Name: Candida albicans biofilm ontwikkeling op medisch-relevante vreemde lichamen in een muis Subcutane Model Gevolgd door bioluminescentiebeeldvorming (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2015-01-27T14:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 31 s
Description: Leer hoe je Candida albicans biofilmvorming in vivo monitort met bioluminescentiebeeldvorming in een subcutaan muismodel. Deze methode kwantificeert biofilms op katheterfragmenten en vermindert het aantal benodigde dieren voor statistische analyse.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Dit werk werd ondersteund door de KU Leuven PF ‘IMIR’, de FWO Onderzoeksgemeenschap over biologie en ecologie van bacteriële en schimmelbiofilms (FWO: WO.026.11N) en door het FWO project G.0804.11. SK dankt KU Leuven voor de PDMK 11/089 beurs en FWO voor de postdoctoraal beurs. We zijn erkentelijk aan Nico Vangoethem voor zijn hulp bij het voorbereiden van de figuren. We willen Celia Lobo Romero danken voor technische assistentie tijdens in vivo experimentele procedures.

OPMERKING: Alle dierproeven werden goedgekeurd door de ethische commissie van de KU Leuven (projectnummer 090/2013). Behouden dieren in overeenstemming met de KU Leuven dierverzorging richtlijnen. 1. C. albicans Growth <ol><li> Vierentwintig uur vóór het begin van het dierproeven voorbereiden YPD platen door 10 g gistextract gegranuleerd, 20 g bacteriologische pepton en 15 g gegranuleerd agar. Make up volume tot 900 ml met Milli-Q water en autoclaaf. </li><li> Voeg 50 ml steriele 40% glucose. Meng goed en giet het in petrischaaltjes. Laat agarplaten afkoelen en stollen. LET OP: In deze studie gebruiken twee stammen, namelijk wild type C. albicans SC5314 - GLUC negatieve stam (aangeduid als WT) en C. albicans SKCA23 stam, die een wild-type C. albicans SC5314 getransformeerd met Clp10 :: Act1p-gLUC59 plasmide op 22 .In deze stam (vernoemd SKCA23- ACTgLuc) Gluc werd gefuseerd aan het endogene PGA59 gen onder controle van WERKW1 (actine) promoter (deze promotor actief in gist, en hyfen stadium schimmelgroei). Deze stam kan worden aangevraagd bij het laboratorium van prof Patrick Van Dijck, KU Leuven, Leuven, België. Plasmide Clp10 :: Act1p-gLUC59 plasmide 22 werd gedoneerd door Prof. C. d&#39;Enfert, Instituut Pasteur, Parijs, Frankrijk. </li><li> Behouden beide stammen in glycerol voorraad winkel en bij -80 ° C. </li><li> Voorafgaand aan een experiment streak stammen op een YPD plaat. Incubeer plaat bij 37 ° C gedurende de nacht. </li></ol> 2. Catheter Pieces Voorbereiding <ol><li> Voor het experiment bepalen hoeveel katheters nodig. Het is mogelijk om implanteren tot 6 katheter stuks per muis (3 catheters links en 3 catheter aan de rechterzijde van het dier (Figuur 2A). </li><li> Vierentwintig uur voorafgaand aan het dier een operatie, open de verpakkingleeftijd met drievoudig-lumen katheter onder de bioveiligheidskast. Verwijder alle overbodige delen met steriel pincet en snij het deel verbonden aan de katheter met een steriele scalpel. Plaats liniaal onder de plastic verpakking en snij polyurethaan katheter stukken van exact 1 cm volgens de schaal op de liniaal (figuur 1). OPMERKING: Het is belangrijk te vermelden dat deze soort katheter stuk is niet fosforescerende en dus geschikt voor BLI 18,19. </li><li> Plaats een maximum van 15 gesneden katheter stukken (stap. 2.2) in 2 ml microcentrifugebuisjes. Bereiden altijd 3 stuks extra, die worden gebruikt om de hoogte van bijgevoegde Candida cellen op inventarisatie van het apparaat na afloop van hechting. </li><li> Supplement katheters met ongeveer 1,8 ml van 100% foetaal runderserum (FBS). </li><li> Krachtig vortex en voeg extra 100-200 ul 100% FBS. Volledig toereikend katheter stukken met serum. </li><li> Incubeer bij 37 ° C geïncubeerd. </li&gt; </ol> 3 dieren en onderdrukking van het immuunsysteem <ol><li> Houd vrouwelijke BALB / c-muizen (ongeveer 8 weken oud) in individueel geventileerde filter top kooien met gratis toegang tot de standaard voedsel en water ad libitum. </li><li> Initiëren onderdrukking van het immuunsysteem 24 uur voor de operatie dier door toevoeging van dexamethason (0,4 mg / l) aan het drinkwater van de dieren. Om elke bacteriële besmetting van de gastheer vermijden, vullen het drinkwater met antibioticum, bijvoorbeeld ampicilline natrium- poeder (0,5 g / l). </li><li> Blijf immunosuppressie van dieren tijdens het gehele experiment (tot 6 dagen). </li></ol> 4. Ex vivo C. albicans Hechting op FBS-gecoate Polyurethaan Substrates <ol><li> Breng elk serum beklede katheter stuk in een nieuwe 1,5 ml microcentrifugebuis. </li><li> Schraap sommige C. albicans-cellen gegroeid op YPD platen (stap 1) en suspendeer deze in 1 mi PBS. </li><li> Verdunde Kandida-cellen (1: 100) in een afzonderlijke microcentrifuge buis. Neem 10 pi van de verdunde monster en toe te passen op een mobiele telkamer. Tellen minstens 16 kleine vierkantjes. </li><li> Bereid Candida cellen (elke stam apart) in RPMI 1640 medium tot een eindconcentratie van 5 x 10 4 cellen / ml. </li><li> Voeg 1 ml celsuspensie aan elk serum-gecoate katheter stuk. </li><li> Krachtig Vortex en ervoor te zorgen dat de katheters worden ondergedompeld in het medium en niet drijven op de top. </li><li> Incubeer katheters bij 37 ° C gedurende 90 min (duur van hechting). </li><li> Verwijder katheters met steriele pincet en wassen tweemaal met 1 ml PBS. Tijdens deze stap zorgen dat de wasvloeistof gaat door het lumen van de katheter te houden in verticale stand terwijl zachtjes spoelen van de katheters. Belangrijk gebruik geen sterke stromen kan leiden tot het verwijderen van aangehechte cellen. </li><li> Transfer elk gewassen katheter om een ​​schone microcentrifugebuis (een stuk per tube). </li><li> Plaats op ijs en blijf daar tot een operatie. </li></ol> 5. Anesthesie <ol><li> Bereid verdoving door mengen van 75 pl ketamine (100 mg / mL) met 100 pl medetomidine (1 mg / ml) en 825 pl steriele zoutoplossing. Dien intraperitoneaal (ip) 60-80 gl anestheticum cocktail per 10 g lichaamsgewicht, resulterend in een dosis van 45-60 mg / kg ketamine en 0,6-0,8 mg / kg medetomidine. </li><li> Voor omkering van anesthesie, verdun 50 ui atipamezol (5 mg / ml) in 4,95 ml zoutoplossing, toedienen ip 100 ul per 10 g lichaamsgewicht als tegengif, resulterend in een dosis van 0,5 mg / kg. </li><li> Na injectie van verdoving, plaats het dier in een aparte kooi en wacht tot het volledig in slaap. </li><li> Bevestig de juiste verdoving van het dier door licht snuifje huid en teen knijpen, die geen schade aan de huid veroorzaken. Alle waargenomen beweging geeft aan dat het dier onvoldoende verdoofd te opereren. Als dit gebeurt, wacht een couple minuten langer totdat het dier geen tekenen van beweging op de huid of teen knijpen tonen. </li></ol> 6. Dierlijke Chirurgie <ol><li> Transfer verdoofd dier uit de kooi op een schoon weefsel geplaatst op het verwarmingselement, voorverwarmd tot 37 ° C (figuur 2A (1)). OPMERKING: Een goedkoper alternatief is om elektrisch verwarmde dekens gebruiken. Het is ook mogelijk isothermische pads, die omhoog worden opgewarmd in de magnetron voor het dier operatie gebruikt. </li><li> Toepassing oogzalf op de