Name: SIVQ-LCM protocol voor de ArcturusXT Instrument (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2014-07-23T14:00:00.000+00:00
Duration: 7 min 37 s
Description: Leer het SIVQ-LCM-protocol voor laser capture microdissectie met de ArcturusXT-instrumentatie. Deze methode combineert beeldanalyse met gerichte weefseldissectie voor snelle moleculaire analyse.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Het onderzoek werd mede ondersteund door de Intramurale Research Program van de National Institutes of Health, National Cancer Institute, Center for Cancer Research.

De beschreven protocol werd toegepast volgens NIH regels voor het gebruik van menselijke weefselmonsters. 1. Tissue Voorbereiding <ol><li> Voorafgaand aan het begin, het verkrijgen van menselijke weefselmonsters volgens Institutional Review Board (IRB)-protocollen. </li><li> Kies het type weefsel / cel blok en bijbehorende verwerkingsmethode [formaline gefixeerde in paraffine ingebedde (FFPE), bevroren of-ethanol vaste paraffine ingebedde (EFPE)]. Formalinefixatie biedt optimale histologie, gevolgd door ethanol fixatie en flash bevroren. Echter, fixatie en weefsel verwerkingsmethoden invloed DNA, RNA en eiwitten kwantiteit en kwaliteit voor stroomafwaartse moleculaire analyse en moet worden beschouwd. </li><li> Snijd het weefsel / celblok secties op het glaasje soort (glas, membraan glas of metalen frame membraan) van keuze. SIVQ analyse werkt even goed op alle drie de typen dia. Let op: de pseudo-dekglaasje methode (hieronder beschreven) met xylenen en Ethanol kan niet worden uitgevoerd op het metalen membraan dia omdat de slede moet worden omgekeerd op het podium. </li><li> Selecteer een chemisch of IHC-gebaseerde weefsels vlek cellen van belang te identificeren van de achtergrond. Let kleuringen kan ook van invloed DNA, RNA en eiwitten kwaliteit en kwantiteit van het weefsel. Test het weefsel na kleuring met de uitgangswaarde kwaliteit van biomoleculen te beoordelen alvorens het protocol. SIVQ-LCM is uitgevoerd op weefsel / cytologie dia gekleurd met: immunohistochemie (IHC) met DAB 15, immunofluorescentie, snel rood, de novo rood, toluïdineblauw en hematoxyline en eosine (H &amp; E) (ongepubliceerde gegevens). </li></ol> 2. Specimen Imaging <ol><li> Belasting glijdt op de gemotoriseerde fase van de microdissection instrument en start de bijbehorende software. Selecteer de selectievakjes om de posities van de geladen dia aanwijzen en zorgen voor de opname bestanden zijn in jpeg-formaat worden opgeslagen. </li><li> Optimaliseer de imleeftijd kwaliteit door het aanpassen van de helderheid en scherpte van het beeld op het scherm, met behulp van de handmatige scherpstelling wiel of via de software van de dissectie instrument. <ol><li> Werken met Image Toolbox software binnen de dissectie instrument, de helderheid en de camera lamp gain gepast. Voorbeeld waarden zijn helderheid = 60 en gain = 220, met de diffuser. </li><li> Focus handmatig of met de functie autofocus in de software. </li></ol></li><li> Leg een thumbnail overzicht beeld van de dia om een ​​routekaart voor de dissectie proces. <ol><li> Voor een optimaal beeld van een uncoverslipped dia, gebruik de diffuser onder de condensor op het instrument, of een kleine hoeveelheid (~ 30 pi) van ofwel ethanol of xylenen de vuurvaste index (pseudo-dekglaasje) verbeteren. Bij het gebruik van xyleen, zich bewust zijn ze giftig en de juiste veiligheidsmaatregelen moeten worden gebruikt, waaronder het gebruik van een afzuigkap en beschermende laboratoriumjas, stofbril en handschoenen. </li><li> Vinden niet plaats totdat de ethanol of xylenen oplossing is volledig gewist of het polymeer op de dop zal worden vervormd de LCM dop op de dia. </li></ol></li><li> Navigeren door de glijbaan en foto&#39;s maken van de gebieden die moeten worden ontleed op 10X, 20X of 40X vergroting. Indien nodig, het imago met software zoals AutoCorrectie (in Microsoft Office Picture Manager) zoals eerder beschreven 22. Afbeeldingen moeten worden vastgelegd in jpeg-formaat, zodat ze opnieuw worden ingevoerd in de geautomatiseerde selectie software. </li></ol> 3. Algoritme analyse van het beeld <ol><li> Transfer gevangen beelden van de microdissection instrument om de map SIVQ. Installeer en open de ArcturusXT, AutoScan en SIVQ software pakketten op de computer aangesloten op de dissectie instrument. Voor toegang tot de SIVQ software kunt u contact opnemen met Dr Ulysses Balis (ulysses@med.umich.edu). </li><li> Open SIVQ en laad het vastgelegde beeld (jpeg) van belang. &lt;/ Li&gt; <li> Ga naar het gebied van rente en / of de grootte van de etalages (Viewport 5 &amp; 6). In de SIVQ software, Viewport 5 imago van de pre-processing toont en de post-processing image 16 Viewport 6 toont. </li><li> Kies de grootte van de ring vector, aantal ringen te gebruiken. </li><li> Selecteer het predikaat afbeelding functie worden vastgelegd door rechts te klikken op het in Viewport 6. </li><li> Klik op &quot;scan&quot; om het beeld te analyseren. </li><li> Pas de statistische kans op afbeelding matching met behulp van de twee schuifbalken. De bovenste balk stelt het geheel vector specificiteit, en wordt gebruikt om ruimte te sluiten van de eerste scan (met gevoeligheid gedefinieerd door het geselecteerde &quot;Stat&quot; variabel) dat overmatig opgenomen gebied kan vertegenwoordigen. Omgekeerd wordt de onderste schuif gebruikt om de gevoeligheid te verhogen na een scan wordt uitgevoerd met de bedoeling van toenemende gebied dat is geclassificeerd als een spel. Beide schuifregelaars utilize de &quot;Stat&quot; variabele als de nulmeting gevoeligheid drempel. </li><li> Om de afbeelding op te slaan, klikt u op &quot;opslaan als jpeg&quot; (afbeelding wordt nu in c :/ vq_test map / pics opgeslagen). </li><li> Analyseer de afbeelding met het algoritme. De output van het algoritme analyse moet resulteren in een geannoteerde beeld om te worden gebruikt in SIVQ-LCM. Op dit moment is de huidige versie van de SIVQ kern motor is in beta versie testen met de verwachting dat de volledige productie versie (beschikbaar Q1 2014) een volledige software development kit (SDK) en application programming interface (API) zullen worden opgenomen voor een vereenvoudigde integratie van user-generated ruimtelijke filters en downstream workflow gegevensverwerking stappen met de kern ring matching engine. Deze SDK zal worden verdeeld met een complete set documentatie. <ol><li> Zorg ervoor dat de SIVQ heatmap wordt gewijzigd in een uniforme kleur. </li></ol></li><li> Exporteer de afbeelding. Het is essentieel om opnieuw verankeren de positie coördinaten in de post-analyse jpeg afbeelding met behulp van een hex-editor te plakken in de header van het imago van de oorspronkelijke dissectie instrument. De juiste gegevens kunnen worden gevonden tussen &quot;Begin van Beeld&quot; marker (0xFF, 0xD8) en de eerste &quot;Definieer kwantisatietabel&quot; marker (0xFF, 0xDB). </li></ol> 4. Microdissection <ol><li> Plaats de LCM dop in het midden van het gebied van belang, waar de beelden werden vastgelegd voor de SIVQ analyse. </li><li> Kalibreren en Quality Control (QC) de UV / IR lasers en optimaliseren van de parameters, waaronder kracht, duur, laser locaties en UV snijsnelheid (zoals aanbevolen door de fabrikant). Voer deze kalibraties voor het opnieuw importeren van de geanalyseerde afbeelding. </li><li> Open AutoScanXT (geautomatiseerde selectie software) en importeer de geanalyseerde afbeelding van c :/ vq_test map / pics. </li><li> Train de geautomatiseerde selectie software om de SIVQ annotatie herkennen en creëren de dissectie kaart. <ol><li> Om een ​​trai makenNing bestand, selecteer vier regio&#39;s van belang (gekenmerkt door &quot;blauwe cirkels&quot;) op de &quot;rode verf&quot; van de SIVQ geanalyseerde afbeelding. </li><li> Selecteer de achtergrond gebieden (gemarkeerd met &quot;rode vierkanten&quot;) die niet worden ontleed. </li><li> Klik op de knop &quot;Analyseren&quot; om de opleiding bestand, dat kan worden opgeslagen voor latere toepassingen te genereren. </li></ol></li><li> Voer microdissectie met de juiste infrarood (IR) en / of ultraviolet (UV)-lasers. <ol><li> Kopieer de geselecteerde gebieden op de &#39;live&#39; beeld. </li><li> In de &quot;microdissect&quot; toolbox, selecteer de juiste IR vangen of UV snijden knoppen. </li></ol></li><li> Na de dissectie is voltooid, zet u de LCM dop om de QC-station en vastleggen van een beeld van de ontleed weefsel / cellen. Een andere benadering is om de kap te plaatsen op een leeg gebied van de dia voorafgaand aan het aan de QC-station verplaatsen, dit stelt de gebruiker in staat om foto&#39;s te maken bij diverse vergrotingen. </li><li>Maak een foto van het weefsel gebied van belang na microdissection om verder te beoordelen tillen efficiëntie. </li><li> Als de gewenste cellen met succes zijn ontleed, klik op de &quot;huidige fase&quot; knop in de ArcturusXT software en verwijder de LCM dop tot inleiding van de moleculaire extractie procedure voor downstream analyse. </li></ol>

