Name: Procedure for Human aderen Ex Vivo Perfusie en Externe Reinforcement (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2014-10-01T15:00:00.000+00:00
Duration: 9 min 50 s
Description: Leer ex vivo perfusie van menselijke aderen met externe mesh-versterking om intima-hyperplasie te verminderen. Deze methode helpt onderzoekers hemodynamische mechanismen van vaatgraftfalen te bestuderen.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Dit werk werd ondersteund door subsidies van de SNF [31003A-138528], de Octav en Marcella Botnar Foundation, de Novartis Foundation en de Emma Muschamp Foundation. Wij danken Martine Lambelet, en Jean-Christophe Stehle voor hun uitstekende technische bijstand.

De Ethische Commissie van de Universiteit van Lausanne ingestemd met de experimenten, die in overeenstemming zijn met de in de Verklaring van Helsinki van 1975 principes, zoals herzien in 1983 voor het gebruik van menselijke weefsels. 1 Human Grote vene Harvest <ol><li> Verkrijgen overschot segmenten van niet-menselijke spataderen aderen van patiënten die de onderste ledematen bypass operatie voor ischemie. In de operatiekamer, desinfecteer de hele been met een jodium-oplossing en drapeer de patiënt aan het been bloot van de lies tot aan de voet. </li><li> Maak een mediane incisie vanaf de lies tot de knie (het verlaten van de onderbroken huid gedeelte). </li><li> Oogst de grote vene met een uitloper van de omgevende weefsels (no-touch-techniek). Secure zijtakken van de aderen met 4-0 zijden dassen. Onmiddellijk slaan minimaal 9 cm lang surplus segment van de grotere saphena, met een uitwendige diameter van 2,5-4 mm bij 4 ° C in een RPMI-1640 Glutamax medium, aangevuld met 12,5% foetaal kalfsserum en brengen het naar het laboratorium. </li></ol> 2 EVPs Ontwerp <ol><li> Monteer de algemene uitrusting getoond in figuur 1. Autoclaaf alle apparatuur en onder steriele omstandigheden te houden alle componenten. Daarnaast is ervoor te zorgen dat het systeem waterdicht is en geen chemicaliën lekken in het medium. Gebruik polymethacrylaat methyl (PMMA-GS) voor de cover. Staal (X5 Cr Ni 18 10) en polyoxymethyleen kunststof (POM) als de ader ondersteuning. </li><li> Ontwerp de perfusie kamer naar de gewenste geometrie voor de plaatsing van de ader en de verbinding mogelijk. Zorg ervoor dat de diepte (of radius bij gebruik cilindrische constructie) ten minste 2,5 cm, zodat het mogelijk minimale buiging en dilatatie van het vat, samen met een constante dekking van het kweekmedium (figuur 1). Afdichting is een groot probleem en is de reden rechthoekige PMMA-GS bouw wordt gebruikt. </li><li> Ontwerp de ader ondersteuning van de gewenste geometry. Om ader knikken of meer distensie voorkomen, moet lengteverstelling door duwen of trekken (schroef kan niet worden gebruikt voor dit doel, aangezien de ader worden gedraaid samen met de schroef). OPMERKING: Een volledig stalen stang met elkaar verbonden door 2 schuifdeuren L-vormige stukken die de 2 ader cilinders ondersteunen (5 mm diameter om het schip te passen) en de ader (Figuur 1B en figuur 2) wordt hier gebruikt. </li><li> Ontwerp de kolom druk, zodat het &quot;rustende druk&quot; toegepast op het systeem: p = 0-10 = hx ρ xg, waarbij p = druk (N / m 2 Pa) h = hoogte van de vloeistofkolom (m) ρ = massa vloeistof (kg / m 3) en g = de gravitatieconstante (9.81 m / s 2). Ontwerp vier verbinding kanalen, van boven naar beneden: druk uitoefenen voor de uitstroom (van de ader), de instroom (de ader) en mediumverversing mogelijk. </li><li> Bereid het medium. Op basis van eerdere studies 5,11-14, kiest RPMI- 1640, aangevuld met Glutamax, 12,5% Foetaal kalfsserum en 1% antibioticum-antimycotische oplossing (10.000 E / ml penicilline G, plus 10 mg / ml streptomycine sulfaat, plus 25 mg / ml amfotericine B, plus 0,5 ug / ml: gentamycine). Shear stress (SS) wordt gegeven door SS = 4 μQ / π * r 3 Q de stroomsnelheid (ml / sec), r de straal (cm) van de ader segment en μ de viscositeit van de perfusie medium. <ol><li> Moduleren SS door het aanpassen van de viscositeit door middel van toevoeging van 70 kDa dextran. Meet de viscositeit met een viscometer. Hier, voeg 8% 70 kDa dextran SS op 9-15 dyn / cm 2. </li></ol></li><li> Stel de gearing pomp een pulsvormige signaal nier van 60 pulsen / min en constante amplitude genereren van een unidirectionele stroming van 150 ± 15 ml / min, onafhankelijk van de in het systeem bestuurd door een computer druk veroorzaken. Zorg ervoor dat het besturen van software integreert constante acquisitie en monitoring van de druk, stroomsnelheid, hartslag en het signaal. Indien gewenst, gebruik maken van een tweede pomp (niet synchroonhronized) een niet-laminaire, turbulente stroming produceren. </li></ol> 3 EVP&#39;s Assembly (figuur 1) <ol><li> Voordat u begint, zorg ervoor dat alle apparatuur is steriel. Voer alle volgende stappen onder