Name: Muizen hoornvliestransplantatie: een model om de meest voorkomende vorm van een orgaantransplantatie Bestudeer (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2014-11-17T13:00:00.000+00:00
Duration: 9 min 3 s
Description: Leer een muizenmodel voor acute hoornvliestransplantatie-afstoting om therapeutische strategieën te evalueren en afstotingsmechanismen te bestuderen. Dit model helpt bij het ontwikkelen van nieuwe behandelingen.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

De auteurs willen de vele personen bedanken die aan deze techniek hebben gewerkt en deze hebben geperfectioneerd en verantwoordelijk zijn geweest voor de productie van vele manuscripten, zowel in dit lab als in andere. Dit werk werd ondersteund door National Institutes of Health Grant EY12707 (PMS) en een onbeperkte subsidie van Research to Prevent Blindness aan het Department of Ophthalmology.

OPMERKING: Alle dieren die in deze procedure worden behandeld in overeenstemming met de Association for Research in Vision en Oogheelkunde verklaring voor het gebruik van dieren in Oogheelkundige en Vision Research evenals de vastgelegd door het dier toezichtscommissie op Saint Louis University richtlijnen. OPMERKING: Chirurgische instrumenten en oplossingen voorafgaand aan de operatie gesteriliseerd microbiële infectie van het oog beperken. Opgemerkt moet worden dat terwijl de dieren ervaren wat pijn van deze procedure hebben we geen analgetica dienst. De reden hiervoor is dat alle analgetica en anti-inflammatoire sinds hoornvliestransplantatie reacties omvatten ontsteking, zou het gebruik van anti-inflammatoire geneesmiddelen ons vermogen te bepalen welke factoren zijn betrokken bij corneale transplantaatfalen compromitteren. 1. Anesthesie <ol style="margin-left: 40px;"><li> Plaats donor en ontvanger muizen onder narcose door IP injecties van ketamine (86.98 mg / kg) en xylazine (13.04 mg / kg). </li><li> Houd de ontvanger muis onder verdoving gehele procedure duurt gewoonlijk 30 minuten tot een uur. Bijgevolg voortdurend de muis op tekenen van weer bij bewustzijn. </li><li> Breng puralube zalf voor het oog die geen operatie ondergaat nadat het dier verdoofd tot droog voorkomen. </li></ol> 2. Cornea enten <ol style="margin-left: 40px;"><li> Het verkrijgen van de donor knop hoornvlies. <ol><li> Zodra het dier volledig verdoofd, bereiken adequate mydriasis door toediening van een enkele oogdruppels van 1% tropicamide en 2,5% fenylefrine hydrochloride. </li><li> Plaats de kop van de donor dier horizontaal op een bord geplaatst op een stevige beweegbare steun. Bevestig de kop met een strook tape in de nek te zorgen dat het oog in een horizontale positie tijdens de hele operatie. </li><li> Met behulp van een 2 mm diameter trephine, wiens tip werd geverfd met methyl blauw, uitLangs de centrale cornea transplantaat website. </li><li> Met een scherp mes, dringen de cornea en injecteer Healon in de voorste kamer te verdiepen om de kans op beschadiging van de donor endotheel en onderliggende lens verminderen. </li><li> Accijnzen de donor transplantaat met Vannas schaar en plaats in een schotel met Hanks &#39;gebalanceerde zoutoplossing tot gebruik. </li><li> Nadat de donor transplantaat het is verwijderd, euthanaseren de donor muis via CO 2 inademing. </li></ol></li><li> Voorbereiden van het transplantaat bed. <ol><li> Herhaal dezelfde stappen als beschreven in 2.1.1 tot 2.1.2 voor de ontvanger. </li><li> Met behulp van een 1,5 mm diameter trephine, een overzicht van de ontvanger graft website. </li><li> Met een scherp mes, dringen de cornea en injecteer Healon in de voorste kamer te verdiepen om de kans op schade aan de onderliggende lens. </li><li> Verwijder de geschetste centrale knop hoornvlies van de ontvanger met behulp van Vannas schaar en gooi ze weg. </li></ol></li><li> Het hechten van deent <ol><li> Plaats de donor hoornvlies over de graft bed in het hoornvlies van de ontvanger. Zorg dat er voldoende Healon onder de donor hoornvlies van de donor endotheliale cellen tegen beschadiging door direct contact met lens. </li><li> Bij gebruik van zeer fijne getipt microforceps, plaatst u de eerste hap van 11-0 nylon hechtdraad in de donor kant, door de donor met 90% diepte van volledige dikte aan kant ontvanger, dan afhechten. </li><li> Zodra het hoornvlies plaats verankerd, uitvoeren midcardinal onderbroken hechtingen zodanig dat het hoornvlies 8-10 totaal hechtingen en de donor hoornvlies stevig uitgelijnd met en aan de ontvanger cornea transplantaat bed. </li></ol></li><li> De verdieping van de voorste oogkamer <ol><li> Verdiepen van de voorste oogkamer door het injecteren van HBSS of luchtbel in de voorste kamer en laat zachtjes de integriteit van de cornea transplantaat op lekkage met een cellulose spons. OPMERKING: Als de voorste oogkamer niet hervormd kan worden, dan is er een grote kans op cataract die toekomstige evaluaties van de getransplanteerde hoornvlies zeer moeilijk zal maken en zal ook kunnen leiden tot donor hoornvlies endotheel disfunctie en dus graft mislukking. </li></ol></li><li> Eindevaluatie <ol><li> Observeer het oog om te bepalen