Name: Effect van Accessory Gland producten op eierleggende in buikpotigen (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2014-06-22T15:00:00.000+00:00
Duration: 15 min 19 s
Description: Leer hoe seminale vloeistof eierlegging beïnvloedt bij de hermafrodiete slak Lymnaea stagnalis. Dit protocol toont dissectie, kunstmatige inseminatie en bioassay-methoden voor gedragsbiologisch onderzoek.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Wij danken MR Helmus voor de voice-over, CM Popelier, S. Ypenburg en C. Levesque voor technische ondersteuning. Dit onderzoek wordt financieel ondersteund door Nederland Organisatie voor Wetenschappelijk Onderzoek (NWO), de Koninklijke Nederland Akademie van Wetenschappen (KNAW) en de Japan Student Services Organization (JASSO). Deze publicatie werd ondersteund door een Open Access-subsidie ​​van NWO om JMK.

1. Fokkerij <ol><li> Verkrijgen volwassen exemplaren van Lymnaea stagnalis (L.) uit een laboratorium cultuur zoals die aan de Vrije Universiteit. </li><li> Handhaaf het lage koper water van 20 ° C in zowel de fokkerij (molluscarium) en experimentele tanks, die continue water uitwisseling hebben. </li><li> Zet de licht / donker cyclus bij 12 uur: 12 uur. </li><li> Voor de fokkerij, voeden de volwassen slakken onbespoten sla ad libitum, voeden de jonge jongeren met TetraPhyll (visvoer) vlokken. Handhaaf slakken in aparte tanks volgens hun leeftijd, vanaf ei massa&#39;s die worden gelegd binnen een 24 uur tijdsbestek. </li><li> Zodra slakken uit de kweekbakken ze niet teruggekeerd, de effecten van voorkomen hebben onder enigszins verschillende omstandigheden alsmede pseudoreplication voorkomen gehouden. </li></ol> 2. Dissection <ol><li> Isoleer de slakken voor 1 week, en voer ze ad libitum, naar tha zorgent ze vol sperma en zaadvocht winkels. </li><li> Bereid een stereo-microscoop, een dissectie plaat met pinnen, kleine chirurgische schaar, grove en fijne tang, een 10 ml spuit gevuld met een 50 mM MgCl2 oplossing, injectienaalden (0,3 mm x 13 mm) en wat keukenpapier. </li><li> Euthanaseren een slak door het injecteren van MgCl2-oplossing (meestal 3 ml of meer voor volwassen slakken met een schelp lengte van 31,6 ± 2,1 mm en nat gewicht van 2,89 ± 0,55 g). Doordringen in de voet met de injectienaald in een hoek van 45 ° en spuit door zachtjes druk uit te oefenen continu totdat de slak ontspant en blijft verlengd (binnen enkele seconden). Verwijder de injectienaald en controleer of de slak wordt gedood (bijvoorbeeld door te controleren of de tentakel terugtrekking reflex afwezig is). </li><li> Verwijder voorzichtig de dop na de kromming door het gebruik van grof tang. Halverwege, voorzichtig los de columellar spier van het reservoir door schrapen met de tang. Draai zachtjes thij slak uit zijn schelp, het kronkelende richting van de schelp. </li><li> Plaats de slak op de dissectie plaat en pin vaststelling van de achterkant van de voet. Plaats dan een pin door het hoofd en doe er wat spanning op de slak om dissectie vergemakkelijken. </li><li> Lokaliseer de vrouwelijke gonopore, die later op een referentiepunt voor dissectie zal zijn. </li><li> De chirurgische schaar en fijne tang, maken het eerste incisie net onder de rand van de mantel en snijd naar de vrouwelijke gonopore. Wanneer een van de bladen schaar &#39;onder het lichaam muur wordt gedrukt, til het iets omhoog om ervoor te zorgen dat alleen het lichaam muur, en geen van de interne organen, wordt gesneden. Blijven snijden boven de gonopore naar het hoofd en snijd in een rechte lijn. </li><li> Lokaliseren van de prostaat (posterior) en zaadblaasjes (anterior). Ontleden deze uit en bewaar ze op ijs. Gebruik deze om de testoplossingen met zaadvocht en / of sperma te maken. Gebruik fysiologische Lymnaea saline (5,83 mmol / L CaCl2 · 2H 2 O, 3,76 mmol / L MgCl2 · 6H 2 O, 42,69 mmol / L NaCl, 37,53 mmol / L KCl) als dragermedium. </li><li> Verzamel de zaadvloeistof die in het lumen van de prostaat en de sperma van de zaadblaasjes is. Vervolgens schorsen zowel in zoutoplossing in afzonderlijke flacons door voorzichtig het uiten van hun inhoud en het verwijderen van het orgaan weefsel met een pincet. Blijf op ijs en maken gebruik van dezelfde dag. Later, meng deze suspensies om de verschillende behandeling oplossingen te creëren. </li></ol> 3. Intravaginale Injectie <ol><li> Alvorens de intravaginale injectieprocedure, stelt een siliconen omhulsel-vorm (aan het uiteinde van het reservoir past), 1 mm spuiten, 10-12 cm siliconenslang met een diameter van 1 mm, stomp injectienaalden (0,3 mm x 13 mm ), grof tang en dezelfde 10 ml spuit, gevuld met een 50 mM MgCl2-oplossing voorzien van een scherpe injectienaald. </li><li> Verzamel de zaadcellen, die nodig zijn om toe te voegen aan de zaadvloeistof (of individuele zaadvocht eiwitten) in sommige behandelingen; een biologisch relevante dosis is gelijk aan 1/3 van een prostaat en zaadblaasjes per injectie. OPMERKING: In de resultaten representatief deel (figuur 1) de resultaten van een experiment met drie verschillende behandelingen worden getoond: Controle (dragermateriaal, dat wil zeggen, zoutoplossing), Ovipostatin (een van de geïdentificeerde zaadvocht eiwitten) alleen en Ovipostatin gepaard met sperma. Ook de biologisch relevante dosis bij andere soorten schatten bepalen het verschil in gewicht van de prostaat individuen die onlangs gepaard en individuen die overbleven seksueel geïsoleerde 16. </li><li> Bereid 1 ml spuiten voor elk van de bereide testoplossingen. Vul elke spuit met een oplossing en ervoor zorgen dat er geen luchtbellen in. </li><li> Monteer een afgestompte injectienaald op elke spuit. </li><li> Voor injectie gebruiken een 1mm siliconenslang met een lengte van 10 cm hoogte. </li><li> Schuif de siliconenslang over de injectienaald, zorg ervoor dat de buis niet te doorboren, en verwijder de lucht uit de buis door voorzichtig het toepassen van de druk op de spuit. </li><li> Verdoven een slak door het volgen van hetzelfde protocol als in punt 2.3. Deze keer zorg ervoor dat meer dan 2-3 ml 50 mM MgCl2 niet te injecteren. </li><li> Leg de slak in de schelp-mal om het in een stabiele positie te houden. </li><li> Zoek de vrouwelijke gonopore, dat duidelijk zichtbaar als witte vlek op de rechterzijde van het dier, voorafgaande aan