steriliteit in een laminaire stroming kap. </li><li> Plaats de ader in een petrischaal gevuld met medium. Gebruik een chirurgisch mes en verdeel de ader in 3 gelijke segmenten. </li><li> Spoel een segment in PBS. Verdeel het segment in 3 delen, lossen een in formaline voor morfometrie. Bevries de andere twee voor kwantitatieve transcript (RT-PCR) en eiwitten (western blot) analyse. Beschouw deze segmenten als een controle, niet-geperfundeerde ader. </li><li> Gebruik de 2 resterende segmenten voor perfusie. <ol><li> Heel voorzichtig te injecteren medium in de ader en het bepalen van de normale stroomrichting; in aanwezigheid van de kleppen van de ader wordt teruggedraaid. </li><li> Het afdichten van de aderen is van het grootste belang voor experimentele succes. Controleer op lekkage door middel van zekerheden. Bevestig eventuele lekken met 6-0 zijde hechtingen. </li> &lt;/ Ol&gt; </li><li> Verbind de ader segment tussen twee metalen cilinders, een uiteinde tegelijk (2.3, figuur 1). Zet de cilinders met Ethibon 3-0 rond de inkepingen (Figuur 1A en B). <ol><li> Leg de hele veneuze segment in de perfusie kamer eerder gevuld met medium. Herhaal dezelfde procedure voor het tweede segment. OPMERKING: Het niet goed af van de ader aan de cilinder zal een bron van lekkage zijn, vereisen reintervention, en een aanzienlijke verhoging van het risico van infectie en experimentele mislukking. </li></ol></li><li> De tweede segment versterken (mesh), laat de twee cilinders (met de ader bijgevoegde) van de L-vormige stukken (2.3 en figuur 1). <ol><li> Wees voorzichtig en raak de ader niet aan met welke instrumenten. Schuif het gaas eerste op de cilinder vervolgens op de ader. Een push / pull gedrang zal het gaas op de ader te krijgen. </li><li> Zodra het gaas bedekt het gehele oppervlak van de ader te verzekeren de jacketed ader naar de cilinders met Ethibon 3-0. </li><li> Monteer de ader / cylinder verbinding aan de L-vormige steun en overbrengen naar de perfusie kamer, vooraf gevuld met medium. </li></ol></li><li> Sluit elke metalen cilinder (in-en uitstroom) een Y-splitser met-peroxide behandelde siliconen buis met een inwendige diameter van 3,2 mm. </li><li> Sluit de uitstroom splitser een tweede Y-splitser met hetzelfde type buis. Vanaf deze Y-splitter Gebruik een buis naar de perfusie druk door beide schepen te meten. Sluit de andere naar de kolom tot gesloten lus (figuur 2) te vormen. </li><li> In de couveuse, gebruik dan een lange (een meter lengte) buis naar de kolom druk aan te sluiten op de kop van de pomp. </li><li> Voltooi het instellen door het aansluiten van de pomp hoofd om de instroom Y-splitter met een andere lange lengte buis (figuur 1). </li></ol> 4 Aders Perfusie <ol><li> Na de EVP&#39;s assemblage co is geweestmpleted, vul de kolom met medium (verblijf onder de ader uitstroom buis aan het opnieuw vullen toelaten). Voeg meer medium in de kolom totdat het systeem vol. Verplaats alle systeem in de incubator op 37 ± 0,1 ° C met een pH constant gehouden op 7.40 ± 0.01 (met een CO 2 / pH algoritme gebaseerd op de Henderson-Hasselbach vergelijking). </li><li> Breng de tandwielpomp hoofd buiten de couveuse en sluit deze aan op de tandwielpomp rijden. Schroef de stangen aan de vast te zetten. </li><li> Schakel de stroom in de pomp, zorg ervoor dat deze is geactiveerd op de driving-software en laat 5 min voor het medium gelijkmatig worden verdeeld in elk compartiment. </li><li> Om de druk te controleren, maken gebruik van een arteriële lijn monitoring. Sluit de EVP uitgangsdruk (het correspondeert met de arteriële catheter) op de drukomvormer gekoppeld aan de computer. <ol><li> Zorg ervoor dat de buis wordt volledig gevuld met medium en geen luchtbellen bevat. De-bubble van de cultuur-systeem via de &quot;arteriële line &quot;buis (figuur 2). Besteed aandacht aan de weergave en zoek een pulserende nier signaal van 60 pulsen / min van constante amplitude. Op dit punt is de gemiddelde druk tussen 0-10 mm Hg. Als de druk &lt;0 en de kolom geleidelijk leegt zoeken naar een lek (ader onderpand of onvoldoende afdichting tussen de ader en de buis). </li></ol></li><li> Stel de minimale druk tot 6 mm Hg voor een veneuze proef of 90 mm Hg voor een arteriële test. Onder deze omstandigheden is een luchtinjector zijn de vereiste druk om de kolom en systeem. </li><li> Vervang het medium elke 2 dagen met de buis verbonden met de kolomdruk. Om de druk verandering schade te voorkomen, opent de kolom stekker eerste. </li></ol> 5 Afronding van de perfusie <ol><li> Na 3 of 7 dagen van de perfusie: neem de EVP&#39;s uit de couveuse en demonteer de aderen. Gooi de 5 mm proximale en distale einden ader aan de apparatuur. Snijd een centrale, 5 mm dik rings van het resterende segment en zet in formaline (morfometrie). Bevries de overgebleven fragmenten en reduceren tot poeder voor verdere moleculaire analyses. </li></ol>

