Name: Implantatie van de vena cava inferior Interpositie Graft in muismodel (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2014-06-04T14:15:00.000+00:00
Duration: 12 min 39 s
Description: Leer de implantatie van een weefsel-geïnspireerde vaatgraft in de vena cava inferior van muizen. Deze methode onderzoekt celinfiltratie en matrixafzetting om stenosevorming te begrijpen.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

playerTrialDesktop

Dit werk werd ondersteund, voor een deel, door een subsidie ​​van de NIH (RO1 HL098228) te CKB.

OPMERKING: Alle dierlijke procedures werden goedgekeurd door de Nationwide Children&#39;s Hospital Institutional Animal Care en gebruik Comite. 1. Graft Manufacturing <ol><li> Maak de ε-caprolacton en L-lactide copolymeer P (WB / CL) oplossing door het toevoegen van 100 mg P (WB / CL) in 2 ml dioxaan onder een afzuigkap. Zet de oplossing op een vortex en meng voortdurend voor 1-1,5 uur volledig op te lossen. </li><li> In de tussentijd, verwijderen van een blad van polyglycolzuur (PGA) vilt uit de vriezer en snijd verschillende 5 x 8 mm secties. Ook sneed het topje van een 0.1-10 ul pipet net boven het filter. </li><li> Plaats een 19 G naald (1,5 lengte) in het distale einde van een pipet tip en wikkel de PGA voelde rond de naald met behulp van micro tang. </li><li> Schuif het vilt aan het distale uiteinde van de pipet tip, waarbij het lumen is rechter dan het proximale gedeelte, met een stompe 18 G naald, terwijl de 19 G naald erin wordt geplaatst. </li><li> Pipet40 gl P (CL / LA) oplossing in de pipetpunt van boven. Verzadigen de PGA gevoeld met de oplossing. Duw vervolgens luchtbellen met behulp van een pipet dispenser. Herhaal deze procedure indien nodig. </li><li> Plaats enten in een 50 ml buis en plaats deze in een -80 ° C vriezer gedurende 20 minuten. Zorg ervoor dat het hoofd van de naalden gezicht naar beneden. </li><li> Breng de buis in een vriesdroger en vacuüm gedurende 24 uur. Zorg ervoor dat het deksel van de buis te openen om de luchtstroom te hebben. </li><li> Haal de transplantaten en verwijder ze uit de naalden. Snijd beide uiteinden van het transplantaat een mm sectie ~ 5 verlaten en zet ze terug op de naalden om hun vorm te behouden. Houd de enten in een exsiccator. </li><li> Plaats de steiger onder UV-licht in een bioveiligheid kap O / N voor cel zaaien. </li></ol> 2. Bone Marrow mononucleaire cellen Oogsten en isolatie <ol><li> Euthanaseren de muizen met ketamine / xylazine overdosering (ketamine, 200 mg / kg en xylazine, 20 mg / kg). </li><li> Verwijder de botten (dijbenen eend dij) van 3 muizen voor 10 graft implantaties en plaats in een petrischaal met 10 cc RPMI. Snijd beide uiteinden van de botten en flush beenmerg met behulp van een spuit met een 25 G naald in een nieuwe petrischaal met 3 cc RPMI. Verzamel beenmerg en RPMI oplossing in een 15 cc buis en was de petrischaal met extra 2 cc RPMI de rest van BM verzamelen. </li><li> Neem monster (5-10 ul) en tel cel met behulp van een geautomatiseerde celgetalmeter of hemocytometer. Noteer het resultaat. </li><li> Zet 5 cc Ficoll in een 15 cc centrifugebuis en voeg beenmerg en RPMI oplossing. Voeg de oplossing zeer voorzichtig om te voorkomen mengen met Ficoll. </li><li> Centrifugeer bij 528 xg gedurende 30 minuten met &quot;NO BRAKE&quot; bij 24 ° C. </li><li> Verwijder de bovenste roze laag. Verzamel de middelste heldere laag fig. 1, dat de MNC laag en verdunnen met PBS 1:01. </li><li> Centrifugeer de verdunde oplossing MNC 528 xg gedurende 10 min bij 24 ° C. </li><li> Verwijder het supernatant en diluit de pellet met 5 ml PBS. </li><li> Centrifugeer de pellet oplossing bij 528 xg gedurende 10 min bij 24 ° C. </li><li> Verwijder het supernatant. Verdun de pellet met het