ogen. </li><li> Scheer de lage rug van het dier met een elektrisch scheerapparaat. Verwijder alle haren van dieren en de overdracht van dier op van een schone tissue. Ontsmet de huid (bijvoorbeeld met 1% jood isopropanol of 0,5% chloorhexidine in 70% alcohol) en laat het gedesinfecteerde ruimte drogen ongeveer 1 min (Figuur 2A, (2)). </li><li> Maak een kleine incisie in de huid (één links en één rechts van het dier) (ongeveer 0,5 &amp;# 8211; 1 cm) (Figuur 2A, (3)). </li><li> Ontleden de subcutis met een schaar tot twee subcutane tunnels te creëren. Elke tunnel moet ongeveer 1,5 cm lang en 1 cm breed. </li><li> Plaats drie katheter stukjes, die eerder geïnfecteerd met Candida, in elke tunnel. Zorg ervoor dat de katheters liggen naast elkaar in een horizontale opstelling en dat deze niet op elkaar om de implantatie van zes katheter fragmenten in totaal mogelijk (figuur 2A (4)). </li><li> Sluiten insnijdingen met hechtingen. U kunt ook gebruik maken van Dermabond om de wond te sluiten. </li><li> Desinfecteer de wond zeer voorzichtig met 0,5% chloorhexidine in 70% alcohol of jodium isopropanol (1%). </li><li> Pas lokale verdoving (xylocaine gel, 2%) direct op de wond. </li><li> Dien omkering van de anesthesie (protocol 5, stap 2): intraperitoneaal 100 ul per 10 g lichaamsgewicht. </li><li> Transfer dier naar een schone kooi eerder op een verwarmingsplaat geplaatst. Houd het dierafzonderlijke warme tot het dier volledig wakker. Ondertussen blijven met de werking en implantaat van het volgende dier. Zodra alle bediend dieren helemaal wakker. Over te dragen aan een kooi. Regelmatig toezicht op dieren. </li></ol> 7. bioluminescentiebeeldvorming: Voorbereiding van Coelenterazine (CTZ), het substraat voor G. princeps luciferase <ol><li> Bereid vers coelenterazine (CTZ) voorraadoplossing door het oplossen van 5 mg / ml CTZ in aangezuurde ethanol of volgens de instructies van de fabrikant. </li><li> Bereid 1,2 mM werkoplossing door verdunning van de stockoplossing 01:10 in steriele PBS. OPMERKING: Injecteer 100 ui CTZ werkoplossingen subcutaan in de omgeving van de katheters. Gebruik van insuline spuiten voor subcutane injectie van CTZ. </li><li> Houden CTZ in het donker Always (bijvoorbeeld betrekking microcentrifuge buisjes met CTZ met aluminiumfolie). Bewaar de stockoplossing bij -80 ° C gedurende de duur van de experimenten. </li></ol&gt; 8. bioluminescentiebeeldvorming <ol><li> Initialiseer de BLI camera. </li><li> Verdoven het Dieren met behulp van een inductie in. Gebruik een gasmengsel van isofluraan in zuurstof, N2O / O2 of lucht bij 2-3%. </li><li> Na inductie, onderhouden anesthesie in het vak inductie en in de beeldvorming kamer bij 1,5-2%. </li><li> Voordat de opnamesessie, plaatst de beeldplaat in de stand A, hetgeen overeenkomt met een FOV van 10 cm. Zorg ervoor dat de juiste positie van de anesthesie outlets en dier door het plaatsen van een slapend dier in de doos. </li><li> Neem paar foto tot dier in de gewenste positie beeldvorming, in het FOV direct onder de camera. </li><li> Bereid twee insuline injectiespuiten elk 100 pl van de CTZ werkoplossing. </li><li> Plaats één dier op de bank en houd het in slaap door middel van een neuskegel verstrekken gas anesthesie. </li><li> Breng de naalden van de spuiten in een plaats rond katheters subcutaan en injecteerde CTZ gelijktijdig bovenop de katheters. </li><li> Onmiddellijk na de injectie, plaatst het dier op de warme plaat in de doos camera en start de afbeelding bioluminescentie overname. </li><li> Verwerven opeenvolgende scans met opnametijden van 20 tot 60 seconden (afhankelijk van de signaalintensiteit) totdat de maximale signaalintensiteit wordt bereikt. Tijdens het verwerven van het volgende frame, meet de BLI signaalintensiteit van de eerder verworven beelden door een ROI van elk katheters trio en meten foton flux door deze ROI. </li><li> Herhaal vanaf stap 7 voor het volgende dier (en). </li><li> Na beeldvorming terug dieren naar de kooi. Herhaal BLI tijdens een experiment voor longitudinaal, niet- invasieve opvolging van biofilm vorming. </li><li> Analyseer de BLI gegevens met behulp van Living Image software. Plaats een rechthoekig ROI van vaste grootte over elke katheter trio en meet de fotonflux (straling) door elke ROI. Herhaal dit voor elk dier. </li><li> Rapportde BLI signaal intensiteit van elke katheter trio als fotonflux per seconde. Vertegenwoordigen de BLI gegevens op een logaritmische schaal door het uitzetten van het gemiddelde en SD van het foton flux per seconde voor elke groep. Uitvoeren statistische analyse op de log 10 getransformeerde gegevens. </li></ol> 9. Catheter Explantatie <ol><li> Bereid microcentrifuge buisjes met 1 ml PBS, één voor elke katheter apparaat en bewaar ze op ijs. </li><li> Euthanaseren de dieren door cervicale dislocatie (figuur 2B (1)). </li><li> Ontsmet de huid van de rug met 0,5% chloorhexidine in 70% alcohol of met jodium isopropanol (1%). </li><li> Maak een insnijding (ongeveer 3 cm) boven de katheters. </li><li> Knip subcutane weefsel en een verwijder de catheter fragmenten door een onder het subcutane weefsel met steriele pincet (Figuur 2B, (2)). </li><li> Handvat katheter zachtjes in verticale positie en was het tweemaal met 1 ml steriel PBS. Plaats elke katheterstuk in een aparte microcentrifugebuis (bereid in trap 1). </li></ol> 10. De kwantificering van de biofilm-geassocieerde cellen door Colony Forming Units Graaf (CFU&#39;s) en statistische analyses van de resultaten <ol><li> Ultrasone trillingen katheters eerder in 1 ml PBS gedurende 10 min bij 40000 Hz in een waterbad ultrasoonapparaat en plaats ze op ijs. </li><li> Na sonicatie, krachtig vortex gedurende 30 seconden en plaats weer op ijs. </li><li> Bereid twee extra microcentrifugebuisjes met 900 ul van PBS. </li><li> Maak 1:10 en 1 100 verdunningen van uw oorspronkelijke monster (degene die de katheter bevat) en houdt al microcentrifugebuisjes op ijs. </li><li> Plaat 100 pl van de oorspronkelijke monsters, 1:10 en 1: 100 verdunningen op YPD agar platen in tweevoud. </li><li> Incubeer de platen gedurende 2 dagen bij 37 ° C en tellen CFU. </li><li> Tel de kolonies gegroeid op YPD agarplaten (telbare hoeveelheid kolonies, maximaal 300 kolonies / plaat) en vermenigvuldigt deze vervolgens met de juiste Dilutie factor (1x-origineel, 10x of 100x verdunning). Verder vermenigvuldigen elke katheter stuk 10x, hetgeen overeenkomt met de uiteindelijke hoeveelheid kolonies in 1 ml buisje met de katheter. Breng het uiteindelijke bedrag van de kolonies tot 10 cellen / katheter stuk met standaarddeviatie (SD) log. Versneld gegevens als gemiddelde ± SD. </li><li> Plaats alle waarden voor elke katheter en specifieke groep in een spreadsheet en / of statistische programma voor de bovengenoemde berekeningen en statistische analyses. Geef aan specifieke groepen te vergelijken, dwz WT versus mutant of 2 dagen vs. 6 dagen biofilmvorming en het uitvoeren van ongepaarde t-toets en ANOVA met Tukey post-test op de log10-getransformeerde gegevens. <ol><li> Versneld het niveau van significantie door een p waarde. In deze studie geven betekenis als p waarde &lt;0,05, als volgt weergegeven: * p &lt;0,05, ** p &lt;0,005, *** p &lt;0.0005. </li></ol></li></ol>

