Meting van de gladde spieren Functie in het Geïsoleerde Tissue Bath-applicaties om Farmacologie Onderzoek

Het algemene doel van deze procedure is om de tonus van de gladde spieren te meten. Dit wordt bereikt door eerst weefsels te disseceren en voor te bereiden. De tweede stap is om het weefsel in een geïsoleerd weefselbad te monteren.

Vervolgens wordt de levensvatbaarheid van het weefsel getest en worden isometrische contractiemetingen genomen. Uiteindelijk wordt de geïsoleerde weefselbadvoorbereiding gebruikt om receptorfunctie, receptorsignalering en gladde spierreactiviteit te testen. Over het algemeen zijn de belangrijkste voordelen van deze techniek de flexibiliteit van het systeem, de snelheid waarmee resultaten worden bereikt en het behoud van het hele weefsel intact.

Deze methode kan helpen bij het beantwoorden van belangrijke vragen in elk veld dat geneesmiddelen gebruikt om te interfereren met receptorsignalering of gladde spierziel. Er zijn enkele voorbereidingen die moeten worden benadrukt. Het is essentieel om het weefselbadsysteem voor te verwarmen tot 37 graden Celsius door de gecirculeerde verwarmde waterbad in te schakelen. Het water moet in elke component stromen bij de laagste hakenverbinding en uitstromen bij de hoogste hakenverbinding.

Elk onderdeel moet worden aangesloten. De krachttransducers moeten worden gekalibreerd en ook minimaal 15 minuten voorafgaand aan het experiment worden ingeschakeld om hun temperatuur in evenwicht te brengen. Controleer vervolgens bij het aansluiten van het gas op lekken en druk het systeem vervolgens onder druk.

Na het vullen van het systeem met oplossing, zorg ervoor om het te primen en eventuele luchtbellen te verwijderen. Het testen van de beluchters van het weefselbad is ook gerechtvaardigd. Goede beluchting zal geneesmiddelen effectief verdelen, maar het weefsel niet onmiddellijk voorafgaand aan het experiment destabiliseren.

Disseceer het weefsel. Na het verdoven van de rat, creëer een pneumothorax met schaar. Kus langs het diafragma aan de onderkant van de ribbenkast.

Snij vervolgens vanaf de onderkant van de ribbenkast tot aan het borstbeen en biseceer het weefsel. Ruim de organen boven de wervelkolom op om de aorta te lokaliseren, die zich direct langs de wervelkolom bevindt. Breek nu alle verbindingen met de aorta en snijd de aorta loodrecht op de wervelkolom op het niveau van het diafragma.

Houd vervolgens voorzichtig de aorta vast en disseceer de aorta van de wervelkolom. Begin in het onderste diafragmagebied naast de wervelkolom en werk je naar het hart toe. Wees voorzichtig om niet aan de aortaweefsels te trekken of te tuggeren, want dat kan het onmiddellijk beschadigen.

Plaats de aorta in een dissectiebakje met PSS. Neem nu een draad en maak een kleine hoek van 90 graden. Bij het ene uiteinde verankert u het hoekige uiteinde van de draad in de basis van de dissectiebak.

Voeg vervolgens voorzichtig de geleidedraad in het lumen van de aorta en schuif de aorta op de draad. Wanneer het vrije uiteinde van de draad zichtbaar wordt, buig het voorzichtig en duw het in de basis, waardoor het weefsel wordt gestabiliseerd. Verwijder nu met kleine Venusschaar en tang het perivasculare vetweefsel en ander overbodig weefsel tot de thoracale aorta wit en enigszins vezelig lijkt.

Zodra het overtollige weefsel is verwijderd, verwijdert u voorzichtig de schone aorta van de draad. Voltooi deze sectie door de aorta in ringen van drie tot vijf millimeter breed te snijden. Een bereikbare aortaring.

Heb twee weefselhaakjes voorbereid met hechtingen om deze in het badkamer te bevestigen. Een haakje moet een hechting hebben met een kleine geknotte lus voor bevestiging aan een staaf. Het andere haakje heeft een stukje hechting van 10 tot 14 centimeter nodig.

Om een knoop te maken, bevestigt u voorzichtig een paar van deze weefselhaakjes aan elke aortaring. Zorg ervoor dat de haakjes niet verstrikt raken. Breng vervolgens elk weefselstuk over in een schaal met PSS op kamertemperatuur met een weefselhouder bevestigd aan een ringstandaard.

Schuif vervolgens de geknotte lus over de pen van de staaf en gebruik het lange stukje hechting om het weefsel omhoog te houden. Plaats vervolgens de staaf in de kamer en zorg ervoor dat de staaf vastzit. Bind nu de hechting van de resterende haak naar de krachttransducer.

Laat voldoende losheid in de hechting, zodat de spanning tussen de krachttransducer en het weefsel kan worden aangepast met de micrometer. Herhaal dit proces voor elke ring in elke kamer. Stel nu de passieve spanning in.

Gebruik de micrometer om de spanning te verhogen tot twee gram en wacht tot de spanning op het weefsel stopt met stijgen. Verhoog vervolgens de spanning met nog eens twee gram en wacht opnieuw op de verandering in de spanning. Om te eindigen.

De spanning moet nu ongeveer 3,2 gram zijn. Herhaal dit proces voor elke ring in elke kamer. Laat na het instellen van alle passieve spanningen de weefsels een uur lang gelijkwaardig worden.

Vervang tijdens deze tijd elke 15 minuten het PSS en maak andere voorbereidingen voor het experiment, zoals de bereiding van de geneesmiddelen aan het einde van de evenwichtsperiode. Was het weefsel een laatste keer, sla de gegevens op en herhaal alle invoer. Maak vervolgens de initiële uitdaging volgens de details in het tekstprotocol.

Zorg ervoor dat u deze acties documenteert in de software. Na de initiële uitdaging zal de spanningsverandering een plateau bereiken. Was vervolgens het uitdagingsgeneesmiddel weg, zodat de toon van het weefsel een basislijn bereikt.

Laat het weefsel nu ongeveer 10 minuten rusten bij deze basislijntoon in één bad met de voertuig in dit geval, water tot de andere. Voeg voldoende prazocine toe voor een concentratie van vijf nanomolair in het bad. Laat de weefselbaden een uur incuberen zonder wassen.

Repareer ondertussen de fenol rine in een breed concentratiebereik langs een logaritme curve. Voeg na een uur fenyl rine agonist toe in toenemende concentraties aan het bad om een cumulatieve concentratierespons te genereren. Wacht na