dat de leerling is rond en de diepte van de voorste oogkamer is normaal. OPMERKING: Als de leerling niet rond is, betekent dit dat tijdens het hechten van de iris beschadigd was en dus de graft wordt beschouwd als een technische storing. </li><li> Breng antibiotische zalf voor het oog. Optioneel: Sluit het deksel oog met een 7-0 zijden hechtdraad. </li><li> Acht muizen tot ze volledig wakker en vervolgens afzonderlijk huis ze ten minste twee dagen na de operatie. </li></ol></li></ol> 3. het verwijderen van hechtingen <ol style="margin-left: 40px;"><li> In die gevallen waarin deksel hechtdraad wordt gebruikt, verdoven muizen zoals hierboven beschreven en verwijder het deksel hechting 48 uur. </li><li> Verdoven muizen op dag 7 na de operatie. Verwijder de sutures vastzetten van de cornea transplantaat. Zodra de hechtingen worden verwijderd en het dier is volledig ontwaakt, terug in de kooi. </li></ol> 4. Klinische Evaluatie <ol style="margin-left: 40px;"><li> Onderzoek het oog voor indicaties van procedurele complicaties waaronder, cataract (vertroebeling van de lens), hyphaema (bloed in de voorste oogkamer), een voorste kamer die is niet van de juiste diepte, of belangrijke dekking van het hoornvlies. Beschouw die deze complicaties te tonen als &quot;gecompromitteerd&quot; en euthanaseren hen door CO 2 inhalatie. <ol><li> Voer alle onderzoeken op niet-verdoofde muizen. Houd de muis met één hand aldus de muis beperken zodat de andere kant het oog proptose een beter zicht van het oog mogelijk. Zodra waarnemingen zijn voltooid, terug het dier naar zijn kooi. </li></ol></li><li> Heeft waarnemer onbekend met de behandelingsgroepen beoordelen getransplanteerd hoornvlies 2 tot 3 keer per week op tekenen van corneale transplantaatafstotingsepisodes of cornea transplantaat falen. Gebruik ofwel de chirurgische microscoop of een horizontale spleetlamp biomicroscope voor deze waarnemingen. <ol><li> Evalueer elke hoornvlies voor dekking met behulp van een schaal van 0 tot 5. De schaal is als volgt gedefinieerd: <ol><li> Wijs een score van 0 tot degenen hoornvliezen dat er geen tekenen van ondoorzichtigheid hebben. </li><li> Wijs een score van 1 tot degenen hoornvliezen die minimale oppervlakkige ondoorzichtigheid tonen. </li><li> Wijs een score van 2 tot en met hoornvliezen die mild en dieper dekking geven, maar de onderliggende pupil en iris zijn nog steeds waarneembaar. </li><li> Wijs een score van 3 tot hoornvlies stroma dat opaciteit geven waarbij de iris niet zichtbaar in detail met uitzondering van de pupil marges. </li><li> Wijs een score van 4 tot hoornvlies dat dichte stromale ondoorzichtigheid weer en als er geen onderliggende structuren kunnen worden bekeken. </li><li> Wijs een score van 5 tot hoornvlies dat volledige dekking en intensieve stromale oedeem, met pupil en iris weer helemaal verduisterd. </li></ol></li><li><html> Ook evalueren elke cornea voor de mate van bloedvat infiltratie (neovascularisatie) met een beoordelingsschaal van 1 tot 8. Om dit te bereiken, bekijk de cornea als bestaande uit 4 gelijke kwadranten en bepalen de hoeveelheid bloedvaten in elk van deze kwadranten met een scoren die zullen variëren van 0 (geen schepen) tot en met 2 voor een uitgebreide vascularisatie van dat kwadrant. Voeg de individuele scores van elk kwadrant naar de finale neovascularisatie score te berekenen. </li><li> Classificeren hoornvliezen als acuut afgewezen als zij een score van 3 voor twee opeenvolgende waarnemingen voor tijd wijst tot 5 weken. </li><li> Classificeren muizen waarvan de hoornvliezen waren duidelijk bij 5 weken, maar ontwikkelen opacificatie soms&gt; 45 dagen na het aanslaan, met een score van 3 voor twee opeenvolgende tijdstippen, zoals het hebben ondergaan late termijn hoornvlies allograftafstoting. Gebruik Kaplan-Meier survival curves om graft survival analyseren. </li></ol></li></ol> 5. Manipulatie van het model in-left: 40px; &quot;&gt; <li> Bereiding van afzonderlijke cellen uit de milt. <ol><li> Om enkele cellen te bereiden, eerst euthanaseren de donor muis. Verwijder vervolgens de milt. </li><li> Plaats de milt in een cel zeef en verstoren met een zuiger van een injectiespuit 3 ml. </li><li> Was de cellen en resuspendeer in 10 ml Hanks gebalanceerde zoutoplossing. </li><li> Breng 10 pl celsuspensie en voeg 10 ul van 0,4% trypan blauw en meng. Toevoegen dat aan hemocytometer en tel de cellen in het centrale rooster. Het aantal cellen in de buis celgetal 10 x 4 x 2 (verdunningsfactor trypan blauw) x 10 (volume in de buis). </li></ol></li><li> Injectie in de voorste oogkamer. <ol><li> Verdoven muizen zoals eerder beschreven. </li><li> Voer injecties met behulp van een dissectie microscoop. Voor elke intracamerale injectie, gebruik 10 6 miltcellen in een 0.005 ml volume en een 0,25 ml microliter injectiespuit voorzien van een 33 G naald. OPMERKING: Andere manipulatiesvan het model kan worden uitgevoerd door behandeling van dieren met reagentia die fungeren als agonisten of antagonisten of de rol die een bepaalde factor spelen na orthotope corneale transplantaatafstoting chirurgie bepalen. </li></ol></li></ol>

