Name: Pseudomonas aeruginosa Induced Lung Injury Model (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2014-10-29T15:00:00.000+00:00
Duration: 7 min 24 s
Description: Leer een longbeschadigingsmodel ontwikkelen door intratracheale injectie van Pseudomonas aeruginosa bij muizen. Deze methode maakt onderzoek naar longontsteking en herstelmechanismen mogelijk.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Dit werk werd ondersteund door subsidies van National Institutes of Health HL105947-01 (YL), HL07829-16 (AM), HL090152 (AM).

De dierproeven werden goedgekeurd door de Animal Care Committee en Institutionele bioveiligheid Comités van de Universiteit van Illinois in Chicago. OPMERKING: Alle procedures waarbij pseudomonas moeten worden uitgevoerd met Biosafety Level 2 (BSL2) praktijken, die omvatten, maar zijn niet beperkt tot: masker, oogbescherming, jurk of jumpsuit, en dubbele handschoenen. Werken in gecertificeerde bioveiligheid kabinet. Behandel instrumenten in contact met bacteriën met bleekwater of chloor dioxide gebaseerd desinfectiemiddel. Gebruik een verzegelde doos voor het vervoer monsters. 1. P. aeruginosa Cultuur en Groei <ol><li> Store P. aeruginosa PA103 als bacteriële voorraad op een schroefdop cryovial bij -80 ° C. </li><li> Plaats de flacon in een rek in een doos met 70% ethanol bevochtigd keukenpapier en neem aan het Biosafety Level 2 (BSL2) laboratorium. </li><li> Streak de bacteriën op agarplaten schapen en groeien bij 37 ° C gedurende ~ 15 uur in een incubator. </li&gt; <li> In een BSL2 kap, krassen op de bacteriën uit plaat met bacteriën lus en resuspendeer in 5 ml PBS. </li><li> Bewaar de voorraad bij 4 ° C gedurende maximaal 3 maanden. Bepalen echter de titer elke 2 weken. </li><li> Serieel verdunnen van de bacteriën in PBS (meestal van 01:10 tot 01:10 4 7) en de plaat uit de bekende verdunning van schapen bloed agarplaten. </li><li> Incubeer de platen gedurende ~ 15 uur. Telling kolonies en berekening kolonievormende eenheid (CFU) bacteriën concentratie bepalen. </li><li> Resuspendeer de juiste concentraties (~ 5 x 10 3 CFU / pl) in 0,5 ml PBS in 1,5 ml steriele schroefdop cryovials. Dicht de cryovials en plaats ze in een cryovial rek op ontsmettingsmiddel beladen papieren handdoeken in een handomdraai deksel doos. </li><li> Vervoer de doos om BSL2 dier faciliteit. Eenmaal daar, opent de doos in de BSL2 kast. </li></ol> 2. P. aeruginosa Blaasinstillatie <ol><li> Voer survival chirurgie aseptisch (steriele handschoenen, steriele instrumentenEn aseptische technieken). Gebruik een steriel laken om een ​​werkende oppervlak voor steriele (autoclaaf) chirurgische instrumenten. Steriliseren instrumenten met een hete kraal sterilisator tussen elke tracheale instillatie procedure. </li><li> Weeg muizen vóór verdoving. Verdoven muizen met ketamine (100 mg / kg), xylazine (5 