juiste volume van RPMI (~ 200 pi). </li><li> Neem een 5-10 ul monster en te tellen cellen met behulp van een geautomatiseerde celgetalmeter of hemocytometer. Noteer het resultaat. Herhaal de cel nog een keer tellen en bereken het gemiddelde aantal cellen. </li><li> Verdun celconcentratie 1.000.000 cellen/10 gl met RPMI. </li></ol> 3. Cel zaaien <ol><li> Prewet steiger door het toevoegen van 5 pi RPMI luminaal gedurende 5 minuten, verwijder RPMI. </li><li> Voeg 10 ul beenmerg afgeleide mono nucleaire cellen in RPMI van Stap 2.12 tot schavot lumen en wacht 10 minuten om de cellen te hechten op het schavot. </li><li> Snijd een 19 G naald 1 cm lengte en de naald in het lumen van de steiger aan de vorm van de steiger te houden. Het monster wordt in een 24-well plaat. &lt;/ Li&gt; <li> Voeg 1.000 III RPMI in elk putje en geïncubeerd O / N in een incubator. </li></ol> 4. Graft Implantatie <ol><li> Autoclaaf alle chirurgische instrumenten voor de operatie: 1x fijne schaar, 3x micro tang, 2x micro vasculaire klemmen, 1x klem toepassen tang, 1x micro naaldhouder, 1x lente schaar, 1x oprolmechanisme. </li><li> 6-8 weken oude vrouwelijke C57BL / 6 worden gebruikt als tissue engineered vaattransplantaat ontvangers. Verwijder de muis uit de kooi en wegen, dan verdoven door een intraperitoneale injectie in de rechter kwadrant van de buik met een ketamine / xylazine cocktail (ketamine, 100 mg / kg en xylazine, 10 mg / kg). Ketoprofen (5 mg / kg, IP) wordt gebruikt als een pre-anesthesie analgeticum. </li><li> Controleer het niveau van sedatie door verhaal knijpen, en klik vervolgens het abdominale haar. Smeer de ogen met steriele oogzalf, en plaats de muis in een dorsale recumbence positie op een pad. Ontsmet de buik met betadine en alcohol pads. Cover de muis met een steriel laken en alleen de incisie gebied bloot. </li><li> Maak een middellijn laparotomie incisie van onder de xyphoid de suprapubische regio, en plaats een zelfborgend oprolmechanisme. Wikkel de darmen in een zoutoplossing bevochtigd gaas. Botweg de infrarenale aorta en vena cava definiëren. </li><li> Plaats twee micro vasculaire klemmen op zowel proximale en distale zijden van de aorta en vena cava dan botweg scheiden de aorta van de vena cava Transect de vena cava. Eventueel ligeren de abdominale aorta takken met een 10-0 monofilament hechtingen op conische naalden. </li><li> Implanteren van een vena cava inferior interpositie graft met proximale en distale einde aan anastomosen eindigen met een steriele 10-0 hechtdraad. Trim de graft, meestal 1-2 mm, afhankelijk van de anatomie van de muis. Bevestig het transplantaat met een steek aan beide proximale en distale einden en gaan continu hechten met 4-5 steken vanaf de andere zijde van het transplantaat. Na het afronden van de voorkant, draait u de klemmen en entenaan de andere kant en hechten de achterzijde van het transplantaat. Tijdens de implantatie, spoelt het transplantaat met heparine oplossing vaak acute trombose te voorkomen. </li><li> Verwijder de proximale klem en de controle van de bloeding door het toepassen van een actueel absorbeerbare steriele hemostaat middel. Wanneer de bloeding stopt helemaal, verwijder de distale klem en de controle van de bloeding op dezelfde manier. Zorg ervoor dat het bloed stroomt door het transplantaat. </li><li> Sluit de buikspieren en huid in twee lagen met een 6-0 zwart polyamide monofilament hechtdraad met de bijgeleverde schroefdraad naald. </li><li> Injecteer 0,5 ml zoutoplossing subcutaan en plaats de muis in een herstel kooi op een opwarming pad totdat de muis is volledig mobiel. Na herstel, de terugkeer van de muis om een ​​nieuwe kooi met papier beddengoed. Geef pijnstillers (Ibuprofen, 30 mg / kg, drinkwater) voor 48 uur. </li></ol>