<ol><li>Farooq, A. V., Shukla, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Herpes+simplex+epithelial+and+stromal+keratitis%3A+an+epidemiologic+update%5BTitle%5D)+AND+%22Surv.+Ophthalmol%22%5BJournal%5D)">Herpes simplex epithelial and stromal keratitis: an epidemiologic update.</a> Surv. Ophthalmol. , 448-462 (2012).</li>
<li>Gipson, I. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Age-related+changes+and+diseases+of+the+ocular+surface+and%5BTitle%5D)+AND+%22Invest.+Opthlamol.+Vis.+Sci%22%5BJournal%5D)">Age-related changes and diseases of the ocular surface and.</a> Invest. Opthlamol. Vis. Sci. 54, 48-53 (2013).</li>
<li>Edwards, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Indications+for+corneal+transplantation+in+New+Zealand%3A+1991-1999%5BTitle%5D)+AND+%22Cornea%22%5BJournal%5D)">Indications for corneal transplantation in New Zealand: 1991-1999.</a> Cornea. 21, 152-155 (2002).</li>
<li>Thompson, R. W., Price, M. O., Bowers, P. J., Price, F. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Long-term+survival+after+penetrating+keratoplasty%5BTitle%5D)+AND+%22Ophthalmol%22%5BJournal%5D)">Long-term survival after penetrating keratoplasty.</a> Ophthalmol. 110, 1396-1402 (2003).</li>
<li>Williams, K. A., Roder, D., Esterman, A., Muehlberg, S. M., Coster, D. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Factors+predictive+of+corneal+graft+survival.+Report+form+the+Australian+Corneal+Graft+Registry%5BTitle%5D)+AND+%22Ophthalmology%22%5BJournal%5D)">Factors predictive of corneal graft survival. Report form the Australian Corneal Graft Registry.</a> Ophthalmology. 99, 403-414 (1992).</li>
<li>Larkin, D. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Corneal+allograft+rejection%5BTitle%5D)+AND+%22Br.+J.+Ophthalmol%22%5BJournal%5D)">Corneal allograft rejection.</a> Br. J. Ophthalmol. 78, 649-652 (1994).</li>
<li>Boisjoly, H. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Risk+factors+of+corneal+graft+failure%5BTitle%5D)+AND+%22Ophthalmol%22%5BJournal%5D)">Risk factors of corneal graft failure.</a> Ophthalmol. 100, 1728-1735 (1993).</li>
<li>Sugar, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Recipient+Risk+Factors+for+Graft+Failure+in+the+Cornea+Donor+Study%5BTitle%5D)+AND+%22Ophthalmol%22%5BJournal%5D)">Recipient Risk Factors for Graft Failure in the Cornea Donor Study.</a> Ophthalmol. 116, 1023-1028 (2009).</li>
<li>Namba, K., Kitaichi, N., Nishida, T., Taylor, A. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Induction+of+regulatory+T+cells+by+the+immunomodulating+cytokines+alpha-melanocyte-stimulating+hormone+and+transforming+growth+factor-beta2%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Leukoc.+Biol%22%5BJournal%5D)">Induction of regulatory T cells by the immunomodulating cytokines alpha-melanocyte-stimulating hormone and transforming growth factor-beta2.</a> J. Leukoc. Biol. 72, 946-952 (2002).</li>
<li>Taylor, A. W., Yee, D. G., Streilein, J. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Suppression+of+nitric+oxide+generated+by+inflammatory+macrophages+by+calcitonin+gene-related+peptide+in+aqueous+humor%5BTitle%5D)+AND+%22Invest.+Ophthalmol.+Vis.+Sci%22%5BJournal%5D)">Suppression of nitric oxide generated by inflammatory macrophages by calcitonin gene-related peptide in aqueous humor.</a> Invest. Ophthalmol. Vis. Sci. 39, 1372-1378 (1998).</li>
<li>Wilbanks, G. A., Mammolenti, M., Streilein, J. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Studies+on+the+induction+of+anterior+chamber-associated+immune+deviation+%28ACAID%29.+III.+Induction+of+ACAID+depends+upon+intraocular+transforming+growth+factor-beta%5BTitle%5D)+AND+%22Eur.+J.+Immunol%22%5BJournal%5D)">Studies on the induction of anterior chamber-associated immune deviation (ACAID). III. Induction of ACAID depends upon intraocular transforming growth factor-beta.</a> Eur. J. Immunol. 22, 165-173 (1992).</li>
<li>Volpert, O. V., et al. Inducer-stimulated Fas targets activated endothelium for destruction by anti-angiogenic thrombospondin-1 and pigment epithelium-derived factor. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aVolpert%2C+OV+%22Nat.+Med%22">Nat. Med</a>. , 8-349 (2002).</li>
<li>Apte, R. S., Sinha, D., Mayhew, E., Wistow, G. J., Niederkorn, J. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cutting+edge%3A+role+of+macrophage+migration+inhibitory+factor+in+inhibiting+NK+cell+activity+and+preserving+immune+privilege%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Immunol%22%5BJournal%5D)">Cutting edge: role of macrophage migration inhibitory factor in inhibiting NK cell activity and preserving immune privilege.</a> J. Immunol. 160, 5693-5696 (1998).</li>
<li>Kennedy, M. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Novel+production+of+interleukin-1+receptor+antagonist+peptides+in+normal+human+cornea%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Clin.+Invest%22%5BJournal%5D)">Novel production of interleukin-1 receptor antagonist peptides in normal human cornea.</a> J. Clin. Invest. 95, 82-88 (1995).</li>
<li>Shimmura-Tomita, M., Wang, M., Taniguchi, H., Akiba, H., Yagita, H., Hori, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Galectin-9-mediated+protection+from+allo-specific+T+cells+as+a+mechanism+of+immune+privilege+of+corneal+allografts%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Galectin-9-mediated protection from allo-specific T cells as a mechanism of immune privilege of corneal allografts.</a> PLoS One. 8, (2013).</li>
<li>Goldberg, M. F., Ferguson, T. A., Pepose, J. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Detection+of+cellular+adhesion+molecules+in+inflamed+human+corneas%5BTitle%5D)+AND+%22Ophthalmol%22%5BJournal%5D)">Detection of cellular adhesion molecules in inflamed human corneas.</a> Ophthalmol. 101, 161-168 (1994).</li>
<li>Stuart, P. M., Griffith, T. S., Usui, N., Pepose, J. S., Yu, X., Ferguson, T. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((CD95+ligand+%28FasL%29-induced+apoptosis+is+necessary+for+corneal+allograft+survival%5BTitle%5D)+AND+%22J+Clin+Invest%22%5BJournal%5D)">CD95 ligand (FasL)-induced apoptosis is necessary for corneal allograft survival.</a> J Clin Invest. 99, 396-402 (1997).</li>
<li>Yamagami, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Role+of+Fas-Fas+ligand+interactions+in+the+immunorejection+of+allogeneic+mouse+corneal+transplants%5BTitle%5D)+AND+%22Transplantation%22%5BJournal%5D)">Role of Fas-Fas ligand interactions in the immunorejection of allogeneic mouse corneal transplants.</a> Transplantation. 64, 1107-1111 (1997).</li>