<ol><li>Sal Go, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Executive+summary%3A+heart+disease+and+stroke+statistics--2014+update%3A+a+report+from+the+american+heart+association%5BTitle%5D)+AND+%22Circulation%22%5BJournal%5D)">Executive summary: heart disease and stroke statistics--2014 update: a report from the american heart association.</a> Circulation. 129, 399-410 (2014).</li>
<li>Sal Conte, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Results+of+PREVENT+III%3A+a+multicenter%2C+randomized+trial+of+edifoligide+for+the+prevention+of+vein+graft+failure+in+lower+extremity+bypass+surgery%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Vascular+Surgery%22%5BJournal%5D)">Results of PREVENT III: a multicenter, randomized trial of edifoligide for the prevention of vein graft failure in lower extremity bypass surgery.</a> Journal of Vascular Surgery. 43, 742-751 (2006).</li>
<li>Yu, P., Nguyen, B. T., Tao, M., Bai, Y., Ozaki, C. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mouse+vein+graft+hemodynamic+manipulations+to+enhance+experimental+utility%5BTitle%5D)+AND+%22The+American+Journal+of+Pathology%22%5BJournal%5D)">Mouse vein graft hemodynamic manipulations to enhance experimental utility.</a> The American Journal of Pathology. 178, 2910-2919 (2011).</li>
<li>Davies, M. G., Hagen, P. O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Reprinted+article+%26%2334%3BPathophysiology+of+vein+graft+failure%3A+a+review%26%2334%3B%5BTitle%5D)+AND+%22European+journal+of+vascular+and+endovascular+surgery+%3A+the+official+journal+of+the+European+Society+for+Vascular+Surgery%22%5BJournal%5D)">Reprinted article &#34;Pathophysiology of vein graft failure: a review&#34;.</a> European journal of vascular and endovascular surgery : the official journal of the European Society for Vascular Surgery. 42, Suppl 1. S19-S29 (2011).</li>
<li>Berard, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Role+of+hemodynamic+forces+in+the+ex+vivo+arterialization+of+human+saphenous+veins%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Vascular+Surgery%22%5BJournal%5D)">Role of hemodynamic forces in the ex vivo arterialization of human saphenous veins.</a> Journal of Vascular Surgery. 57, 1371-1382 (2013).</li>
<li>Vijayan, V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Long-term+reduction+of+medial+and+intimal+thickening+in+porcine+saphenous+vein+grafts+with+a+polyglactin+biodegradable+external+sheath%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Vascular+Surgery%22%5BJournal%5D)">Long-term reduction of medial and intimal thickening in porcine saphenous vein grafts with a polyglactin biodegradable external sheath.</a> Journal of Vascular Surgery. 40, 1011-1019 (2004).</li>
<li>Jeremy, J. Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((On+the+biology+of+saphenous+vein+grafts+fitted+with+external+synthetic+sheaths+and+stents%5BTitle%5D)+AND+%22Biomaterials%22%5BJournal%5D)">On the biology of saphenous vein grafts fitted with external synthetic sheaths and stents.</a> Biomaterials. 28, 895-908 (2007).</li>
<li>Zilla, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Constrictive+external+nitinol+meshes+inhibit+vein+graft+intimal+hyperplasia+in+nonhuman+primates%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+Thoracic+and+Cardiovascular+Surgery%22%5BJournal%5D)">Constrictive external nitinol meshes inhibit vein graft intimal hyperplasia in nonhuman primates.</a> The Journal of Thoracic and Cardiovascular Surgery. 136, 717-725 (2008).</li>
<li>Zilla, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Utilization+of+shape+memory+in+external+vein-graft+meshes+allows+extreme+diameter+constriction+for+suppressing+intimal+hyperplasia%3A+a+non-human+primate+study%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Vascular+Surgery%22%5BJournal%5D)">Utilization of shape memory in external vein-graft meshes allows extreme diameter constriction for suppressing intimal hyperplasia: a non-human primate study.</a> Journal of Vascular Surgery. 49, 1532-1542 (2009).</li>