<ol><li>Heart Association, A. merican <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Heart+Disease+and+Stroke+Statistics%E2%80%942012+Update%5BTitle%5D)+AND+%22Circulation%22%5BJournal%5D)">Heart Disease and Stroke Statistics—2012 Update.</a> Circulation. 125, (2012).</li>
<li>Shinoka, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Creation+Of+Viable+Pulmonary+Artery+Autografts+Through+Tissue+Engineering%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+Thoracic+and+Cardiovascular+Surgery%22%5BJournal%5D)">Creation Of Viable Pulmonary Artery Autografts Through Tissue Engineering.</a> The Journal of Thoracic and Cardiovascular Surgery. 115, 536-546 (1998).</li>
<li>Hibino, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Late-term+results+of+tissue-engineered+vascular+grafts+in+humans%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+Thoracic+and+Cardiovascular+Surgery%22%5BJournal%5D)">Late-term results of tissue-engineered vascular grafts in humans.</a> The Journal of Thoracic and Cardiovascular Surgery. 139, 431-436 (2010).</li>
<li>Shin'oka, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Midterm+clinical+result+of+tissue-engineered+vascular+autografts+seeded+with+autologous+bone+marrow+cells%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+Thoracic+and+Cardiovascular+Surgery%22%5BJournal%5D)">Midterm clinical result of tissue-engineered vascular autografts seeded with autologous bone marrow cells.</a> The Journal of Thoracic and Cardiovascular Surgery. 129, 1330-1338 (2005).</li>
<li>Brennan, M. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tissue-engineered+vascular+grafts+demonstrate+evidence+of+growth+and+development+when+implanted+in+a+juvenile+animal+model%5BTitle%5D)+AND+%22Ann+Surg%22%5BJournal%5D)">Tissue-engineered vascular grafts demonstrate evidence of growth and development when implanted in a juvenile animal model.</a> Ann Surg. 248, 370-377 (2008).</li>
<li>Roh, J. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Construction+of+an+autologous+tissue-engineered+venous+conduit+from+bone+marrow-derived+vascular+cells%3A+optimization+of+cell+harvest+and+seeding+techniques%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Pediatric+Surgery%22%5BJournal%5D)">Construction of an autologous tissue-engineered venous conduit from bone marrow-derived vascular cells: optimization of cell harvest and seeding techniques.</a> Journal of Pediatric Surgery. 42, 198-202 (2007).</li>
<li>Hibino, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tissue-engineered+vascular+grafts+form+neovessels+that+arise+from+regeneration+of+the+adjacent+blood+vessel%5BTitle%5D)+AND+%22The+FASEB+Journal%22%5BJournal%5D)">Tissue-engineered vascular grafts form neovessels that arise from regeneration of the adjacent blood vessel.</a> The FASEB Journal. 25, 2731-2739 (2011).</li>
