Name: Rat Heterotope Abdominale Hart / Single-longtransplantatie in een Volume geladen configuratie (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2015-05-29T13:00:00.000+00:00
Duration: 6 min 16 s
Description: Leer heterotopische abdominale hart-longtransplantatie bij ratten met dynamische volumelading. Deze methode maakt real-time cardiovasculaire beoordeling van het transplantaat mogelijk voor transplantatiebiologie.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Mark J. Kearns krijgt steun van de UBC Clinician Investigator Program (uitgereikt door het Koninklijk College van Artsen en Chirurgen van Canada), en de UBC 4YF Doctoral Fellowship. John H. Boyd is een Nationaal Sanatorium Association en Michael Smith Foundation for Health Research Scholar. Financiering door middel van CIHR. De auteurs willen dr M. Allard en Richard Wamboldt bedanken voor hun hulp bij de installatie en het onderhoud van perfusie apparatuur.

Alle dieren werden gehuisvest en verzorgd in overeenstemming met de nationale en institutionele richtlijnen voor de verzorging en het gebruik van proefdieren. Ethiek goedkeuring voor dit protocol werd door de Universiteit van Animal Care Committee British Columbia verleend. Mannelijke Sprague-Dawley ratten die tussen 300-450 g werden gebruikt voor dit protocol. 1. Donor Operation <ol><li> Bij benadering 100 ml cardioplegia (RT) in een bekerglas verbonden lange intraveneuze (IV) katheterbuis met een 3-weg kraan. Gebruik een stand aan de kolf verheffen tot ongeveer 80 cm boven het werkzame oppervlak, waardoor cardioplegia levering door zwaartekracht. </li><li> Om structuren adequaat te visualiseren, gebruikt u een paar van chirurgische loepen of een dissectie microscoop. LET OP: Wij gebruiken momenteel een verrekijker operationele microscoop met 3.4 - 21.3X vergroting. </li><li> Plaats de donor in een verdoving kamer en veroorzaken anesthesie met 4-5% isofluraan. </li&gt; <li> Breng de rat om een ​​operationele platform en anesthesie door neuskegel met 1 te behouden - 2% isofluraan. Breng vet zalf ogen van het dier tot droog voorkomen. Dien midazolam (2 mg / kg) intraperitoneaal met een 25 G naald. </li><li> Met behulp van chirurgische clippers, scheren de donor van xiphisternum naar onderkaak. Scheren een klein gebied van de linker lies (voor volgende toegang IV). Breng een ontharen agent om de operatieve oppervlakken, wacht ongeveer 5 min, en verwijder haar met een stukje gaas. </li><li> Prep de chirurgische sites met een povidonjood of chloorhexidine-gebaseerde oplossing (we alleen chloorhexidine gebruiken). Infiltreren de incisional sites met 0,1-0,5% lidocaïne subcutaan. </li><li> Bevestig de voorpoten en liet achterbeen aan het bedrijfsresultaat platform met plakband, gratis voor monitoring van narcose diepte en de vitale functies verlaten van de rechter achterpoot. </li><li> Na het zorgen voor een passende verdoving diepte door pedaal snuifje, maken een incisie in de linker lies plooi met behulpEen 22-scalpel blade. Door stompe dissectie, bloot de linker gemeenschappelijke dijbeenader en het verkrijgen van toegang IV als volgt: <ol><li> Voorzichtig trekken het weefsel bovenop de lies, en canule de ader met een 24 G IV. Sluit de IV een korte lengte van de zoutoplossing gevulde IV slangen, en zet de slang op zijn plaats met plakband. OPMERKING: De procedure voor femorale veneuze canulatie bij ratten wordt elders beschreven door Jespersen en collega&#39;s 14. </li><li> Sluit een zoutoplossing gevulde 10 ml spuit om de IV buis en voorzichtig zuig bloed correcte positionering van de IV waarborgen. </li><li> Injecteer 300-500 IU van ongefractioneerde heparine door de IV buis, en vervolgens spoel de buis met 3-5 ml zoutoplossing. </li></ol></li><li> Vervolgens