<ol><li>Yapar, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Epidemiology+and+risk+factors+for+invasive+candidiasis%5BTitle%5D)+AND+%22Ther+Clin+Risk+Manag%22%5BJournal%5D)">Epidemiology and risk factors for invasive candidiasis.</a> Ther Clin Risk Manag. 10, 95-105 (2014).</li>
<li>Tournu, H., Van Dijck, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Candida+biofims+and+the+host%3A+models+and+new+concepts+for+eradication%5BTitle%5D)+AND+%22Int+J+Microbiol%22%5BJournal%5D)">Candida biofims and the host: models and new concepts for eradication.</a> Int J Microbiol. 2012, 845352(2012).</li>
<li>Taff, H. T., Mitchell, K. F., Edward, J. A., Andes, D. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mechanisms+of+Candida+biofilm+drug+resistance%5BTitle%5D)+AND+%22Future+Microbiol%22%5BJournal%5D)">Mechanisms of Candida biofilm drug resistance.</a> Future Microbiol. 8 (10), 1325-1337 (2013).</li>
<li>Mathé, L., Van Dijck, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Recent+insights+into+Candida+albicans+biofilm+resistance+mechanisms%5BTitle%5D)+AND+%22Curr+Genet%22%5BJournal%5D)">Recent insights into Candida albicans biofilm resistance mechanisms.</a> Curr Genet. 59 (4), 251-264 (2013).</li>
<li>Kucharíková, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Activities+of+systematically+administered+echinocandins+against+in+vivo+mature+Candida+albicans.+biofilms+developed+in+a+rat+subcutaneous+model%5BTitle%5D)+AND+%22Antimicrob+Agents+Chemother%22%5BJournal%5D)">Activities of systematically administered echinocandins against in vivo mature Candida albicans. biofilms developed in a rat subcutaneous model.</a> Antimicrob Agents Chemother. 57 (5), 2365-2368 (2013).</li>
<li>Kuhn, D. M., George, T., Chandra, J., Mukherjee, P. K., Ghannoum, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Antifungal+susceptibility+of+Candida+biofilms%3A+Unique+efficacy+of+amphotericin+B+lipid+formulations+and+echinocandins%5BTitle%5D)+AND+%22Antimicrob+Agents+Chemother%22%5BJournal%5D)">Antifungal susceptibility of Candida biofilms: Unique efficacy of amphotericin B lipid formulations and echinocandins.</a> Antimicrob Agents Chemother. 46 (6), 1773-1780 (2002).</li>
<li>Ramage, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Liposomal+amphotericin+B+displays+rapid+dose-dependent+activity+against+Candida+albicans+biofilms%5BTitle%5D)+AND+%22Antimicrob+Agents+Chemother%22%5BJournal%5D)">Liposomal amphotericin B displays rapid dose-dependent activity against Candida albicans biofilms.</a> Antimicrob Agents Chemother. 57 (5), 2369-2371 (2013).</li>
<li>Andes, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Development+and+characterization+of+an+in+vivo+central+venous+catheter+Candida+albicans+biofilm+model%5BTitle%5D)+AND+%22Infect+Immun%22%5BJournal%5D)">Development and characterization of an in vivo central venous catheter Candida albicans biofilm model.</a> Infect Immun. 72 (10), 6023-6031 (2004).</li>
<li>Schinabeck, M. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Rabbit+model+of+Candida+albicans+biofilm+infection%3A+liposomal+amphotericin+B+antifungal+lock+therapy%5BTitle%5D)+AND+%22Antimicrob+Agents+Chemother%22%5BJournal%5D)">Rabbit model of Candida albicans biofilm infection: liposomal amphotericin B antifungal lock therapy.</a> Antimicrob Agents Chemother. 48 (5), 1727-1732 (2004).</li>
<li>Lazzell, A. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Treatment+and+prevention+of+Candida+albicans+biofilms+with+caspofungin+in+a+novel+central+venous+catheter+murine+model+of+candidiasis%5BTitle%5D)+AND+%22J+Antimicrob+Chemother%22%5BJournal%5D)">Treatment and prevention of Candida albicans biofilms with caspofungin in a novel central venous catheter murine model of candidiasis.</a> J Antimicrob Chemother. 64 (3), 567-570 (2009).</li>
<li>Nett, J. E., Marchillo, K., Spiegel, C. A., Andes, D. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Development+and+validation+of+an+in+vivo+Candida+albicans+biofilm+denture+model%5BTitle%5D)+AND+%22Infect+Immun%22%5BJournal%5D)">Development and validation of an in vivo Candida albicans biofilm denture model.</a> Infect Immun. 78 (9), 3650-3659 (2010).</li>
<li>Wang, X., Fries, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+murine+model+for+catheter+associated+Candiduria%5BTitle%5D)+AND+%22J+Med+Microbiol%22%5BJournal%5D)">A murine model for catheter associated Candiduria.</a> J Med Microbiol. 60 (10), 1523-1529 (2011).</li>
<li>Harriott, M. M., Lilly, E. A., Rodriguez, T. E., Fidel, P. L. J., Noverr, M. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Candida+albicans+forms+biofilms+on+the+vaginal+mucosa%5BTitle%5D)+AND+%22Microbiology%22%5BJournal%5D)">Candida albicans forms biofilms on the vaginal mucosa.</a> Microbiology. 156 (12), 3635-3644 (2010).</li>