<li>Stuart, P. M., Pan, F., Plambeck, S., Ferguson, T. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fas%2FFas+ligand+interactions+regulate+neovascularization+in+the+cornea%5BTitle%5D)+AND+%22Invest.+Ophthalmmol.+Vis.+Sci%22%5BJournal%5D)">Fas/Fas ligand interactions regulate neovascularization in the cornea.</a> Invest. Ophthalmmol. Vis. Sci. 44, 93-98 (2003).</li>
<li>Stuart, P. M., Yin, X. T., Pan, F., Haskova, Z., Plambeck, S., Ferguson, T. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Inhibitors+of+matrix+metalloproteinases+activity+prolong+corneal+allograft+acceptance+by+increasing+FasL+expression%5BTitle%5D)+AND+%22Invest.+Ophthalmol.+Vis.+Sci%22%5BJournal%5D)">Inhibitors of matrix metalloproteinases activity prolong corneal allograft acceptance by increasing FasL expression.</a> Invest. Ophthalmol. Vis. Sci. 45, 1169-1173 (2004).</li>
<li>Joo, C. -K., Pepose, J. S., Stuart, P. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((T-cell+mediated+responses+in+a+murine+model+of+orthotopic+corneal+transplantation%5BTitle%5D)+AND+%22Invest.Ophthalmol.+Vis.+Sci%22%5BJournal%5D)">T-cell mediated responses in a murine model of orthotopic corneal transplantation.</a> Invest.Ophthalmol. Vis. Sci. 36, 1530-1540 (1995).</li>
<li>Sonoda, Y., Sano, Y., Ksander, B., Streilein, J. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Characterization+of+cell-mediated+immune+responses+elicited+by+orthotopic+corneal+allografts+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Invest.+Ophthalmol.+Vis.+Sci%22%5BJournal%5D)">Characterization of cell-mediated immune responses elicited by orthotopic corneal allografts in mice.</a> Invest. Ophthalmol. Vis. Sci. 36, 427-434 (1995).</li>
<li>Sano, Y., Osawa, H., Sotozono, C., Kinoshita, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cytokine+expression+during+orthotopiccorneal+allograft+rejection+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Invest.+Ophthalmol.+Vis.+Sci%22%5BJournal%5D)">Cytokine expression during orthotopiccorneal allograft rejection in mice.</a> Invest. Ophthalmol. Vis. Sci. 39, 1953-1957 (1998).</li>
<li>Haskova, Z., Usui, N., Ferguson, T. A., Pepose, J. S., Stuart, P. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((CD4%2B+T+cells+are+critical+in+corneal+but+not+skin+allograft+rejection%5BTitle%5D)+AND+%22Transplantation%22%5BJournal%5D)">CD4+ T cells are critical in corneal but not skin allograft rejection.</a> Transplantation. 69, 483-488 (2000).</li>
<li>Tan, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Immunological+disruption+of+antiangiogenic+signals+by+recruited+allospecific+T+cells+leads+to+corneal+allograft+rejection%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Immunol%22%5BJournal%5D)">Immunological disruption of antiangiogenic signals by recruited allospecific T cells leads to corneal allograft rejection.</a> J. Immunol. 188, 5962-5969 (2012).</li>
<li>Dana, M. R., Yamada, J., Streilein, J. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Topical+interleukin-1+receptor+antagonist+promotes+corneal+transplant+survival%5BTitle%5D)+AND+%22Transplantation%22%5BJournal%5D)">Topical interleukin-1 receptor antagonist promotes corneal transplant survival.</a> Transplantation. 63, 1501-1507 (1997).</li>
<li>Cunnusamy, K., Chen, P. W., Niederkorn, J. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((IL-17A-dependent+CD4%2BCD25%2B+regulatory+T+cells+promote+immune+privilege+of+corneal+allografts%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Immunol%22%5BJournal%5D)">IL-17A-dependent CD4+CD25+ regulatory T cells promote immune privilege of corneal allografts.</a> J. Immunol. 186, 6737-6745 (2011).</li>
<li>Fu, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Arginine+depletion+as+a+mechanism+for+the+immune+privilege+of+corneal+allografts%5BTitle%5D)+AND+%22Eur.+J.+Immunol%22%5BJournal%5D)">Arginine depletion as a mechanism for the immune privilege of corneal allografts.</a> Eur. J. Immunol. 41, 2997-3005 (2011).</li>
<li>Medina, C. A., Rowe, A. M., Yun, H., Knickelbein, J. E., Lathrop, K. L., Hendricks, R. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Azithromycin+treatment+increases+survival+of+high-risk+corneal+allotransplants.Cornea%5BTitle%5D)+AND+%22%22%5BJournal%5D)">Azithromycin treatment increases survival of high-risk corneal allotransplants.Cornea.</a> , 32-658 (2013).</li>
<li>Cho, Y. K., Zhang, X., Uehara, H., Young, J. R., Archer, B., Ambati, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Vascular+Endothelial+Growth+Factor+Receptor+1+morpholino+increases+graft+survival+in+a+murine+penetrating+keratoplasty%5BTitle%5D)+AND+%22Invest.+Ophthalmol.+Vis.+Sci%22%5BJournal%5D)">Vascular Endothelial Growth Factor Receptor 1 morpholino increases graft survival in a murine penetrating keratoplasty.</a> Invest. Ophthalmol. Vis. Sci. 53, 8458-8471 (2012).</li>
<li>Kim, H. K., Choi, J. A., Uehara, H., Zhang, X., Ambati, B. K., Cho, Y. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Presurgical+corticosteroid+treatment+improves+corneal+transplant+survival+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Cornea%22%5BJournal%5D)">Presurgical corticosteroid treatment improves corneal transplant survival in mice.</a> Cornea. 32, 1591-1598 (2013).</li>
<li>Yamazoe, K., Yamazoe, K., Shimazaki-Den, S., Shimazaki, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Prognostic+factors+for+corneal+graft+recovery+after+severe+corneal+graft+rejection+following+penetrating+keratoplasty%5BTitle%5D)+AND+%22BMC+Ophthalmol%22%5BJournal%5D)">Prognostic factors for corneal graft recovery after severe corneal graft rejection following penetrating keratoplasty.</a> BMC Ophthalmol. 13, 5(2013).</li>
<li>Panda, A., Vanathi, M., Kumar, A., Dash, Y., Priya, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Corneal+graft+rejection%5BTitle%5D)+AND+%22Surv.+Ophthalmol%22%5BJournal%5D)">Corneal graft rejection.</a> Surv. Ophthalmol. 52, 375-396 (2007).</li>
<li>Patel, S. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Graft+survival+and+endothelial+outcomes+in+the+new+era+of+endothelial+keratoplasty%5BTitle%5D)+AND+%22Exp.+Eye+Res%22%5BJournal%5D)">Graft survival and endothelial outcomes in the new era of endothelial keratoplasty.</a> Exp. Eye Res. 95, 40-47 (2012).</li>
<li>Anshu, A., Price, M. O., Tan, D. T., Price, F. W. Jr <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Endothelial+keratoplasty%3A+a+revolution+in+evolution%5BTitle%5D)+AND+%22Surv.+Ophthalmol%22%5BJournal%5D)">Endothelial keratoplasty: a revolution in evolution.</a> Surv. Ophthalmol. 57, 236-252 (2013).</li>
</ol>