mg / kg) in 0,1-0,2 ml PBS intraperitoneaal (ip). De effectiviteit van de verdoving door niet-reactiviteit op teen knijpen. Gebruik een dierenarts zalf op de ogen tot droog onder narcose voorkomen. </li><li> Bedwingen muizen op een chirurgische boord in BSL2 kast. </li><li> Identificeer het gebied voor de snede naar beneden. Scheer dit gebied en de huid met behulp van afwisselende alcohol en povidonjood swabs 3 maal te bereiden. </li><li> Behandel de incisie met locale verdoving (lidocaïne) dit anesthesie is voldoende voor een kleine ingreep zoals een huid incisie om de luchtpijp. </li><li> Maak een kleine incisie (ongeveer 5 mm) op de middenlijn van de nek en stompe forceps zachtjes bewegen de spier voor de toegang tot de luchtpijp. Expose de luchtpijp door chirurgische dissectie. </li><li> Trekken bacteriën oplossing in een 1 ml wegwerpspuit met 27 G naald. Voor elke muis toedienen 20-30 pl kiemen bij de geschikte concentratie (tot 10 5 CFU per muis). </li><li> Steek de naald in de luchtpijp. Injecteer oplossing langzaam in de trachea. </li><li> Zorg ervoor dat het dier hapt, wat meestal aangeeft dat oplossing heeft bereikt in de longen. </li><li> Sluit de wond met steriel hechtingen (6-0 monofilament) onder aseptische omstandigheden. </li><li> Met 0,1 mg / kg buprenorfine door subcutane injectie als postoperatieve analgesie tot postoperatieve pijn te beheersen. </li><li> Zorg ervoor dat de benodigde tijd van de eerste verdoving inductie tot sluiting incisie wordt minder dan 15 min. </li><li> Na injectie, vervreemden van spuiten en naalden in een geschikte biohazard naaldcontainer. </li><li> Behandel de chirurgische instrumenten met chloordioxide gebaseerd disinfectant gedurende 15 min, spoelen en terug naar het laboratorium voor sterilisatie en opnieuw als nodig. </li><li> Huis de muizen alleen in schone kooien op warme omgeving. </li><li> Controle van het dier elke 30 minuten totdat het weer bij bewustzijn en begint te bewegen; en later 12 uur gedurende de eerste 3 dagen na de operatie. </li><li> Houd de muizen in het dier BSL2 inrichting gedurende het experiment. Zorg ervoor dat alleen het weefsel bevatte in verzegelde doos verlaat het dier BSL2 faciliteit. Wanneer de muizen tot expressie geven stervende gedrag (gedefinieerd als ademnood, lethargie, niet-ambulante reactie op zachte stimulatie) op elk punt in de studie, euthanaseren de muizen met CO2 inhalatie van een fles bron gevolgd door cervicale dislocatie. </li><li> Euthanaseren de proefpersoon door verbloeding onder verdoving. <ol><li> Verzamel longweefsel uit geëuthanaseerd muizen. Het uitvoeren van deze procedures in een BSL2 kap. Indien nodig, breng het monster met behulp van gesloten buizen geplaatst in een rack op ontsmettingsmiddel beladen papieren handdoeken in een handomdraai deksel doos voor verdere proces. </li></ol></li></ol>