<ol><li>Bonner, R. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Laser+capture+microdissection%3A+molecular+analysis+of+tissue%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Laser capture microdissection: molecular analysis of tissue.</a> Science. 278, 1481-1483 (1997).</li>
<li>Emmert-Buck, M. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Laser+capture+microdissection%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Laser capture microdissection.</a> Science. 274, 998-1001 (1996).</li>
<li>Edwards, R. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Laser+capture+microdissection+of+mammalian+tissue%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Laser capture microdissection of mammalian tissue.</a> J Vis Exp. (8), (2007).</li>
<li>El-Serag, H. B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Gene+expression+in+Barrett%27s+esophagus%3A+laser+capture+versus+whole+tissue%5BTitle%5D)+AND+%22Scandinavian+journal+of+gastroenterology%22%5BJournal%5D)">Gene expression in Barrett's esophagus: laser capture versus whole tissue.</a> Scandinavian journal of gastroenterology. 44, 787-795 (2009).</li>
<li>Espina, V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Laser-capture+microdissection%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Laser-capture microdissection.</a> Nature. 1, 586-603 (2006).</li>
<li>Harrell, J. C., Dye, W. W., Harvell, D. M., Sartorius, C. A., Horwitz, K. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Contaminating+cells+alter+gene+signatures+in+whole+organ+versus+laser+capture+microdissected+tumors%3A+a+comparison+of+experimental+breast+cancers+and+their+lymph+node+metastases%5BTitle%5D)+AND+%22Clinical+%26+experimental+metastasis%22%5BJournal%5D)">Contaminating cells alter gene signatures in whole organ versus laser capture microdissected tumors: a comparison of experimental breast cancers and their lymph node metastases.</a> Clinical & experimental metastasis. 25, 81-88 (2008).</li>
<li>Rodriguez-Canales, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Optimal+molecular+profiling+of+tissue+and+tissue+components%3A+defining+the+best+processing+and+microdissection+methods+for+biomedical+applications%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+in+molecular+biology%22%5BJournal%5D)">Optimal molecular profiling of tissue and tissue components: defining the best processing and microdissection methods for biomedical applications.</a> Methods in molecular biology. 980, 61-120 (2013).</li>
<li>Silvestri, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Protein+pathway+biomarker+analysis+of+human+cancer+reveals+requirement+for+upfront+cellular-enrichment+processing%5BTitle%5D)+AND+%22Laboratory+investigation%3B+a+journal+of+technical+methods+and+pathology%22%5BJournal%5D)">Protein pathway biomarker analysis of human cancer reveals requirement for upfront cellular-enrichment processing.</a> Laboratory investigation; a journal of technical methods and pathology. 90, 787-796 (2010).</li>
<li>Eberle, F. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Immunoguided+laser+assisted+microdissection+techniques+for+DNA+methylation+analysis+of+archival+tissue+specimens%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+molecular+diagnostics+%3A+JMD%22%5BJournal%5D)">Immunoguided laser assisted microdissection techniques for DNA methylation analysis of archival tissue specimens.</a> The Journal of molecular diagnostics : JMD. 12, 394-401 (2010).</li>
<li>Kim, H. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Distinctions+in+gastric+cancer+gene+expression+signatures+derived+from+laser+capture+microdissection+versus+histologic+macrodissection%5BTitle%5D)+AND+%22BMC+medical+genomics%22%5BJournal%5D)">Distinctions in gastric cancer gene expression signatures derived from laser capture microdissection versus histologic macrodissection.</a> BMC medical genomics. 4, 48(2011).</li>
<li>Klee, E. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Impact+of+sample+acquisition+and+linear+amplification+on+gene+expression+profiling+of+lung+adenocarcinoma%3A+laser+capture+micro-dissection+cell-sampling+versus+bulk+tissue-sampling%5BTitle%5D)+AND+%22BMC+medical+genomics%22%5BJournal%5D)">Impact of sample acquisition and linear amplification on gene expression profiling of lung adenocarcinoma: laser capture micro-dissection cell-sampling versus bulk tissue-sampling.</a> BMC medical genomics. 2, 13(2009).</li>
<li>Zheng, J., Garg, S., Wang, J., Loose, D. S., Hauer-Jensen, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Laser+capture+microdissected+mucosa+versus+whole+tissue+specimens+for+assessment+of+radiation-induced+dynamic+molecular+and+pathway+changes+in+the+small+intestine%5BTitle%5D)+AND+%22PloS+one%22%5BJournal%5D)">Laser capture microdissected mucosa versus whole tissue specimens for assessment of radiation-induced dynamic molecular and pathway changes in the small intestine.</a> PloS one. 8, e53711(2013).</li>
<li>Boone, D. R., Sell, S. L., Hellmich, H. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Laser+capture+microdissection+of+enriched+populations+of+neurons+or+single+neurons+for+gene+expression+analysis+after+traumatic+brain+injury%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Laser capture microdissection of enriched populations of neurons or single neurons for gene expression analysis after traumatic brain injury.</a> J Vis Exp. (74), (2013).</li>
<li>Iyer, E. P., Cox, D. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Laser+capture+microdissection+of+Drosophila+peripheral+neurons%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Laser capture microdissection of Drosophila peripheral neurons.</a> J Vis Exp. (39), (2010).</li>
<li>Hipp, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((SIVQ-aided+laser+capture+microdissection%3A+A+tool+for+high-throughput+expression+profiling%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+pathology+informatics%22%5BJournal%5D)">SIVQ-aided laser capture microdissection: A tool for high-throughput expression profiling.</a> Journal of pathology informatics. 2, 19(2011).</li>
<li>Hipp, J. D., Cheng, J. Y., Toner, M., Tompkins, R. G., Balis, U. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Spatially+Invariant+Vector+Quantization%3A+A+pattern+matching+algorithm+for+multiple+classes+of+image+subject+matter+including+pathology%5BTitle%5D)+AND+%22J+Pathol+Inform%22%5BJournal%5D)">Spatially Invariant Vector Quantization: A pattern matching algorithm for multiple classes of image subject matter including pathology.</a> J Pathol Inform. 2, 13(2011).</li>
<li>Hipp, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Optimization+of+complex+cancer+morphology+detection+using+the+SIVQ+pattern+recognition+algorithm%5BTitle%5D)+AND+%22Anal+Cell+Pathol+%28Amst%29%22%5BJournal%5D)">Optimization of complex cancer morphology detection using the SIVQ pattern recognition algorithm.</a> Anal Cell Pathol (Amst). , (2011).</li>
<li>Hipp, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Integration+of+architectural+and+cytologic+drive+n+image+algorithms+for+prostate+adenocarcinoma+identification%5BTitle%5D)+AND+%22Analytical+cellular+pathology%22%5BJournal%5D)">Integration of architectural and cytologic drive n image algorithms for prostate adenocarcinoma identification.</a> Analytical cellular pathology. 35, 251-265 (2012).</li>
<li>Hipp, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Automated+area+calculation+of+histopathologic+features+using+SIVQ%5BTitle%5D)+AND+%22Anal+Cell+Pathol+%28Amst%22%5BJournal%5D)">Automated area calculation of histopathologic features using SIVQ.</a> Anal Cell Pathol (Amst. 34, (2011).</li>
<li>Cheng, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Automated+vector+selection+of+SIVQ+and+parallel+computing+integration+MATLAB%3A+Innovations+supporting+large-scale+and+high-throughput+image+analysis+studies%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+pathology%22%5BJournal%5D)">Automated vector selection of SIVQ and parallel computing integration MATLAB: Innovations supporting large-scale and high-throughput image analysis studies.</a> Journal of pathology. 2, 37(2011).</li>
<li>Roy Chowdhuri, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Semiautomated+laser+capture+microdissection+of+lung+adenocarcinoma+cytology+samples%5BTitle%5D)+AND+%22Acta+Cytol%22%5BJournal%5D)">Semiautomated laser capture microdissection of lung adenocarcinoma cytology samples.</a> Acta Cytol. 56, 622-631 (2012).</li>
<li>Hipp, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Image+Microarrays+%28IMA%29%3A+Digital+Pathology%27s+Missing+Tool%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+pathology%22%5BJournal%5D)">Image Microarrays (IMA): Digital Pathology's Missing Tool.</a> Journal of pathology. 2, (2011).</li>
<li>Hanson, J. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Expression+microdissection+adapted+to+commercial+laser+dissection+instruments%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Expression microdissection adapted to commercial laser dissection instruments.</a> Nature. 6, 457-467 (2011).</li>
</ol>