<li>Dongari-Bagtzoglou, A., Kashleva, H., Dwivedi, P., Diaz, P., Vasilakos, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Characerterization+of+mucosal+Candida+albicans+biofilms%5BTitle%5D)+AND+%22PloS+One%22%5BJournal%5D)">Characerterization of mucosal Candida albicans biofilms.</a> PloS One. 4, e7976(2009).</li>
<li>Ricicová, M., Kucharíková, S., Tournu, H., Hendrix, J., Bujdáková, H., Van Eldere, J., Lagrou, K., Van Dijck, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Candida+albicans+biofilm+formation+in+a+new+in+vivo+rat+model%5BTitle%5D)+AND+%22Microbiol%22%5BJournal%5D)">Candida albicans biofilm formation in a new in vivo rat model.</a> Microbiol. 156, 909-919 (2010).</li>
<li>Kucharíková, S., Tournu, H., Holtappels, M., Van Dijck, P., Lagrou, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vivo+efficacy+of+anidulafungin+against+Candida+albicans+mature+biofilms+in+a+novel+rat+model+of+catheter-associated+candidiasis%5BTitle%5D)+AND+%22Antimicrob+Agents+Chemother%22%5BJournal%5D)">In vivo efficacy of anidulafungin against Candida albicans mature biofilms in a novel rat model of catheter-associated candidiasis.</a> Antimicrob Agents Chemother. 54 (10), 4474-4478 (2010).</li>
<li>Bink, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+nonsteroidal+antiinflammatory+drug+diclofenac+potentiates+the+in+vivo+activity+of+caspofungin+against+Candida+albicans+biofilms%5BTitle%5D)+AND+%22J+Infect+Dis%22%5BJournal%5D)">The nonsteroidal antiinflammatory drug diclofenac potentiates the in vivo activity of caspofungin against Candida albicans biofilms.</a> J Infect Dis. 206 (11), 1790-1797 (2012).</li>
<li>Van de Velde, G., Kucharíková, D., Schrevens, D., Himmelreich, U., Van Dijck, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Towards+non-invasive+monitoring+of+pathogen-host+interactions+during+Candida+albicans+biofilm+formation+using+in+vivo+bioluminescence%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Microbiol%22%5BJournal%5D)">Towards non-invasive monitoring of pathogen-host interactions during Candida albicans biofilm formation using in vivo bioluminescence.</a> Cell Microbiol. 16 (1), 115-130 (2014).</li>
<li>Van de Velde, G., Kucharíková, S., Van Dijck, P., Himmelreich, U. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Bioluminescence+imaging+of+fungal+biofilm+development+in+live+animals%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+in+Molecular+Biology%22%5BJournal%5D)">Bioluminescence imaging of fungal biofilm development in live animals.</a> Methods in Molecular Biology. 1098, 153-167 (2014).</li>
<li>Gahan, C. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+bacterial+lux+reporter+system%3A+applications+in+bacterial+localisation+studies%5BTitle%5D)+AND+%22Curr+Gene+Ther%22%5BJournal%5D)">The bacterial lux reporter system: applications in bacterial localisation studies.</a> Curr Gene Ther. 12 (1), 12-19 (2012).</li>
<li>Doyle, T. C., Nawotka, K. A., Kawahara, C. B., Francis, K. P., Contag, P. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Visualizing+fungal+infections+in+living+mice+using+bioluminescent+pathogenic+Candida+albicans+strains+transformed+with+the+firefly+luciferase+gene%5BTitle%5D)+AND+%22Microb+Pathog%22%5BJournal%5D)">Visualizing fungal infections in living mice using bioluminescent pathogenic Candida albicans strains transformed with the firefly luciferase gene.</a> Microb Pathog. 40 (2), 82-90 (2006).</li>
<li>Enjalbert, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+multifunctional+synthetic+Gaussia+princeps+luciferase+reporter+for+live+imaging+of+Candida+albicans+infections%5BTitle%5D)+AND+%22Infect+Immun%22%5BJournal%5D)">A multifunctional synthetic Gaussia princeps luciferase reporter for live imaging of Candida albicans infections.</a> Infect Immun. 77 (11), 4847-4858 (2009).</li>
<li>Mosci, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+novel+bioluminescence+mouse+model+for+monitoring+oropharyngeal+candidiasis+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Virulence%22%5BJournal%5D)">A novel bioluminescence mouse model for monitoring oropharyngeal candidiasis in mice.</a> Virulence. 4 (3), 250-254 (2013).</li>
<li>Van Wijngaerden, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Foreign+body+infection%3A+a+new+rat+model+for+prophylaxis+and+treatment%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Antimicrob.+Chemoth%22%5BJournal%5D)">Foreign body infection: a new rat model for prophylaxis and treatment.</a> J. Antimicrob. Chemoth. 44 (5), 669-674 (1999).</li>
<li>Nobile, C. J., Mitchell, A. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Regulation+of+cell-surface+genes+and+biofilm+formation+by+the+C.+albicans+transcription+factor+Bcr1p%5BTitle%5D)+AND+%22Curr.+Biol%22%5BJournal%5D)">Regulation of cell-surface genes and biofilm formation by the C. albicans transcription factor Bcr1p.</a> Curr. Biol. 15 (12), 1150-1155 (2005).</li>
</ol>