<ol><li>Ware, L. B., Matthay, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+acute+respiratory+distress+syndrome%5BTitle%5D)+AND+%22N+Engl+J+Med%22%5BJournal%5D)">The acute respiratory distress syndrome.</a> N Engl J Med. 342, 1334-1349 (2000).</li>
<li>Matthay, M. A., Ware, L. B., Zimmerman, G. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+acute+respiratory+distress+syndrome%5BTitle%5D)+AND+%22J+Clin+Invest%22%5BJournal%5D)">The acute respiratory distress syndrome.</a> J Clin Invest. 122, 2731-2740 (2012).</li>
<li>Shimabukuro, D. W., Sawa, T., Gropper, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Injury+and+repair+in+lung+and+airways%5BTitle%5D)+AND+%22Crit+Care+Med%22%5BJournal%5D)">Injury and repair in lung and airways.</a> Crit Care Med. 31 (8), 524-531 (2003).</li>
<li>Wansleeben, C., Barkauskas, C. E., Rock, J. R., Hogan, B. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Stem+cells+of+the+adult+lung%3A+Their+development+and+role+in+homeostasis%2C+regeneration%2C+and+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Wiley+Interdiscip+Rev+Dev+Biol%22%5BJournal%5D)">Stem cells of the adult lung: Their development and role in homeostasis, regeneration, and disease.</a> Wiley Interdiscip Rev Dev Biol. 2, 131-148 (2013).</li>
<li>Singleton, P. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dynamin+2+and+c-abl+are+novel+regulators+of+hyperoxia-mediated+nadph+oxidase+activation+and+reactive+oxygen+species+production+in+caveolin-enriched+microdomains+of+the+endothelium%5BTitle%5D)+AND+%22J+Biol+Chem%22%5BJournal%5D)">Dynamin 2 and c-abl are novel regulators of hyperoxia-mediated nadph oxidase activation and reactive oxygen species production in caveolin-enriched microdomains of the endothelium.</a> J Biol Chem. 284, 34964-34975 (2009).</li>
<li>Sadikot, R. T., Blackwell, T. S., Christman, J. W., Prince, A. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pathogen-host+interactions+in+pseudomonas+aeruginosa+pneumonia%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Respir+Crit+Care+Med%22%5BJournal%5D)">Pathogen-host interactions in pseudomonas aeruginosa pneumonia.</a> Am J Respir Crit Care Med. 171, 1209-1223 (2005).</li>
<li>Liu, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Foxm1+mediates+the+progenitor+function+of+type+ii+epithelial+cells+in+repairing+alveolar+injury+induced+by+pseudomonas+aeruginosa%5BTitle%5D)+AND+%22J+Exp+Med%22%5BJournal%5D)">Foxm1 mediates the progenitor function of type ii epithelial cells in repairing alveolar injury induced by pseudomonas aeruginosa.</a> J Exp Med. 208, 1473-1484 (2011).</li>
<li>Kurahashi, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pathogenesis+of+septic+shock+in+pseudomonas+aeruginosa+pneumonia%5BTitle%5D)+AND+%22J+Clin+Invest%22%5BJournal%5D)">Pathogenesis of septic shock in pseudomonas aeruginosa pneumonia.</a> J Clin Invest. 104, 743-750 (1999).</li>
<li>Kumar, P. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Distal+airway+stem+cells+yield+alveoli+in+vitro+and+during+lung+regeneration+following+h1n1+influenza+infection%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">Distal airway stem cells yield alveoli in vitro and during lung regeneration following h1n1 influenza infection.</a> Cell. 147, 525-538 (2011).</li>
<li>Delano, M. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Sepsis+induces+early+alterations+in+innate+immunity+that+impact+mortality+to+secondary+infection%5BTitle%5D)+AND+%22J+Immunology%22%5BJournal%5D)">Sepsis induces early alterations in innate immunity that impact mortality to secondary infection.</a> J Immunology. 186, 195-202 (2011).</li>
<li>Lange, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+murine+model+of+sepsis+following+smoke+inhalation+injury%5BTitle%5D)+AND+%22Biochem+Biophys+Res+Commun%22%5BJournal%5D)">A murine model of sepsis following smoke inhalation injury.</a> Biochem Biophys Res Commun. 391 (3), 1555-1560 (2010).</li>
<li>Kobayashi, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+role+of+chemokines+in+neutrophil+biology%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Biosci%22%5BJournal%5D)">The role of chemokines in neutrophil biology.</a> Front Biosci. 13, 2400-2407 (2008).</li>
<li>Matute-Bello, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Animal+models+of+acute+lung+injury%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Physiol+Lung+Cell+Mol+Physiol%22%5BJournal%5D)">Animal models of acute lung injury.</a> Am J Physiol Lung Cell Mol Physiol. 295, L379-L399 (2008).</li>
<li>Sadikot, R. T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Targeted+immunomodulation+of+the+nf-kappab+pathway+in+airway+epithelium+impacts+host+defense+against+pseudomonas+aeruginosa%5BTitle%5D)+AND+%22J+Immunol%22%5BJournal%5D)">Targeted immunomodulation of the nf-kappab pathway in airway epithelium impacts host defense against pseudomonas aeruginosa.</a> J Immunol. 176, 4923-4930 (2006).</li>
<li>Pinto, I. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Development+of+an+experimental+model+of+neutrophilic+pulmonary+response+induction+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22J+Pneumologia%22%5BJournal%5D)">Development of an experimental model of neutrophilic pulmonary response induction in mice.</a> J Pneumologia. 29, 213-214 (2003).</li>
</ol>