Michael R. Emmert-Buck is een uitvinder op NIH-held patenten die lasermicrodissectie en ontvangt op basis van royalty betalingen door de NIH Technology Transfer Program.

We presenteren een protocol voor de toepassing van SIVQ-LCM om immuun-epitheliale cellen van FFPE menselijk borstweefsel microdissect. Het gebruik van een beeldanalyse algoritme, zoals SIVQ, vermindert de hands-on tijd die het proces microdissectie. Dit is een potentieel belangrijke stap vooruit voor het gebied sinds operator tijd en moeite is meestal de snelheidsbeperkende stap voor de precieze ontleding van cellen van belang. In dit protocol is specifiek onze procedure aangepast aan de ArcturusXT instrument, hoewel he...

Oorspronkelijk ontwikkeld in het midden van de jaren 1990, lasermicrodissectie (LCM) kan de gebruiker specifieke cellen of cellulaire gebieden van een histologische sectie weefsel via microscopische visualisatie 1, 2 nauwkeurig vast te leggen. Vele studies waarin moleculaire analyse van LCM versus weefsel krassen illustreren de waarde van de methode 3-12. Daarnaast zijn er drie video-protocol publicaties welke technologie beschikbaar voor het bekijken 13, 14 zijn. Ondanks de bewezen waarde, LCM kan vervelend en moeizaam wanneer het doelwit van belang een gedispergeerde celpopulatie in een heterogene weefselsectie of wanneer grote aantallen cellen voor specifieke stroomafwaartse toepassingen zoals proteomics. De lasten voor de menselijke operator leidde ons naar een semi-automatische ontleding aanpak voor LCM ontwikkelen door de combinatie van een krachtige beeldanalyse algoritme om de LCM-proces 15 begeleiden. &lt;p class = &quot;jove_content&quot;&gt; In samenwerking met de Universiteit van Michigan, ons laboratorium aan de NIH uitgebreid de eerder ontwikkelde en gerapporteerd Ruimtelijk invariant vector quantisatie (SIVQ) algoritme op een manier om het te laten semi-automatiseren van het weefsel selectieproces inherent aan begeleide microdissection leveren zodoende een tool met de patholoog of leven wetenschapper in het achterhoofd. Ruimtelijk invariante vector quantisatie (SIVQ) is een algoritme waarmee de gebruiker eenvoudig &quot;klik&quot; op een histologische kenmerk van belang om een ​​ring vector (predikaat image functie) die kan worden gebruikt om de gehele afbeelding histologische zoeken creëren, aanpassen van de statistische drempel als nodig 16-21. De resulterende hitte kaart geeft de kwaliteit van de wedstrijden om de eerste afbeelding predikaat functie en wordt vervolgens omgezet in een enkele kleur (rood) annotatie kaart die in de LCM instrument kan worden geïmporteerd. De geautomatiseerde selectie software, AutoScanXT, wordt dan gebruikt om een ​​kaart op basis van tekenenop SIVQ&#39;s annotatie begeleiden van de vangst van de doelcellen van het weefselmonster. De gedetailleerde protocol hieronder beschrijft de uitvoering van SIVQ in de microdissection workflow.