<li>Hibino, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+critical+role+for+macrophages+in+neovessel+formation+and+the+development+of+stenosis+in+tissue-engineered+vascular+grafts%5BTitle%5D)+AND+%22The+FASEB+Journal%22%5BJournal%5D)">A critical role for macrophages in neovessel formation and the development of stenosis in tissue-engineered vascular grafts.</a> The FASEB Journal. 25, 4253-4263 (2011).</li>
<li>Naito, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Characterization+of+the+Natural+History+of+Extracellular+Matrix+Production+in+Tissue-Engineered+Vascular+Grafts+during+Neovessel+Formation%5BTitle%5D)+AND+%22Cells+Tissues+Organs%22%5BJournal%5D)">Characterization of the Natural History of Extracellular Matrix Production in Tissue-Engineered Vascular Grafts during Neovessel Formation.</a> Cells Tissues Organs. 195, 60-72 (2012).</li>
<li>Naito, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Beyond+Burst+Pressure%3A+Initial+Evaluation+of+the+Natural+History+of+the+Biaxial+Mechanical+Properties+of+Tissue+Engineered+Vascular+Grafts+in+the+Venous+Circulation+Using+a+Murine+Model%5BTitle%5D)+AND+%22Tissue+Eng.+Part+A%22%5BJournal%5D)">Beyond Burst Pressure: Initial Evaluation of the Natural History of the Biaxial Mechanical Properties of Tissue Engineered Vascular Grafts in the Venous Circulation Using a Murine Model.</a> Tissue Eng. Part A. 20, (2013).</li>
<li>Mirensky, T. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tissue-engineered+vascular+grafts%3A+does+cell+seeding+matter%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Pediatric+Surgery%22%5BJournal%5D)">Tissue-engineered vascular grafts: does cell seeding matter.</a> Journal of Pediatric Surgery. 45, 1299-1305 (2010).</li>
<li>Roh, J. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tissue-engineered+vascular+grafts+transform+into+mature+blood+vessels+via+an+inflammation-mediated+process+of+vascular+remodeling%5BTitle%5D)+AND+%22Proceedings+of+the+National+Academy+of+Sciences%22%5BJournal%5D)">Tissue-engineered vascular grafts transform into mature blood vessels via an inflammation-mediated process of vascular remodeling.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences. 107, 4669-4674 (2010).</li>
<li>Mirensky, T. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tissue-engineered+arterial+grafts%3A+long-term+results+after+implantation+in+a+small+animal+model%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Pediatric+Surgery%22%5BJournal%5D)">Tissue-engineered arterial grafts: long-term results after implantation in a small animal model.</a> Journal of Pediatric Surgery. 44, 1127-1133 (2009).</li>
<li>Lee, Y. U., Naito, Y., Kurobe, H., Breuer, C. K., Humphrey, J. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Biaxial+mechanical+properties+of+the+inferior+vena+cava+in+C57BL%2F6+and+CB-17+SCID%2Fbg+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Biomechanics%22%5BJournal%5D)">Biaxial mechanical properties of the inferior vena cava in C57BL/6 and CB-17 SCID/bg mice.</a> Journal of Biomechanics. 46, 2277-2282 (2013).</li>
</ol>