De auteurs hebben geen concurrerende financiële belangen.

Het muizenmodel van hoornvliestransplantatie hier beschreven kan de onderzoeker menselijke hoornvlies allograft afstoting bestuderen in een model dat voorspellend is welke factoren zijn best geassocieerd met zowel afstoting 15,17,18,20, 26-30 en 21-25 acceptatie van corneale allografts. Unlike menselijke cornea transplantatie, waarbij patiënten worden gegeven als topische of systemische behandeling steroïd of behandelen of voorkomen van afstoting 31, is dit model meestal gebruikt om de f...

Hoornvliestransplantatie is een van de meest succesvolle en voorkomende soorten transplantaties uitgevoerd bij mensen. De redenen waarom deze operatie wordt uitgevoerd zijn een gevolg van letsel, infectieziekten 1, of andere vormen van niet-infectieuze ziekten hoornvlies 2. Uit cijfers van de Eye Bank Association of America geven aan dat meer dan 46.000 werden uitgevoerd in 2011 (zie website: restoresight.org/eye_banks/eye_banks.html). Een indicatie van het succes dat één jaar uitval allogene corneale transplantaten van 10 tot 15% en 5 jaar het succes dan 70% 3-8. Zoals veel studies hebben aangetoond, is het succes van corneale transplantaten direct gerelateerd aan het feit dat het oog een immunologisch begunstigde plaats. Factoren die verantwoordelijk zijn voor de cornea hoedanigheid immune privilege site zijn indien zowel bloed- en lymfevaten in de cornea, een relatieve afwezigheid van antigen presenterende cellen, factoren die door het hoornvlies dat te onderdrukkens immune effector funtions 9-15, lage expressie van MHC antigenen 16, en de expressie van FasL 17-20. Ondanks deze factoren predisponeren deze enten voor succes, ze ondergaan afwijzing 3-7. Een goed begrip van de mechanismen die deze afwijzing bemiddelen alsook het testen van verschillende therapieën om afstoting te voorkomen, is van cruciaal belang. Daartoe beschrijven wij hier een muizenmodel van hoornvliestransplantatie die in gebruik voor meer dan 20 jaar hoornvliestransplantatie bestuderen in een gecontroleerde experimentele omgeving. Aangezien transplantatie responsen vertonen talrijke factoren daarbij samenwerken die uiteindelijk bepalen of de getransplanteerde weefsel of valt, is het niet mogelijk om het belang van deze factoren in een in vitro model te begrijpen. Bijgevolg zijn studies met behulp van intacte dieren nodig om te bepalen welke factoren belangrijk om ofwel succes of failu zijnre van getransplanteerde weefsel. Terwijl andere diersoorten zijn gebruikt voor hoornvliestransplantatie studie, het murine model heeft verschillende voordelen ten opzichte van het gebruik van andere soorten. De eerste is het bestaan ​​van vele stammen van muizen die bepaalde transgenen tot expressie of zijn gen-gerichte expressie van specifieke immunologische factoren waarvan de functie in transplantatie beter worden bestudeerd ontbreekt. Daarnaast zijn er vele reagentia (zowel recombinante factoren en antilichamen die factoren neutraliseren) die specifiek zijn voor muizen die niet bestaan ​​voor vele andere diersoorten. Vanwege het bestaan ​​van deze factoren, is dit model uitgebreid gebruikt om relevante factoren die bij acute corneale transplantaatafstoting reacties 15, 17,18,20 -29 identificeren. Bovendien zijn veel van de bij hoornvliestransplantatie factoren bekend functioneel transplantatie van andere weefsels zijn.