<li>Yeoman, M. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+constitutive+model+for+the+warp-weft+coupled+non-linear+behavior+of+knitted+biomedical+textiles%5BTitle%5D)+AND+%22Biomaterials%22%5BJournal%5D)">A constitutive model for the warp-weft coupled non-linear behavior of knitted biomedical textiles.</a> Biomaterials. 31, 8484-8493 (2010).</li>
<li>Longchamp, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+use+of+external+mesh+reinforcement+to+reduce+intimal+hyperplasia+and+preserve+the+structure+of+human+saphenous+veins%5BTitle%5D)+AND+%22Biomaterials%22%5BJournal%5D)">The use of external mesh reinforcement to reduce intimal hyperplasia and preserve the structure of human saphenous veins.</a> Biomaterials. 35, 2588-2599 (2014).</li>
<li>Saucy, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ex+vivo+pulsatile+perfusion+of+human+saphenous+veins+induces+intimal+hyperplasia+and+increased+levels+of+the+plasminogen+activator+inhibitor+1%5BTitle%5D)+AND+%22European+Surgical+Research.+Europaische+Chirurgische+Forschung.+Recherches+Chirurgicales+Europeennes%22%5BJournal%5D)">Ex vivo pulsatile perfusion of human saphenous veins induces intimal hyperplasia and increased levels of the plasminogen activator inhibitor 1.</a> European Surgical Research. Europaische Chirurgische Forschung. Recherches Chirurgicales Europeennes. 45, 50-59 (2010).</li>
<li>Dubuis, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Atorvastatin-loaded+hydrogel+affects+the+smooth+muscle+cells+of+human+veins%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+pharmacology+and+experimental%22%5BJournal%5D)">Atorvastatin-loaded hydrogel affects the smooth muscle cells of human veins.</a> The Journal of pharmacology and experimental. 347, 574-581 (2013).</li>
<li>Deglise, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Increased+connexin43+expression+in+human+saphenous+veins+in+culture+is+associated+with+intimal+hyperplasia%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Vascular+Surgery%22%5BJournal%5D)">Increased connexin43 expression in human saphenous veins in culture is associated with intimal hyperplasia.</a> Journal of Vascular Surgery. 41, 1043-1052 (2005).</li>
<li>Muto, A., Model, L., Ziegler, K., Eghbalieh, S. D., Dardik, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mechanisms+of+vein+graft+adaptation+to+the+arterial+circulation%3A+insights+into+the+neointimal+algorithm+and+management+strategies%5BTitle%5D)+AND+%22Circulation+Journal+%3A+Official+Journal+of+the+Japanese+Circulation+Society%22%5BJournal%5D)">Mechanisms of vein graft adaptation to the arterial circulation: insights into the neointimal algorithm and management strategies.</a> Circulation Journal : Official Journal of the Japanese Circulation Society. 74, 1501-1512 (2010).</li>
<li>Tao, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+simplified+murine+intimal+hyperplasia+model+founded+on+a+focal+carotid+stenosis%5BTitle%5D)+AND+%22The+American+Journal+of+Pathology%22%5BJournal%5D)">A simplified murine intimal hyperplasia model founded on a focal carotid stenosis.</a> The American Journal of Pathology. 182, 277-287 (2013).</li>
<li>Berard, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Salvage+treatment+for+venous+aneurysm+complicating+vascular+access+arteriovenous+fistula%3A+use+of+an+exoprosthesis+to+reinforce+the+vein+after+aneurysmorrhaphy%5BTitle%5D)+AND+%22European+Journal+of+Vascular+and+Endovascular+Surgery+%3A+the+Official+Journal+of+the+European+Society+for+Vascular+Surgery%22%5BJournal%5D)">Salvage treatment for venous aneurysm complicating vascular access arteriovenous fistula: use of an exoprosthesis to reinforce the vein after aneurysmorrhaphy.</a> European Journal of Vascular and Endovascular Surgery : the Official Journal of the European Society for Vascular Surgery. 40, 100-106 (2010).</li>
</ol>