De auteurs verklaren dat zij geen concurrerende financiële belangen.

De toepassing van diermodellen en vooral knaagdiermodellen, voor studies gewijd aan microbiële biofilms zeer belangrijk als gastheer immuunsysteem is een essentiële factor bij biofilmvorming die in vitro modellen kunnen niet verklaren. In deze studie beschrijven we een relatief eenvoudige subcutane C. albicans biofilm muismodel, die gemakkelijk in een onderzoekslaboratorium kan worden vastgesteld en geen sterke technische vaardigheden vereist. Dit model is aanvankelijk ontwikkeld Staphylococcus epi...

Candida albicans is een commensaal organisme, te vinden op verschillende plaatsen van gezonde individuen, bijvoorbeeld op de huid of als een deel van de tractus en vaginale flora. Echter, in het ziekenhuis, en vooral immunogecompromitteerde patiënten, kan een groot aantal infecties 1 veroorzaken. Bij dergelijke individuen, het verzwakte immuunsysteem maakt Candida cellen te verspreiden in de bloedbaan en diepere weefsels binnen te vallen waardoor levensbedreigende infecties. Bovendien is de aanwezigheid van abiotische substraten zoals centrale veneuze en urinaire katheters, kunstmatige hartkleppen en gewrichten kunnen een niche voor Candida bevestiging 2 verschaffen. Hechting aan dergelijke substraten is voordat verder biofilm ontwikkeling, waarop een laag gist en hyphal cellen ingebed in extracellulair polymeermateriaal vertegenwoordigt hoofdzakelijk uit polysacchariden 2. C. albicans katheter-geassocieerde infectiesworden geassocieerd met een hoog sterftecijfer. Een algemeen kenmerk van biofilms is hun verminderde gevoeligheid voor bekende antimycotica, zoals azolen 3,4. Alleen nieuwere klassen van antimycotica, zoals echinocandinen en liposomale formulering van amfotericine B bleken werkzaam tegen katheter infecties 5-7 zijn. Door biofilm veerkracht antimycotica zijn therapeutische benaderingen erg beperkt, wat vaak leidt tot verwijdering van de katheter en de daaropvolgende vervanging als enige oplossing. De meeste van onze huidige kennis van C. albicans biofilm ontwikkelen komt uit in vitro naar abiotische substraten zoals polystyreen, of kunststof voor de vervaardiging van bovengenoemde inrichtingen, bijvoorbeeld, silicone, polyurethaan 2. Deze modellen zijn zeer geavanceerd en proberen de situatie in vivo zo goed mogelijke nabootsen. Echter, deze systemen niet betrekking op de continue bloedstroom en thij immuunsysteem van de host. Dit resulteerde in de ontwikkeling van in vivo modelsystemen, zoals centrale veneuze katheter (CVC) model 8-10, de prothese stomatitis model van orale candidiasis 11 en een muizenmodel voor katheters candidurie 12. Bovendien, C. albicans biofilm ontwikkeling werd bestudeerd in vivo op de mucosale oppervlakken, zoals die van de vagina 13 en mondholte 14. Ons laboratorium heeft bijgedragen aan de oprichting van een onderhuidse C. albicans biofilm model, dat is gebaseerd op het implantaat van geïnfecteerde catheter stuks op de achterkant van Sprague Dawley 15. Dit model werd met succes gebruikt in ons laboratorium biofilm gevoeligheid testen fluconazol en echinocandine medicijnen 5,16, namelijk combinatoriële therapie van diclofenac en caspofungine 17 bestuderen. Recenter passen wij deze voor gebruik in BALB / c muizen 18,19. Invergelijking met andere in vivo modellen, het belangrijkste voordeel van deze subcutaan model is de mogelijkheid om meerdere biofilms per dier ontwikkeld binnen het lumen van geïmplanteerde katheter stukken te bestuderen. Om het aantal proefdieren verminderen, hebben wij dit model aan de ontwikkeling van C. bestuderen aangepast albicans biofilms niet-invasief met behulp van bioluminescentie beeldvorming (BLI) 18,19. Deze werkwijze bleek een krachtige techniek die kan worden gebruikt om biofilms kwantificeren meten van de specifieke BLI signaal op het gebied van belang (in ons geval het gebied van geïmplanteerde katheters), het vermijden van dierlijk offer. In vergelijking met bacteriën die zowel het gen en het substraat vereist voor de bioluminescentie reactie kan uitdrukken door de invoering van een specifiek lux operon 20 meeste eukaryote organismen, zoals C. albicans, zijn afhankelijk van de heterologe expressie van een luciferase gen in combinatie met deexterne toediening van een specifiek substraat, zoals D- luciferine of coelenterazine 21. Waarschijnlijk door de aanwezigheid van de schimmel celwand en C. albicans morfogenese, de intracellulaire aflevering van het substraat voor het enzym luciferase was een grote uitdaging 21. Om dit probleem op te lossen, Enjalbert et al. 22 gemanipuleerde een stam waarin een synthetisch C. albicans-codon geoptimaliseerde versie van het gen voor de natuurlijk uitgescheiden Gaussia princeps luciferase (Gluc) werd gefuseerd met de C albicans PGA59 gen, een GPI verankerde celwand eiwit. Door de aanwezigheid van luciferase in de celwand, kunnen problemen met de intracellulaire beschikbaarheid van het substraat worden voorkomen. Dit bijzondere systeem werd gebruikt om oppervlakkige infecties veroorzaakt door C. bestuderen albicans 22. Zeer recent BLI werd ook gebruikt om de progressie van orofaryngeale candidiasis en mogel followe behandeling 23. Deze bevindingen ondersteunen het gebruik van BLI als een veelbelovende techniek infecties veroorzaakt door vrij levende cellen maar ook device geassocieerde infecties te bestuderen. In deze studie beschrijven we de C. albicans biofilm ontwikkeling van polyurethaan katheter stukken in BALB / c muizen en kwantificering middels BLI. We geven een gedetailleerd protocol van in vitro kolonisatie van polyurethaan katheters gedurende de adhesie gevolgd door implantatie in muizen en verdere biofilm ontwikkeling in levende dieren. Naast het meten van het BLI-signaal uitgezonden door de C. albicans cellen, ook de kolonievormende eenheden vergelijking met de standaard techniek voor biofilm fungale belasting kwantificering bepalen.