tracheotomize de donor als volgt: <ol><li> Voeg een middellijn incisie in het zachte weefsel tussen de jugulaire notch en onderkaak met een 22-scalpel blade. Doordringen in de capsule van de schildklier in de middellijn behulp MetzenBaum schaar, en een aparte haar lobben met stompe dissectie. </li><li> Met stompe dissectie, scheid de riem spieren van de nek in de middellijn aan het voorste oppervlak van de trachea bloot. </li><li> Gebruik een gebogen tang om botweg ontleden een omtrek vliegtuig rond de luchtpijp. Omcirkel de luchtpijp met een 4-0 zijden stropdas. </li><li> Met irisschaar, maak een dwarse incisie in de voorste trachea, ongeveer 5 mm lager dan de schildklier kraakbeen. Voorzichtig introduceren de tracheacanule (een 14 G IV) en zet hem op zijn plaats met behulp van de 4-0 zijden stropdas. </li><li> Sluit de tracheale canule een mechanische ventilator. Redirect de toevoer van zuurstof en isofluraan via de ventilator circuit, en ventileren van de donor met een snelheid en getijdenenergie volume voorspeld door zijn gewicht 13. </li></ol></li><li> Een insnijding in de middellijn van de borstkas (met een 22-scalpel blade), verlenging van de snede in het jugularis inkeping tot onder de xipisternum. </li><li> Logeren in de middellijn, Voer een mediane sternotomie met behulp van een bot mes. Trek de randen van het borstbeen met een zelf-behoud oprolmechanisme. Voer het hartzakje en pleura holtes. </li><li> Voer een thymectomie. Het is het makkelijkst om eerst onomwonden verdelen de thymus in de middellijn, en dan scheiden van de omliggende structuren met behulp van een combinatie van stompe en scherpe dissectie. OPMERKING: De oorsprong van de interne thoracale slagaders worden verwond wanneer het ontleden van de thymus van het superieure sternale randen. Om het bloeden te voorkomen, kan hemostatische clips worden toegepast voordat het verwijderen van de thymus op deze punten. </li><li> Met behulp van Metzenbaum schaar en / of een scherp Lauer, ontleden peri-cavale vet weg van de vena cava inferior (IVC). Zorg ervoor dat de IVC is relatief vrij van vet en bindweefsel van de Cavo-atriale knooppunt superieur, het membraan inferiorly. </li><li> Met behulp van een scherpe Lauer, de omtrek gratis de vena cava superior (SVC) en omringen het met een 4-0 zijden stropdas. </li><li> Vervolgens ontleden delinks vena cava vrij van de omliggende structuren en ligeren deze proximaal en distaal met 4-0 zijden dassen. Reseceren de tussenliggende gedeelte van cava naar links subclavia bloot te leggen. </li><li> Omtrek gratis de aortaboog schepen met een scherp Lauer. Breng proximale en distale chirurgische clips naar de onbenoemde slagader, en verdeel het tussen de clips. Laat de linker gemeenschappelijke halsslagader en de linker subclavia-un afgekapt. </li><li> Vervolgens canule de SVC met een 24 G IV katheter. Bevestig de katheter met de eerder geplaatste 4-0 zijden stropdas. </li><li> Bereid je voor op een doelmatige, maar zachte graft oogst. </li><li> Met behulp van een scherpe schaar, verdeel het IVC gewoon superieur aan het middenrif oppervlak. Verdeel de SVC superieur aan haar cannulatie site, ervoor te zorgen dat de omgeving van de luchtwegen structuren niet gewond. </li><li> Schakel de ventilator en ontkoppel de tracheacanule. Doorsnijden de trachea proximaal. </li><li> Pak de doorsneden luchtpijp met een tang en verwijder het harten de longen en-bloc. Dit zal zachte tractie nodig met scherpe dissectie als het hart-long transplantaat wordt verwijderd. Scheid de trachea van de onderliggende slokdarm. Niet verwondt de afdalende aorta, waardoor een lang onderdeel ervan blijft intact na de oogst. </li></ol> 2. Voorbereiding van de hart-long Graft OPMERKING: bij het invullen