De auteurs hebben niets te onthullen.

Deze studie onthult een ex vivo ader perfusiesysteem (EVP&#39;s) tot uitgebreide hemodynamische studies uit te voeren in de menselijke aderen. Dit systeem maakt aderen perfusie onder gedefinieerde hemodynamische parameters bij afwezigheid van verzwarende inflammatoire en groeifactoren vrijgegeven door circulerende cellen in vivo. Zo een beter begrip van de onderliggende routes betrokken bij de controle van IH in menselijke aderen grafts 5,11,12,15. Reproduceerbar...

Hart-en vaatziekten zijn de belangrijkste oorzaak van morbiditeit en mortaliteit in de westerse landen 1. Ondanks de vooruitgang in endovasculaire behandelingen, bypass-operatie blijft de steunpilaar van de moderne therapieën, dus meer dan een half miljoen vaatprothesen worden jaarlijks uitgevoerd in de Verenigde Staten. Echter, ondanks decennia van onderzoek, 30-60% van de onderste extremiteit veneuze transplantaten niet binnen de eerste jaren als gevolg van hyperplasie (IH) 2. Mechanische krachten, in het bijzonder lage shear stress (SS) en de hoge muur spanning, staan ​​centraal in de initiatie en ontwikkeling van deze hyperplastische respons 3,4. Om dit probleem aan te pakken, een ex vivo aderen perfusiesysteem (EVP&#39;s) werd gegenereerd om te studeren, onder strikt gecontroleerde hemodynamische omstandigheden (druk en shear stress), het gedrag van de menselijke aderen. In deze studie, na insertie in de arteriële circulatie-achtige, hoge druk (gemiddelde = 100 mm Hg) was voldoende om Prolif stimulerenking en migratie van gladde spiercellen in de intimale laag (IH) 5. Zoogdieren studies hebben gesuggereerd het gebruik van uitwendige wapening als een efficiënte methode om de &quot;gearterialiseerde ader&quot; ondersteunen en het tegengaan van de acute hemodynamische verandert de ader gezichten eenmaal geïmplanteerd in een arteriële milieu. Het gaas voorkomen over-uitzetting, verhoogde schuifspanning en verminderde wandspanning en dus IH 6-10. Echter, de onderliggende mechanismen en de toepasselijkheid ervan op de menselijke aderen in het verbeteren van de bypass doorgankelijkheid zijn niet volledig gekarakteriseerd. De EVP werd gebruikt voor het vergelijken, in staat nabootsen van de veranderingen een ader gezichten eenmaal ingebracht in een arteriële behandeling (high shear stress en druk), het gedrag van menselijke aderen in de afwezigheid en aanwezigheid externe macroporeuze polyester buisvormige mesh. Door het voorkomen van pathologische remodelling en IH, het gaas het bewijs geleverd van haar potentiële klinische efficiëntie 11 </sup&gt;. Deze studie 1) introduceert een model van ex vivo humane aderen perfusie onder gecontroleerde druk en schuifspanning 2) toont aan dat de externe macro-poreuze polyester gaas vermindert IH en geeft cruciale informatie voor de potentiële klinische toepassing.

<table><tbody><tr><td>RPMI 1640 - Glutamax</td><td>Life Technologies</td><td>61870-010</td><td></td></tr><tr><td>Penicilline/Streptomycine/Fungizone</td><td>Bioconcept</td><td>4-02F00-H</td><td></td></tr><tr><td>Dextran van Leuconostoc spp. 500 g</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>31390</td><td></td></tr><tr><td>Tampon PBS CHUV pH 7.1-7.3 1 L</td><td>Laboratorium und Grosse Apotheke Dr. G. Bichsel AG</td><td>100 0 324 00</td><td></td></tr><tr><td>Cryosectionering inbeddingsmedium - Tissue-Tek OCT Compound</td><td>Fisher Scientific</td><td>14-373-65</td><td></td></tr><tr><td>Siliconen slang (Peroxide) L/S 16 (96400-16 ) - 7.5 m</td><td>Idex Health &amp; Science GMBH</td><td>MF0037ST</td><td></td></tr><tr><td>Y-splitter&nbsp;</td><td>Idex Health &amp; Science GMBH</td><td>Y-connector</td><td></td></tr><tr><td>35 mm kweekschaal</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>CLS430165-100EA</td><td></td></tr><tr><td>15 ml Falcon buis</td><td>BD Bioscence</td><td>352096</td><td></td></tr><tr><td>50 ml Falcon buis</td><td>BD Bioscence</td><td>352098</td><td></td></tr><tr><td>Gearing pomp - Reglo-Z</td><td>Idex Health &amp; Science GMBH</td><td>SM 895&nbsp;</td><td>&nbsp;App-Nr 03736-00194</td></tr><tr><td>Pompkop</td><td>Idex Health &amp; Science GMBH</td><td>MI0008&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>Monitoring Kit TRANSPAC IV</td><td>icumedical</td><td>011-0J736-01</td><td></td></tr><tr><td>20 ml Spuit</td><td>B. Braun Medical SA</td><td>4612041-02</td><td></td></tr><tr><td>Etibon 3-0 FS-2</td><td>Ethicon- Johnson&amp;Johnson</td><td>EH7346H</td><td></td></tr><tr><td>Mesh ProVena 6-8mm</td><td>B. Braun Medical SA</td><td>1105012-14</td><td></td></tr><tr><td>NaCl: natriumchloride oplossing perfusie 0.9% (100 ml)</td><td>B. Braun Medical SA</td><td>534534</td><td></td></tr><tr><td>Masterflex L/S Standard Drive</td><td>Cole-Parmer Instrument Co</td><td>7521-10</td><td></td></tr><tr><td>Acquisitiekaart</td><td>National Instruments</td><td>PCI-6024 E</td><td></td></tr><tr><td>Flowmeter module</td><td>Transonic Systems Inc.</td><td>TS410 and T402</td><td></td></tr><tr><td>Stopkraan met 3-weg</td><td>BD Connexta Luerlock</td><td>394600</td><td></td></tr><tr><td>Millex Filter</td><td>Milian</td><td>SE2M229I04</td><td></td></tr></tbody></table>