<table><tbody><tr><td>Positive Charged Glass Slides</td><td>Thermo Scientific</td><td>4951Plus-001</td><td></td></tr><tr><td>Xylenes, ACS reagent, &ge;98.5% xylenes + ethylbenzene basis&nbsp;</td><td>Sigma Aldrich</td><td>247642</td><td>VOORZICHTIG: GEBRUIK VOOR HET ZICHTBAAR GEBRUIK DE GEBRUIK VAN DE GEBRUIK VAN DE GEBRUIK VAN DE GEBRUIK VAN DE GEBRUIK VAN DE GEBRUIK VAN DE GEBRUIK VAN DE GEBRUIK VAN DE GEBRUIK VAN DE GEBRUIK VAN DE GEBRUIK VAN DE GEBRUIK VAN DE GEBRUIK VAN DE GEBRUIK VAN DE GEBRUIK VAN DE GEBRUIK VAN DE GEBRUIK VAN DE GEBRUIK VAN DE GEBRUIK VAN DE GEBRUIK VAN DE GEBRUIK VAN DE GEBRUIK VAN DE GEBRUIK VAN DE GEBRUIK VAN DE GEBRUIK VAN DE GEBRUIK VAN DE GEBRUIK VAN DE GEBRUIK VAN DE GEBRUIK VAN DE GEBRUIK VAN DE GEBRUIK VAN DE GEBRUIK VAN DE GEBRUIK VAN DE GEBRUIK VAN DE GEBRUIK VAN DE GEBRUIK VAN DE GEBRUIK VAN DE GEBRUIK VAN DE GEBRUIK VAN DE GEBRUIK VAN DE GEBRUIK VAN DE GEBRUIK VAN DE GEBRUIK VAN DE GEBRUIK VAN DE GEBRUIK VAN DE GEBRUIK VAN DE GEBRUIK VAN DE GEBRUIK VAN DE GEBRUIK VAN DE GEBRUIK VAN DE GEBRUIK VAN DE GEBRUIK VAN DE GEBRUIK VAN DE GEBRUIK VAN DE GEBRUIK VAN DE GEBRUIK VAN DE GEBRUIK VAN DE GEBRUIK VAN DE GEBRUIK VAN DE GEBRUIK VAN DE GEBRUIK VAN DE GEBRUIK VAN DE GEBRUIK VAN DE GEBRUIK VAN DE GEBRUIK VAN DE GEBRUIK VAN DE GEBRUIK VAN DE GEBRUIK VAN DE GEBRUIK VAN DE GEBRUIK VAN DE GEBRUIK VAN DE GEBRUIK VAN DE GEBRUIK VAN DE GEBRUIK VAN DE GEBRUIK VAN DE GEBRUIK VAN DE GEBRUIK VAN DE GEBRUIK VAN DE GEBRUIK VAN DE GEBRUIK VAN DE GEBRUIK VAN DE GEBRUIK VAN DE GEBRUIK VAN DE GEBRUIK VAN DE GEBRUIK VAN DE GEBRUIK VAN DE GEBRUIK VAN DE GEBRUIK VAN DE GEBRUIK VAN DE GEBRUIK VAN DE GEBRUIK VAN DE GEBRUIK VAN DE GEBRUIK VAN DE GEBRUIK VAN DE GEBRUIK VAN DE GEBRUIK VAN DE GEBRUIK VAN DE GEBRUIK VAN DE GEBRUIK VAN DE GEBRUIK VAN DE GEBRUIK VAN DE GEBRUIK VAN DE GEBRUIK VAN DE GEBRUIK VAN DE GEBRUIK VAN DE GEBRUIK VAN DE GEBRUIK VAN DE GEBRUIK VAN DE GEBRUIK VAN DE GEBRUIK VAN DE GEBRUIK VAN DE GEBRUIK VAN DE GEBRUIK VAN DE GEBRUIK VAN DE GEBRUIK VAN DE GEBRUIK VAN DE GEBRUIK VAN DE GEBRUIK VAN DE GEBRUIK VAN DE GEBRUIK VAN DE GEBRUIK VAN DE GEBRUIK VAN DE GEBRUIK VAN DE GEBRUIK VAN DE GEBRUIK VAN DE GEBRUIK VAN DE GEBRUIK VAN DE GEBRUIK VAN DE GEBRUIK VAN DE GEBRUIK VAN DE GEBRUIK VAN DE GEBRUIK VAN DE GEBRUIK VAN DE GEBRUIK VAN DE GEBRUIK VAN DE GEBRUIK VAN DE GEBRUIK VAN DE GEBRUIK VAN DE GEBRUIK VAN DE GEBRUIK VAN DE GEBRUIK VAN DE GEBRUIK VAN DE GEBRUIK VAN DE GEBRUIK VAN DE GEBRUIK VAN DE GEBRUIK VAN DE GEBRUIK VAN DE GEBRUIK VAN DE GEBRUIK VAN DE