Name: Chirurgische Retrieval, Isolatie en In vitro Uitbreiding van de Mens Voorste kruisband-afgeleide cellen voor Tissue Engineering Applications (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2014-04-30T15:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 30 s
Description: Leer chirurgische isolatie en uitbreiding van menselijke ACL-afgeleide cellen voor weefseltechnische toepassingen. Deze methode ondersteunt ontwikkeling van biocompatibele pleisters voor partiële ACL-ruptuur.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

De auteurs willen graag de afdeling chirurgie onderzoek subsidie ​​van de Southern Illinois University, School of Medicine startersfonds en erkennen; en het Memorial Medical Foundation subsidie.

1. Chirurgische Retrieval Opmerking: Een IRB goedkeuring is verkregen om de ACL stomp verzamelen tijdens ACL reconstructie chirurgie. IRB vrijstelling werd gegeven als de ACL stomp gebruikt werden in het algemeen weggegooid als chirurgische afval. 20 patiënten werden gebruikt om de ACL stomp verzamelen. <ol><li> Dien algemene anesthesie en pre-operatieve antibiotica volgens het protocol instelling aan de patiënt. </li><li> Solliciteer tourniquet en opblazen 100 mg boven de systolische bloeddruk. </li><li> Situeren de patiënt in rugligging. Maak een horizontale anterolaterale incisie met knie in 30-45 ° flexie voor een 5 mm poort en steek de arthroscopische trocar en camera in de suprapatellaris zakje bij 30 °. </li><li> Voer een routine diagnostische arthroscopie. </li><li> Voer een inkeping en debrideren de membraneuze synovium over de gescheurde ACL. </li><li> Gebruik een 4,5 mm scheerapparaat en ablator aan de ACL stomp identificeren. </li><li> Gebruik een eendenbek straight bittere meerdere spe verzamelencimens van de resterende ACL stomp. </li><li> Handhaaf het monster in een fysiologische zoutoplossing in een steriele container. </li><li> Stuur de monsters naar pathologie voor het decoderen en de uiteindelijke levering aan het laboratorium faciliteit. </li><li> Recover patiënt en het uitvoeren van post-operatieve zorg volgens het protocol instelling. </li></ol> 2. Tissue Spijsvertering en hACL Isolatie <ol><li> Breng de menselijke ACL weefsel ontvangen van pathologie tot een petrischaal met een steriele zoutoplossing / PBS (fosfaat gebufferde zoutoplossing). </li><li> Hak het weefsel met behulp van een steriele schaar in 1-2 mm 3 stuks en was het gehakt weefsel met een zoutoplossing minstens 3 keer. </li><li> Digest gehakt weefsel met 0,4% collagenase in DMEM/F-12 (50/50 1x) medium aangevuld met 10% foetaal runderserum (FBS) en 1% penicilline / streptomycine gedurende 4-6 uur bij 37 ° C. </li><li> Centrifugeer de cellen bij 1000 g gedurende 5 minuten en vervolgens resuspendeer de cellen in het medium. </li><li> Was de cellen met het medium voor 2-3 keer en dan sEED / cultuur in T-25 kolven gedurende 2-3 dagen. </li></ol> 3. Cellulaire Expansion, invriezen en ontdooien <ol><li> Gebruik een lichtmicroscoop om de cellen gekweekt gedurende 2-3 dagen visualiseren in een T-25 kolf. </li><li> Handhaaf de cellen bij 37 ° C in DMEM/F-12 (50/50 1x) medium aangevuld met 10% foetaal runderserum (FBS) en 1% penicilline / streptomycine (P / S). Let op: Vervang de media wanneer cellen vertonen hechting en standaard morfologie. Gebruik een lichte microscoop om de cellen te observeren. </li><li> Was de samenvloeiing cellen met PBS op dag 7 (~ 1,3 x 10 6 cellen / fles). Voeg trypsine (0,5 g / L) en incubeer de cellen bij 37 ° C gedurende 5 minuten. Media aan gesuspendeerde cellen aan trypsine te neutraliseren. Verdeel de media-celmengsel tussen drie T-25 kolven. </li><li> Was de confluente cellen met PBS, voeg trypsine (0,5 g / L) en resuspendeer ze in ijskoud medium met DMSO, FBS en compleet medium (DMEM/F-12 Medium + 10% FBS + 1% P / S) in de verhouding 01:02:07. </li><li> Winkelde cryogene flesjes bij -80 ° C indien de cellen worden gebruikt binnen een maand en in vloeibare stikstof als de cellen worden opgeslagen voor langere perioden. </li><li> Ontdooi de flesjes in een 37 ° C waterbad voor hergebruik. Opmerking: Typisch 90-95% cellen overleven. </li></ol> 4. Fabricage van Tissue Engineered 2-D Poly Lactic-co-glycolzuur (PLAGA) Steiger <ol><li> Los 1 g PLAGA in 12 ml dichloormethaan in een 20 ml scintillatieflesje en vortex de oplossing gedurende 8 uur bij een constante snelheid (800 rpm). Opmerking: Gedetailleerde beschrijving in Gupta et al. 15. </li><li> Breng de opgeloste oplossing voor een glazen petrischaal bekleed met fluor bescherming papier. </li><li> Plaats de petrischaal onder een afzuigkap 30 minuten. Laat de petrischaal bij -20 ° C gedurende de nacht en vervolgens bij kamertemperatuur. Plaats de petrischalen in vriesdroger om volledige verdamping van het oplosmiddel te waarborgen dunne films van het polymeer te verkrijgen. </li><li> Plaats het polymeer films in een exsiccator 24 uur. </li><li> Snijd het polymeer films in 12 mm diameter ronde schijven en bewaar ze in een exsiccator totdat het nodig is. </li></ol> 5. Scanning Electron Microscopy (SEM) <ol><li> Was de cellen (50.000 cellen / schijf) gezaaid op de controle TCPS en de PLAGA schavot met PBS 7 dagen na het zaaien. </li><li> Gebruik 1,5% Glutaraldehyde in 0,1 M kakodylaatbuffer om de cellen te repareren en 2,5% OsO 4 in 0,1 M kakodylaatbuffer voor post-fixatie. </li><li> Was de gefixeerde cellen met 0,1 M cacodylaatbuffer. Droog de gefixeerde cellen met seriële ethanol uitdroging (50%, 70%, 80%, 90% en 100%) gedurende 15 min elk, en verder drogen in hexamethyldisilazaan (HMDS) overnacht. </li><li> Vent de kamer van SEM sputter coating systeem met knoop klep en verhogen de bovenplaat. </li><li> Leg de gedroogde monsters in de kamer. Laat de bovenplaat. </li><li> Schakel de draaiknop aan de pomp om te beginnen met het evacueren van de kamer. </li><li> Open argon lekklep. Wachtvoor vacuüm dalen tot 0,05 mbar. </li><li> De vacht van de gedroogde monsters met een dunne laag (0,13 nm) van Gold / Palladium. </li><li> Zet de argon lek klep naar zijn gesloten stand. </li><li> Schakel de draaiknop af. </li><li> Vent de kamer met knoop klep en verhogen de bovenplaat. </li><li> Verwijder de monsters en bewaar ze in een exsiccator gedurende 24 uur. </li><li> Let op de monsters onder een scanning elektronenmicroscoop. </li></ol> 6. Immunofluorescentiekleuring <ol><li> Was de cellen (50.000 cellen / schijf) gezaaid op de controle TCPS en de PLAGA schavot met PBS 7 dagen na het zaaien. </li><li> Fixeer de cellen met 70% ethanol (koud) gedurende 10 minuten. </li><li> Incubeer de gefixeerde cellen bij kamertemperatuur met 1% runderserumalbumine (BSA) in PBS met 0,05% Triton X-100 gedurende 20 minuten. </li><li> Dompel de monsters in 1% Tween bij kamertemperatuur gedurende 20 minuten. </li><li> Voeg monoklonaal muis anti-β-actine antilichaam (1:400) en incubeer de cellen overnight bij 4 ° C. </li><li> Was de cellen met 0,05% Tween. Voeg secundair antilichaam (geit anti-muis F (ab &#39;) 2 fragment van IgG geconjugeerd met een fluorescentie probe, 1:400) om de cellen en incubeer gedurende 1 uur bij kamertemperatuur geroerd. </li><li> Was de cellen met PBS. Vlekken op de cellen met nucleaire vlek en monteer met behulp van 80% glycerol. </li><li> Let op de cellen onder een confocale microscoop. </li></ol>