<table><tbody><tr><td>Zeiss Surgical Microscope</td><td>Zeiss</td><td>Rebuilt</td><td></td></tr><tr><td>1 ml Syringe</td><td>BD</td><td>305122</td><td></td></tr><tr><td>3 ml Syringe</td><td>BD</td><td>309657</td><td></td></tr><tr><td>10 ml Syringe</td><td>BD</td><td>309602</td><td></td></tr><tr><td>Vannus Scissors</td><td>Stortz</td><td>E-3387</td><td></td></tr><tr><td>11-0 Sutures</td><td>Alcon</td><td>717939M</td><td></td></tr><tr><td>Trephine 2.0 mm</td><td>Katena</td><td>K 2-7520</td><td></td></tr><tr><td>Trephine 1.5 mm</td><td>Katena</td><td>K 2-7510</td><td></td></tr><tr><td>Tricaine Hydrochloride 0.5%</td><td>Alcon</td><td>NDC 0065-0741-12</td><td></td></tr><tr><td>Healon</td><td>Abbott</td><td>Healon OVD</td><td></td></tr><tr><td>Forceps</td><td>FST</td><td>11251-20</td><td></td></tr><tr><td>7-0 Sutures</td><td>Alcon</td><td>8065</td><td></td></tr><tr><td>2.5% Phenylephrine HCl</td><td>Alcon</td><td>NDC 61314-342-02</td><td></td></tr><tr><td>1% Tropicamide</td><td>Bausch & Lomb</td><td>NDC-24208-585-59</td><td></td></tr><tr><td>Hamilton Syringe</td><td>Hamilton</td><td>7654-01</td><td></td></tr><tr><td>33 gauge needle</td><td>Hamilton</td><td>90033</td><td></td></tr><tr><td>Cell Strainer (100 &mu;m nylon)</td><td>BD Falcon</td><td>352360</td><td></td></tr><tr><td>Hemocytometer</td><td>Cardinal Health</td><td>B3175</td><td></td></tr><tr><td>Trypan Blue</td><td>Sigma</td><td>T8154</td><td></td></tr></tbody></table>

muizen hoornvliestransplantatie: een model om de meest voorkomende vorm van een orgaantransplantatie bestudeer

Murine Corneal Transplantation: A Model to Study the Most Common Form of Solid Organ Transplantation

Hoornvliestransplantatie is de meest voorkomende vorm van orgaantransplantatie in de Verenigde Staten met tussen de 45.000 en 55.000 procedures die jaarlijks worden uitgevoerd. Hoewel er verschillende diermodellen bestaan voor deze procedure, zijn muizen de soort die het meest wordt gebruikt. De redenen voor het gebruik van muizen zijn de relatieve kosten van het gebruik van deze soort, het bestaan van veel genetisch gedefinieerde stammen die de studie van immuunresponsen mogelijk maken, en het bestaan van een uitgebreid scala aan reagentia die kunnen worden gebruikt om reacties in deze soort verder te definiëren. Dit model is gebruikt om factoren in het hoornvlies te definiëren die verantwoordelijk zijn voor de relatieve immuunprivilegestatus van dit weefsel dat hoornvliesallotransplantaten in staat stelt om acute afstoting te overleven in de afwezigheid van immunosuppressieve therapie. Het is ook gebruikt om die factoren te definiëren die het belangrijkst zijn bij de afstoting van dergelijke allotransplantaten. Bijgevolg is veel van wat we weten over de mechanismen van zowel acceptatie als afstoting van hoornvliesallotransplantaten te danken aan studies die een muurmodel van hoornvliestransplantatie gebruiken. Naast het beschrijven van een model voor acute hoornvliesallotransplantaatabstoting presenteren we ook voor het eerst een model van late hoornvliesallotransplantaatabstoting.

Het muizenmodel van hoornvliestransplantatie is al meer dan 20 jaar succesvol mechanismen van beide corneale transplantaatafstoting 19-23 en corneale transplantaatafstoting acceptatie 13, 15,16,18, 24-27 karakteriseren. Dit model werd gebruikt om het belang van FasL expressie vaststellen cornea allograft acceptatie, dat dieren die FasL missen waren niet in staat om corneale transplantaten 15 accepteren. Het is ook gebruikt om aan te tonen dat vasculaire endotheliale groeifactor receptor ...

Muizen zijn gebruikt als een model voor het bestuderen van vele vormen van transplantatie, inclusief hoornvliestransplantatie. We beschrijven in dit rapport een muismodel voor zowel acute als late-term hoornvliestransplantatie.

Muizen hoornvliestransplantatie: een model om de meest voorkomende vorm van een orgaantransplantatie Bestudeer

Corneal transplantation is the most common form of organ transplantation in the United States with between 45,000 and 55,000 procedures performed each ...