GEBRUIK VAN DE GEBRUIK VAN DE GEBRUIK VAN DE GEBRUIK VAN DE GEBRUIK VAN DE GEBRUIK VAN DE GEBRUIK VAN DE GEBRUIK VAN DE GEBRUIK VAN DE GEBRUIK VAN DE GEBRUIK VAN DE GEBRUIK VAN DE GEBRUIK VAN DE GEBRUIK VAN DE GEBRUIK VAN DE GEBRUIK VAN DE GEBRUIK VAN DE GEBRUIK VAN DE GEBRUIK VAN DE GEBRUIK VAN DE GEBRUIK VAN DE GEBRUIK VAN DE GEBRUIK VAN DE GEBRUIK VAN DE GEBRUIK VAN DE GEBRUIK VAN DE GEBRUIK VAN DE GEBRUIK VAN DE GEBRUIK VAN DE GEBRUIK VAN DE GEBRUIK VAN DE GEBRUIK VAN DE GEBRUIK VAN DE GEBRUIK VAN DE GEBRUIK VAN DE GEBRUIK VAN DE GEBRUIK VAN DE GEBRUIK VAN DE GEBRUIK VAN DE GEBRUIK VAN DE GEBRUIK VAN DE GEBRUIK VAN DE GEBRUIK VAN DE GEBRUIK VAN DE GEBRUIK VAN DE GEBRUIK VAN DE GEBRUIK VAN DE GEBRUIK VAN DE GEBRUIK VAN DE GEBRUIK VAN DE GEBRUIK VAN DE GEBRUIK VAN DE GEBRUIK VAN DE GEBRUIK VAN DE GEBRUIK VAN DE GEBRUIK VAN DE GEBRUIK VAN DE GEBRUIK VAN DE GEBRUIK VAN DE GEBRUIK VAN DE GEBRUIK VAN DE GEBRUIK VAN DE GEBRUIK VAN DE GEBRUIK VAN DE GEBRUIK VAN DE GEBRUIK VAN DE GEBRUIK VAN DE GEBRUIK VAN DE GEBRUIK VAN DE GEBRUIK VAN DE GEBRUIK VAN DE GEBRUIK VAN DE GEBRUIK VAN DE GEBRUIK VAN DE GEBRUIK VAN DE GEBRUIK VAN DE GEBRUIK VAN DE GEBRUIK VAN DE GEBRUIK VAN DE GEBRUIK VAN DE GEBRUIK VAN DE GEBRUIK VAN DE GEBRUIK VAN DE GEBRUIK VAN DE GEBRUIK VAN DE GEBRUIK VAN DE GEBRUIK VAN DE GEBRUIK VAN DE GEBRUIK VAN DE GEBRUIK VAN DE GEBRUIK VAN DE GEBRUIK VAN DE GEBRUIK VAN DE GEBRUIK VAN DE GEBRUIK VAN DE GEBRUIK VAN DE GEBRUIK VAN DE GEBRUIK VAN DE GEBRUIK VAN DE GEBRUIK VAN DE GEBRUIK VAN DE GEBRUIK VAN DE GEBRUIK VAN DE GEBRUIK VAN DE GEBRUIK VAN DE GEBRUIK VAN DE GEBRUIK VAN DE GEBRUIK VAN DE GEBRUIK VAN DE GEBRUIK VAN DE GEBRUIK VAN DE GEBRUIK VAN DE GEBRUIK VAN DE GEBRUIK VAN DE GEBRUIK VAN DE GEBRUIK VAN DE GEBRUIK VAN DE GEBRUIK VAN DE GEBRUIK VAN DE GEBRUIK VAN DE GEBRUIK VAN DE GEBRUIK VAN DE GEBRUIK VAN DE GEBRUIK VAN DE GEBRUIK VAN DE GEBRUIK VAN DE GEBRUIK VAN DE GEBRUIK VAN DE GEBRUIK VAN DE GEBRUIK VAN DE GEBRUIK VAN DE GEBRUIK VAN DE GEBRUIK VAN DE GEBRUIK VAN DE GEBRUIK VAN DE GEBRUIK VAN DE GEBRUIK VAN DE GEBRUIK VAN DE GEBRUIK VAN DE GEBRUIK VAN DE GEBRUIK VAN DE GEBRUIK VAN DE GEBRUIK VAN DE GEBRUIK VAN DE GEBRUIK VAN DE GEBRUIK VAN DE GEBRUIK VAN DE GEBRUIK VAN DE GEBRUIK VAN DE GEBRUIK VAN DE GEBRUIK VAN DE GEBRUIK VAN DE GEBRUIK VAN DE GEBRUIK VAN DE GEBRUIK VAN DE GEBRUIK VAN DE GEBRUIK VAN DE GEBRUIK VAN DE GEBRUIK VAN DE GEBRUIK VAN DE GEBRUIK VAN DE GEBRUIK VAN DE GEBRUIK VAN DE GEBRUIK VAN DE GEBRUIK VAN DE GEBRUIK VAN DE GEBRUIK VAN DE GEBRUIK VAN DE