<ol><li>Johnson, R. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+anterior+cruciate+ligament%3A+A+dilemma+in+sports+medicine%5BTitle%5D)+AND+%22Int+J+Sports+Med%22%5BJournal%5D)">The anterior cruciate ligament: A dilemma in sports medicine.</a> Int J Sports Med. 3, 71-79 (1982).</li>
<li>Owings, M. F., Kozak, L. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ambulatory+and+inpatient+procedures+in+the+United+States%2C+1996%5BTitle%5D)+AND+%22Vital+Health+Stats%22%5BJournal%5D)">Ambulatory and inpatient procedures in the United States, 1996.</a> Vital Health Stats. 13, 1-119 (1998).</li>
<li>Frank, C. B., Jackson, D. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+science+of+reconstruction+of+the+anterior+cruciate+ligament%5BTitle%5D)+AND+%22J+Bone+Joint+Surg+Am%22%5BJournal%5D)">The science of reconstruction of the anterior cruciate ligament.</a> J Bone Joint Surg Am. 79, 1556-1576 (1997).</li>
<li>Miyasaka, K. C., Daniel, D. M., Stone, M. L., Hirshman, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+incidence+of+knee+ligament+injuries+in+the+general+population%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Knee+Surg%22%5BJournal%5D)">The incidence of knee ligament injuries in the general population.</a> Am J Knee Surg. 4, 3-8 (1991).</li>
<li>Taylor, D. C., Posner, M., Curl, W. W., Feagin, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Isolated+tears+of+the+anterior+cruciate+ligament%3A+over+30+year+follow-up+of+patients+treated+with+arthrotomy+and+primary+repair%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Sports+Med%22%5BJournal%5D)">Isolated tears of the anterior cruciate ligament: over 30 year follow-up of patients treated with arthrotomy and primary repair.</a> Am J Sports Med. 37 (1), 65-71 (2009).</li>
<li>Liljedahl, S. O., Lindvall, N., Wetterfors, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Early+diagnosis+and+treatment+of+acute+ruptures+of+the+anterior+cruciate+ligament%3A+a+clinical+and+arthrographic+study+of+forty-eight+cases%5BTitle%5D)+AND+%22J+Bone+Joint+Surg+Am%22%5BJournal%5D)">Early diagnosis and treatment of acute ruptures of the anterior cruciate ligament: a clinical and arthrographic study of forty-eight cases.</a> J Bone Joint Surg Am. 47, 1503-1513 (1965).</li>
<li>Oensten, M., Lysholdm, J., Gillquist, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Suture+of+fresh+ruptures+of+the+anterior+cruciate+ligament%3A+A+5+year+follow+up%5BTitle%5D)+AND+%22Acta+Orthop+Scan%22%5BJournal%5D)">Suture of fresh ruptures of the anterior cruciate ligament: A 5 year follow up.</a> Acta Orthop Scan. 55, 270 (1984).</li>
<li>Buckley, S. L., Barrack, R. L., Alexander, A. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+natural+history+of+conservatively+treated+partial+anterior+cruciate+ligament+tears%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Sports+Med%22%5BJournal%5D)">The natural history of conservatively treated partial anterior cruciate ligament tears.</a> Am J Sports Med. 17 (2), 221-225 (1989).</li>
<li>Noyes, F. R., Mooar, L. A., Moorman, C. T. 3rd, McGinnis, H. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Partial+tears+of+the+anterior+cruciate+ligament.+Progression+to+complete+ligament+deficiency%5BTitle%5D)+AND+%22J+Bone+Joint+Surg+Br%22%5BJournal%5D)">Partial tears of the anterior cruciate ligament. Progression to complete ligament deficiency.</a> J Bone Joint Surg Br. 71 (5), 825-833 (1989).</li>
<li>Bak, K., Scavenius, M., Hansen, S., Norring, K., Jensen, K. H., Jorgensen, U. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Isolated+partial+rupture+of+the+anterior+cruciate+ligament.+Long+term+followup+of+56+cases%5BTitle%5D)+AND+%22Knee+Surg+Sports+Traumatol+Arthrosc%22%5BJournal%5D)">Isolated partial rupture of the anterior cruciate ligament. Long term followup of 56 cases.</a> Knee Surg Sports Traumatol Arthrosc. 5 (2), 66-71 (1997).</li>
<li>Fritschy, D., Panoussopoulos, A., Wallensten, R., Peter, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Can+we+predict+the+outcome+of+a+partial+rupture+of+the+anterior+cruciate+ligament%3F+A+prospective+study+of+43+cases%5BTitle%5D)+AND+%22Knee+Surg+Sports+Traumatol+Arthrosc%22%5BJournal%5D)">Can we predict the outcome of a partial rupture of the anterior cruciate ligament? A prospective study of 43 cases.</a> Knee Surg Sports Traumatol Arthrosc. 5 (1), 2-5 (1997).</li>