de juiste tentakel en mannelijke gonopore (deze plaats geldt ook voor andere soorten van zoetwater slakken). Zorg ervoor dat u vrij toegang hebben. </li><li> Gebruik een tang om het einde van de siliconenslang houden en breng dan ongeveer 2-4 mm van de siliconenslang in het vrouwelijke gonopore. </li><li> Breng zorgvuldig druk op de spuit en injecteer 0,03 ml van de testoplossing. Wacht een half minute de druk in de buis te verspreiden in de vrouwelijke tractus alvorens de buis mogelijk. </li><li> De terugkeer van de behandelde slak aan zijn isolement container, waar het kan worden gecontroleerd, en laat het herstellen van sedatie in de experimentele tank. </li></ol> 4. Bioassay <ol><li> Label elke slak voor de identificatie en meet zijn schelp lengte. De laatste is een goede indicator van de omvang, die relevant is kwantificering voortplantingsresultaat. </li><li> Houd elke slak geïsoleerd in een 460 ml container die is geperforeerd om voor water-uitwisseling binnen de experimentele tank. Het is belangrijk dat alle containers in de juiste oriëntatie met de perforaties in de richting van de waterstroom, zodat efficiënte waterverversing. </li><li> Tijdens de biologische, voeden slakken regelmatig met een gestandaardiseerde hoeveelheid van sla. Gebruik een ronde, metalen puncher om sla te snijden. In dit protocol sla schijven van 19,6 cm2 worden gebruikt, die een benadertmonteer ze maximaal kunnen eten in een dag. </li><li> Verzamel een ei massa met de platte kant van een spatel en schraap het ei massa van de container muur. Gebruik de lepel kant om het ei massa te verzamelen. OPMERKING: Ondoorzichtige ei massa&#39;s die net zijn gelegd kunnen niet worden gebruikt voor het scannen (ze transparant worden binnen een paar uur na het leggen). Voor het model soorten in dit protocol, Lymnaea stagnalis, controleer ei massa&#39;s elke dag, omdat ze produceren 2-3 ei massa&#39;s per week. Dit kan verschillen bij andere soorten. </li><li> Scan de verzamelde ei massa&#39;s digitaal, met behulp van een (laptop) computer met de scanner driver, een flat bed scanner, een standaard millimeter schaal, een spatel, het overbrengen van borden en glazen tegels. </li><li> Plaats elk ei massa op de overdracht platen en herhalen totdat de platen vol. Vervolgens dep de ei massa droog op keukenpapier en overbrengen op het glas tegels in dezelfde volgorde als de overdracht platen. </li><li> Draai elke tegel ondersteboven (deei massa zal vasthouden aan de glazen tegel) en leg hem voorzichtig op de flatbed scanner, net onder de millimeter schaal. Breng een beetje druk om het ei massa&#39;s plat, die gelijkmatig zal verdelen de eieren zodat ze allemaal zichtbaar binnen dezelfde focus vliegtuig. Monteer de tegels met een gestandaardiseerde hoeveelheid tape rond twee kanten om te verzekeren dat alle eieren gelijk worden afgevlakt. </li><li> Pas de scanner instellingen. Het is belangrijk om de resolutie tot de maximale passen, maak een voorbeeld scan, bijsnijden het werkgebied, en pas de helderheid en het contrast. Scan de ei massa. </li><li> Leg elk ei massa voor haar eigen label 20 ml glazen flacon voor verdere ontwikkeling en broedeieren. </li><li> Vernieuw het water in het uitbroeden flesjes om de andere dag om het goed zuurstofrijk te houden. Doe dit volgens hatchling aantallen en grootte in de volgende volgorde: decanteren / afgieten (geen jongen), overlopen (begin van broedeieren) en extraheren uit het water met een pipet (veel jongen). </li></ol> &lt;p class = &quot;jove_title&quot;&gt; 5. Meten en tellen Eieren <ol><li> Installeer de vrij verkrijgbare software voor beeldanalyse ImageJ (NIH, USA) en de cel teller plugin. </li><li> Open ImageJ evenals een spreadsheetprogramma om de gegevens aan. Vervolgens opent u een gescande foto van ei massa&#39;s in ImageJ. </li><li> Zet de schaal met behulp van de zoom-functie om te navigeren op de millimeter schaal. Zoom in en het venster aan te passen voor 1 mm tot het scherm opvullen. Trek een lijn met de lijn gereedschap tussen de twee lijnen die 1 mm aan te geven. Navigeer naar Analyseren en Set schaal. In het pop-upmenu de gemeten lengte optie zichtbaar, passen Bekende afstand tot 1 en eenheid van lengte mm. Vink het vakje Global, en sluit het venster. </li><li> Stel de gewenste metingen (lengte, breedte, omtrek) door te navigeren naar Analyseren en Set Metingen door Ruimte en Feret Diameter (lengte en breedte) te selecteren. Klik op OK om te bevestigen en door te gaan met het beeld analyseert. </li><li> Om de eieren te meten, ZoOm in op een ei van de eerste ei massa die moet worden gemeten. Een zoom van 800% wordt aanbevolen. Dan, met behulp van de elliptische gereedschap tekenen een ovaal precies rond het ei, druk op Ctrl + D om de omtrek te tekenen op de afbeelding (om te voorkomen dat het meten van dezelfde ei tweemaal). Druk dan op ctrl + M om de maatregel van de eigenschappen van het ovaal (lengte, breedte, omtrek) registreren; een pop-up scherm geopend met de metingen. OPMERKING: Het gebruik van de elliptische tool om eieren te meten geldt niet voor alle soorten. Voor soorten met niet-gelijkmatig gevormde eieren, gebruikt u de vrije hand selecties plaats. </li><li> Meet zoveel eieren als nodig en sla de maatregelen. Xls werkblad. Eventueel, kopieert u de gegevens rechtstreeks in een werkblad. </li><li> Vervolgens tellen de eieren in een ei massa, met behulp van de teller-venster en zet de tellingen handmatig in het werkblad. </li><li> Als alternatief, de telling van de individuele eieren per ei massa met de hulp van de cel contra plug-in. Hiervoor gaat u naar plug-ins,vervolgens, Analyseren en selecteer Celgetalmeter. Het venster celgetalmeter verschijnt, controleert u de &#39;Bewaar de originele&#39; vakje en druk op &#39;initialiseren&#39;. Een nieuwe teller verschijnt, selecteert u de crosshair op de werkbalk en selecteer een teller in het menu cel teller. Tel de individuele eieren door te klikken op de individuele eieren in de cel teller venster. Let op de totale telling naast het type teller in het menu cel teller. Kopieer dit nummer handmatig in een spreadsheet of de resultaten te verkrijgen door op Resultaten. </li><li> Count meerdere ei massa binnen een telling evenement door het toevoegen van soorten tegen te gaan, indien nodig. </li></ol>