sivq-lcm protocol voor de arcturusxt instrument

SIVQ-LCM Protocol for the ArcturusXT Instrument

SIVQ-LCM is een nieuwe methode die automatiseert en stroomlijnt de meer traditionele, gebruikersafhankelijke laser dissectie proces. Het doel is om een ​​geavanceerde, snel aanpasbare laser dissectie platform technologie te creëren. In dit rapport beschrijven we de integratie van de software voor beeldanalyse Ruimtelijk Invariante Vector Quantization (SIVQ) op de ArcturusXT instrument. Het ArcturusXT systeem bevat zowel een infrarood (IR) en ultraviolette (UV) laser, waardoor specifieke cel of groot gebied dissecties. Het voornaamste doel is om de snelheid, nauwkeurigheid en reproduceerbaarheid van de laser dissectie steekproefproductie verhogen verbeteren. Deze nieuwe benadering vergemakkelijkt microdissection van zowel dierlijke en menselijke weefsels in onderzoek en klinische workflows.

Een FFPE menselijk borstweefsel sectie werd immunostained voor Cytokeratine AE1/AE3 gebruik van een standaard IHC protocol 23. Na het kleuren werd het weefsel dia op de ArcturusXT podium geplaatst en SIVQ-LCM protocol werd ingeleid zoals hierboven beschreven. Aangezien het weefsel niet worden afgedekt voor microdissectie, kan de IHC + gekleurde cellen moeilijk visueel te onderscheiden (figuur 1A). Aldus beter bijpassende brekingsindex en een verbeterd beeld verschaffen, xylenen toegevoegd aan...

SIVQ-LCM is een innovatieve aanpak die een computer algoritme, Ruimtelijk Invariante Vector Quantization (SIVQ) benut, om de lasermicrodissectie (LCM) proces te sturen. De SIVQ-LCM workflow verbetert de snelheid en nauwkeurigheid van microdissection, met toepassingen in zowel de onderzoeks-en klinische settings.

SIVQ-LCM protocol voor de ArcturusXT Instrument

SIVQ-LCM is a new methodology that automates and streamlines the more traditional, user-dependent laser dissection process.&#160;It aims to create an ...

Het algemene doel van deze procedure is om ruimtelijk invariante vectorquantisatie, of SIVQ-beeldanalyse, in combinatie met laser capture MICRODISSECTION of LCM te gebruiken om weefselkenmerken van belang te identificeren en om snel gerichte microdissectie uit te voeren. Dit wordt bereikt door eerst beelden van het doelweefsel vast te leggen voor SIVQ. Vervolgens wordt de SIVQ-analyse uitgevoerd en wordt de SIVQ-annotatie geïmporteerd in het microdissectieapparaat voor verwerking.Uiteindelijk kunnen de cellen van belang worden geïsoleerd via S-I-V-Q-L-C-M voor verdere moleculaire analyse. Het belangrijkste voordeel van deze techniek ten opzichte van bestaande methoden is dat S-I-V-Q-L-C-M het proces van het selecteren en micro-dissecteren van grote doelgebieden stroomlijnt, wat anders uitdagend en tijdrovend zou zijn met traditionele laser capture microdissectie-technieken. De procedure zal worden gedemonstreerd door Dr. Avi Rosenberg, een clinical fellow in ons laboratorium, om de weefselmonsters van belang in beeld te brengen.Plaats eerst de objectglazen op de gemotoriseerde tafel van het microdissectie-instrument en start de bijbehorende software. Selecteer vervolgens de juiste

sivq-lcm-protocol-for-the-arcturusxt-instrument

Research

JoVE Journal

Biology

Biologie

Hier presenteren we een protocol om een ​​snelle Brillouin spectrometer te bouwen. Cascading vrijwel afgebeeld fase array (VIPA) etalons bereiken van een meetsnelheid meer dan 1000 keer sneller dan de traditionele scannen Fabry-Perot spectrometers. Deze verbetering is het instrument om Brillouin analyse van weefsel en biomaterialen bij lage energieniveaus in vivo.