<li>Sommerlath, K., Odensten, M., Lysholm, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+late+course+of+acute+partial+anterior+cruciate+ligament+tears.+A+nine+to+15+year+follow-up+evaluation%5BTitle%5D)+AND+%22Clin+Orthop%22%5BJournal%5D)">The late course of acute partial anterior cruciate ligament tears. A nine to 15 year follow-up evaluation.</a> Clin Orthop. , 281-2152 (1992).</li>
<li>Barrack, R. L., Buckley, S. L., Bruckner, J. D., Kneisl, J. S., Alexander, A. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Partial+versus+complete+acute+anterior+cruciate+ligament+tears%3A+the+results+of+nonoperative+treatment%5BTitle%5D)+AND+%22J+Bone+Joint+Surg+Br%22%5BJournal%5D)">Partial versus complete acute anterior cruciate ligament tears: the results of nonoperative treatment.</a> J Bone Joint Surg Br. 72 (4), 622-624 (1990).</li>
<li>Murray, M. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Current+status+and+potential+of+primary+ACL+repair%5BTitle%5D)+AND+%22Clin+Sports+Med%22%5BJournal%5D)">Current status and potential of primary ACL repair.</a> Clin Sports Med. 28 (1), 51-61 (2009).</li>
<li>Gupta, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Single+walled+carbon+nanotube+composites+for+bone+tissue+engineering%5BTitle%5D)+AND+%22J+Orthop+Res%22%5BJournal%5D)">Single walled carbon nanotube composites for bone tissue engineering.</a> J Orthop Res. 9, 1374-1381 (2013).</li>
<li>Fruensgaard, S., Johannsen, H. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Incomplete+ruptures+of+the+anterior+cruciate+ligament%5BTitle%5D)+AND+%22J+Bone+Joint+Surg+Br%22%5BJournal%5D)">Incomplete ruptures of the anterior cruciate ligament.</a> J Bone Joint Surg Br. 71, 526-530 (1989).</li>
<li>Sandberg, R., Balkfors, B., Nilsson, B., Westlin, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Operative+versus+non-operative+treatment+of+recent+injuries+to+the+ligaments+of+the+knee.+A+prospective+randomized+study%5BTitle%5D)+AND+%22J+Bone+Joint+Surg+Am%22%5BJournal%5D)">Operative versus non-operative treatment of recent injuries to the ligaments of the knee. A prospective randomized study.</a> J Bone Joint Surg Am. 69, 1120-1126 (1987).</li>
<li>Lamar, D. S., Bartolozzi, A. R., Freedman, K. B., Nagda, S. H., Fawcett, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Thermal+modification+of+partial+tears+of+the+anterior+cruciate+ligament%5BTitle%5D)+AND+%22Arthroscopy%22%5BJournal%5D)">Thermal modification of partial tears of the anterior cruciate ligament.</a> Arthroscopy. 21 (7), 809-814 (2005).</li>
<li>Indelli, P. F., Dillingham, M. F., Fanton, G. S., Schurman, D. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Monopolar+thermal+treatment+of+symptomatic+anterior+cruciate+ligament+instability%5BTitle%5D)+AND+%22Clin+Orthop%22%5BJournal%5D)">Monopolar thermal treatment of symptomatic anterior cruciate ligament instability.</a> Clin Orthop. 407, 138-147 (2003).</li>
<li>Smith, D. B., Carter, T. R., Johnson, D. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((High+failure+rate+for+electrothermal+shrinkage+of+the+lax+anterior+cruciate+ligament%3A+a+multicenter+follow-up+past+2+years%5BTitle%5D)+AND+%22Arthroscopy%22%5BJournal%5D)">High failure rate for electrothermal shrinkage of the lax anterior cruciate ligament: a multicenter follow-up past 2 years.</a> Arthroscopy. 24 (6), 637-641 (2008).</li>
<li>Buda, R., Ferruzzi, A., Vannini, F., Zambelli, L., Di Caprio, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Augmentation+technique+with+semitendinosus+and+gracilis+tendons+in+chronic+partial+lesions+of+the+ACL%3A+clinical+and+arthrometric+analysis%5BTitle%5D)+AND+%22Knee+Surg+Sports+Traumatol+Arthrosc%22%5BJournal%5D)">Augmentation technique with semitendinosus and gracilis tendons in chronic partial lesions of the ACL: clinical and arthrometric analysis.</a> Knee Surg Sports Traumatol Arthrosc. 14 (11), 1101-1107 (2006).</li>