procedure for human aderen ex vivo perfusie en externe reinforcement

Procedure for Human Saphenous Veins Ex Vivo Perfusion and External Reinforcement

De steunpilaar van de hedendaagse therapieën voor uitgebreide occlusieve arteriële ziekte is veneuze bypass. Echter, is de duurzaamheid bedreigd door intimale hyperplasie (IH) die uiteindelijk leidt tot vatafsluiting en graft falen. Mechanische krachten, met name lage afschuifspanning en hoge wandspanning, worden verondersteld te initiëren en deze cellulaire en moleculaire veranderingen ondersteunen, maar hun precieze bijdrage nog worden ontrafeld. Om selectief de rol van de druk en schuifspanning op de biologie van IH evalueren, een ex vivo perfusie systeem (EVP&#39;s) is opgericht om segmenten van de menselijke aderen onder arteriële regime (high shear stress en hoge druk) doortrekken. Bijkomende technische innovaties mogelijk om tegelijkertijd perfusie van twee segmenten van dezelfde ader, een versterkt met een externe mesh. Aderen werden geoogst met behulp van een no-touch-techniek en onmiddellijk overgebracht naar het laboratorium voor de montage in de EVP. Een segment van de vers isoleerde ader werd niet doorbloed (controle, dag 0). De twee andere segmenten werden geperfundeerd gedurende maximaal 7 dagen, een volledig wordt afgeschermd met een 4 mm (diameter) externe mesh. De druk, stroomsnelheid, en hartslag werden continu bewaakt en aangepast aan de hemodynamische omstandigheden in de slagader na te bootsen. Na voltooiing van de perfusie werden aders gedemonteerd en gebruikt voor histologische en moleculaire analyse. Onder ex vivo omstandigheden, hoge druk perfusie (arterieel, gemiddelde = 100 mm Hg) voldoende om IH en hermodellering van menselijke aderen genereren. Deze veranderingen worden gereduceerd in de aanwezigheid van een externe polyester mesh.

De EVP&#39;s biedt een waardevol hulpmiddel om zelfstandig de hemodynamische krachten te beoordelen op de menselijke saphena ent remodeling en IH. Figuur 1 toont de perfusie kamer en de ader support. In figuren 1A en B, de ader steun before (figuur 1A) en na (figuur 1B) samenstel respectievelijk afgebeeld. Het is samengesteld (van boven naar beneden) van 1 plain roestvrij staal meten 9 cm, die dient als drag...

De mechanismen die leiden tot de ontwikkeling van intimale hyperplasie (IH) en bypass falen nog steeds slecht begrepen. Deze studie beschrijft een ex vivo-systeem voor de menselijke aderen onder gecontroleerde flow en druk perfuseren. Verder is de efficiëntie van het extern wapeningsnet beperken de ontwikkeling van IH werd geëvalueerd.

Procedure for Human aderen Ex Vivo Perfusie en Externe Reinforcement

The mainstay of contemporary therapies for extensive occlusive arterial disease is venous bypass graft. However, its durability is threatened by intimal ...