van dit deel van de procedure, moet een assistent zijn verlamming van de ontvanger knaagdieren en de voorbereiding van graft implantatie. <ol><li> Plaats de hart-long transplantaat op chirurgische gaas met het voorste oppervlak van het hart naar beneden. Met behulp van scherpe dissectie, verwijder eventueel resterende slokdarm, het vermijden van schade aan de achterste luchtwegen. </li><li> Zoek de thoracale aorta en plaats een 16 G-stompe getipt canule. Bevestig de canule op zijn plaats met een 4-0 zijden stropdas. </li><li> Zoek de aortaboog schepen, en een chirurgische clip van toepassing op de linker subclavia. Laat de linker halsslagader un-geknipt voor subsequent de-luchten. </li><li> Dien de eerste dosis cardioplegia op door de cardioplegia slang op de 16 G aorta canule. De halsslagader tijdelijk moeten worden afgesloten met een tang om adequate levering van cardioplegie waarborgen. Opmerking: Een voordeel van het hebben van de aorta canule bevestigd dat cardioplegia continu en / of intermitterend worden toegediend zoals gewenst. Voor intermitterende dosering, we leveren meestal cardioplegie elke 10 - 15 min in 5 ml bolussen meer dan 30 - 45 sec. </li><li> Met Metzenbaum schaar en / of een scherpe Lauer, ontleden peri-aortische vet verwijderd van de aorta. Zorg ervoor dat de aorta is relatief vrij van vet en bindweefsel van links subclavia (distale arch) om zijn cannulatie website. </li><li> Vervolgens bloot de linker hoofdstam bronchus met een scherp Lauer en ligeren deze proximaal met een 4-0 zijden stropdas. Doorsnijden de linker bronchus distale aan de ligatuur met iris schaar. Voer een achtergelaten pneumonectomie door ligatie van de linker longslagader en ader met 4-0 zijden dassen. Doorsnijden distaal van de ligatuur en verwijder de linker long. </li><li> Zoals hierboven, verwijder alle longkwabben met uitzondering van de rechter bovenste en middelste lobben. Vermijd verwonden het IVC in het proces van het uitvoeren van lobectomies. </li><li> Sluit de cardioplegia slang aan op de aorta canule en beheren continue cardioplegie terwijl de ontvanger wordt voorbereid. Plaats de hart-long transplantaat in een steriele houder (bijvoorbeeld een bekerglas). </li></ol> 3. Ontvanger Operation <ol><li> Verdoven van de ontvanger volgens de donor operatie boven. Gebruik dierenarts zalf voor de ogen van het dier te beschermen tegen uitdroging. Bevestig anesthesie vaak door pedaal snuifje. </li><li> Plaats het dier volgens de donor operatie, dit keer het verlaten van de juiste voorpoot vrij om de vitale functies en verdoving diepte te controleren. </li><li> Scheer de buik van xiphisternum naar penis. Scheren een klein gebied van de linker lies (voor volgende toegang IV). Breng eenontharen agent om de operatieve oppervlakken, wacht ongeveer 5 min, en verwijder haar met een stukje gaas. </li><li> Prep de chirurgische sites met een povidonjood of chloorhexidine gebaseerde oplossing. Infiltreren de incisional sites met 0,1-0,5% lidocaïne subcutaan. </li><li> Tracheotomize en ventileren van de ontvanger, zoals hierboven aangegeven. Ook onderhouden van de ontvanger onder de neus-cone anesthesie. </li><li> Invoering van een catheter in de femorale ader zoals hierboven beschreven. Injecteer 300-500 IU van ongefractioneerde heparine door de IV buis, en vervolgens spoel de buis met 3-5 ml zoutoplossing. </li><li> Voer een laparotomie door een middenlijn abdominale incisie met een 22-scalpel blade van xiphisternum penis. Trek de buikwand met behulp van een zelf-behoud oprolmechanisme. Vervolgens trekken de darmen superieur en aan de linkerkant van de rat. Wikkel ze in warm, zoutoplossing gedrenkt gaas. </li><li> Expose het IVC en abdominale aorta door scherp ontleden door de bovenliggende