<ol><li>Mann, T., Lutwak-Mann, C. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aMann%2C+T+%22Male+reproductive+function+and+semen%22">Male reproductive function and semen</a>. , Springer-Verlag. (1981).</li>
<li>Arnqvist, G., Rowe, L. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aArnqvist%2C+G+%22Sexual+Conflict%22">Sexual Conflict</a>. , Princeton University Press. Princeton, New Jersey. (2005).</li>
<li>Birkhead, T. R., Hosken, D. J., Pitnick, S. S. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aBirkhead%2C+TR+%22Sperm+Biology%2C+an+Evolutionary+Approach%22">Sperm Biology, an Evolutionary Approach</a>. , Elsevier. (2008).</li>
<li>Koene, J. M., Ter Maat, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Allohormones%22%3A+A+class+of+bioactive+substances+favoured+by+sexual+selection%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Comparative+Physiology+A%22%5BJournal%5D)">Allohormones": A class of bioactive substances favoured by sexual selection.</a> Journal of Comparative Physiology A. 187 (5), 323-326 (2001).</li>
<li>Parker, G. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Sperm+competition+and+its+evolutionary+consequences+in+the+insects%5BTitle%5D)+AND+%22Biological+Reviews%22%5BJournal%5D)">Sperm competition and its evolutionary consequences in the insects.</a> Biological Reviews. 45 (4), 525-567 (1970).</li>
<li>Perry, J. C., Sirot, L., Wigby, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+seminal+symphony%3A+how+to+compose+an+ejaculate%5BTitle%5D)+AND+%22Trends+in+Ecology+%26+Evolution%22%5BJournal%5D)">The seminal symphony: how to compose an ejaculate.</a> Trends in Ecology & Evolution. 28 (7), 414-422 (2013).</li>
<li>Baldini, F., Gabrieli, P., Rogers, D. W., Catteruccia, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Function+and+composition+of+male+accessory+gland+secretions+in+Anopheles+gambiae%3A+a+comparison+with+other+insect+vectors+of+infectious+diseases%5BTitle%5D)+AND+%22Pathogens+and+Global+Health%22%5BJournal%5D)">Function and composition of male accessory gland secretions in Anopheles gambiae: a comparison with other insect vectors of infectious diseases.</a> Pathogens and Global Health. 106 (2), 82-93 (2012).</li>
<li>Xu, J., Baulding, J., Palli, S. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Proteomics+of+Tribolium+castaneum+seminal+fluid+proteins%3A+identification+of+an+angiotensin-converting+enzyme+as+a+key+player+in+regulation+of+reproduction%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Proteomics%22%5BJournal%5D)">Proteomics of Tribolium castaneum seminal fluid proteins: identification of an angiotensin-converting enzyme as a key player in regulation of reproduction.</a> Journal of Proteomics. 78, 83-93 (2013).</li>
<li>Jarne, P., Auld, J. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Animals+mix+it+up+too%3A+The+distribution+of+self-fertilization+among+hermaphroditic+animals%5BTitle%5D)+AND+%22Evolution%22%5BJournal%5D)">Animals mix it up too: The distribution of self-fertilization among hermaphroditic animals.</a> Evolution. 60 (9), 1816-1824 (2006).</li>
<li>Nakadera, Y., Koene, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Reproductive+strategies+in+hermaphroditic+gastropods%3A+conceptual+and+empirical+approaches%5BTitle%5D)+AND+%22Canadian+Journal+of+Zoology%22%5BJournal%5D)">Reproductive strategies in hermaphroditic gastropods: conceptual and empirical approaches.</a> Canadian Journal of Zoology. 91 (6), 367-381 (2013).</li>
<li>Chase, R., Blanchard, K. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+snail%E2%80%99s+love-dart+delivers+mucus+to+increase+paternity%5BTitle%5D)+AND+%22Proceedings+of+the+Royal+Society+of+London+B%22%5BJournal%5D)">The snail’s love-dart delivers mucus to increase paternity.</a> Proceedings of the Royal Society of London B. 273 (1593), 1471-1475 (2006).</li>
<li>Koene, J. M., Chase, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Changes+in+the+reproductive+system+of+the+snail+Helix+aspersa+caused+by+mucus+from+the+love+dart%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Experimental+Biology%22%5BJournal%5D)">Changes in the reproductive system of the snail Helix aspersa caused by mucus from the love dart.</a> Journal of Experimental Biology. 201 (15), 2313-2319 (1998).</li>
<li>Van Duivenboden, Y. A., Pieneman, A. W., Ter Maat, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Multiple+mating+suppresses+fecundity+in+the+hermaphrodite+freshwater+snail+Lymnaea+stagnalis%3A+a+laboratory+study%5BTitle%5D)+AND+%22Animal+Behaviour%22%5BJournal%5D)">Multiple mating suppresses fecundity in the hermaphrodite freshwater snail Lymnaea stagnalis: a laboratory study.</a> Animal Behaviour. 33, 1184-1191 (1985).</li>
<li>Koene, J. M., Brouwer, A., Hoffer, J. N. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Reduced+egg+laying+caused+by+a+male+accessory+gland+product+opens+the+possibility+for+sexual+conflict+in+a+simultaneous+hermaphrodite%5BTitle%5D)+AND+%22Animal+Biology%22%5BJournal%5D)">Reduced egg laying caused by a male accessory gland product opens the possibility for sexual conflict in a simultaneous hermaphrodite.</a> Animal Biology. 59 (1), 435-448 (2009).</li>
<li>Hoffer, J. N. A., Schwegler, D., Ellers, J., Koene, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mating+rate+influences+female+reproductive+investment+in+a+simultaneous+hermaphrodite%2C+Lymnaea+stagnalis%5BTitle%5D)+AND+%22Animal+Behaviour%22%5BJournal%5D)">Mating rate influences female reproductive investment in a simultaneous hermaphrodite, Lymnaea stagnalis.</a> Animal Behaviour. 84 (3), 523-529 (2012).</li>
<li>Koene, J. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Male+accessory+gland+protein+reduces+egg+laying+in+a+simultaneous+hermaphrodite%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+ONE%22%5BJournal%5D)">Male accessory gland protein reduces egg laying in a simultaneous hermaphrodite.</a> PLoS ONE. (5), (2010).</li>
<li>Nakadera, Y., Swart, E. M., Hoffer, J. N. A., Den Boon, O., Ellers, J., Koene, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Receipt+of+seminal+fluid+proteins+causes+reduction+of+male+investment+in+a+simultaneous+hermaphrodite%5BTitle%5D)+AND+%22Current+Biology%22%5BJournal%5D)">Receipt of seminal fluid proteins causes reduction of male investment in a simultaneous hermaphrodite.</a> Current Biology. 24, 1-4 (2014).</li>
</ol>