Het algemene doel van de volgende procedure is om een model te introduceren voor acute corneaal allograft afstoting. Dit wordt bereikt door eerst het donorhoornvlies te verwijderen. De volgende stappen van de procedure zijn om de graftbed van de ontvanger voor te bereiden en het donorhoornvlies te hechten op zijn plaats.Vervolgens wordt de integriteit van de graft getest en als er geen lekken zijn, wordt het ooglid dichtgenaaid. Na een week wordt de opaciteit van het corneaal graft geëvalueerd om de afstoting van het allograft te meten. Uiteindelijk kan het model worden gebruikt om een verscheidenheid aan therapeutische strategieën te testen om de belangrijkste factoren te definiëren die verband houden met allograft afstoting van de solide orgaantransplantaties.Corneaal transplantatie is het meest gebruikelijk in de Verenigde Staten. Er zijn verschillende diermodellen beschikbaar voor deze procedure, maar muizen worden het meest gebruikt. Dit model is gebruikt om factoren te definiëren die betrokken zijn bij zowel de afstoting als acceptatie van het corneaal transplantaat.Na het verdoven van de donor- en ontvangermuizen en het bevestigen van hun verdoofde toestand door een teenprik, breng pure smeerzalf aan op de ogen die niet onderhevig zijn aan chirurgie. Bevestig vervolgens het hoofd met het donoroog horizontaal op een stevige, beweegbare ondersteuning met behulp van een strook tape over de nek. Gebruik nu een tine met een diameter van twee millimeter waarvan de punt is geverfd met methylblauw om de centrale corneaal graft site te omlijnen.Vervolgens met een 15 graden oogheelkundige mesblad penetreer de cornea om schade aan de onderliggende lens te voorkomen. Injecteer de viscoelastische oplossing in de voorste kamer zodat de kamer dieper wordt. Verwijder nu de donorgraft met Venetiaanse scharen en breng de graft over in een schotel van HBSS op ijs tot gebruik om madres te bereiken, breng een paar druppels 1% tpic zuur en 2,5% efrin hydrochloride toe aan het ontvangeroog.Gebruik vervolgens een 1,5 millimeter tine om de graft site te omlijnen zoals eerder beschreven, gebruik een 15 graden oogheelkundige mesblad, penetreer de cornea en injecteer een viscoelastische oplossing in de voorste kamer om deze te verdiepen. Om ruimte te behouden tussen de donorcornea en de lens, vermindert dit de kans op schade aan de onderliggende lens en het donorendotheel. Verwijder met Venetiaanse scharen de omlijnde centrale corneaal knop uit de ontvanger en gooi weg.Voeg viscoelastisch medium toe aan het gebied dat is vrijgemaakt door het verwijderen van de corneaal knop om de corneaal endotheelcellen te beschermen tegen schade door direct contact met de lens. Plaats nu de donorcornea over het graftbed met behulp van micro forceps met een super fijne punt. Plaats de eerste hap van 11,0 nylon naald in de donorkant door de donorcornea tot ongeveer 90% van de volledige dikte.Vervolgens naar de ontvangerkant op dezelfde diepte, en vervolgens vastbinden. Blijf de getransplanteerde cornea bevestigen met behulp van mid-cardinaal onderbroken hechtingen. In totaal zijn acht tot tien hechtingen voldoende.Vorm nu de voorste kamer opnieuw en was met een injectie van zoutoplossing. Als alternatief injecteer lucht in de voorste kamer om deze opnieuw te vormen. Na de injectie, test zachtjes de integriteit van de graft met behulp van een cellulose spons.Evalueer tenslotte het oog. Bepaal of de pupil rond is en of de voorste kamer normaal lijkt. Als de graft goed lijkt, breng antibioticumzalf aan en sluit optioneel het ooglid postoperatief met een doorlopende 7,0 zijdedraad.Bewaak de muis totdat deze volledig wakker is en bekijk hem vervolgens twee dagen in zijn eigen kooi. Verwijder de hechtingen van de verdoofde muis tussen vier en zeven dagen na de operatie. Na het verwijderen van de hechtingen, observeer de muis gedurende enkele dagen.Evalueer elke cornea met een score van nul tot vijf met behulp van een opaciteitsschaal. Een nul geeft geen opaciteit aan. Een score van een komt overeen met minimale oppervlakkige opaciteit.Een score van twee geeft aan milde tot diepere opaciteit met een herkenbare onderliggende pupil. En iris een teken van een score van drie tot corneas met stromaal opaciteit waarbij het iris niet in detail te zien is met uitzondering van de pupilranden. Als er een dichte stromaal opaciteit is en er geen onderliggende structuren kunnen worden gezien, geef de graft een score van vier.Als er volledige opaciteit is met intens stromaal oedeem en zowel de pupil als de iris volledig zijn verduisterd, scoor dan de graft een vijf. Het tekstprotocol stelt ook een schaal van nul tot acht voor op infiltratie van bloedvaten. Er kan een grote verscheidenheid aan manipulaties worden uitgevoerd met behulp van het graftmodel.Bijvoorbeeld, miltcellen kunnen worden toegevoegd aan de voorste kamer van de donormuis. Nadat de donor is gedood, verwijder de milt en breng deze over in een celfilter met behulp van een driekilo-seringpomp, vernietig de milt, was vervolgens de miltcellen in 10 milliliters HBSS, schors de gewassen cellen in 10 milliliters HBSS en tel de cellen met een hemo cytometer. Bewaar de cellen op kamertemperatuur totdat ze later worden gebruikt.Voorafgaand aan het uitvoeren van de corneaal transplantatie, injecteer de cellen in de voorste kamer in het contralaterale oog met behulp van een dissectiemicroscoop, injecteer 1 miljoen miltcellen in vijf microliter HBSS vanuit een 33 gauge naald. Het model werd gebruikt om te testen of systemische allo-antigeen T-celtolerantie voor allo-antigenen tot expressie gebracht door het donorhoornvliesallograft de graftoverleving zou kunnen verbeteren. BC-muizen werden getolerantiseerd voor C 57 black 10 allo-antigenen door injectie van B 10-miltcellen in de voorste kamer.Dit verbeterde de acceptatie van corneaal allograft niet. Studies tonen aan dat het vaststellen van antigeenspecifieke tolerantie voor allo-antigeen zoals gemeten door DTH-reacties het resultaat van huid- of corneaal allografts niet beïnvloedt. Een soortgelijk onderzoek toonde aan dat wanneer DTH-tolerantie werd vastgesteld in BAB c-muizen tegen B 10-allo-antigenen, huidgraft die een deel