<li>Sekiya, J. K., Golladay, G. J., Wojtys, E. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Autodigestion+of+a+hamstring+anterior+cruciate+ligament+autograft+following+thermal+shrinkage%3A+a+case+report+and+sentinel+of+concern%5BTitle%5D)+AND+%22J+Bone+Joint+Surg+Am%22%5BJournal%5D)">Autodigestion of a hamstring anterior cruciate ligament autograft following thermal shrinkage: a case report and sentinel of concern.</a> J Bone Joint Surg Am. 82 (10), 1454-1457 (2000).</li>
<li>Farquharson-Roberts, M. A., Osborne, A. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Partial+rupture+of+the+anterior+cruciate+ligament+of+the+knee%5BTitle%5D)+AND+%22J+Bone+Joint+Surg+Br%22%5BJournal%5D)">Partial rupture of the anterior cruciate ligament of the knee.</a> J Bone Joint Surg Br. 65, 32-34 (1983).</li>
<li>Rue, J. P., Ghodadra, N., Bach, B. R. Jr <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Femoral+tunnel+placement+in+single-bundle+anterior+cruciate+ligament+reconstruction%3A+a+cadaveric+study+relating+transtibial+lateralized+femoral+tunnel+position+to+the+anteromedial+and+posterolateral+bundle+femoral+origins+of+the+anterior+cruciate+ligament%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Sports+Med%22%5BJournal%5D)">Femoral tunnel placement in single-bundle anterior cruciate ligament reconstruction: a cadaveric study relating transtibial lateralized femoral tunnel position to the anteromedial and posterolateral bundle femoral origins of the anterior cruciate ligament.</a> Am J Sports Med. 36, 73-79 (2008).</li>
<li>Carey, J. L., Dunn, W. R., Dahm, D. L., Zege, S. L., Spindler, K. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+systematic+review+of+anterior+cruciate+ligament+reconstruction+with+autograft+compared+with+allograft%5BTitle%5D)+AND+%22J+Bone+Joint+Surg%22%5BJournal%5D)">A systematic review of anterior cruciate ligament reconstruction with autograft compared with allograft.</a> J Bone Joint Surg. 91, 2242-2450 (2009).</li>
<li>Murray, M. M., Martin, S. D., Martin, T. L., Spector, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Histological+changes+in+the+human+anterior+cruciate+ligament+after+rupture%5BTitle%5D)+AND+%22J+Bone+Joint+Surg+Am%22%5BJournal%5D)">Histological changes in the human anterior cruciate ligament after rupture.</a> J Bone Joint Surg Am. 82, 1387-1397 (2000).</li>
<li>Andrish, J., Holmes, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effects+of+synovial+fluid+on+fibroblasts+in+tissue+culture%5BTitle%5D)+AND+%22Clin+Orthop+Relat+Res%22%5BJournal%5D)">Effects of synovial fluid on fibroblasts in tissue culture.</a> Clin Orthop Relat Res. (138), 279-283 (1979).</li>
<li>Murray, M. M., Spindler, K. P., Ballard, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Enhanced+histologic+repair+in+a+central+wound+in+the+anterior+cruciate+ligamentwith+a+collagen-platelet-rich+plasma+scaffold%5BTitle%5D)+AND+%22J+Orthop+Res%22%5BJournal%5D)">Enhanced histologic repair in a central wound in the anterior cruciate ligamentwith a collagen-platelet-rich plasma scaffold.</a> J Orthop Res. 25, 1007-1017 (2007).</li>
<li>Carter, T. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Anterior+cruciate+ligament+thermal+shrinkage%5BTitle%5D)+AND+%22Clin+Sports+Med%22%5BJournal%5D)">Anterior cruciate ligament thermal shrinkage.</a> Clin Sports Med. 21, 693-700 (2002).</li>
<li>Perry, J. J., Higgins, L. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Anterior+and+posterior+cruciate+ligament+rupture+after+thermal+treatment%5BTitle%5D)+AND+%22Arthroscopy%22%5BJournal%5D)">Anterior and posterior cruciate ligament rupture after thermal treatment.</a> Arthroscopy. 16, 732-736 (2000).</li>
<li>Cheng, M. T., Yang, H. W., Chen, T. H., Lee, O. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Isolation+and+characterization+of+multipotent+stem+cells+from+human+cruciate+ligaments%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Prolif%22%5BJournal%5D)">Isolation and characterization of multipotent stem cells from human cruciate ligaments.</a> Cell Prolif. 42 (4), 448-460 (2009).</li>
<li>Matsumoto, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Isolation+and+characterization+of+human+anterior+cruciate+ligament-derived+vascular+stem+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Stem+Cells+Dev%22%5BJournal%5D)">Isolation and characterization of human anterior cruciate ligament-derived vascular stem cells.</a> Stem Cells Dev. 21 (6), 859-872 (2012).</li>
</ol>