De auteurs hebben niets te onthullen.

De Pseudomonas muis longbeschadiging model dat we hier beschrijven bootst het hele proces van ontsteking, longschade, reparatie, en de resolutie die optreden na acute lung injury of longontsteking. Het heeft unieke voordelen vergeleken met verscheidene andere schade modellen doordat het klinisch relevant en relatief veilig en gemakkelijk te hanteren. De kritische stap in de procedure is dat de injectie van bacteriën oplossing moet zeer traag. Als de injectie te snel is, de muizen zijn kans o...

Longen worden blootgesteld aan ziekteverwekkers uit de omgeving en zijn gevoelig voor ontstekingen en schade 1-3. Tijdens pathologische aandoeningen zoals longontsteking of Adult Respiratory Distress Syndrome (ARDS), pathogenen en ontstekingsfactoren vrijgegeven door leukocyten te induceren schade en dood van alveolaire cellen 1-3. Het is belangrijk om diermodellen van acute longbeschadiging te ontwikkelen voor de studie van pathologie schade en mechanisme van herstel bevorderen. Momenteel hebben de meeste mensen gebruiken hyperoxia en bleomycine geïnduceerde muis longbeschadiging modellen 4. De mechanismen van hyperoxie veroorzaakte schade niet hetzelfde als meest voorkomende longaandoeningen die tijdens longontsteking of ARDS 5. Bleomycine geïnduceerde acute blessure is zeldzaam in een klinische context 4. Hier doen we verslag van een muis longbeschadiging model met behulp van intra-tracheale injectie van P. aeruginosa 6,7. Dit model is klinisch relevant, en bootst de processes die gebeuren na longontsteking 8. Als een opportunistische, nosocomiale pathogeen van immuungecompromitteerde personen, P. aeruginosa infecteert meestal de longen, urinewegen, brandwonden, wonden, en veroorzaakt ook andere bloed infecties 6. De bacteriën produceren virulentie factor exotoxine A, te vermenigvuldigen en te activeren immuunsysteem 6 reacties. Intra-trachael toediening van P. aeruginosa zijn de gegevens betreffende blootstelling aan de bacteriën die pneumonie veroorzaken en de pathologie waarschijnlijk verschilt van de recent gerapporteerde influenza H1N1 geïnduceerde longbeschadiging model 9 zijn. Aangezien P. aeruginosa is een opportunistisch pathogeen, is relatief veilig te hanteren in vergelijking met sommige van de meer virulente pathogenen. Hier gebruikten we intratracheale injectie om de bacteriën te dienen omdat we geconstateerd dat deze methode meer bacteriën ingebracht in het distale gebied alveoli van de longen tegenandere procedures zoals het gebruik van een katheter via de mond. Vergeleken met andere acute longbeschadiging modellen, de P. aeruginosa model beschreven is geschikt voor het bestuderen longbeschadiging geïnduceerd door bacteriën en overmatige ontsteking. In tegenstelling tot andere diermodellen die gebruikt P. aeruginosa sepsis 10,11 induceren hier gebruiken we intratracheale injectie van deze bacteriën gelokaliseerde acute longbeschadiging veroorzaken.

<table><tbody><tr><td>Anesthetic: Ketamin, xylazine, lidocaine, buprenorphine</td><td></td><td></td><td>farmaceutische kwaliteit</td></tr><tr><td>27 G naald</td><td>Fisher</td><td>1482648</td><td></td></tr><tr><td>spuit</td><td>Fisher</td><td>14823434</td><td>1 ml</td></tr><tr><td>schaar</td><td>Fine Science tools</td><td></td><td></td></tr><tr><td>tang</td><td>Fine Science tools</td><td></td><td></td></tr><tr><td>sutuur&nbsp;</td><td>Fisher</td><td>19-037-526</td><td></td></tr><tr><td>Oogmeetlint, handschoen, gewaad</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Bioveiligheidskast</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>op chloordioxide gebaseerd desinfectiemiddel</td><td></td><td></td><td>Clidox</td></tr><tr><td>schapenbloed agar platen&nbsp;</td><td>Medex supply</td><td>HL-1160</td><td></td></tr></tbody></table>

pseudomonas aeruginosa induced lung injury model

Pseudomonas aeruginosa Induced Lung Injury Model

Om de menselijke acute longontsteking bestuderen, is het belangrijk om diermodellen te ontwikkelen om verschillende pathologische kenmerken van de ziekte na te bootsen. Hier hebben we een muis longbeschadiging model door intratracheale injectie van bacteriën Pseudomonas aeruginosa (P. aeruginosa of PA) ontwikkeld. Met behulp van dit model, waren we in staat om longontsteking te laten zien in de vroege fase van de blessure. Bovendien werd alveolaire epitheliale barrière lekkages waargenomen door analyse bronchoalveolaire lavage (BAL); en alveolaire celdood werd geobserveerd door Tunel assay met weefsel bereid uit gewond longen. In een latere fase na verwonding, observeerden we celproliferatie vereist voor het reparatieproces. De schade werd opgelost 7 dagen na de inleiding van P. aeruginosa injectie. Dit model bootst de sequentiële loop van long-ontsteking, letsel en reparatie tijdens longontsteking. Dit klinisch relevant diermodel is geschikt voor het bestuderen van de pathologie, het mechanisme van de reparatie, fadat acute longbeschadiging, en kan ook worden gebruikt om mogelijke therapeutische middelen te testen voor deze ziekte.