De auteurs hebben niets te onthullen.

Het muismodel van TEVG is een waardevol hulpmiddel om cellulaire en moleculaire mechanismen van neotissue vorming en de ontwikkeling van stenose bestuderen. De gezaaide BM-MNC werd getoond in zowel histologische en SEM beelden van de gezaaide cellen op het implantaat 11. Zaaien van cellen efficiëntie werd ook aangetoond met een DNA assay 7. Met dit modelsysteem we aangetoond dat zaaien van cellen verlaagde effect van de ontwikkeling van TEVG stenose, waarbij de primaire wijze van falen in onze mens...

Aangeboren hartafwijkingen zijn ernstige aandoeningen die bijna 8% van de levendgeborenen in de Verenigde Staten beïnvloeden. Ongeveer 25% van de zuigelingen met aangeboren hartafwijkingen of 2,4 per 1000 levend geboren, vereisen invasieve behandeling in het eerste jaar van hun leven 1. De meest effectieve behandeling voor aangeboren hartafwijkingen is reconstructieve chirurgie. Helaas, complicaties als gevolg van het gebruik van thans beschikbare vasculaire leidingen zijn de belangrijkste oorzaak van postoperatieve morbiditeit en mortaliteit. Om dit probleem aan te pakken, ontwikkelden we de eerste tissue engineered vaattransplantaten (TEVGs) voor klinisch gebruik 2. TEVGs werden opgebouwd uit biologisch afbreekbare polyester buizen bezaaid met autoloog beenmerg-cellen (BM-MNO&#39;s) en geïmplanteerd als veneuze leidingen voor congenitale hartchirurgie. De resultaten toonden een uitstekende doorgankelijkheid bij 1-3 jaar follow-up, maar met significante incidentie van stenose <sinschrijven&gt; 3,4. Het was duidelijk dat een beter begrip van vasculaire neotissue vorming en het mechanisme achter de ontwikkeling van TEVG stenose nodig is. Om beter inzicht in de ontwikkeling van TEVGs en het mechanisme van stenose ontwikkeling, werd een schaap model gecreëerd 5,6. In dit model, de TEVGs succes getransformeerd in levende schepen en waren vergelijkbaar in zowel morfologie en functie van natief aderen. Dit gebruik van een groot diermodel was een goede eerste stap deze belangrijke pre-klinische informatie die klinische gebruik van TEVGs geholpen. Echter volledig begrip van de cellulaire en moleculaire mechanismen van vasculaire neotissue formatie TEVGs met grote diermodellen beperkt gevolg van beperkingen in de moleculaire karakterisatie van vasculaire cel fenotypes gebrek aan soortspecifieke moleculaire technieken. Om deze tekortkomingen te overwinnen, een muizenmodel van TEVGs werd ontwikkeld op grond van de snelle vooruitgang in de muis genetica en hun uitgebreide molecular karakterisering met het extra voordeel van een kortere tijdschaal. De muizen IVC tussenplaatsing model getrouw recapituleerde de werkwijze neovessel formatie die voorkomt in grote dieren en mensen, maar over een veel kortere tijdsverloop 6-9. Hier, een gedetailleerd protocol voor kleinschalige graft fabricage gebruik van biologisch afbreekbare steigers, BM-MNC oogsten en isolatie, BM-MNC zaaien op steiger, en graft implantatie in een muismodel werden beschreven.