retro-peritoneale vet. </li><li> Een gebogen vat klem beschikbaar en klaar. </li><li> Omtrek gratis de IVC en aorta proximaal en distaal en omringen ze met 4-0 zijden dassen. Er moet ongeveer 2-3 cm ruimte tussen deze sites. </li><li> Toepassing zorgvuldig de gebogen schip klem, ervoor te zorgen dat een voldoende deel van zowel IVC en de aorta boven de kaken van de klem worden blootgesteld. </li><li> Een insnijding in de voorste wand van de IVC met een 25 G naald verbonden met een zoutoplossing gevulde 1 ml spuit. Verleng de incisie met Potts schaar om de lengte van de donor IVC opening passen. </li><li> Verwijder de hart-long transplantaat uit de container en de stekker uit cardioplegie. Plaats het implantaat in de buik van de ontvanger in een optimale positie op het veneuze anastomose uitvoert. LET OP: Het hart-long transplantaat zal uiteindelijk enigszins schuin georiënteerd, met de apex wijst naar de buik links onderste kwadrant. </li><li> Zet de hielen teen uiteinden van de anastomose met 9-0 nylon hechtdraad. Leg een stevige knoop aan elk uiteinde, waarbij de naald bevestigd aan een lange arm van hechtdraad en een korte stuk hechtdraad later worden gekoppeld aan. Dien een dosis van cardioplegie. </li><li> In lopende mode, volledige helft van de hechtdraad lijn en stropdas naar de tegengestelde korte hechtdraad arm. Dien een dosis van cardioplegie. </li><li> Voltooi de andere helft van de hechtdraad lijn en bind het naar beneden. De veneuze anastomose voltooid. Dien een dosis cardioplegia </li><li> Richt de hart-long transplantaat met apex wijst het hart naar de buik links onderste kwadrant. Zorg ervoor dat de veneuze anastomose niet wordt geknikt of gedraaid. </li><li> Beoordeel de lengte van de donor aorta die nodig zal zijn om de ontvanger aorta te bereiken, onderhouden zowel IVC en aorta anastomoses in spanningsvrij en un-geknikte configuraties. </li><li> Verdeel de afdalende aorta (distaal links subclavia) met een irisschaar. </li><li> Maak een incision in de voorwand van de ontvanger aorta met een 25 G naald verbonden met een zoutoplossing gevulde 1 ml spuit. Verleng de incisie met Potts schaar om de lengte van de donor aorta opening passen. </li><li> Veranker de teen (superior aspect) van de donor aorta naar de ontvanger aorta met een 9-0 nylon hechtdraad. Vervolgens passeren de naald op de mediale zijde van de aorta en voltooi de helft van de anastomose bij lopende wijze. </li><li> Op de hiel van de aorta anastomose, keren de oriëntatie van de hechtdraad lijn (een overgang in de richting van de stiksels), en voltooi de laterale helft van de anastomose in het runnen van de mode. </li><li> Verwijder langzaam de IV katheter in de SVC, en ligeren van de SVC met een chirurgische clip. </li><li> De lucht van de aorta door het lokaliseren van de VN-geknipt links gemeenschappelijke halsslagader. Houd de slagader geopend, rechtopstaand waarmee lucht vrij te evacueren. </li><li> Open kort de kaken van de gebogen schip klem en laat de halsslagader te bloeden (de-air) voor 2 - 3 sec. Re-toepassing van het schip klem. </li><li> Breng een chirurgische clip toe aan de halsslagader. Verwijder de gebogen schip klem. </li><li> Controleer of bloeding op de hechting lijnen. Indien aanwezig, zachtjes compressie met chirurgische gaas of reparatie met een lengte van 9-0 nylon hechtdraad (afhankelijk van de ernst van bloeden). </li><li> Het donorhart moet hervatten kloppen binnen enkele minuten. </li><li> Let goed op de vitale functies van de ontvanger, de diepte van de anesthesie, en het volume reanimatie toedienen als dat nodig is. </li><li> Afhankelijk van de experimentele eindpunten, ofwel sluit buik van het dier en het laten herstellen van verdoving, of bereid het dier cardiovasculaire assessment. OPMERKING: Voorbeelden van graft evaluatie omvatten in vivo metingen van de belasting-afhankelijke en load-onafhankelijke hemodynamica, in vitro maatregelen van de functie in Langendorff en werken hart modi, en (in overleving chirurgie) echocardiografisch of MRI-onderzoek. </li><li> Bij deeinde van acute terminal experimenten, worden de dieren gedood door verbloeding. </li></ol>