High Speed ​​Sub-GHz Spectrometer voor Brillouin Scattering Analyse

Dit artikel geeft een diepgaand overzicht van de assemblage en werking van een gestructureerde verlichtingsmicroscoop die werkt met totale interne reflectie fluorescentie verlichting (TIRF-SIM) om dynamische biologische processen met optische superresolutie in meerdere kleuren te beeldvormen.

A Guide to Structured Illumination TIRF Microscopie op hoge snelheid met meerdere kleuren

X-ray spectra leveren een schat aan informatie over de hoge temperatuur plasma's. Dit manuscript presenteert de werking van een hoge golflengte resolutie ruimtelijk imaging X-ray spectrometer gebruikt om waterstof en helium-achtige ionen van medium atoomnummer elementen in een tokamak plasma te geven.

Het toepassen van X-ray Imaging Crystal Spectroscopie voor gebruik als een High Temperature Plasma Diagnostic

De bepaling van de oplossing structuur van een eiwit door kleine hoek röntgen verstrooiing (SAXS) vereist monodisperse monsters. Hier presenteren we twee mogelijkheden te verzekeren minimale vertragingen tussen monstervoorbereiding en data acquisitie: online size-exclusion chromatography (SEC) en online ionenuitwisselingschromatografie (IEC).

Online Grootte-uitsluiting en ionenuitwisselingschromatografie op een SAX Beamline

Details van signaalgeneratie en -optimalisatie, meting, gegevensverwerving en gegevensverwerking voor een femtotweede time-resolved near-IR gestimuleerde Raman spectrometer worden beschreven. Een nabij infrarood gestimuleerde Raman studie over de opgewonden-staat dynamiek van β-caroteen in tolueen wordt getoond als een representatieve toepassing.

Ultrasnelle time-resolved Near-IR Stimulated Raman Metingen van Functionele π-conjugaat Systemen

We bieden een algemeen overzicht van kwantitatieve microanalysemethoden voor het schatten van de locatiebezetting van onzuiverheden en hun chemische toestanden door gebruik te maken van elektronengeangaliseerde verschijnselen onder incidentele elektronenstraal-schommelomstandigheden, die betrouwbaar informatie extraheren uit minderheidssoorten, lichtelementen, zuurstofvacatures en andere punt/lijn/planaire defecten.

Kwantitatieve atomaire-site analyse van functionele dopants/puntdefecten in kristallijne materialen door elektronengeankan-verbeterde microanalyse

Hier presenteren we een protocol voor cryogene monstervoorbereiding en overdracht van kristallen naar het vacuümeindstation op beamline I23 bij Diamond Light Source, voor macromoleculaire röntgenkristallografie-experimenten met lange golflengte.

Monstervoorbereidings- en overdrachtsprotocol voor in-vacuüm kristallografie met lange golflengte op Beamline I23 bij Diamond Light Source

Ionenmobiliteitsspectrometrie (IMS) is een interessante aanvulling op massaspectrometrie voor de karakterisering van biomoleculen, met name omdat het gevoelig is voor isomisme. Dit protocol beschrijft een tandem IMS (IMS/IMS) experiment, dat de isolatie van een molecuul en het genereren van de mobiliteitsprofielen van zijn fragmenten mogelijk maakt.

Een cyclische ionenmobiliteitsspectrometer gebruiken voor tandem-ionmobiliteitsexperimenten

Dit artikel vergelijkt direct de resolutie, gevoeligheid en beeldcontrasten van gestimuleerde Raman-verstrooiing (SRS) en coherente anti-Stokes Raman-verstrooiing (CARS) geïntegreerd in hetzelfde microscoopplatform. De resultaten laten zien dat CARS een betere ruimtelijke resolutie heeft, SRS betere contrasten en spectrale resolutie geeft, en beide methoden hebben een vergelijkbare gevoeligheid.

Directe vergelijking van hyperspectrale gestimuleerde Raman-verstrooiing en coherente anti-stokes Raman-verstrooiingsmicroscopie voor chemische beeldvorming

Hier gebruiken we een polymeerstabilisator om metaal-organische raamwerk (MOF) suspensies te bereiden die een duidelijk verminderde verstrooiing vertonen in hun grondtoestand en voorbijgaande absorptiespectra. Met deze MOF-suspensies biedt het protocol verschillende richtlijnen om de MOFs spectroscopisch te karakteriseren om interpreteerbare gegevens op te leveren.

Een technische gids voor het uitvoeren van spectroscopische metingen aan metaal-organische raamwerken

Leer het SIVQ-LCM-protocol voor laser capture microdissectie met de ArcturusXT-instrumentatie. Deze methode combineert beeldanalyse met gerichte weefseldissectie voor snelle moleculaire analyse.

SIVQ-LCM protocol voor de ArcturusXT Instrument

Meer video's verkennen