<table><tbody><tr><td>Gist extract gegranuleerd</td><td>Merck</td><td>MERC1.03753.0500</td><td></td></tr><tr><td>Bacteriologische peptonen</td><td>Oxoid</td><td>LP037B</td><td></td></tr><tr><td>Agar gegranuleerd</td><td>Difco</td><td>214530</td><td></td></tr><tr><td>D-(+)-glucose</td><td>Fluka</td><td>49159-5KG</td><td></td></tr><tr><td>Fosfaat gebufferde zoutoplossing&nbsp;</td><td>Bereidt in het laboratorium</td><td></td><td>voor 1L van 10x PBS: 80 g NaCl, 2 g KCl, 14,4 g Na2HPO4, 2,4 g KH2PO4</td></tr><tr><td>RPMI1640 met L-glutamine en zonder natriumcarbonaat&nbsp;</td><td>Sigma</td><td>R6504-1L</td><td>Bereid volgens het protocol voor Candida albicans geneesmiddelgevoeligheidstesten&nbsp;</td></tr><tr><td>3-(N-Morpholino)propaansulfonzuur (MOPS)</td><td>Sigma</td><td>M1254</td><td>MOPS wordt gebruikt om de pH van het RPMI-medium (pH 7,0) aan te passen</td></tr><tr><td>Fétaal runderserum (FBS)</td><td>Sigma</td><td>F7524</td><td></td></tr><tr><td>Polyurethaandompelbuis voor intraveneuze toediening (2,4 mm diameter, Certofix Trio S730)&nbsp;</td><td>BBraun</td><td>CV-15703</td><td>Polyurethaangedeelte gesneden in stukken van 1 cm</td></tr><tr><td>Dexamethason</td><td>Fagron SAS, Frankrijk</td><td>611139</td><td>Immunosuppressivum (voorraadoplossing 10 mg/ml)</td></tr><tr><td>Ampicilline&nbsp;</td><td>Duchefa Biochemie, Nederland</td><td>A0104</td><td>Antibacteriële profylaxe</td></tr><tr><td>Ketamine 1000</td><td>Pfizer</td><td>804 119</td><td>Anestheticum</td></tr><tr><td>Domitor</td><td>Pfizer</td><td>134737-1</td><td>Anestheticum</td></tr><tr><td>Antisedan</td><td>Pfizer</td><td>134783-2</td><td>Reversie van anesthesie</td></tr><tr><td>Xylocaine gel (2%) - dit is Linisol</td><td>AstraZeneca</td><td>352 1206</td><td>Lokaal verdovingsmiddel voor de huid</td></tr><tr><td>Terramycin/ polymyxine-b oogzalf</td><td></td><td></td><td>Om uitdroging en infectie van ogen te voorkomen</td></tr><tr><td>Coelenterazine&nbsp;</td><td>Prolume (Nanolight)</td><td>NF-CTZ-FB</td><td>Lichtgevoelig middel (moet in het donker worden bewaard)</td></tr><tr><td>Jodium isopropanol (1%)</td><td>3M&trade; DuraPrep&trade;&nbsp;</td><td></td><td>Ontsmettingsmiddel voor de huid</td></tr><tr><td>0,5 % chloorhexidine in 70 % alcohol.&nbsp;&nbsp;</td><td>Cedium</td><td></td><td>Ontsmettingsmiddel voor de huid</td></tr><tr><td>Uitrusting</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Celtelkamer</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Insulinespuitjes (0,3 ml)</td><td>Terumo Myjector 29G</td><td>324826</td><td>Voor injectie van coelenterazine</td></tr><tr><td>Elektrische scheerapparaat</td><td></td><td></td><td>Voor kleine dieren</td></tr><tr><td>Steriele chirurgische werktuigen</td><td></td><td></td><td>Scharen, 2 paar pincetten, scalpel</td></tr><tr><td>Verwarmingskussen</td><td>Leica</td><td>14042321474</td><td></td></tr><tr><td>Huidnaald</td><td>Johnson&amp;Johnson</td><td>K890H</td><td>Chirurgisch draad, naald</td></tr><tr><td>Waterbadsonicator</td><td>Branson 2210</td><td></td><td></td></tr><tr><td>BLI-camera (IVIS Spectrum)&nbsp;</td><td>Perkin Elmer, Alameda</td><td>IVISSPE</td><td></td></tr><tr><td>Living Image-software&nbsp;</td><td>Perkin Elmer, Alameda</td><td></td><td>(versie 4.2)&nbsp;</td></tr></tbody></table>

candida albicans biofilm ontwikkeling op medisch-relevante vreemde lichamen in een muis subcutane model gevolgd door bioluminescentiebeeldvorming

Candida albicans Biofilm Development on Medically-relevant Foreign Bodies in a Mouse Subcutaneous Model Followed by Bioluminescence Imaging

Candida albicans biofilm ontwikkeling op biotische en / of abiotische vlakken vormt een specifieke dreiging voor gehospitaliseerde patiënten. Tot nu toe C. albicans biofilms werden voornamelijk bestudeerd in vitro, maar er is een dringende behoefte aan een beter begrip van deze dynamische proces onder in vivo condities. We ontwikkelden een in vivo subcutane rat model om C. te studeren albicans biofilm vorming. In ons model meervoudige (tot 9) Candida geïnfecteerde inrichtingen worden geïmplanteerd om het rugdeel van het dier. Dit geeft ons een groot voordeel ten opzichte van de centrale veneuze katheter modelsysteem als het ons toelaat om verschillende onafhankelijke biofilms studeren in één dier. Onlangs hebben we aangepast deze model naar C. studeren albicans biofilm ontwikkeling in BALB / c muizen. In dit model, volwassen C. albicans biofilms ontwikkelen binnen 48 hr en tonen de typische driedimensionale biofilm architectuur. Het kwantificeren van schimmels biofilmis van oudsher geanalyseerd post mortem en vereist gastheer opoffering. Omdat dit vereist het gebruik van vele dieren kinetische studies uitvoeren, toegepast worden niet-invasieve bioluminescentie (BLI) longitudinaal volgen in vivo volwassen C. albicans biofilms ontwikkelen in onze subcutane model. C. albicans cellen werden om de Gaussia princeps luciferasegen (GLUC) bevestigd aan de celwand expressie. De bioluminescentie-signaal wordt geproduceerd door het luciferase die het toegevoegde substraat coelenterazine omzet in licht die kan worden gemeten. De BLI signaal leek cel verkregen uit geëxplanteerde katheters telt. Niet-invasieve beeldvorming voor het kwantificeren van in vivo biofilmvorming biedt onmiddellijke toepassingen voor screening en validatie van antimycotica onder in vivo omstandigheden, alsmede voor studies op basis van gastheer-pathogeen interacties hierbij dragen tot een beter begriping van de pathogenese van katheter-gerelateerde infecties.