<ol><li>Abbott, C. P., Lindsey, E. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+technique+for+heart+transplantation+in+the+rat%5BTitle%5D)+AND+%22Arch+Surg%22%5BJournal%5D)">A technique for heart transplantation in the rat.</a> Arch Surg. 89 (1964), 649-652 (1964).</li>
<li>Ma, Y., Wang, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comparison+of+2+heterotopic+heart+transplant+techniques+in+rats%3A+cervical+and+abdominal+heart%5BTitle%5D)+AND+%22Exp+Clin+Transplant%22%5BJournal%5D)">Comparison of 2 heterotopic heart transplant techniques in rats: cervical and abdominal heart.</a> Exp Clin Transplant. 9 (2), 128-133 (2011).</li>
<li>Wiedemann, D., Boesch, F., Schneeberger, S., Kocher, A., Laufer, G., Semsroth, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Graft+function+after+heterotopic+rat+heart+transplant+with+an+isolated+reperfused+working+heart%3A+a+methodic+consideration%5BTitle%5D)+AND+%22Exp+Clin+Transplant%22%5BJournal%5D)">Graft function after heterotopic rat heart transplant with an isolated reperfused working heart: a methodic consideration.</a> Exp Clin Transplant. 10 (2), 154-157 (2012).</li>
<li>Chen, Z. H., Xia, S. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+technique+of+heterotopic+heart-lung+transplantation+in+the+rat%5BTitle%5D)+AND+%22J+Tongji+Med+Univ%22%5BJournal%5D)">The technique of heterotopic heart-lung transplantation in the rat.</a> J Tongji Med Univ. 6 (2), 67-70 (1986).</li>
<li>Ibrahim, M., Navaratnarajah, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Heterotopic+abdominal+heart+transplantation+in+rats+for+functional+studies+of+ventricular+unloading%5BTitle%5D)+AND+%22J+Surg+Res%22%5BJournal%5D)">Heterotopic abdominal heart transplantation in rats for functional studies of ventricular unloading.</a> J Surg Res. 179 (1), e31-e39 (2013).</li>
<li>Asfour, B., Hare, J. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+simple+new+model+of+physiologically+working+heterotopic+rat+heart+transplantation+provides+hemodynamic+performance+equivalent+to+that+of+an+orthotopic+heart%5BTitle%5D)+AND+%22J+Heart+Lung+Transplant%22%5BJournal%5D)">A simple new model of physiologically working heterotopic rat heart transplantation provides hemodynamic performance equivalent to that of an orthotopic heart.</a> J Heart Lung Transplant. 18 (10), 927-936 (1999).</li>
<li>Figueiredo, J. -L., Nahrendorf, M., Sosnovik, D. E., Weissleder, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((MRI+of+a+novel+murine+working+heart+transplant+model%5BTitle%5D)+AND+%22Circ+Heart+Fail%22%5BJournal%5D)">MRI of a novel murine working heart transplant model.</a> Circ Heart Fail. 2 (3), 272-274 (2009).</li>
<li>Wen, P., Wang, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+simple+technique+for+a+new+working+heterotopic+heart+transplantation+model+in+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Transplant+Proc%22%5BJournal%5D)">A simple technique for a new working heterotopic heart transplantation model in rats.</a> Transplant Proc. 45 (6), 2522-2526 (2013).</li>
<li>Didié, M., Biermann, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Preservation+of+left+ventricular+function+and+morphology+in+volume-loaded+versus+volume-unloaded+heterotopic+heart+transplants%5BTitle%5D)+AND+%22A.Am+J+Physiol+Heart+Circ+Physiol%22%5BJournal%5D)">Preservation of left ventricular function and morphology in volume-loaded versus volume-unloaded heterotopic heart transplants.</a> A.Am J Physiol Heart Circ Physiol. 305 (4), H533-H541 (2013).</li>