Het algemene doel van het volgende experiment is om de invloed van druk, schurende spanning en externe versterking op humane intimal hyperplasie te beoordelen. Dit wordt bereikt door gelijktijdige hogedrukperfusie van twee segmenten van dezelfde ader. Terwijl het ene segment wordt versterkt door een extern gaas, worden de adersneden vervolgens in secties gesneden voor histologische en moleculaire analyse.Deze analyses worden gebruikt om het effect van een externe versterking op intimal hyperplasie te evalueren. De resultaten tonen aan dat een externe versterking intimal hyperplasie kan verminderen die normaal gesproken wordt waargenomen na zeven dagen van perfusie. Seno van bypass graft is een van de behandelingen bij patiënten die lijden aan perifere arteriële ziekte.Echter, de ontwikkeling van deze hyperplasie die tot falen van de graft leidt, is de belangrijkste beperkende factor in dergelijke vaartuigen. Deze remodellering is te wijten aan de aanpassing van de vaartuigen aan de arteriële omgeving om nieuwe therapieën te ontwikkelen. Het begrip van de moleculaire mechanismen die bij dit fenomeen betrokken zijn, is essentieel.Daarom hebben we een ex vivo model van perfusie ontwikkeld. Een van de belangrijkste voordelen van ons systeem is dat het de studie van hemodynamische parameters mogelijk maakt zonder enige andere verwarrende immuun- of endocriene factoren. Een MD PhD student uit ons laboratorium zal de techniek demonstreren.Menselijke aders worden verkregen van patiënten die een bypass-operatie ondergaan aan de onderste ledematen. De ader wordt verzameld en onder steriele omstandigheden naar het laboratorium gebracht en onder een laminaire flowkap geplaatst. De minimale grootte van dergelijke aders is negen centimeter lang.De interne diameter is meer dan 2,5 millimeter en de externe diameter meer dan vier millimeter. De ader wordt in drieën gedeeld. Gelijkmatige segmenten van geoogste aders worden bewaard in ijskoud RPMI 1640 glut max medium, aangevuld met 12,5% FBS, en één segment wordt gespoeld in PBS.Het is de controle verdeeld opnieuw in drie delen. Bevestig één deel in Formin voor morpho en bevries de andere twee delen voor moleculaire analyse. De EVPS moet gemaakt zijn van waterdicht materiaal dat geen chemicaliën zal uitlekken, zoals polymethylacrylic, methylpolyoxyethyleen en staal.De perfusiekamer moet minimaal 2,5 centimeter diep zijn voor minimale flexie en dilatatie van het vat, en gemakkelijke mediawisselingen. De vaatondersteuning is een stalen staaf verbonden met L-vormige bevestigingen van boven naar beneden. De verbindingskanalen op de drukkolom laten drukverstellingen toe in en uitstroom naar het vat en mediaverandering om de normale stroomrichting te bepalen.De twee resterende segmenten voor perfusie worden voorzichtig geïnjecteerd met media. Als het segment kleppen heeft, zal de stroom langzamer zijn. De ader moet in de EVPS worden omgedraaid zodat de kleppen de stroom niet belemmeren.Verbind de ader met de twee metalen cilinders. Een uiteinde tegelijk. Bevestig de cilinders met Vicryl drie oh rond de indrukken met een strakke knoop.Breng vervolgens de ader over naar de perfusiekamer geladen met media. Voor het derde aderstuk, bevestig één uiteinde van de ader aan de cilinder zoals eerder getoond. Schuif vervolgens voorzichtig het gaas op de ader.Bevestig vervolgens het gaas en de ader op de cilinder met hechtingen. Pas tenslotte de lengte van het gaas aan en bevestig het andere uiteinde van de ader en het gaas aan de cilinder. Verplaats de assemblage naar de tweede perfusiekamer.De EVPS is geassembleerd in een gesloten lus met siliconen slangen. Verbind elke uitstroomcilinder met een Y-splitter met behulp van een segment van peroxide-behandelde siliconen slang. Doe hetzelfde voor elke instroommetalen cilinder.Verbind vervolgens de uitstroomsplitter met een tweede Y-splitter. Van deze Y-splitter. Verbind een uitstroom naar de buis die is verbonden met de druktransducer en om de andere uitstroom naar de drukkolom te verbinden, gebruik een buis van een meter om de drukkolom te verbinden met de pomp.Voltooi de installatie door de pomp aan te sluiten op de instroom Y-splitter. Met nog een meter slang, verbind de overige buizen met de drukkolom. De laagste kanaal dient voor mediaverandering.Na het samenstellen van de EVPS, vul de kolom met medium tot net onder de uitstroomkanaal van de ader. Beweeg nu het systeem naar de incubator, die is ingesteld op 37 graden Celsius met behulp van koolstofdioxide. Houd de pH constant op 7,4 buiten de incubator.Bevestig de pomptandwielen aan de aandrijving om de druk te bewaken. Verbind de drukuitgang van de EVPS met de druktransducer. Controleer of de buis volledig is gevuld en geen bellen bevat.Een pulserend cardio signaal van 60 pulsen per minuut met constante amplitude wordt ingesteld via de computersoftware, die onafhankelijk de tandwielkastpomp bestuurt. Het resulterende debiet is ongeveer 160 milliliter per minuut. De druk wordt onafhankelijk ingesteld en geregeld door een centrifugale pomp in serie met een instelbare drukregelaar die wordt bestuurd door de computer.Na drie tot zeven dagen, eindig de perfusie voor elk geperfuseerd segment. Verwijder vijf millimeter van elk uiteinde om het geligeerde deel van de aders weg te gooien. Snijd vervolgens een vijf millimeter ring voor fixatie uit het centrale gedeelte van de ader.Bewaar de resterende fragmenten voor moleculaire analyse. Bedenk het derde segment in formin voor histologie en moleculaire analyse. Na zeven dagen van hogedrukperfusie werden adersneden voorbereid voor histologische analyse.Voor alle omstandigheden onthulde h en e-kleuring kernen van endotheelcellen die het lumen bekleden en kernen van SMC's in de medialaag. Wanneer weefsel werd gekleurd met V gel om elastine te bekijken, toonden geperfuseerde aders verdikking van de intima, pathologische uitwaartse hermodellering en mediaverdunning. Masson's trichomekleuring toont dat slechts een van de drie spierlagen intact bleef, gladde spiercellen opgehoopt in de binnenste laag.Daartegenover bewaarde de externe versterking van de ader de SMC-verdeling en mediastructuur. Deze techniek vereist om onder rigoureuze sepsis te werken. Eenmaal beheer