De auteurs hebben niets te onthullen.

De gepresenteerde protocol laat zien hoe zaadvloeistof en hoe dit te testen in een biologisch zinvolle manier te verzamelen. Hoewel deze procedure hier weergegeven met de prostaat extract, kan het effect van een gezuiverd zaadvloeistof eiwit worden getest volgens dezelfde procedure. Uiteraard, in dergelijke tests is het altijd belangrijk om de juiste controles (sham behandelingen) om te garanderen dat de procedure en / of de vervoerder medium hebben geen invloed op de parameters in vragen 14,16. Met deze methode is reeds aangetoond dat er een zaadvloeistof eiwit, namelijk Ovipostatin, dat een vermindering van eierleggende 14,16 bemiddelt. Dit eiwit, geproduceerd in de prostaat en Overdracht paring met de spermatozoa, is de eerste volledig gekarakteriseerde zaadvloeistof component in simultaan hermafrodiet en heeft tot nu toe geen gelijkenis met bekende eiwitten tonen. De bevinding dat Ovipostatin vermindert ei massaproductie in de ontvanger bevestigt eerdere werk aangeeft dat stoffen in het sperma ei kunnen beïnvloeden leggen 13-15. Door de overdracht van biologisch relevante bedragen (zie 3.2 16), kan men overtuigend aan te tonen dat het een rudimentaire vloeistof eiwit, en niet de aanwezigheid van spermatozoa zelf, dat de waargenomen daling van de eileg (figuur 1) komt tussenbeide. Gezien het feit dat herhaalde ontvangst van zaadvocht via natuurlijke paringen verhoogt de investering per ei 15, wordt het nu zeer relevant voor andere parameters van de eileg kwantificeren. Het gepresenteerde protocol worden nu de vereiste methoden om dit te doen. Hoewel geen effect werd gevonden Ovipostatin op ontluiking succes van de genoemde door de ontvanger 16 eieren, kunnen er andere zaadvloeistof eiwitten die met dit eiwit handelen in concert. Vandaar, parameters die moeten worden gekwantificeerd in deze context - naast leggen frequentie en ei nummers - onder andere ei grootte, hatching tijd, hatchling ontwikkeling en hatchling grootte. Bovendien is het mogelijk om te kijken naar effecten op andere processen dan vrouwelijke leg, zoals sperma opslag en gebruik, alsmede de verdeling van reproductieve middelen naar de vrouwelijke en mannelijke functie 14,17. Het is duidelijk dat de gepresenteerde methode is instrumenteel in het aanpakken van deze follow-vraagstukken, zowel in Lymnaea stagnalis en in andere zoet water slakken. Kortom, experimenten met dit protocol blijkt dat zaadvocht eiwitten overgebracht invloed op de vrouwelijke reproductieve prestaties van de ontvanger in deze simultaan hermafrodieten. Gezien het feit dat weinig studies dit hebben aangepakt, is het waarschijnlijk veel vaker voor bij intern bevruchten hermafrodieten dan momenteel wordt weerspiegeld in de wetenschappelijke literatuur. Zeker als men zich realiseert dat de pre-copulatory partnerkeuze en sperma concurrentie is aangetoond dat een belangrijke rol spelen in deze hermafrodieten 14, dat highlights het potentieel van zulke mannelijke accessoire klier eiwitten om seksueel worden geselecteerd in dit systeem. Tot slot, dit onderzoek helpt om het ontwikkelen van begrip dat zaadvocht eiwitten zijn van even groot belang voor gelijktijdige hermafrodieten als ze zijn voor de gescheiden-gesekst soorten ondersteunen.