<table><tbody><tr><td>Polyglycolic acid (PGA) felt</td><td>Biomedical Structures</td><td></td><td>Op bestelling</td></tr><tr><td>Pipet tip, 0.1-10 &mu;l&nbsp;</td><td>Fisher Sientific</td><td>02-707-456</td><td></td></tr><tr><td>Lyophilizer&nbsp;</td><td>Labconco</td><td>7070020</td><td></td></tr><tr><td>RPMI medium 1604</td><td>Gibco</td><td>11875-093</td><td></td></tr><tr><td>Petri dish</td><td>BD</td><td>353003</td><td></td></tr><tr><td>24-well plate</td><td>Corning</td><td>3526</td><td></td></tr><tr><td>15 cc tube&nbsp;</td><td>BD</td><td>352096</td><td></td></tr><tr><td>Ficoll</td><td>Sigma</td><td>10831-100ml</td><td>Ook wel 'Histopaque' genoemd</td></tr><tr><td>DPBS</td><td>Gibco</td><td>14190-144</td><td></td></tr><tr><td>Littauer botensnijder 4.5" Straight</td><td>Roboz</td><td>RS-8480</td><td>Voor BM harvesting</td></tr><tr><td>Forceps 4.5"</td><td>Roboz</td><td>RS-8120</td><td>Voor BM harvesting</td></tr><tr><td>Schaar 4.5"</td><td>Roboz</td><td>RS-5912</td><td>Voor BM harvesting</td></tr><tr><td>Microscoop</td><td>Leica</td><td>M80</td><td></td></tr><tr><td>C57BL/6J (H-2b), Female</td><td>Jackson Laboratories</td><td>664</td><td>8-12 weken</td></tr><tr><td>Ketamine hydrochloride injectie</td><td>Hospira Inc.</td><td>NDC 0409-2053</td><td></td></tr><tr><td>Xylazine steriele oplossing</td><td>Akorn Inc.</td><td>NADA# 139-236</td><td></td></tr><tr><td>Ketoprofen</td><td>Fort Dodge Animal Health</td><td>NDC 0856-4396-01</td><td></td></tr><tr><td>Ibuprofen</td><td>PrecisionDose</td><td>NDC 68094-494-59</td><td></td></tr><tr><td>Heparine natrium</td><td>Sagent Pharmaceticals</td><td>NDC 25021-400</td><td></td></tr><tr><td>Zoutenoplossing (steriele 0,9% natriumchloride)</td><td>Hospira Inc.</td><td>NDC 0409-0138-22</td><td></td></tr><tr><td>0,9% Natriumchloride-injectie</td><td>Hospira Inc.</td><td>NDC 0409-4888-10</td><td></td></tr><tr><td>Petrolatum oogzalf</td><td>Dechra Veterinary Products</td><td>NDC 17033-211-38</td><td></td></tr><tr><td>Jodium voorbereidingspads</td><td>Triad Disposables, Inc.</td><td>NDC 50730-3201-1</td><td></td></tr><tr><td>Alcohol voorbereidingspads</td><td>McKesson Corp.</td><td>NDC 68599-5805-1</td><td></td></tr><tr><td>Wattenstaafjes met opzet</td><td>Fisher Scientific</td><td>23-400-118</td><td></td></tr><tr><td>Fijne schaar</td><td>FST</td><td>14028-10</td><td></td></tr><tr><td>Micro-adson forceps</td><td>FST</td><td>11018-12</td><td></td></tr><tr><td>Klemapplicateur</td><td>FST</td><td>00072-14</td><td></td></tr><tr><td>S&amp;T Vasculaire klem</td><td>FST</td><td>00396-01</td><td></td></tr><tr><td>Veer schaar</td><td>FST</td><td>15008-08</td><td></td></tr><tr><td>Colibri retractors</td><td>FST</td><td>17000-04</td><td></td></tr><tr><td>Dumont #5 forceps</td><td>FST</td><td>11251-20</td><td></td></tr><tr><td>Dumont #7 - fijne forceps</td><td>FST</td><td>11274-20</td><td></td></tr><tr><td>Dumont #5/45 forceps</td><td>FST</td><td>11251-35</td><td></td></tr><tr><td>Tish naaldhouder/forceps</td><td>Micrins</td><td>MI1540</td><td></td></tr><tr><td>Zwarte polyamide monofilament hechtdraad, 10-0</td><td>AROSurgical Instruments Corporation</td><td>TI638402</td><td>Voor het vasthechten van het transplantaat</td></tr><tr><td>Zwarte polyamide monofilament hechtdraad, 6-0</td><td>AROSurgical Instruments</td><td>SN-1956</td><td>Voor sluiting van de musculatuur en de huid</td></tr><tr><td>Niet-geweven sponzen</td><td>McKesson Corp.</td><td>94442000</td><td></td></tr><tr><td>Absorbeerbaar hemostaat</td><td>Ethicon</td><td>1961</td><td></td></tr><tr><td>1 ml spuit</td><td>BD</td><td>309659</td><td></td></tr><tr><td>3 ml spuit</td><td>BD</td><td>309657</td><td></td></tr><tr><td>10 ml spuit</td><td>BD</td><td>309604</td><td></td></tr><tr><td>18 G 1,5 inch, Naald</td><td>BD</td><td>305190</td><td></td></tr><tr><td>25 G 1 inch, Naald</td><td>BD</td><td>305125</td><td></td></tr><tr><td>30 G 1 inch, Naald</td><td>BD</td><td>305106</td><td></td></tr><tr><td>Warmwaterrecirculator</td><td>Gaymar</td><td>TP-700</td><td></td></tr><tr><td>Verwarmde pad</td><td>Gaymar</td><td>TP-22G</td><td></td></tr><tr><td>Trimmer</td><td>Wahl</td><td>9854-500</td><td></td></tr></tbody></table>