<li>Galiñanes, M., Zhai, X., Hearse, D. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+effect+of+load+on+atrophy%2C+myosin+isoform+shifts+and+contractile+function%3A+studies+in+a+novel+rat+heart+transplant+preparation%5BTitle%5D)+AND+%22J+Mol+Cell+Cardiol%22%5BJournal%5D)">The effect of load on atrophy, myosin isoform shifts and contractile function: studies in a novel rat heart transplant preparation.</a> J Mol Cell Cardiol. 27 (1), 407-417 (1995).</li>
<li>Yokoyama, H., Ohmi, M., Murata, S., Nakame, T., Tabayashi, K., Mohri, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Proposal+of+a+working+left+heart+model+with+a+heterotopic+transplantation+technique+in+rats%5BTitle%5D)+AND+%22J+Heart+Lung+Transplant%22%5BJournal%5D)">Proposal of a working left heart model with a heterotopic transplantation technique in rats.</a> J Heart Lung Transplant. 14 (4), 706-712 (1995).</li>
<li>Maruyama, T., Swartz, M. T., McBride, L. R., Pennington, D. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Working+heart+model+of+heterotopic+heart-lung+transplantation+in+rats%5BTitle%5D)+AND+%22J+Thorac+Cardiovasc+Surg%22%5BJournal%5D)">Working heart model of heterotopic heart-lung transplantation in rats.</a> J Thorac Cardiovasc Surg. 107 (1), 210-215 (1994).</li>
<li>Pacher, P., Nagayama, T., Mukhopadhyay, P., Bátkai, S., Kass, D. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Measurement+of+cardiac+function+using+pressure-volume+conductance+catheter+technique+in+mice+and+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Protoc%22%5BJournal%5D)">Measurement of cardiac function using pressure-volume conductance catheter technique in mice and rats.</a> Nat Protoc. 3 (9), 1422-1434 (2008).</li>
<li>Jespersen, B., Knupp, L., Northcott, C. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Femoral+arterial+and+venous+catheterization+for+blood+sampling%2C+drug+administration+and+conscious+blood+pressure+and+heart+rate+measurements%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Femoral arterial and venous catheterization for blood sampling, drug administration and conscious blood pressure and heart rate measurements.</a> J Vis Exp. (59), 3496-3410 (2012).</li>
<li>Habertheuer, A., Kocher, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Innovative%2C+simplified+orthotopic+lung+transplantation+in+rats%29%5BTitle%5D)+AND+%22J+Surg+Res%22%5BJournal%5D)">Innovative, simplified orthotopic lung transplantation in rats).</a> J Surg Res. 185 (1), 419-425 (2013).</li>
</ol>

De auteurs hebben niets te onthullen.

Succes met de hier beschreven techniek wordt beweerd van verschillende factoren. Key onder hen zullen zorgen voor stabiliteit van donor en ontvanger dieren, de vaststelling van nauwgezette operatieve techniek die veilig is en in verband met minimale bloedverlies, zorgen voor volledige cardioplegische arrestatie uniforme transplantaat koeling, het minimaliseren van de totale ischemische tijd en adequaat gede-luchten het transplantaat. Zoals hierboven erkend, technische complexiteit van de techniek is zijn belangrijkste b...

Het eerste knaagdiermodel van heterotope abdominale harttransplantatie (HAHT) werd beschreven door Abbott en collega's in 19641. Deze techniek en daaropvolgende aanpassingen zijn veelvuldig toegepast om de functie van transplantatiegraft en de immuunstatus te karakteriseren. De meeste beschreven HAHT-technieken omvatten een niet-volumegeladen hart2,3. Modellen van HAHT met volumegeladen ventrikels zijn beschreven, maar ze zijn vaak beperkt in een of meer opzichten.