Bij overdracht worden spermatozoa meestal vergezeld van rudimentaire vloeistof geproduceerd door mannelijke accessoire klieren. Terwijl sommige ejaculaat componenten een rol spelen in het voeden en het activeren van sperma 1, anderen te beïnvloeden vrouwelijke fysiologie om bevruchting succes van de spermadonor 2-4 te verhogen. Dergelijke effecten zijn speciaal geselecteerd voor, via seksuele selectie, als een soort is zeer promiscue en heeft efficiënte sperma opslag en sperma spijsvertering. Onder dergelijke omstandigheden, sperma donoren zwaar strijden om de bevruchting van eieren 5. Hoewel er een overvloedige correlationeel bewijs voor het belang van het zaadvocht stoffen voor mannelijke bevruchting succes, direct bewijs is meer zeldzaam en weinig studies hebben zich verdiept in de details van de fysiologische veranderingen en / of stoffen 6. Bij soorten met gescheiden seksen (dwz, mannetjes en vrouwtjes; gonochorists) zijn er een paar goed onderzocht model species als het gaat om zaadvloeistof samenstelling en hun effecten. Voorbeelden hiervan zijn de fruitvlieg, Drosophila melanogaster 6, de malariamug, Anopheles gambiae 7, en de rode bloem kever, Tribolium castaneum 8. Dergelijke zaadvloeistof studies zijn veel zeldzamer als het gaat om soorten die tegelijkertijd hermafrodiete (dwz individuen functioneel mannelijk en vrouwelijk tegelijk), hoewel deze wijze van voortplanting is gebruikelijk in het dierenrijk 9. De meest opvallende hermafrodiete voorbeeld van de overdracht van een accessoire klier stof is waarschijnlijk het neerschieten van zogenaamde liefde-darts in landslakken 2,10, waar de stof wordt overgebracht door de spermadonor via onderhuidse injectie 11,12, dat wil zeggen, niet samen met de spermatozoa. Maar er zijn veel simultaan hermafrodieten dat mannelijke accessoire klier producten dragen samen met hun sperma,zoals het model soort hier gebruikt, de grote vijver Lymnaea stagnalis. Eerder onderzoek heeft al aangetoond dat de ontvangst van zaadvocht beïnvloedt de vrouwelijke reproductieve output van deze soort 13-15, en een aantal van de betrokken zaadvocht eiwitten geïdentificeerd 16,17. De algemene doelstelling van dit protocol, dat is een uitbreiding van de methoden vermeld in Koene et al. 16, is aan de gevolgen van zaadvloeistof eiwitten op verschillende parameters van de eileg in buikpotigen testen. Dit wordt bereikt door dissectie van de prostaat (dwz de mannelijke accessoire klier produceert het zaadvocht) van seksueel geïsoleerd donor slakken uit een gestandaardiseerde laboratorium cultuur. Ten tweede wordt het sperma donor vanuit de zaadblaasjes en de verschillende behandelingsmogelijkheden gemaakt. Vervolgens worden testen slakken verdoofd en intravaginally geïnjecteerd met een testoplossing (bijvoorbeeldprostaatklier extract alleen, prostaat-extract met zaadcellen, alleen, vervoerder alleen medium). Deze proef slakken worden vervolgens gecontroleerd op de volgende dagen tot weken, onder normale omstandigheden, tot het leggen van eieren te leggen. Ei massa&#39;s worden verzameld, digitaal gescand voor het tellen en meten van diverse parameters, en vervolgens in individuele flesjes voor het uitkomen. Na ongeveer twee weken zijn de jongen geteld en digitaal gescand. Alle scans, zowel ei massa en jongen, worden vervolgens geanalyseerd met een vrij verkrijgbare beeldanalyse softwarepakket. Voor dit protocol het laboratorium stam van de grote vijver slak, Lymnaea stagnalis, wordt gebruikt, die wordt gekweekt aan de Vrije Universiteit in Amsterdam. Deze soort dient als een modelsysteem voor het onderzoeken van vragen over seksuele selectie en voortplanting bij hermafrodieten. Relatief grote omvang van het dier maakt het experimenteel zeer toegankelijk. Bovendien, omdat het wordt gebruikt als model species in vele biological disciplines weten we al veel over de fundamentele biologie van deze dieren. Deze methode zal helpen om vragen over processen van seksuele selectie die worden gemedieerd via zaadvocht eiwitten in het algemeen te bestuderen. Bovendien, omdat deze simultaan hermafrodieten, is het mogelijk aan te pakken of dergelijke proteïnen zijn in soortgelijke en / of verschillende manieren zoals in soorten waarvoor de geslachten gescheiden 16,17.

<table><tbody><tr><td>Visvoervlokken</td><td>TetraPhyll</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Stereo microscoop</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Kleine chirurgische schaar</td><td>WPI</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Grof en fijn tang</td><td>WPI</td><td></td><td></td></tr><tr><td>10 ml spuit</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Injectienaalden (0,3 mm x 13 mm)</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>50 mM MgCl2</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>5,83 mmol/L CaCl2&#183;2H2O</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>3,76 mmol/L MgCl2&#183;6H2O</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>42,69 mmol/L NaCl</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>37,53 mmol/L KCl</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Twee componenten Silicium</td><td>Sylgard</td><td></td><td></td></tr><tr><td>1 mm spuiten</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Siliconen buis (diameter 1 mm)</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Gedempte injectienaalden (0,3 mm x 13 mm)</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Buizen</td><td>Eppendorff</td><td></td><td></td></tr><tr><td>460 ml geperforeerde containers</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Metaalplaatjes pons (19,6 cm2)</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Spatel/lepel</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>(Laptop) computer</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Vlakbedscanner</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Millimeterschaal</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Overdrachtplaten</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Glazen tegels</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>20 ml glazen flacons</td><td></td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

effect van accessory gland producten op eierleggende in buikpotigen

Effect of Male Accessory Gland Products on Egg Laying in Gastropod Molluscs

In intern bemesten dieren wordt zaadvocht meestal toegevoegd aan de spermatozoa, vormen samen het sperma of ejaculaat. Naast voedende en activeren sperma kunnen de componenten in de zaadvloeistof ook invloed vrouwelijke fysiologie bevruchting succes van het sperma donor vergroten. Terwijl veel studies dergelijke effecten in soorten met gescheiden seksen hebben gemeld, hebben weinig studies dit aangepakt gelijktijdig hermafrodiete dieren. Deze video protocol presenteert een methode om effecten van zaadvloeistof in buikpotigen bestuderen, met behulp van een gelijktijdig hermafrodiete zoetwaterslak, de grote vijver Lymnaea stagnalis, als modelorganisme. Terwijl de procedure wordt gegeven met volledige prostaatklier extracten kunnen individuele componenten (dat wil zeggen, eiwitten, peptiden, en andere verbindingen) van de zaadvloeistof getest op dezelfde manier. Effecten van de ontvangst van het ejaculaat componenten op de eileg kan worden gekwantificeerd in termen van frequentie van de eileg ensubtieler schattingen van vrouwelijke reproductieve prestaties zoals ei nummers binnen elk ei massa. Resultaten tonen aan dat zaadvocht eiwitten beïnvloeden vrouwelijke reproductieve output in deze simultaan hermafrodiet, met de nadruk hun belang voor seksuele selectie.