implantatie van de vena cava inferior interpositie graft in muismodel

Implantation of Inferior Vena Cava Interposition Graft in Mouse Model

Biologisch afbreekbare scaffolds geënt beenmerg mononucleaire cellen (BMCs) worden vaak gebruikt voor reconstructieve chirurgie aangeboren hartafwijkingen te behandelen. De lange-termijn klinische resultaten toonden uitstekende doorgankelijkheid, echter met significante incidentie van stenose. Naar de cellulaire en moleculaire mechanismen van vasculaire neotissue vorming te onderzoeken en te voorkomen stenose ontwikkeling in weefselmanipulatieproduct vaattransplantaten (TEVGs), ontwikkelden we een muismodel van het transplantaat met ongeveer 1 mm binnendiameter. Eerst werden de TEVGs samengesteld uit biologisch afbreekbare buisvormige steigers vervaardigd van een polyglycolzuur geweven vilt gaas bekleed met ε-caprolacton en L-lactide copolymeer. De steigers werden vervolgens in een vriesdroger, opgezogen voor 24 uur, en opgeslagen in een exsiccator tot zaaien van cellen. Ten tweede, werd beenmerg vanuit donor muizen en mononucleaire cellen werden geïsoleerd door dichtheidsgradiënt centrifugatie. Ten derde, ongeveer een miljoen cellengezaaid op een steiger en geïncubeerd O / N Tenslotte werden de gezaaide steigers geïmplanteerd als infrarenale vena cava tussenvoeging enten in C57BL / 6 muizen. De geïmplanteerde grafts aangetoond uitstekende doorgankelijkheid (&gt; 90%) zonder bewijs van trombo-embolische complicaties of aneurysma vorming. Dit muizenmodel zal ons helpen bij het begrijpen en kwantificeren van de cellulaire en moleculaire mechanismen van neotissue formatie in de TEVG.

Een schema van TEVG implantatie wordt getoond in figuur 1. Beenmerg werd geoogst uit een donor muis en mono-nucleaire cellen werden geïsoleerd met behulp van dichtheidsgradiënt centrifugatie en vervolgens gezaaid op een biologisch afbreekbare scaffold. De geplaatste steigers werden gedurende O / N en geïmplanteerd om een ​​ontvanger muis als een inferieure vena cava interpositie graft. Figuur 2 illustreert de scanning elektronen microscopie van PGA-P (CL / L...

Om onze kennis van cellulaire en moleculaire neotissue vorming te verbeteren, werd een muizenmodel van het TEVG recent ontwikkelde. De transplantaten werden geïmplanteerd infrarenale vena cava tussenvoeging enten in C57BL / 6 muizen. Dit model behaalt dezelfde resultaten als die bereikt bij onze klinische onderzoek, maar over een veel kortere tijd-cursus.

Implantatie van de vena cava inferior Interpositie Graft in muismodel

Biodegradable scaffolds seeded with bone marrow mononuclear cells (BMCs) are often used for reconstructive surgery to treat congenital cardiac anomalies. ...

Het algemene doel van deze procedure is het onderzoeken van de cellulaire en moleculaire mechanismen van nieuw weefselvorming en de ontwikkeling van stenose in tissue-engineered vasculaire grafts. Eerst worden biologisch afbreekbare tubulaire scaffolds geassembleerd door niet-geweven vilt van polyglycolzuur te coaten met een epsilon-caprolacton en L-lactide copolymeer. De volgende stappen bestaan uit het oogsten van beenmerg en het isoleren van de mononucleaire cellen via dichtheidsgradiëntcentrifugatie.Vervolgens worden ongeveer 1 miljoen cellen op het scaffold gezaaid en worden deze een nacht geïncubeerd. De laatste stap is het implanteren van het gezaaide scaffold als een interpositiegraft van de vena cava inferior. Uiteindelijk kunnen de resultaten via immunohistochemie celinfiltratie en depositie van de extracellulaire matrix in de weefseltechnisch vervaardigde vasculaire graft aantonen.De implicaties van deze techniek zijn om beter te begrijpen wat de oorzaak is van de vorming van stenose in weefseltechnische vasculaire grafts, om deze informatie vervolgens te gebruiken bij het ontwerpen van een betere weefseltechnische vasculaire graft. Uit onze klinische studie bleek dat bi

implantation-of-inferior-vena-cava-interposition-graft-in-mouse-model

Research

JoVE Journal

Medicine

Geneeskunde

De muis heterotope harttransplantatie model is bewezen door vele onderzoekers een belangrijke methode voor het bestuderen van de mechanismen van de afwijzing en immuunrespons worden. Echter, de betrokken technieken zijn nog steeds uitdagend. Door het wijzigen van standaard technieken die we hebben succes gehad met meer dan 1000 transplantaties.