In deze studie tonen we de operatie van katheter implantaat en explantaat tijdens de in vivo C. albicans biofilm ontwikkeling in een muis. Bovendien geven we de kwantificering van volwassen biofilms niet alleen klassieke CFU opsomming, maar ook door BLI. Zoals getoond in figuur 1A, werden niet-fosforescerende polyurethaan katheter stukjes gesneden in 1 cm inrichtingen en vervolgens bekleed met serum. Deze stap is zeer belangrijk omdat het laat Candida-cellen</em...

We presenteren een experimentele procedure van Candida albicans biofilmontwikkeling in een muis subcutaan model. Schimmelbiofilms werden gekwantificeerd door het bepalen van het aantal kleurvormende eenheden en door niet-invasieve bioluminescentie-beeldvorming, waarbij de hoeveelheid geproduceerd licht overeenkomt met het aantal levensvatbare cellen.

Candida albicans biofilm ontwikkeling op medisch-relevante vreemde lichamen in een muis Subcutane Model Gevolgd door bioluminescentiebeeldvorming

Candida albicans biofilm development on biotic and/or abiotic surfaces represents a specific threat for hospitalized patients. So far, C. albicans ...

Het algemene doel van het volgende experiment is om het gebruik van een luciferase-expresserende stam te valideren voor de niet-invasieve monitoring van in vivo biofilmvorming door candida albican-cellen. Dit wordt bereikt door fragmenten van katheters, gekoloniseerd met een luciferase-expresserende stam van candida albicans, in de rug van een muis te implanteren. Tijdens de tweede stap wordt de gist toegestaan om te groeien tot een dikke laag cellen ingebed in een extracellulair matrix, waardoor een volwassen biofilm ontstaat aan de binnenkant van de katheters.Vervolgens wordt een substraat toegevoegd dat door het luciferase-enzym wordt omgezet. Deze reactie produceert meetbaar licht. Bioluminescente beeldvorming of BLI wordt vervolgens gebruikt om de vorming van de biofilm binnen de levende gastheer te registreren en te kwantificeren. Het belangrijkste voordeel van deze techniek ten opzichte van andere bestaande technieken, zoals het centrale Venmo-systeem, is dat we tot zes biofilms in één dier kunnen testen, waardoor het aantal dieren dat we nodig hebben voor statistische analyse aanzienlijk wordt verminderd.De implicaties van deze techniek strekken zich uit tot de therapie van candida albicans-biofilmvorming, aangezien onze methode het eenvoudig maakt om bestaande en nieuwe antischimmelcomponenten te testen. Ook kan deze methode inzicht geven in candida albicans, schimmelbiofilms. Het kan ook worden toegepast op andere microben zoals bacteriën of andere schimmelsoorten.De voorgestelde procedures zijn eenvoudig te implementeren in elk laboratorium dat 24 uur voorafgaand aan de chirurgische procedure toegang heeft tot een dierfaciliteit. Open de verpakking met de drie-lumen katheters binnen een biologische veiligheidskast. Gebruik steriele pincetten om alle onnodige onderdelen te verwijderen en een steriele scalpel om het deel dat aan de katheter is bevestigd te snijden. Plaats vervolgens een liniaal onder de plastic verpakking en snijd de polyurethaan katheter in stukken van één centimeter lang.Vervolgens vult u elke katheter met ongeveer 1,8 milliliter 100% foetaal bovien serum en incubeert u de stukken bij 37 graden Celsius een nacht. De volgende ochtend brengt u elk serum-gecoate katheterstuk over naar individuele microcentrifugebuizen van 1,5 milliliter en schraapt u C albicans van een YPD-plaat in één milliliter PBS in een aparte microcentrifugebuis bij een verdunning van één op honderd. Na het tellen, verdunt u de celsuspensie tot een eindconcentratie van vijf keer 10 tot de vierde cellen per milliliter.En voegt u één milliliter cellen toe aan elk van de serum-gecoate katheterstukken. Laat de cellen 90 minuten bij 37 graden Celsius aan de katheters hechten. Houd vervolgens de buisjes met steriele pincetten in een verticale positie.Spoel voorzichtig elk stuk twee keer door het lumen met één milliliter PBS om de katheters te plaatsen. Begin met het scheren van de onderrug van een acht weken oude, anesthetische muis die op een verwarmingskussen is gepositioneerd. Desinfecteer vervolgens de huid en maak een kleine snede van 0,5 tot één centimeter aan elke kant van het dier.Vervolgens dissecteert u het subcu met schaar om twee subcutane tunnels van ongeveer 1,5 centimeter lang en één centimeter breed te maken. Breng drie katheterstukken in elke tunnel in en zorg ervoor dat de stukken naast elkaar in een horizontale opstelling liggen zonder overlapping. Sluit de sneden met hechtingen en reinig vervolgens de wonden heel voorzichtig met een ontsmettingsmiddel.Breng vervolgens een lokaal anestheticum direct aan op de sneden en toedien een anesthesie-reverserend middel en bewaak de dieren totdat ze volledig zijn hersteld. Om de biofilmvorming op het juiste experimentele tijdstip te beeld, injecteert u 100 microliter vers bereide coil en terezin subcutaan in elk gebied dat de katheters bevat in een anesthetiseerde dier. Vervolgens verwerft u opeenvolgende scans met acquisitietijden variërend van 20 tot 60 seconden totdat de maximale signaalintensiteit is bereikt.Tijdens het verkrijgen van de volgende frame, plaatst u een interessegebied over elke trio katheters om de bioluminescente beeldvorming of BLI signaalintensiteit van de eerder verworven frames te meten. Plaats ook een rechthoekig interessegebied van vaste grootte op een controlegebied om de achtergrondsignaal in levende beeldsoftware te meten. Meet de fotonflux door de interessegebieden voor elke kathetertrio, evenals voor de achtergrond.Na het herhalen van deze metingen voor elk dier en op verschillende tijdstippen tijdens de biofilmvorming, rapporteert u de BLI signaalintensiteit van elke kathetertrio als fotonflux per seconde. De gegevens kunnen direct worden gekopieerd en in een spreadsheetprogramma worden geplakt. Aan het einde van het longitudinale experiment, offert u elk dier op, snijdt u door het subcutane weefsel en gebruikt u steriele pincetten om de katheterfragmenten een voor een te verwijderen.Was de katheters twee keer in één milliliter PBS zoals zojuist is gedemonstreerd. Soniceer vervolgens de stukken in een nieuwe microcentrifugebuis in één milliliter vers PBS bij 40.000 hertz in een waterbad. Soniceer na 10 minuten, plaats de buisjes met de katheters op ijs en plateer 100 microliter van de originele monsters bij één op tien en één op honderd verdunning op YPD-agarplaten.In duplicaat. Plot uiteindelijk het gemiddelde en de standaardafwijking van de kolonievormingseenheden. En BLI signaal voor elk dier op een logaritmische schaal.In deze afbeelding wordt een representatief dier getoond dat het bioluminescentie signaal samen met een interessegebied weergeeft, zes dagen na biofilmontwikkeling. Merk het gebrek aan signalering in het controle-achtergrondgebied op, wat de beperking van de biofilm tot de gebieden onmiddellijk naast de candida-gecoate katheters bevestigt. In dit representatieve experiment kan een duidelijke BLI signaal worden waargenomen dat wordt geproduceerd door de luciferase-expresserende biofilms, terwijl alleen achtergrondsignaal lijkt te worden geproduceerd door de wilde typestam.Deze toename in signaal volgt dezelfde trend als de toename in kolonievormingseenheden per biofilm en de fotonfluxmetingen voor elke groep dieren samen genomen. Deze

