microdissectie (figuur 2), en microRNA (miRNA) profilering (figuur 3) geanalyseerd voor vergelijking van differentieel tot expressie miR...

Moleculaire profilering van laser gemicrodissecteerde cellen en stroma van synthetische, weefselengineering darmkanker modellen vertegenwoordigt een nieuwe benadering en manipuleerbaar te karakteriseren en ontleden de kenmerkende biologie op het grensvlak tussen tumorcellen aan de voorzijde en invasieve kanker geassocieerd stromacellen.

Molecular Profiling van de invasieve tumor micro in een 3-dimensionaal model van colorectale kanker cellen en<em&gt; Ex vivo</em&gt; Fibroblasts

Invading colorectal cancer (CRC) cells have acquired the capacity to break free from their sister cells, infiltrate the stroma, and remodel the ...

Het algemene doel van deze procedure is het karakteriseren van de specifieke biologie op de interface tussen maligne epitheelcellen aan het invasieve tumorfront en kankerassocieerde stromale cellen. Dit wordt bereikt door eerst primaire fibroblastculturen op te zetten uit colonimplantaten. De tweede stap is het construeren van organotypische co-cultuurmodellen met behulp van primaire colonfibroblasten en gecultiveerde colorectale kankercellen.Vervolgens worden de organotypische modellen gefixeerd in formaline, gesneden op membraan-gemonteerde objectglazen en gekleurd met kristalviolet. De laatste stap is laser-microdissectie om binnendringende tumorcellen te scheiden van niet-binnendringende tumorcellen en kanker-geassocieerde stromale cellen. Uiteindelijk kunnen moleculaire profileringstechnieken worden gebruikt om de biologie van binnendringende en niet-binnendringende tumorcellen en stromale cellen in de omringende tumormicro-omgeving te karakteriseren.We kregen voor het eerst het idee voor deze methode toen we beseften hoe duidelijk binnendringende cellen te onderscheiden zijn van niet-binnendringende cellen in driedimensionale organotypische co-culturemodellen van colorectale

molecular-profiling-invasive-tumor-microenvironment-3-dimensional

Research

JoVE Journal

Medicine

Geneeskunde

Beschreven wij een procedure voor het uiteenvallen van colorectale kanker (CRC) levensvatbare enkele cellen, die vervolgens worden opgevangen op maat antilichaam microarrays herkennen van oppervlakte-antigenen (DotScan CRC microarray) te produceren. Subpopulaties van cellen gebonden aan de microarray kan worden geprofileerd door fluorescentie multiplexen behulp van monoklonale antilichamen gelabeld met een fluorescerende kleurstoffen.

Colorectal Cancer Cell oppervlakte-eiwit Profiling Met behulp van een antilichaam Microarray en fluorescentie Multiplexing

We hebben 3D coculture modellen voor live-cell imaging in real-time van de interacties tussen borsttumor cellen en andere cellen in hun micro-omgeving die van invloed zijn progressie naar een invasieve fenotype. Deze modellen kunnen dienen als preklinisch schermen voor drugs te paracriene-geïnduceerde proteolytische, chemokine / cytokine en kinase pathways die betrokken zijn bij invasiviteit richten.

MAME Modellen voor 4D live-cell imaging van de tumor: micro-omgeving interacties die van invloed zijn Maligne Progression

The video describes the laser dissection of the 3D organotypic co-culture model with micron-level precision. In 3D organotypic models, stromal constituents such as fibroblasts are 3-dimensionally co-cultured with cancer epithelial cells. The 3D model serves as an experimental tool that enables invasion and cancer-stroma interactions to be studied in near-physiological conditions.

Laser Microdissection: A Technique to Isolate Invading Colorectal Cancer cells from a 3D Organotypic Culture Model

Weefselbewerkt-fibroblast afgeleid inheemse matrix is ​​een opkomende hulpmiddel om een ​​stromale substraat dat epitheelcelproliferatie en differentiatie ondersteunt genereren. Hier een protocol deze methode toegepast op de impact van verschillende stromale celtypen op tumorcel biologie beoordelen wordt gepresenteerd.