Heterotope harttransplantatie in Muizen

Om de cellulaire en moleculaire mechanismen die ten grondslag liggen neotissue vorming en stenose ontwikkeling in tissue engineered hartkleppen begrijpen, een muizenmodel van heterotopische hartklep transplantatie werd ontwikkeld. Een pulmonale hartklep werd getransplanteerd naar ontvanger via de heterotopische harttransplantatie techniek.

Transplantatie van Pulmonary Valve een muis model van Heterotope Heart Transplantation

De manchettechniek verkort en vergemakkelijkt het model van heterotope cervicale harttransplantatie bij muizen door technisch uitdagende hechtingsanastomosen van kleine bloedvaten te vermijden. De technische details die in dit videopapier worden getoond, zouden onderzoekers in staat moeten stellen dit model in hun laboratoria tot stand te brengen.

Heterotopische Cervical harttransplantatie in Muizen

Deze video demonstreert een model om de ontwikkeling van myointimale hyperplasie na veneuze interpositiechirurgie bij ratten te bestuderen.

Vein Interpositie Model: Een geschikt model om te studeren Bypass Graft Patency

Het huidige protocol is gericht op het experimenteel creëren van veneuze intimale hyperplasie door het onderwerpen van aderen aan arteriële bloeddruk voor het ontwikkelen van strategieën om veneuze intimale hyperplasie te verzachten na revascularisatie chirurgie met behulp van adergrafts.

Een konijn veneuze interposition model nabootsen revascularisatie chirurgie met behulp van ader grafts te beoordelen Intimal Hyperplasie onder arteriële bloeddruk

Een nieuwe techniek voor bloedcircuitreconstructie in een heterotopisch abdominale muisharttransplantatiemodel wordt gedemonstreerd.

Bloedcircuitreconstructie in een abdominale muis harttransplantatiemodel

Harttransplantatiemodellen bij muizen vertegenwoordigen waardevolle onderzoeksinstrumenten voor het bestuderen van de immunologie van transplantaties. Het huidige protocol beschrijft muis heterotopische cervicale harttransplantatie waarbij manchetten op de gemeenschappelijke halsslagader van de ontvanger en de longslagaderstam van de donor worden geplaatst om laminaire bloedstroom mogelijk te maken.

Muis heterotopische cervicale harttransplantatie met behulp van vasculaire manchetten

Dit protocol biedt technische informatie voor vatreconstructie met behulp van de manchettechniek bij orthotope levertransplantatie bij muizen.

Vasculaire reconstructie met de manchettechniek bij orthotope levertransplantatie bij muizen

Hier wordt een protocol gepresenteerd voor de implantatie van een weefselgemanipuleerd vasculair transplantaat in de halsslagader van de muis met behulp van de manchettechniek, waardoor een geschikt diermodel wordt geboden voor het onderzoeken van mechanismen voor de regeneratie van vasculair weefsel.

Implantatie van weefselgemanipuleerd vasculair transplantaat in de halsslagader van muizen via manchettechniek

We presenteren een reproduceerbaar muismodel van heterotopische vascularisatie allotransplantatie van achterpoot tot hals. Dit supermicrochirurgisch protocol, waarbij 0,3-0,5 mm vatenanastomosen worden gebruikt, integreert nylonfilamentgeleiding en veneuze manchetten. Het biedt een betrouwbaar platform voor translationele studies naar tolerantie, ischemie-reperfusieschade en immunologische mechanismen bij vasculariseerde samengestelde allotransplantatie.

Heterotopische achterpoot-naar-nek transplantatie bij de muis: een supermicrochirurgisch model van vasculariseerde composietallotransplantatie

Leer de implantatie van een weefsel-geïnspireerde vaatgraft in de vena cava inferior van muizen. Deze methode onderzoekt celinfiltratie en matrixafzetting om stenosevorming te begrijpen.

Implantatie van de vena cava inferior Interpositie Graft in muismodel

Meer video's verkennen