Heterotope abdominale hart-longtransplantatie (HAHLT) met een volumegeladen linker ventrikel (LV) is eerder beschreven. Chen en collega's4, en later Ibrahim en collega's5 beschreven HAHLT met een enkele aorto-aortische (donor ascenderende naar recipient abdominale aorta) anastomose. De enige volumebelasting die de ventrikel in deze circulatie ondervindt is de coronaire veneuze terugkeer. Asfour en collega's beschreven een HAHT-techniek waarbij het longcircuit werd geëlimineerd door anastomosering van de donor pulmonale arterie (PA) naar de donor linker atrium (LA)6. In deze circulatie vindt veneuze instroom naar de rechter ventrikel (RV) plaats via een donor SVC naar recipient IVC anastomose, en de daaropvolgende LV-belasting wordt uitgeworpen in de aorto-aortische anastomose. De cardiale functie werd gedeeltelijk beoordeeld in vivo en ook in vitro met behulp van een Langendorff-opstelling. Figueiredo en collega's beschreven een HAHLT-model vergelijkbaar met het onze7, maar in muizen. Veneuze instroom naar de RV vindt plaats via donor SVC naar recipient IVC anastomose. Het bloed passeert vervolgens door de enkele longcirculatie en de LV-belasting wordt uitgeworpen in de aorto-aortische anastomose. De cardiale functie in hun studie werd beoordeeld door magnetische resonantie beeldvorming (MRI). Wen en collega's beschreven een unieke HAHT-techniek waarbij de LV wordt geladen door middel van een recipient aorta naar donor LA anastomose8. De LV vult zich dus op systemische druk. Of de cardiale functie en of het LV slagvolume antegrade wordt uitgeworpen in hun model, werd niet beoordeeld.
Veel van de hierboven genoemde technieken omvatten niet-fysiologische LV-belastingscondities, inclusief de technieken waarvan de gedeeltelijke LV-belasting slechts wordt vertegenwoordigd door coronaire veneuze terugkeer. Aan de andere kant benaderen veel technieken een fysiologische LV-belasting. De meeste van deze technieken, zoals de techniek van Asfour en collega's, laten de longcirculatie weg en gebruiken een donor PA naar donor LA anastomose6,9. De circulatie beschreven door Galinanes en collega's10 maakt gebruik van een directe recipient cava naar donor LA anastomose, waarbij de longcirculatie en het rechter hart worden weggelaten. Yokoyama en collega's bereiken hetzelfde effect door de donor PA te ligeren en een interatriale communicatie in het donorhart te creëren (waarbij de donor long en rechter hartcirculaties worden weggelaten)11. De circulatie van Maruyama en collega's12 omvat een anastomose tussen donor linker PA en recipient Ao, wat LV-vulling via de longcirculatie als een kanaal mogelijk maakt, maar effectief het rechter hart uitsluit.
In gevallen waarbij bijna fysiologische belastingscondities werden bereikt, ontwikkelen we de HAHLT-techniek in twee belangrijke opzichten. Ten eerste, voor zover ons bekend, is de exacte configuratie die we rapporteren niet beschreven in ratten. Het is mogelijk de meest veelzijdige circulatie voor onderzoekers die de fysiologie, structuur en immunologie van het getransplanteerde hart-long-graft willen bestuderen. Ten tweede beschrijven we hoe de functie van het transplantatiegraft direct in vivo kan worden gekarakteriseerd. Voor deze toepassing kunnen druk-volume geleidingskatheters direct in de LV-apex van het transplantatiegraft worden geïntroduceerd, wat een volledige cardiale functionele karakterisering mogelijk maakt.
De hier beschreven techniek kan worden toegepast op zowel acute als chronische studies van transplantatiegraftfunctie, terwijl de functionele beoordeling hetzij in vivo of in vitro kan worden uitgevoerd. We presenteren een model waarin de belastingscondities bijna fysiologisch kunnen zijn, maar de mate van ventrikelbelasting zowel acuut als chronisch kan worden gemanipuleerd door veneuze retour naar of weg van het graft te leiden. De afterload-condities kunnen ook worden gemanipuleerd. Omdat de long en zijn luchtwegen worden behouden in deze transplantaatconfiguratie, kunnen onderzoekers de donor long acuut opnieuw ventileren. Uniek is dat longreventilatie de samenstelling van het bloed dat de transplantaatcoronaire arteriën perfudeert verandert. Onder niet-geventileerde omstandigheden is het bloed dat uit de donor aorta wordt geëjecteerd gedeoxygeneerd en mengt zich met geoxygeneerd bloed in de recipient aorta. Onder acuut geventileerde omstandigheden wordt het geëjecteerde bloed geoxygeneerd. Zodoende kan de functie van het transplantatiegraft worden vergeleken onder geventileerde en niet-geventileerde omstandigheden, en ook onder variabel belaste omstandigheden.