procedure-for-human-saphenous-veins-ex-vivo-perfusion-external

Research

JoVE Journal

Medicine

Geneeskunde

Dit is een richtlijn voor het construeren van in vivo vasculair weefsel met behulp van een microchirurgische arterioveneuze lus of een doorstromende pedikkelconfiguratie binnen een weefselengineeringkamer. De gegenereerde vasculaire weefsels kunnen worden gebruikt voor orgaanregeneratie en vervanging van weefselderven, evenals voor medicijntesten en ziektemodellering.

Tissue Engineering door Intrinsic Vascularisatie in een<em&gt; In Vivo</em&gt; Tissue Engineering Chamber

We beschrijven een microchirurgische benadering voor het genereren van een arterioveneuze (AV) -lus als model voor het analyseren van vascularisatie in vivo in een geïsoleerd en goed gekarakteriseerd omgeving. Dit model is niet alleen nuttig voor het onderzoek naar angiogenese, maar ook optimaal geschikt voor engineering axiaal gevasculariseerd en transplantable weefsels.

De arterioveneuze (AV) Loop in een klein proefdiermodel voor Angiogenese en Gevasculariseerd Tissue Engineering Studie

Deze video demonstreert een model om de ontwikkeling van myointimale hyperplasie na veneuze interpositiechirurgie bij ratten te bestuderen.

Vein Interpositie Model: Een geschikt model om te studeren Bypass Graft Patency

Hier beschrijven we een protocol voor de decellularization van de saphenous ader met behulp van detergenten en recellularization door perfusie van het perifere bloed en het endotheel medium.

Decellularization en Recellularization methodologie voor menselijke Saphenous aderen

Hier gepresenteerd is een protocol voor antegrade Endoscopische ader oogsten uit het onderbeen, die veilig kan worden geïntroduceerd in routine coronaire bypasstransplantatie. Ader transplantaties presenteren een uitstekende Graft kwaliteit na dit gestandaardiseerde protocol met positionering van de benen, minimaal invasieve toegang tot de ader, en antegrade Endoscopische ader oogsten.

Synerverse Antegrade Endoscopische met bridging ader oogsten voor verbetering van de grote Saphenous ader Graft kwaliteit van het onderbeen

Hier presenteren we een trainings-en testsysteem waarbij een trainee handmatige vasculaire reconstructie in vitro individueel kan voltooien met behulp van een magnetische verankerings techniek. Het systeem kan ook worden gebruikt om de kwaliteit van de wederopbouw te testen.

Een trainings-en testsysteem voor het uitvoeren van vasculaire wederopbouw in vitro

Het huidige protocol is gericht op het experimenteel creëren van veneuze intimale hyperplasie door het onderwerpen van aderen aan arteriële bloeddruk voor het ontwikkelen van strategieën om veneuze intimale hyperplasie te verzachten na revascularisatie chirurgie met behulp van adergrafts.

Een konijn veneuze interposition model nabootsen revascularisatie chirurgie met behulp van ader grafts te beoordelen Intimal Hyperplasie onder arteriële bloeddruk

Het huidige protocol beschrijft het porcine fascio-cutane flap model en het potentiële gebruik ervan in gevasculariseerd samengesteld weefselonderzoek.

Een betrouwbaar porcine fascio-cutaan flapmodel voor gevasculariseerde composiet allografts bio-engineering studies

Hier presenteren we een protocol voor de behandeling van de grote sapheneuze ader (GSV) en de kleine sapheneuze ader (SSV) aangetast door ernstige pathologische reflux, met behulp van een originele scleroserende en emboliserende cyanoacrylaat-gebaseerde lijm samengesteld uit N-butylcyanoacrylaat en methacryloxy sulfolane (NBCA + MS).

Occlusie van de grote en kleine sapheneuze ader met behulp van copolymeerlijm op basis van N-butylcyanoacrylaat en methacryloxy sulfolane

We beschrijven een protocol om menselijke venaeuze veneuze endotheelcellen (hSVECs) te isoleren en te kweken. We bieden ook gedetailleerde methoden om schuifspanning en rek te produceren om mechanische spanning in hSVECs te bestuderen.

Isolatie van menselijke sapheneuze ader-endotheelcellen en blootstelling aan gecontroleerde niveaus van schuifspanning en rek

Leer ex vivo perfusie van menselijke aderen met externe mesh-versterking om intima-hyperplasie te verminderen. Deze methode helpt onderzoekers hemodynamische mechanismen van vaatgraftfalen te bestuderen.

Procedure for Human aderen Ex Vivo Perfusie en Externe Reinforcement

Meer video's verkennen