Vanaf 24-72 uur na P. aeruginosa injectie werd verhoogd cellulariteit waargenomen in longsecties (Figuur 1A-D). De longen begonnen te herstellen van 96 uur na verwonding (figuur 1E). Op 7 dagen na P. aeruginosa, normale alveoli morfologie werd grotendeels hersteld (Figuur 1F). Tunnel kleuring met behulp longcoupes voorbereid op 24 uur na P. aeruginosa toonden celdood in alveoli cellen (Figuur 1G-I). Om het herstelproces in dit...

We hebben een muislongletselmodel ontwikkeld door intra-tracheale injectie van bacteriën Pseudomonas aeruginosa. Dit model bootst longletsel tijdens pneumonie na en is klinisch relevant.

In order to study human acute lung injury and pneumonia, it is important to develop animal models to mimic various pathological features of this disease. ...

Het algemene doel van deze procedure is om pneumonie, longschadevoorwaarden bij de muis te bootsen door toediening van pseudomonas aerogen. Dit wordt bereikt door eerst pseudomonas voor te bereiden op de juiste concentratie voor injectie. In de tweede stap wordt de muizentrachea zorgvuldig blootgelegd en vervolgens worden de bacteriën toegediend aan de longen door intratracheale injectie.In de laatste stap wordt de ziekteprogressie bij de muis zorgvuldig gemonitord. Uiteindelijk kunnen longontsteking, celdoodveranderingen in de alveolaire barrière en longherstel worden bestudeerd in de pseudomonas aerogen geïnjecteerde muizenlong. De implicaties van deze techniek strekken zich uit tot de therapie van acute longschade veroorzaakt door pneumonie.Aangezien dit model de processen na pneumonie nabootst, om quats van p Aerogen, PA 1 0 3 voor installatie te creëren, begint u met het transporteren van een cryo vial van de bacteriën van minus 80 graden Celsius, opslag naar het bioveiligheidsniveau twee of BSL twee laboratorium in een rek in een doos gevoerd met 70% ethanol bevochtigde papieren handdoeken. Vervolgens onder een BSL twee kap, strekt de P aerogen PA 1 0 3 bacteriekolonies op schapenbloed agar platen en laat de kolonies groeien in een 37 graden Celsius incubator. Na ongeveer 15 uur, gebruikt u een bacterieloop om de kolonies over te brengen in vijf milliliter PBS.Verdun vervolgens de bacteriën serieel in meer PBS tot een tot 10, tot de vier, tot een tot 10 tot de zeven concentraties, zet de verdunning op verse schapenbloed agar platen. Bereken vervolgens na nog eens ongeveer 15 uur incubatie de kolonievormende eenheden voor elke plaat om de bacterieconcentratie te bepalen. Vervolgens Eloqua de juiste hoeveelheid bacteriën in 0,5 milliliter PBS in 1,5 milliliter, steriele schroefdop cryo vials, en plaats vervolgens de flacons, verzegeld in een cryo vialrek op desinfecterende beladen papieren handdoeken in een doos met snap-deksel in een BSL twee kast, bedek voorzichtig de ogen van het dier met vetointment werken.Scherp scheer de incisie en reinig de huid door drie keer afwisselend alcohol en povidonjodium gebruiken en bevestig sedatie door teen. Knijp, houd de muis vast op een chirurgisch bord na behandeling van de huid met een lokaal anestheticum. Maak vervolgens een kleine vijf millimeter incisie in het midden van de nek van het dier en gebruik stompe pincetten om voorzichtig de spier te bewegen om toegang tot de trachea te krijgen.Wanneer de trachea is blootgelegd, trek tot een keer 10 tot de vijf