Figuur 1 toont het percentage dieren eieren leggen na intravaginale injectie van ofwel de controlestof (zoutoplossing), Ovipostatin of Ovipostatin gepaard met sperma. N = 15 voor elke behandeling; zie Koene et al. 16 voor meer informatie en statistieken (Bron: Figuur 3 van Koene et al. 2010, PLoS ONE.).. <img alt="Figuur 1" fo:content-width="5in" src="/files/ftp_upload/51698/51698fig1highres.jpg" width="500" /> Figuur 1. Effect van Ovipostatin op eieren massaproductie van Lymnaea stagnalis. De grafiek toont het percentage dieren eieren leggen na intravaginal injectie van hetzij de controle stof (zoutoplossing), Ovipostatin of Ovipostatin gepaard met sperma. N = 15 voor elke behandeling; zie Koene et al.. 2010 gegevens en statistieken. Herdruk met toestemming van Koene et al. 2010 PLoS ONE 5:. E10117.

Dit videoprotocol demonstreert een methode om effecten van zaadvloeistof bij weekdieren te bestuderen, met behulp van de hermafroditische zoetwaterslak Lymnaea stagnalis.

Effect van Accessory Gland producten op eierleggende in buikpotigen

In internally fertilizing animals, seminal fluid is usually added to the spermatozoa, together forming the semen or ejaculate. Besides nourishing and ...