De auteurs verklaren dat zij geen concurrerende financiële belangen.

Het hoofddoel van deze hACL/2D steiger studie was de verkregen cellen gebruiken in een patch primaire reparatie van gedeeltelijke ACL tranen vergroten. Nonoperative beheer van gedeeltelijke ACL tranen kan een korte periode van immobilisatie, bracing, een progressieve revalidatieprogramma, en regelmatige follow-up evaluaties 13,16,17. Veel studies tonen aan dat traditionele behandeling bij atleten is geassocieerd met slechte resultaten en falen. Buckley et al.. Onderzocht 25 patiënten met partiële ACL...

De voorste kruisband (VKB) is een veel gewonden intra-articulaire ligament van de knie. Ongeveer 200.000 (VKB) letsel worden jaarlijks gerapporteerd in de Verenigde Staten. Meer dan 75% van de patiënten die ACL verwonding kiezen voor orthopedische reconstructieve chirurgie 1,2,3,4. Chirurgische ingreep wordt vaak aangegeven als gevolg van een inherent slechte genezing potentieel 3. Kniebandoperatie wordt typisch bewerkstelligd door een autograft of allograft pees. Autograft en allograft vertegenwoordigen de gouden standaard voor de wederopbouw als ze in het bezit hoge slagingspercentages, en primaire hechtdraad reparatie, de andere optie behandeling, heeft aangetoond uitval van maximaal 94% 5,6,7. Gedeeltelijke scheuren van de ACL vertegenwoordigen 10% tot 28% van alle ACL tranen 8. In een prospectieve studie, Noyes et al.. Geschat dat 50% van de patiënten met partiële tranen die meer dan de helft van de ACL ontwikkeld tot ACL insufficiëntie voltooien na niet-operatieve behandeling 9. Andere studies rapporteren aanhoudende instabiliteit en verminderde functie met minder dan 30% van de patiënten kunnen terugkeren naar hun pre-blessure activiteitenniveau 9,10,11,12,13. Behandeling opties zijn beperkt en onder conservatieve modaliteiten, thermische krimp van de resterende ACL of ACL reconstructie. Onlangs is er toenemende belangstelling in augmented primaire reparatie. Deze technieken gebruiken biologische primaire hechtdraad reparaties 14 verbeteren. Recent onderzoek heeft geprobeerd oogsten mesenchymale-achtige hACL afgeleide stamcellen graft beperkingen omzeilen 31,32 maar de geldigheid en werkzaamheid van deze cellen is nog onbekend. De ideale cel bron voor tissue engineering toepassingen lijkt niet mesechymal hACL afgeleide fibroblast cellen. Lopend onderzoek is gericht op het identificeren van een geschikt matrixmateriaal en mobiele bron voor de gemanipuleerde steiger. Het is standaard procedure voor een gescheurde ACL als su te worden weggegooidrgical afval tijdens de reconstructie chirurgie, echter, deze beschadigd ligament kan een kwaliteit bron voor het verwerven van cellen die nodig zijn voor het ontwikkelen en verbeteren van een ideale tissue engineered ACL vervanging. Ons laboratorium heeft een protocol voor de in vitro expansie van deze geoogst hACL afgeleide cellen ontwikkeld. Met behulp van een aangelegde 2D matrix doordrenkt met hACL afgeleide cellen, hebben we een patch die mogelijk zou kunnen vergroten gedeeltelijke ACL reparatie en versterking van gescheurde ligamenten ontworpen.