murine-corneal-transplantation-model-to-study-most-common-form-solid

Research

JoVE Journal

Medicine

Geneeskunde

Het murine cervicale harttransplantatie model is geschikt voor immunologische en ischemie-reperfusie schade studies. We pasten de procedure met een niet-hechtingsmanchet techniek en uitgevoerd meer dan 1000 succesvolle transplantaties met deze benadering.  Hierin geven we meer details van deze techniek om de video te vullen.

Muizen Baarmoederhalskanker harttransplantatie Model met een aangepaste manchet Techniek

Hier presenteren we een protocol om de immunologie van afstoting te bestuderen. Het gepresenteerde chirurgische model rapporteert een korte operatietijd en een beknopte techniek. Afhankelijk van de donor-recipiënt stamcombinatie, kan de getransplanteerde nier acute cellulaire afstoting of chronische allotransplantaatbeschadiging ontwikkelen, gedefinieerd door interstitiële fibrose en tubulaire atrofie.

Muis Niertransplantatie: Modellen van transplantaatafstoting

Om gecombineerde transplantatie van vaste organen en vaatvoorziene samengestelde allogene transplantaten te bestuderen, beschrijven we een nieuw heterotopisch en bloc model voor borstwand-, thymus- en harttransplantatie bij muizen, waarbij gebruik wordt gemaakt van een cervicale niet-naadloze manchettechniek.

A Novel Microchirurgische Model voor Heterotope, En Bloc borstwand, Thymus, en harttransplantatie in Muizen

Dit nieuwe model voor orthotope achterste ledematen transplantatie in de muis, van een niet-hechtingsmanchet techniek voor super-microvasculaire anastomose, een krachtig hulpmiddel voor in vivo mechanistische immunologisch onderzoek naar gevasculariseerd samengestelde allotransplantatie (VCA).

Orthotope Hind Limb Transplantation in de muis

Murine full-dikte van de huid transplantatie is een gevestigde model om afstoting te studeren in een alloimmuun setting. Hier bieden we een tutorial van elke stap die betrokken zijn bij het uitvoeren van een BALB / c -&gt; C57BL / 6 full-dikte van de huid transplantatie.

Murine volledige dikte van de huid Transplantation

Hier wordt een stap-voor-stap protocol voor de bereiding en de teelt van de corneale knoppen van het varkens gesplitst. Aangezien dit organo-typisch gecultiveerde orgel cultuur model de celsterfte binnen 15 dagen weergeeft, vergelijkbaar met de menselijke donor cornea's, vertegenwoordigt het het eerste model dat langdurige teelt van niet-humane cornea's toestaat zonder toxische dextran toe te voegen.

Een porcine Corneale endotheliale orgel cultuur model met behulp van splitsen Corneale knoppen

Dit artikel beschrijft een aangepaste techniek voor heterotope gevasculariseerde harttransplantatie met bijgewerkte aseptische techniek, analgesie en anesthesie.

Een gemodificeerd muizen heterotopisch harttransplantatieprotocol dat overeenkomt met hedendaagse normen voor aseptische techniek, anesthesie en analgesie

Dit protocol presenteert een transpupillaire zichtgeleide transsclerale benadering om veilig en nauwkeurig subretinale cellulaire transplantaten af te leveren, met een laag aantal chirurgische complicaties, bij muizenontvangers met of zonder retinale degeneratie.

Transpupilgeleide transsclerale transplantatie van subretinale transplantaten in een muismodel voor retinale degeneratie

Deze studie stelt twee gestandaardiseerde muisxenotransplantatiemodellen vast om specifiek acute cellulaire afstoting en acute antilichaam-gemedieerde afstoting te repliceren. Deze modellen dienen als een betrouwbaar platform voor het onderzoeken van mechanismen van immuunafstoting van xenograften, het evalueren van immunosuppressieve strategieën en het bevorderen van preklinisch xenotransplantatieonderzoek.

Een gestandaardiseerd muismodel met een werkwijze van drie personen voor het bestuderen van acute cellulaire en antilichaam-gemedieerde afstoting bij xenotransplantatie

Dit protocol presenteert een vereenvoudigde, end-to-side hechtingsanastomosetechniek voor muis-cervicale harttransplantatie, en biedt een robuust en reproduceerbaar model voor het bestuderen van transplantatie-immunologie.

Cervicale heterotopische muisharttransplantatie met behulp van end-to-side anastomosetechniek om transplantatie-immunologie te bestuderen

Leer een muizenmodel voor acute hoornvliestransplantatie-afstoting om therapeutische strategieën te evalueren en afstotingsmechanismen te bestuderen. Dit model helpt bij het ontwikkelen van nieuwe behandelingen.

Muizen hoornvliestransplantatie: een model om de meest voorkomende vorm van een orgaantransplantatie Bestudeer

Meer video's verkennen