Het algemene doel van dit protocol is om de effecten van eiwitten in het seminale vocht op het eiwitleggingsgedrag van een simultaan hermafrodiete soort te karakteriseren. Dit wordt bereikt door eerst individuen uit een gestandaardiseerde labcultuur te isoleren, gevolgd door dissectie van de doelorganen. Vervolgens worden de verzamelde spermacellen gebruikt om een behandelingsoplossing te maken.Hierna worden de slakken kunstmatig bevrucht. Vervolgens worden ze in een bio-assay geplaatst. Onder standaardcondities worden de eimassa's verzameld, gescand en in individuele BS geplaatst om uit te komen.Na enkele weken worden de uitgelakte jongen geteld en gescand, waarna alle afbeeldingen met behulp van gratis software kunnen worden geanalyseerd. Dit protocol kan helpen bij het beantwoorden van vragen over processen van seksuele selectie die worden gemedieerd via proteïnen in het zaadvocht. Omdat we hier kijken naar simultane hermaphroditen, kunnen we ook onderzoeken of deze processen op een vergelijkbare of verschillende manier werken als bij soorten met gescheiden seksen.Voor dit protocol hebben we de grote IL in les gebruikt, die we in stand houden aan de VU University in Amsterdam. We gebruiken deze soort om vraagstukken over seksuele selectie en reproductie te bestuderen. Bij hermafrodieten is deze soort, vanwege de relatief grote lichaamsomvang, experimenteel zeer toegankelijk.Bovendien weten we veel over de basisbiologie van deze dieren, omdat ze in veel verschillende biologische disciplines als modelsoort worden gebruikt. Mijn naam is Yumi. Ik ben promovendus bij de Afdeling Ecologische Wetenschappen.In deze volledige universiteit zal ik de volgende protocollen demonstreren. Laten we beginnen. Om een betrouwbare biosa uit te voeren, wordt meestal een laboratoriumcultuur gebruikt om storende variabelen uit te sluiten.Water met een laag kopergehalte wordt op 20 graden Celsius gehouden, en de licht-donkercyclus is 12 bij 12 uur. Aan de VU University wordt de laboratoriumcultuur onderhouden in tanks van de kweekfaciliteit met continue waterverversing. Onder standaardcondities krijgen volwassen slakken naar believen slaat en worden ze gescheiden op basis van hun leeftijdsklasse.Zodra de slakken uit de kweekfaciliteit zijn gehaald, worden ze als in gebruik beschouwd en kunnen ze niet worden teruggeplaatst in de kweekbakken. Voordat u met de procedure begint, heeft u een stereomicroscoop, een dissectieplaat met pinnen, kleine chirurgische scharen, pincetten, een spuit gevuld met magnesiumchloride-oplossing en enkele papieren handdoekjes nodig om de slak te euthanaseren, de voet onder een hoek van 45 graden met de injectienaald te doorprikken en voorzichtig continu druk uit te oefenen totdat de slak ontspant en uitgerekt blijft. Verwijder de injectienaald en controleer of de slak is geëuthanaseerd.Neem vervolgens de pincet en verwijder voorzichtig de schelp. Schraap de adductor spier voorzichtig van de schelp door de kromming tot halverwege te volgen. Draai vervolgens de slak voorzichtig uit zijn schelp, in de windrichting van de schelp.Nu de slak uit zijn huis is gehaald, kan het huis worden weggegooid. Plaats de slak vervolgens op de dissectieplaat en steek een speld door het achterste uiteinde van de voet. Steek daarna een speld door de kop.Zet wat spanning op de slak en plaats de pin in de plaat. Nu is de slak klaar voor dissectie. Zet de verlichting van het stereomicroscoop aan en stel de microscoop in.Voordat de eerste incisie wordt gemaakt, is het belangrijk om de vrouwelijke poriën te lokaliseren. Dit dient later als referentiepunt. Maak een eerste incisie net onder de rand van de mantel en snijd in de richting van de vrouwelijke poriën.Maak een inkeping rondom het gat in het osseum nasale in de richting van de kop. Zorg ervoor dat alleen de huid wordt doorgesneden, dat er geen organen worden geraakt en snijd in een rechte lijn. Voor deze studie zullen we de prostaatklier en de zaadblaasjes dissecteren voor respectievelijk het zaadvocht en de sperma.Houd er rekening mee dat voor volledige voorraden sperma en seminaal vocht de slakken gedurende één week geïsoleerd moeten worden en ad libitum gevoed. De dissectie verloopt op dezelfde wijze als eerder uitgelegd. De zaadblaasjes bevinden zich in het posterieure deel van het dier.Vervolgens wordt de prostaatklier in zoutoplossing gesuspendeerd en op ijs geplaatst. Later zullen deze worden gemengd met de behandelingsoplossingen.Voorafgaand aan de intravaginale injectie wordt het verzamelde sperma toegevoegd aan het seminale vloeistof of individuele eiwitten in een relevante dosis. Voor deze kunstmatige inseminatietechniek heeft u een injectiespuit van één milliliter nodig die de testoplossing bevat. Bevestig een injectienaald aan de spuit en zorg ervoor dat er geen luchtbellen in de spuit zitten. Gebruik de siliconen slang voorzichtig; schuif de siliconen slang over de injectienaald.Zorg ervoor dat de buis is doorboord en verwijder de lucht uit de buis. Vóór de injectie moet de slak gesedeerd worden. Hiervoor wordt hetzelfde protocol gevolgd als in hoofdstuk twee.De slak krijgt een dosis van twee tot drie milliliter 50 µM magnesiumchloride. Wanneer de slak adequaat gesedeerd en ontspannen is, wordt deze in de mal geplaatst om een stabiele positie te waarborgen. Pak vervolgens het uiteinde van de siliconen slang vast met een fijne pincet en voer deze voorzichtig in de vrouwelijke porie in.Oefen vervolgens voorzichtig druk uit op de spuit en injecteer zorgvuldig het voorgeschreven volume van de testoplossing. Wacht een halve minuut tot de druk in de buis zich in het vrouwelijke voortplantingsorgaan heeft verspreid. Verwijder daarna voorzichtig de buis en plaats de slak in zijn eigen specifieke bakje.Nadat alle slakken kunstmatig zijn geïnsemineerd, kunnen ze naar hun experimentele tanks worden getransporteerd en kan de bio-assay beginnen. De slakken zullen na enkele uren herstellen van de sedatie. Bio-assays.Voor seksuele selectie duren experimenten gewoonlijk twee weken voordat de biosa kan worden gestart. Het is belangrijk om alle individuen in hun eigen bakjes te plaatsen en deze te labelen. Meet vervolgens de lengte van de schelp van elke slak.Dit is een goede indicator voor hun grootte, wat invloed kan hebben op het seksuele gedrag. Daarna worden de slakken in een experimenteel aquarium geplaatst. Dit aquarium heeft dezelfde standaardcondities als de kweekfaciliteit.Zoals besproken in hoofdstuk één, is het belangrijk om de containers in de juiste oriëntatie te plaatsen, zodat de openingen de waterstroom in het aquarium volgen. Tijdens de bioassays moeten de slakken regelmatig worden gevoerd. Een standaardhoeveelheid sla-schijfjes wordt uitgesneden met een metalen perforator.Een voldoende dosering is twee schijven om de dag. Bij de modelsoort, lumia stauss, moeten de slakken om de dag worden gecontroleerd op eimassa's. Deze eimassa's worden verzameld voor metingen.Voor het scannen van de eieren heeft u een laptop nodig met de scannerdriver, een flatbedscanner, een standaard millimeterliniaal, een lepel voor het overbrengen van eimassa's, transportplaatjes en glasplaatjes om bovenop de eimassa's te leggen. Gebruik eerst de lepel om de eimassa's van de wanden van de container te schrapen. Eimassa's die ondoorzichtig zijn, zijn net gelegd en kunnen niet worden gebruikt.Plaats bij deze meetbeurt de eimassa's op de overplaatjes en herhaal deze stappen totdat de plaatjes vol zijn. Plaats daarna de eimassa's in dezelfde volgorde als op de overplaatjes op de glazen tegels. De eimassa's zullen aan de glazen tegel hechten; draai deze om en plaats hem voorzichtig op de flatbedscanner direct onder de weegschaal.Oefen vervolgens druk uit op de platen om de ei-massa's plat te drukken. Hierdoor worden alle eieren nu gelijkmatig verspreid, zodat ze allemaal optimaal gescand kunnen worden. Het wordt aangeraden om vóór het scannen de instellingen aan te passen voor het beste resultaat.Voor het scannen is het belangrijk om de resolutie op maximaal in te stellen om een voorverkenning-scan te maken, om vervolgens het werkgebied bij te snijden en tot slot de helderheid en het contrast aan te passen voordat de definitieve scan wordt gemaakt. Na het scannen worden de eimassa's in eigen gelabelde vials geplaatst om te rijpen en uit te komen. Het water in deze vials wordt om de dag ververst om het zuurstofgehalte op een适当 niveau te houden.Naarmate er meer slakken uitkomen, moeten verschillende technieken worden gebruikt om het water te verversen. De beste volgorde is in het begin het gieten of overlopen en later het water eruit zuigen met een pipet open image JA spreadsheet program. Om de gegevens en een foto vanuit image J vast te leggen, gebruikt u eerst de zoomtool om naar de millimeterschaal te navigeren.Zoom in en pas het venster aan zodat één Millimeter het scherm vult. Trek met de lijntool een lijn tussen de twee indicatielijnen. Navigeer vervolgens naar analyse en selecteer dan schaal instellen.In het pop-upmenu ziet u de optie 'Measured length' om de bekende afstand op één in te stellen en de eenheid op millimeters. Vink het vakje 'global' aan en sluit het venster. Nu de schaal is ingesteld, kunnen we inzoomen op de eerste eimassa's tot 800%. Gebruik de elliptische tool om de omtrek van de eieren te tekenen.Druk op D om de omtrek te tekenen. Dit helpt om te voorkomen dat hetzelfde ei twee keer wordt gemeten. Druk op M om de omtrek te meten.Er verschijnt een venster zodra er voldoende gegevens zijn verzameld. Het gegevensvenster kan worden opgeslagen als een Excel-bestand. Gegevens kunnen ook rechtstreeks in een werkblad worden gekopieerd.Als de gewenste metingen niet in het pop-upvenster verschijnen, kunnen deze worden aangepast en geanalyseerd. Het instellen van metingen en het tellen van de individuele eieren per eimassa kan ook worden gedaan met behulp van de cell counter-plugin. Navigeer naar plugins.Analyseer vervolgens en selecteer de celsteller. Het venster van de celsteller verschijnt. Vink het vakje 'keep original' aan en druk op 'initialize'.Er is een nieuw teller-venster verschenen. Selecteer de tool 'cross here' (kruis hier) in de werkbalk. Selecteer vervolgens een tellertype in het menu van de celsteller.Door in het venster van de celsteller te klikken, worden de eieren geteld. Het totale aantal is te vinden naast het type teller in het menu van de celsteller. Met de celsteller kunnen meerdere eimassa's worden geteld.Tellers van verschillende typen kunnen naar wens worden toegevoegd of verwijderd. Dit getal moet handmatig naar een spreadsheet worden gekopieerd of druk op 'resultaten', waarna er een venster verschijnt waarin alle resultaten worden getoond. Met deze methode hebben we aangetoond hoe semenproteïnen kunnen worden verzameld en hoe deze op een zinvolle manier kunnen worden getest.We hebben dit aangetoond met behulp van het volledige extract van de prostaatklier, maar uiteraard kunnen de individuele eiwitten uit het zaadvocht op dezelfde manier worden getest. Daarnaast is het mogelijk om naar andere processen en de eiaflegging te kijken. Resultaten van onze experimenten hebben aangetoond dat er een enkel eiwit in het zaadvocht is, genaamd avios statin, dat een vermindering van de eiaflegging medieert.Daarnaast stellen we vast dat de overdracht van zaaksestoffen de grootte van de posten verhoogt. Statin is het eerste volledig gekarakteriseerde eiwit uit zaaksestoffen bij een simultaan hermafrodiet. Hoewel de effecten van zaaksestoffen vaak zijn gerapporteerd bij soorten met gescheiden seksen, benadrukken onze resultaten dat zaaksestoffen even belangrijk zijn bij hermafrodieten.