Tissue Engineering van Tumor Stromal Microenvironment met Toepassing op Cancer Cell Invasion

Dit artikel geeft gedetailleerde methodologieën voor het gebruik van driedimensionale (3D) assays om borstkanker cel invasie kwantificeren. Concreet bespreken we het nodig om dergelijke assays procedures, kwantificering en gegevensanalyse, alsook werkwijzen voor het verlies van membraan integriteit die ontstaat wanneer cellen binnendringen onderzoeken.

Kwantificering van de Breast Cancer Cell Invasiviteit met een drie-dimensionale (3D) Model

Hier presenteren we een protocol voor co-cultuur in drie dimensies, wat nuttig is voor het onderzoeken van interacties tussen meerdere cellen en het beïnvloeden van het gedrag van kankercellen door de extracellulaire matrix. In dit experimentele model worden kankercellen gekweekt op collageengels ingebed met humane kanker-geassocieerde fibroblasten.

Driedimensionale Co-cultuur Model voor Tumor-stromale Interactie

We demonstreren een methode om 3D-surrogaten voor borstkanker te genereren, die kunnen worden gekweekt met behulp van een perfusiebioreactorsysteem om zuurstof en voedingsstoffen af te geven. Na de groei worden surrogaten gefixeerd en verwerkt tot paraffine voor evaluatie van parameters van belang. De evaluatie van één van deze parameters, celdichtheid, wordt uitgelegd.

Voorbereiding en analyse van<em&gt; In Vitro</em&gt; Three Dimensional mammacarcinoom Surrogates

Hier beschrijven we een driedimensionale cultuur-methode voor het analyseren van de morfologie van primaire borstkankercellen, alsmede over de studie van hun directe/indirecte interacties met monocyten en de resultaten zoals de aantasting van het collageen, immuun cel aanwerving, cel invasie, en bevordering van kanker-gerelateerde ontsteking.

Analyseren van de communicatie tussen monocyten en primaire borstkankercellen in een extracellulaire Matrix extraheren (ECME)-gebaseerde driedimensionaal systeem

Het doel van dit protocol is om een 3D in vitro model te vestigen om de differentiatie van met kanker geassocieerde fibroblasten (CAFs) in een tumor bulk-achtige omgeving te bestuderen, die kan worden aangepakt in verschillende analysesystemen, zoals immunofluorescentie, transcriptionele analyse en Life Cell Imaging.

Een 3D-Spheroid-model als een fysiologisch systeem voor de differentiatie van kanker-geassocieerde fibroblasten en invasies in vitro studies

Dit protocol presenteert een nieuw, robuust en reproduceerbaar kweeksysteem om driedimensionale sferoïden uit Caco2 colon adenocarcinoomcellen te genereren en te laten groeien. De resultaten vormen de eerste proof-of-concept voor de geschiktheid van deze aanpak om kankerstamcelbiologie te bestuderen, inclusief de respons op chemotherapie.

Een driedimensionaal model van sferoïden om stamcellen van darmkanker te bestuderen

Er is een kritieke behoefte aan 3D-kankermodellen die heterocellulaire overspraak vastleggen om kankermetastasen te bestuderen. Onze studie presenteert de generatie van heteromulticellulair stromaal-epitheel in een steiger- en steigervrije omgeving die kan worden gebruikt om invasie en cellulaire ruimtelijke verdelingen te bestuderen.

Heteromulticellulaire stromale cellen in steigervrije 3D-culturen van epitheelkankercellen om invasie te stimuleren

Ontdek laser microdissectie voor moleculaire profilering van colorectale kankercellen en stromale cellen in een 3D organotypisch model. Deze methode onderscheidt invaderende van niet-invaderende tumorcellen.

Molecular Profiling van de invasieve tumor micro in een 3-dimensionaal model van colorectale kanker cellen en Ex vivo Fibroblasts (Video) | JoVE Journal

Molecular Profiling van de invasieve tumor micro in een 3-dimensionaal model van colorectale kanker cellen en

Meer video's verkennen