<table><tbody><tr><td>Petrischaal</td><td>Fisher Scientific</td><td>08-757-103C</td><td></td></tr><tr><td>Fosfaat Buffered Saline (PBS)</td><td>Fisher Scientific</td><td>BP3994</td><td></td></tr><tr><td>Collagenase</td><td>Gibco</td><td>17018-029</td><td>Bewaar bij 4 &#176;C</td></tr><tr><td>DMEM/F-12</td><td>Cellgro</td><td>10-092-CV</td><td>Bewaar bij 4 &#176;C. Opwarmen in 37 &#176;C waterbad voor gebruik.</td></tr><tr><td>Fetal Bovine Serum (FBS)</td><td>Gibco</td><td>10082</td><td>Bewaar bij -80 &#176;C</td></tr><tr><td>Penicilline/Streptomycine</td><td>Lonza</td><td>17-602E</td><td>Bewaar bij 4 &#176;C</td></tr><tr><td>Centrifugebuizen- 15 ml</td><td>Corning</td><td>430790</td><td></td></tr><tr><td>T-25 flessen</td><td>BD Falcon</td><td>3013</td><td></td></tr><tr><td>Trypsine-Versene mengsel</td><td>Lonza</td><td>17-161E</td><td>Bewaar bij 4 &#176;C. Opwarmen in 37 &#176;C waterbad voor gebruik.</td></tr><tr><td>DMSO</td><td>Fisher Scientific</td><td>BP231-100</td><td>Ontvlambare vloeistof. Kan irritatie van de huid, ogen en luchtwegen veroorzaken.</td></tr><tr><td>Cryogene flacons</td><td>Corning</td><td>430489</td><td></td></tr><tr><td>PLAGA</td><td>Purac Biomaterials</td><td>Purasorb PLG8523</td><td>Bewaar bij -80 &#176;C</td></tr><tr><td>TCPS schijven</td><td>Fisher Scientific</td><td>12-545-82</td><td></td></tr><tr><td>Dichloormethaen</td><td>Fisher Scientific</td><td>AC36423-0010</td><td>Mogelijke kankergevaar. Bewaren op een droge, koele plaats.</td></tr><tr><td>Bytac papier</td><td>Saint gobin performance plastics</td><td>1420652</td><td></td></tr><tr><td>Scintillatiebuisje</td><td>Fisher Scientific</td><td>03-339-21G</td><td></td></tr><tr><td>Bovine Serum Albumine (BSA)</td><td>Sigma Aldrich</td><td>A7906</td><td>Bewaar bij 4 &#176;C</td></tr><tr><td>Tween</td><td>Fisher Scientific</td><td>BP337-500</td><td></td></tr><tr><td>muis Anti-β-actine antilichaam (1&#176; Ab)</td><td>Sigma Aldrich</td><td>A5441</td><td>Bewaar bij -20 &#176;C</td></tr><tr><td>geit-anti-muis antilichaam (2&#176; Ab)</td><td>Cell Signaling</td><td>4408</td><td>Bewaar bij -20 &#176;C</td></tr><tr><td>Hoechst kleurstof</td><td>Sigma Aldrich</td><td>14530</td><td>Bewaar bij -20 &#176;C</td></tr><tr><td>Glycerol</td><td>Fisher Scientific</td><td>BP229-1</td><td></td></tr><tr><td>Glutaraldehyde</td><td>Fisher Scientific</td><td>BP2547-1</td><td>Toxisch bij inademing en inslikken. Veroorzaakt brandwonden via alle blootstellingsroutes.</td></tr><tr><td>Hexamethyldisilazane</td><td>Fisher Scientific</td><td>AC43085-1000</td><td>Ontvlambare vloeistof en damp. Veroorzaakt brandwonden via alle blootstellingsroutes.</td></tr><tr><td>Steriele schaar</td><td>McKesson</td><td>25-716</td><td></td></tr><tr><td>Centrifuge</td><td>Eppendorf</td><td>5804R</td><td></td></tr><tr><td>Lichtmicroscoop</td><td>Olympus</td><td>CK40</td><td></td></tr><tr><td>Waterbad</td><td>Thermo scientific</td><td>2845</td><td></td></tr><tr><td>Vortex</td><td>Labnet</td><td>VX-200</td><td></td></tr><tr><td>Glazen petrischalen</td><td>fisher Scientific</td><td>S31473</td><td></td></tr><tr><td>Acu-Punch</td><td>Acuderm Inc.</td><td>P1225</td><td>Acu-Punch werd gebruikt om 12 mm schijven te snijden</td></tr><tr><td>Cacodylate buffer</td><td>Sigma Aldrich</td><td>97068</td><td>Ontvlambare vloeistof, carcinogeen en irriterend.</td></tr><tr><td>Osmium tetraoxide</td><td>Sigma Aldrich</td><td>201030</td><td>Zeer giftig</td></tr><tr><td>Triton X-100</td><td>Sigma Aldrich</td><td>T8787</td><td>Schadelijk indien doorgeslikt</td></tr><tr><td>Ethanol</td><td>Decon Labs</td><td>2705</td><td>Houd uit de buurt van hitte, vonken, vlam en andere vormen van ontsteking.</td></tr><tr><td>Algemene/regionale anesthesie</td><td>Amphastar pharmaceuticals</td><td></td><td>1% Lidocaine, 0.25% Bupivacaine,Anesthetische middelen voor inductie en onderhoud</td></tr><tr><td>Antibiotica</td><td>Hospira</td><td>0409-0805-01</td><td>Ancef 1 g i.v.</td></tr><tr><td>Artroscopie trocart</td><td>Smith and Nephew</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Artroscopie Camera</td><td>Smith and Nephew</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Artroscopische grijper en bitter</td><td>Arthrex</td><td></td><td></td></tr><tr><td>4,5 mm schuurder</td><td>Arthrex</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Interferentie Schroeven</td><td>Arthrex</td><td></td><td>roestvrijstalen schroeven</td></tr><tr><td>Sputter Coater</td><td>Polaron</td><td>E5400</td><td></td></tr></tbody></table>

chirurgische retrieval, isolatie en<em&gt; in vitro</em&gt; uitbreiding van de mens voorste kruisband-afgeleide cellen voor tissue engineering applications