effect-male-accessory-gland-products-on-egg-laying-gastropod

Research

JoVE Journal

Biology

Biologie

De eieren van de Xenopus laevis intact, gelyseerd en / of gefractioneerde nuttig zijn voor een breed scala aan experimenten. Dit protocol laat zien hoe eieren leggen induceren, te verzamelen en dejelly de eieren, en sorteren van de eieren op een beschadigde eieren te verwijderen.

Het verkrijgen van Eieren van Xenopus laevis Teven

Eieren en de extracellulaire coatings rond eieren vaak los peptiden, eiwitten en kleine moleculen die communiceren met sperma om hen te begeleiden naar het ei daarbij het bevorderen van de bevruchting. Met behulp van kikker sperma beschrijven we en vergelijking van twee klassen van assays gebruikt om sperma chemoattractie detecteren - sperma accumulatie assays en sperma tracking assays.

Twee Soorten Assays voor het detecteren van Kikker Sperma chemoattractie

Deze video beschrijft de dissectie van de accessoire klieren van mannelijke vliegen en toont een voorbeeld waarin de geïsoleerde klier zal worden gescheiden in een eencellige suspensie.

Drosophila Mannelijke accessoire klier dissectie: een methode om secundaire cellen te isoleren

C. elegans eierleggedrag kan belangrijke informatie bieden in ontwikkelings-, reproductieve en anatomische studies.  Deze video introduceert de belangrijke stappen van een eierlegtest en toont een monsterexperiment waarbij een medicijn wordt getest op reproductietoxiciteit.

Egg Laying Assay: Een methode om het eierleggedrag van C. elegans te kwantificeren

-Visserij-geïnduceerde veranderingen om uitgebuit schaaldier visserij, zoals de Amerikaanse kreeft visserij, kan mogelijk invloed hebben op hun reproductieve dynamiek, wat leidt tot een vermindering van de paring succes. Het doel van deze studie was om een ​​niet-invasieve methode voor het vaststellen van de paring succes van vrouwelijke kreeften die fysiologisch of functioneel volwassen kunnen ontwikkelen.

Een niet-invasieve methode voor<em&gt; In situ</em&gt; Bepaling van het Koppelen van Succes in vrouwelijke Amerikaanse Kreeften (<em&gt; Homarus americanus</em&gt;)

Dit protocol beschrijft een hoogdoorlaattest voor het testen van ei-legvoorkeuren van Drosophila melanogaster met een nauwkeurigheid per enkel dier. Deze test biedt een eenvoudige, efficiënte en schaalbare platform om genen en circuitonderdelen te identificeren die een eenvoudig besluitvormingsproces controleren.

High Throughput Assay to-eierleggende Voorkeuren van de individuele onderzoeken<em&gt; Drosophila melanogaster</em

Het doel van dit protocol is om gebruikers een reeks methoden te bieden voor de hoogwaardige decapsulatie van Lymnaea stagnalis embryo's en larven ter voorbereiding op gehele berging in situ  hybridisatie, en voor daaropvolgende pre- en post-hybridisatie behandelingen.

Een hele berg<em&gt; In Situ</em&gt; Hybridisatie Methode voor de slak,<em&gt; Poelslak</em

Het behoud van zoet water mossel is afhankelijk van het monitoren van voortplantings patronen en processen van soorten. Deze studie standaardiseert een niet-dodelijk protocol voor het bemonsteren van Gill-inhoud, het karakteriseren van de larvale ontwikkeling en het verstrekken van een digitale repository voor verzamelde gegevens. Dit protocol-database-pakket zal een belangrijk hulpmiddel zijn voor mossel onderzoekers die niet-verontreinigde soorten herstellen.

Standaardiseren van een niet-dodelijke methode voor het karakteriseren van de reproductieve status en de larvale ontwikkeling van zoetwatermosselen (Bivalvia: Unionida)

Dit artikel rapporteert een eenvoudige methode om de buitenste en binnenste perivitelline-sublagen van kippeneieren te isoleren terwijl structurele verandering wordt geminimaliseerd en om de eiwitoplosbaarheid van elke onderlaag te optimaliseren voor proteomische analyses.

Mechanische scheiding en eiwitsnoerlubilisatie van de buitenste en binnenste Perivitelline-sublagen van kippeneieren

Wanneer Transforming Growth Factor ß familie voorloper eiwitten ectopisch tot expressie komen in Xenopus laevis embryo's, worden ze gedimeriseerd, worden ze gesplitst en worden ze uitgescheiden in de blastocoele, die begint bij de late blastula tot vroege gastrula stadium. We beschrijven een methode voor het opzuigen van splitsingsproducten uit de blastocoeleholte voor immunoblotanalyse.

Analyse van transformerende groeifactor ß familiesplitsingsproducten uitgescheiden in de blastocoele van Xenopus laevis-embryo's

Twee eyestalk ablatieprotocollen (d.w.z. cauterisatie en chirurgische benaderingen) werden uitgevoerd op verdoofde vrouwelijke krabben. De oogsteblablatie van modderkrabben versnelde de rijping van eierstokken zonder de overlevingskans te verminderen.

Eyestalk ablatie om de ovariële rijping bij modderkrabben te verhogen

Leer hoe seminale vloeistof eierlegging beïnvloedt bij de hermafrodiete slak Lymnaea stagnalis. Dit protocol toont dissectie, kunstmatige inseminatie en bioassay-methoden voor gedragsbiologisch onderzoek.

Effect van Accessory Gland producten op eierleggende in buikpotigen

Meer video's verkennen