kolonievormende eenheden van de bacteriën in 20 tot 30 microliter PBS in een wegwerpspuit van een milliliter uitgerust met een 27 gauge naald. Steek vervolgens de naald in de trachea en injecteer langzaam de oplossing. Zorg ervoor dat het dier naar adem snakt, wat meestal aangeeft dat de oplossing de long heeft bereikt.Nu sluit u de wond aseptisch met zes nul monofilament steriele hechtingen en dient u de pijnstilling na de operatie toe. Gooi vervolgens de spuiten en naalden in de juiste biogevaarlijke puntencontainer na injectie van elk dier. Hoe is de myers alleen in schone kooien in een warme omgeving?Controleer de dieren elke 30 minuten totdat ze bijkomen en beginnen te bewegen. Behandel de chirurgische instrumenten gedurende 15 minuten met chloordioxide desinfectiemiddel. Spoel vervolgens af en breng de gereedschappen terug naar het laboratorium voor verdere sterilisatie indien nodig.Huis de muizen in de BSL twee dierenfaciliteit gedurende het hele experiment en verzamel vervolgens na exsanguinatie onder anesthesie het longweefsel van elk dier onder een BSL twee kap. Ten slotte, als verdere verwerking gewenst is, brengt u de monsters in verzegeld buizen geplaatst op een rek op desinfecterende beladen papieren handdoeken in een doos met snap-deksel naar de juiste verwerkingsfaciliteit. In dit representatieve experiment bij 24 tot 72 uur na P aerogen injectie, kan een verhoogde cellulatie worden waargenomen in de longsecties.Tegen 96 uur is de long begonnen te herstellen en tegen zeven dagen is de normale alveolaire morfologie grotendeels hersteld. Tunnelkleuring van longsecties bereid 24 uur na P aerogen installatie vertoont celdood binnen de alveolaire cellen om het herstelproces te bestuderen. In dit verwondingsmodel kan BRDU worden geïnjecteerd in de muizen drie dagen na p aerogen-toediening.Zoals geïllustreerd, vertonen p aerogen behandelde dieren hyperproliferatie in het longweefsel in vergelijking met controlebehandelde dieren. Om de veranderingen in barrière, permeabiliteit en ontsteking na verwonding te bestuderen, kan bronchoalveolaire lavage of darmvloeistof worden verzameld op verschillende tijdstippen. Na p aerogen injectie, bijvoorbeeld, is de eiwitconcentratie in de darm significant verhoogd na 48 uur na bacterie-installatie, wat wijst op lekkage van de epitheliale barrière, het aantal cellen.De darm is ook significant verhoogd op dit moment, wat wijst op een ontstekingsreactie op vier tot vijf dagen na P aerogen injectie, zowel het eiwitniveau in de darm als het aantal cellen beginnen te dalen, wat wijst op herstel. Verder neemt een niveau van macrofaag ontstekingseiwit twee, een cytokine betrokken bij neutrofielen aantrekking, significant toe na 48 uur en keert dan terug naar basale niveaus na 96 uur. In longlysaten zonder p aerogen worden slechts een klein aantal monocyten waargenomen in de darmvloeistof.In tegenstelling daarmee, is een groot aantal neutrofielen aanwezig in de darm, geïsoleerd na 48 uur na injectie. Na 96 uur keert de celsamenstelling van de darm terug naar controleniveaus Na deze procedure. Andere methoden zoals histologisch, sectioneren of bronchoalveolaire lavage verzameling kunnen worden uitgevoerd om aanvullende vragen te beantwoorden, zoals welke cellen of factoren zijn betrokken bij ontsteking en herstel na acute longschade?