Surgical Retrieval, Isolation and In vitro Expansion of Human Anterior Cruciate Ligament-derived Cells for Tissue Engineering Applications

Letsel aan de ACL is een vaak voorkomend probleem in actieve individuen. Zelfs gedeeltelijke tranen van deze intra-articulaire knie ligament leiden tot biomechanische tekortkomingen die functie en stabiliteit aantasten. Huidige opties voor de behandeling van partiële ACL tranen variëren van niet-operatieve, conservatieve behandeling meerdere chirurgische opties, zoals: thermische modificatie, single-bundel reparatie, een volledige renovatie, en de wederopbouw van het beschadigde gedeelte van de inheemse ligament. Weinig studies, eventueel, hebben een enkele methode voor het management om consistent superieur zijn aangetoond, en in veel gevallen blijven de patiënten aanhoudende instabiliteit en andere comorbiditeit demonstreren. Het doel van deze studie is een potentiële bron van cellen voor gebruik bij de ontwikkeling van een tissue engineered patch die in de reparatie van een gedeeltelijk gescheurde ACL kan worden uitgevoerd identificeren. Een nieuw protocol ontwikkeld voor de expansie van cellen afkomstig van patiegen ondergaan ACL reconstructie. Om de cellen te isoleren, gehakt hACL weefsel verkregen tijdens ACL reconstructie werd verteerd in een Collagenase oplossing. Expansion werd uitgevoerd met DMEM/F12 medium aangevuld met 10% foetaal runderserum (FBS) en 1% penicilline / streptomycine (P / S). De cellen werden vervolgens bij -80 ° C of in vloeibare stikstof opgeslagen in een invriesmedium bestaande uit DMSO, FBS en expansie medium. Na ontdooien werden de hACL afgeleide cellen dan gezaaid op een tissue engineered steiger, PLAGA (Poly melkzuur-co-glycolzuur) en controle Weefselkweek polystyreen (TCPS). Na 7 dagen werd uitgevoerd SEM cellulaire adhesie te vergelijken met de PLAGA versus de controle TCPS. Celmorfologie werd geëvalueerd middels immunofluorescentie kleuring. SEM (Scanning Electron Microscope) microfoto aangetoond dat cellen groeide en gehecht aan zowel PLAGA en TCPS oppervlakken en werden confluente over het gehele oppervlak tot dag 7. Immunofluorescentiekleuring toonden normale, niet-benadrukte morfologischeal patronen aan beide zijden. Deze techniek is veelbelovend voor toepassingen in ACL regeneratie en wederopbouw.

Het werkmodel voor chirurgische ophalen, weefsel digestie en isolatie van de menselijke voorste kruisband (hACL) afgeleide cellen wordt getoond in Figuur 1. De cellen gemigreerd van de explantaten en gehecht aan de T-25 kolven. Deze cellen werden gedurende 3 dagen en vervolgens werden gevisualiseerd onder een lichtmicroscoop (figuur 2). Een confluente monolaag werd verkregen dag 7. De aanwezigheid van gezonde, levensvatbare cellen aangegeven succesvolle ophalen en cultuur van hACL afgel...

Voor toekomstige toepassingen als een patch om gedeeltelijke scheuren van de voorste kruisband (VKB) te herstellen, werden menselijke ACL afgeleide cellen geïsoleerd uit weefsel verkregen tijdens reconstructieve procedures, uitgebreid in vitro en geteeld op tissue engineered steigers. Cellulaire adhesie en morfologie werd vervolgens uitgevoerd om biocompatibiliteit bevestigen op steiger oppervlak.

Chirurgische Retrieval, Isolatie en<em&gt; In vitro</em&gt; Uitbreiding van de Mens Voorste kruisband-afgeleide cellen voor Tissue Engineering Applications

Injury to the ACL is a commonly encountered problem in active individuals. Even partial tears of this intra-articular knee ligament lead to biomechanical ...

Het algemene doel van deze procedure is het ontwikkelen van een weefselengineered voorste kruisband of ACL-patch voor een paar gedeeltelijk gescheurde ACL. Dit wordt bereikt door eerst het menselijke ACL-weefsel van de patiënt te verkrijgen en dit te bewaren in zoutoplossing. Het verkregen ACL-monster wordt fijngehakt en verteerd met collagenase om ACL-afgeleide cellen te verkrijgen.De geïsoleerde cellen worden vervolgens gekweekt en uitgebreid. De volgende stap is het vervaardigen van een tweedimensionaal polylactide-co-glycolide-scaffold. Als laatste stap worden de cellen op deze polymeerfilm gezaaid.Uiteindelijk worden scanning elektronenmicroscopie en immunofluorescentiemicroscopie gebruikt om de biocompatibiliteit op het oppervlak van het steigerconstruct (scaffold) aan te tonen. Vandaag demonstreerden we onze techniek voor het ontwikkelen van een patch voor gedeeltelijke scheuren van de voorste kruisband (ACL). Het belang hiervan ligt in het feit dat kruisbanden niet vanzelf genezen.Dit is een nieuwe innovatieve techniek die we hebben ontwikkeld om het herstel van de voorste kruisband (ACL) te bevorderen. Begin met het overbrengen van het menselijke ACL-weefsel, ontvangen van

surgical-retrieval-isolation-vitro-expansion-human-anterior-cruciate

Research

JoVE Journal

Bioengineering

Bio-engineering

Een experimentele techniek voor de behandeling van chondrale defecten in het konijn kniegewricht beschreven. De implantatie van autologe chondrocyten geënt op een matrix is ​​een algemeen aanvaarde methode voor het verbouwen en herstel van gewrichtskraakbeen letsels leveren bevredigende resultaten op lange termijn. Matrix-bijgestaan ​​autologe chondrocyten transplantatie (MACT) biedt een gestandaardiseerd en klinisch vastgestelde implantatie methode.