candida-albicans-biofilm-development-on-medically-relevant-foreign

Research

JoVE Journal

Medicine

Geneeskunde

This video demonstrates the development of an in vivo mouse model to study the biofilm formation of Candida albicans in subcutaneous tissue. The experiment involves implanting Candida-infected devices in the animal's back region for biofilm development.

Candida albicans Biofilm Formation in an In Vivo Mouse Model

Hier beschrijven we een roman diabetische lymfkliertest model met behulp van haarloze muizen voor real-time, niet-invasieve, bewaking van biofilm wond infecties van bioluminescente Pseudomonas aeruginosa. Deze methode kan worden aangepast aan de infectie van andere bacteriesoorten en genetisch gemodificeerde micro-organismen, met inbegrip van meerdere soorten biofilms, evalueren en testen van de werkzaamheid van antibiofilm strategieën.

Aan de kant van licht komen: In Vivo Monitoring van Pseudomonas aeruginosa Biofilm infecties in chronische wonden in een diabetische haarloze lymfkliertest Model

Dit protocol beschrijft het gebruik van een aanpasbaar geautomatiseerde microfluidic apparaat te visualiseren van biofilm vorming in Candida albicans , onder fysiologische omstandigheden van de gastheer.

Visualisatie van Biofilm vorming in Candida albicans met behulp van een geautomatiseerd Microfluidic-apparaat

Het doel van dit protocol is het visualiseren van Candida albicans celvorm en lokalisatie in het maagdarmkanaal van zoogdieren.

Visualisatie van Candida albicans in de Murine gastro-intestinale tractus met behulp van fluorescerende in situ hybridisatie

Om de interne kenmerken van Candida albicans biofilms te bekijken en te kwantificeren, bereiden we vaste intacte exemplaren voor die worden verduidelijkt door refractieve indexmatching. Vervolgens kan optische sectioning microscopie worden gebruikt om driedimensionale beeldgegevens te verkrijgen, hoewel de volledige dikte van de biofilm.

Verduidelijken en beeldvorming Candida albicans Biofilms

Dit manuscript beschrijft de intravesicale toediening van uropathogene bacteriën met een lux operon om een urineweginfectie bij muizen te induceren en de daaropvolgende longitudinale in vivo analyse van de bacteriële belasting met behulp van bioluminescentie beeldvorming.

Longitudinale follow-up van urineweginfecties en hun behandeling bij muizen met behulp van bioluminescentiebeeldvorming

Dit manuscript beschrijft een methode voor het screenen van middelgrote Candida albicans mutante bibliotheken op morfogenese fenotypes tijdens actieve infectie in een zoogdier gastheer met behulp van niet-invasieve confocale microscopie.

Gebruik van in vivo beeldvorming om te screenen op morfogenese fenotypes in Candida albicans mutante stammen tijdens actieve infectie bij een zoogdiergastheer

Periprothetische gewrichtsinfectie (PJI) veroorzaakt door gevaarlijke ziekteverwekkers komt vaak voor in de klinische orthopedie. Bestaande diermodellen kunnen de werkelijke situatie van PJI niet nauwkeurig simuleren. Hier hebben we een Candida albicans biofilm-geassocieerd PJI-muismodel opgezet om nieuwe therapieën voor PJI te onderzoeken en te ontwikkelen.

Een periprothetisch gewrichtsinfectiemodel van Candida albicans bij muizen

We stellen een muismodel op van C.albicans-geassocieerde kathetergerelateerde infectie (CRI), waarbij biofilm zich vormt op de katheter, en de interactie tussen C.albicans en gastheer goed correleert met de klinische CRI. Dit model helpt bij het screenen van therapieën voor C.albicans biofilm-geassocieerde CRI, waarmee een basis wordt gelegd voor klinische transformatie.

Een kathetergerelateerd Candida albicans-infectiemodel bij muizen

Dit protocol beschrijft de toepassing van antimicrobiële fotodynamische therapie (aPDT) in een muizenmodel van orale candidiasis. aPDT werd uitgevoerd met behulp van een in water oplosbaar mengsel van curcuminoïden en blauw LED-licht.

Curcuminoïde-gemedieerde antimicrobiële fotodynamische therapie op een muizenmodel van orale candidiasis

Dit protocol beschrijft een uniek experimenteel model van implantaatgerelateerde infecties dat de gelijktijdige incubatie van twee implantaten met bacteriën onder identieke omstandigheden binnen een enkele muis mogelijk maakt. Het maakt ook een nauwkeurige beoordeling van de vorming van biofilm op implantaatoppervlakken mogelijk met behulp van geoptimaliseerde vergelijkende analytische methoden, waarbij geavanceerde technieken worden gedemonstreerd voor het evalueren van de antimicrobiële...

Een uniek muismodel voor kwantitatieve beoordeling van biofilmvorming op chirurgische implantaten in subcutaan abces

Leer hoe je Candida albicans biofilmvorming in vivo monitort met bioluminescentiebeeldvorming in een subcutaan muismodel. Deze methode kwantificeert biofilms op katheterfragmenten en vermindert het aantal benodigde dieren voor statistische analyse.

Candida albicans biofilm ontwikkeling op medisch-relevante vreemde lichamen in een muis Subcutane Model Gevolgd door bioluminescentiebeeldvorming (Video) | JoVE Journal

Candida albicans biofilm ontwikkeling op medisch-relevante vreemde lichamen in een muis Subcutane Model Gevolgd door bioluminescentiebeeldvorming

Meer video's verkennen