pseudomonas-aeruginosa-induced-lung-injury-model

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Immunologie en Infectie

We beschrijven de agar-kralen methode om hardnekkige langdurige chronische Pseudomonas aeruginosa luchtweginfectie te vestigen in het muismodel.

Long Term Chronische<em&gt; Pseudomonas aeruginosa</em&gt; Luchtweginfectie in Muizen

We beschrijven een werkwijze voor het induceren neutrofiele longontsteking door uitdaging om vernevelde lipopolysacharide door verneveling, te modelleren acute longbeschadiging. Daarnaast worden fundamentele chirurgische technieken long isolatie, tracheale intubatie en bronchoalveolaire lavage beschreven.

Een methode voor het genereren van Pulmonale neutrofilie behulp Aerosolized Lipopolysaccharide

Terwijl in vitro studie van gastheer-pathogeen interacties de karakterisering van specifieke immuunresponsen mogelijk maakt, zijn in vivo modellen vereist om de effecten van complexe responsen te observeren. Door gebruik van Candida albicans blootstelling gevolgd door Pseudomonas aeruginosa-gemedieerde longinfectie, hebben we een muismodel gevestigd van microbiële interacties betrokken bij de pathogeniteit van ventilateur-geassocieerde pneumonie.

Bestuderen van microbiële gemeenschappen<em&gt; In Vivo</em&gt;: Een model van de Host-gemedieerde interactie tussen<em&gt; Candida albicans</em&gt; En<em&gt; Pseudomonas aeruginosa</em&gt; In het Airways

Verscheidene werkwijzen zijn beschreven in de literatuur voor het modelleren van bacteriële pneumonie bij muizen. Hierin beschrijven we een niet-invasieve, goedkope, snelle werkwijze voor het induceren via aspiratie pneumonie (bijvoorbeeld inhalatie) van een bacterieel inoculum gepipetteerd in de orofarynx. Downstream methoden voor de beoordeling van de pulmonaire aangeboren immuunrespons zijn ook gedetailleerd.

Een niet-invasieve en Technisch Niet-intensieve methode voor Inductie en fenotypering van experimentele bacteriële longontsteking in Muizen

Een methode voor het veroorzaken van longinfecties bij immuungeschikt knaagdieren wordt beschreven. Met vaardigheid kan deze methode snel en eenvoudig worden uitgevoerd om een stabiele infectie te induceren met veel isolaten van S. pneumoniae, H. influenzae, P. aeruginosa, K. pneumoniae en A. baumannii.

Een robuuste Longontsteking Model in Immunocompetente Knaagdieren om Antibacteriële Werkzaamheid Evalueer tegen<i&gt; S. pneumoniae</i&gt;,<i&gt; H. influenzae</i&gt;,<i&gt; K. pneumoniae</i&gt;,<em&gt; P. aeruginosa</em&gt; of<em&gt; A. baumannii</em

Eenvoudige methoden beschreven voor het aantonen van de productie van cytotoxische amyloids na infectie van pulmonaire endotheel door Pseudomonas aeruginosa.

Methoden voor het opsporen van cytotoxische Amyloids volgende infectie van pulmonaire endotheliale cellen door Pseudomonas aeruginosa

Hier gepresenteerd is een stap-voor-stap procedure om acute longschade in muizen induceren door directe intratracheal lipopolysaccharide instillatie en uit te voeren FACS analyse van bloedmonsters, bronchoalveolaire lavage vloeistof, en longweefsel. Minimale invasieve, eenvoudige handling, goede reproduceerbaarheid, en titratie van de ziekte ernst zijn voordelen van deze aanpak.

Inducerende acute Long blessure bij muizen door directe Intratracheal lipopolysaccharide instillatie

We beschrijven een vertraagd inentingsprotocol voor het genereren van chronische wondinfecties bij immunocompetente muizen.

Een vertraagde inenting model van chronische Pseudomonas aeruginosa wondinfectie

Dit manuscript beschrijft de opstelling van een infectieus model van longontsteking bij muizen en de respectieve karakterisering van letselresolutie, samen met methoden voor het kweken van bacteriën en intratracheale instillatie. Een nieuwe benadering met behulp van hoogdimensionale flowcytometrie om het immuunlandschap te evalueren, wordt ook beschreven.

Experimenteel model om de resolutie van longontsteking te evalueren

Er is momenteel een gebrek aan in vivo modellen die geschikt zijn voor screening van geneesmiddelen tegen chronische bacteriële infecties. Hier beschrijven we een protocol voor wondinfectie door een Pseudomonas aeruginosa klinisch isolaat om een persisterende infectie bij zebravislarven te genereren.

Modellering van persistente Pseudomonas aeruginosa-infectie bij gewonde zebravislarven

In deze studie is aangetoond dat een niet-invasieve endotracheale installatietechniek ALI bij ratten ontwikkelt met behulp van een basislaryngoscoop om een precieze LPS-afgifte aan de longen te garanderen. De LPS wordt toegediend via een endotracheale buis met behulp van een laryngoscoop. De omvang van het longletsel wordt op meerdere tijdstippen beoordeeld.

Niet-invasieve endotracheale toediening van lipopolysaccharide om acute longschade bij knaagdieren te induceren

Leer een longbeschadigingsmodel ontwikkelen door intratracheale injectie van Pseudomonas aeruginosa bij muizen. Deze methode maakt onderzoek naar longontsteking en herstelmechanismen mogelijk.

Pseudomonas aeruginosa Induced Lung Injury Model

Meer video's verkennen