Matrix-bijgestaan ​​autologe chondrocyten transplantatie voor Renovatie en de reparatie van chondrale Gebreken in een konijn model

Een experimentele techniek voor de behandeling van osteochondrale defecten in het konijn kniegewricht beschreven. De implantatie van allogene mesenchymale stamcellen in osteochondrale defecten heeft een veelbelovende ontwikkeling op het gebied van weefsel engineering. De voorbereiding van...

Behandeling van Osteochondrale Defecten in de Rabbit&#39;s kniegewricht door Implantatie van Allogeneic mesenchymale stamcellen in fibrinestolsels

Diermodellen zijn belangrijke hulpmiddelen voor de evaluatie van door weefseltechniek ontwikkelde grafts. Dit artikel presenteert het protocol voor het bereiden van een elektrospunnend biologisch afbreekbaar polymeer graft voor gebruik in weefseltechniek van het voorste kruisband, evenals een chirurgisch protocol voor implantatie in een rattenmodel.

Athymische Rat Model voor de Evaluatie van Engineered voorste kruisband Grafts

Weefselmanipulatie omvat vaak in vitro expansie om autologe voor weefselregeneratie creëren. Deze studie geeft een werkwijze voor weefselexpansie, regeneratie, reconstructie en in vivo werd ontwikkeld om de verwerking van cellen en biologische materialen buiten het lichaam te minimaliseren.

Gehakt Tissue in Compressed Collageen: A-cel met Biotransplant voor Single-geënsceneerde Reconstructieve Repair

Wij presenteren een model van ligamentweefsel waarin driedimensionale constructen worden behandeld met het menselijk oefenconditionerende serum en geanalyseerd voor collageengehalte, functie en cellulaire biochemie.

Behandeling van ligamentconstructen met uitoefening geconditioneerd serum: een translatie weefsel techniek model

Deze paper beschrijft de voorbereiding en de evaluatie van de navelstreng mesenchymale stamcellen matrix afkomstige spheroïden met een bilaterale Patellaire pees defect model in een rat. Dit model werd werd geassocieerd met een aanvaardbaar morbiditeit en gevonden voor het detecteren van de verschillen tussen onbehandelde en behandelde pezen, en tussen de twee behandelingen getest.

Evaluatie van stamcellen therapieën in een bilaterale Patellaire pees letsel Model bij ratten

Wij stellen voor een cel expansie protocol betreffende macroporeuze microcarriers en hun gebruik als levering systeem in een bioreactor perfusie om het zonebeheer van een matrix decellularized weefsel. Wij omvatten ook verschillende technieken om te bepalen van celproliferatie en levensvatbaarheid van cellen gekweekt op microcarriers. Bovendien tonen we functionaliteit van cellen na bioreactor culturen.

Recombinante collageen ik Peptide Microcarriers voor cel expansie en hun mogelijke toepassing als cel levering systeem in een Bioreactor Model

Dit protocol beschrijft de isolatie van chondrocyten, van de fibronectine-adhesietest afgeleide chondroprogenitoren (FAA-CP's) en migrerende chondroprogenitoren (MCP's) uit menselijk gewrichtskraakbeen. Het omvat enzymatische spijsvertering, fibronectine-adhesie en op migratie gebaseerde assays voor het isoleren en karakteriseren van deze cellen.

Isolatie van chondrocyten en chondroprogenitoren met behulp van fibronectine-adhesie en migratoire assay

Methoden om menselijke 3D tumorweefsels maken als testsystemen worden beschreven. Deze technologieën zijn gebaseerd op een van cellen ontdane biologische Gevasculariseerd Steiger (BioVaSc), primaire humane cellen en tumor cellijn, die kan worden gekweekt in statische als onder dynamische omstandigheden in een stroom bioreactor.

Tissue Engineering van een Menselijke 3D<em&gt; In vitro</em&gt; Tumor Test System

We hebben een oogirritatie test die een driedimensionaal gereconstrueerd menselijk hoornvlies-achtige epitheliale (RHCE) weefsel model maakt gebruik ontwikkeld. De test is in staat onderscheid te maken tussen oculaire irriterende en bijtende stoffen (GHS-categorieën 1 en 2 gecombineerd) en degenen die geen etikettering (GHS geen categorie) vereisen.

Test op oogirritatie (EIT) voor Risico oog irriterende stoffen met gereconstrueerde humane Cornea-achtige Epithelial (RHCE) Tissue Model

Leer chirurgische isolatie en uitbreiding van menselijke ACL-afgeleide cellen voor weefseltechnische toepassingen. Deze methode ondersteunt ontwikkeling van biocompatibele pleisters voor partiële ACL-ruptuur.

Chirurgische Retrieval, Isolatie en In vitro Uitbreiding van de Mens Voorste kruisband-afgeleide cellen voor Tissue Engineering Applications (Video) | JoVE Journal

Chirurgische Retrieval, Isolatie en

Meer video's verkennen