Het onderstaande protocol beschrijft belangrijke aanpassingen aan eerder beschreven HAHLT donor- en recipient-operaties. Het beschrijft ook een optimale techniek voor het beschermen van het transplantatiegraft gedurende de ischemieperiode (tijd tussen donor explant en recipient implant). Voordelen van deze techniek omvatten fysiologische omstandigheden die potentieel die van een orthotopisch getransplanteerd graft benaderen, en een breed scala aan onderzoekstoepassingen. Een belangrijke beperking is de technische complexiteit. Met voldoende begeleiding en oefening zullen de voordelen van deze techniek waarschijnlijk de uitdagingen bij het toepassen ervan overwegen.

<table><tbody><tr><td>Celsior Cardioplegic Soution</td><td>Genzyme</td><td></td><td>De oplossing wordt tijdens het hele proces op ijs bewaard. Wij bereiden onze eigen oplossing, met lichte wijzigingen.</td></tr><tr><td>Rodent Ventilator</td><td>Harvard Apparatus</td><td>Model 683</td><td></td></tr><tr><td>Vital Sign Monitor</td><td>Nonin</td><td>Model 9847V</td><td>Geeft SpO2 en hartslag weer.</td></tr><tr><td>IV Cannulae</td><td>Jelco</td><td>3063</td><td>24 - 26 G x 3/4" canules.</td></tr><tr><td>IV Tubing</td><td>CareFusion</td><td>MP9259-C</td><td>Korte verbindingsbuisjes (18 cm).</td></tr><tr><td>Surgical Clips</td><td>Teleflex Medical</td><td>001204</td><td>Horizon titanium ligating clips.</td></tr><tr><td>Sutures</td><td>Ethicon, Sharpoint</td><td>LA54G, AK-0107</td><td>3-0 zijden spoel, en 9-0 proleen hechtdraad (enkele arm, DR5 naald).</td></tr><tr><td>Surgical Instruments</td><td>Niet Van Toepassing</td><td>Niet Van Toepassing</td><td>De gebruikte instrumenten zijn generiek en kunnen worden gekocht bij elk chirurgisch leveranciersbedrijf.</td></tr></tbody></table>

rat heterotope abdominale hart / single-longtransplantatie in een volume geladen configuratie

Rat Heterotopic Abdominal Heart/Single-lung Transplantation in a Volume-loaded Configuration

Hier beschrijven we een nieuwe techniek voor heterotope abdominale hart-longtransplantatie (HAHLT) bij ratten. De configuratie van het transplantaat omvat anastomose van de inferieure vena cava (IVC) van de donor naar de IVC van de ontvanger, en de opgaande aorta (Ao) van de donor naar de abdominale Ao van de ontvanger. De rechter bovenste en middelste longkwabben worden bewaard en fungeren als geleiders voor de bloedstroom van het rechter naar het linker hart.
Er zijn verschillende voordelen aan het gebruik van deze techniek, en deze leent zich voor een breed scala aan toepassingen. Omdat het transplantaat wordt geïmplanteerd in een configuratie die dynamisch volume-laden mogelijk maakt, kan de hartfunctie direct in vivo worden beoordeeld. Het gebruik van druk-volume geleidingskatheters maakt de karakterisering van belastingsafhankelijke en onafhankelijke hemodynamische parameters mogelijk. Het transplantaat kan worden omgezet in een belaste configuratie door een klem op de infra-hepatische IVC van de ontvanger aan te brengen. We beschrijven gemodificeerde chirurgische technieken voor zowel donor- als ontvangersoperaties, en een ideale strategie voor myocardbescherming. Afhankelijk van het experimentele doel, kan dit model worden aangepast voor gebruik in zowel acute als chronische studies van transplantaatfunctie, immunologische status en variabele ventriculaire belastingsomstandigheden. De luchtwegen naar de getransplanteerde long worden bewaard en maken acute longreventilatie mogelijk. Dit vergemakkelijkt de analyse van de effecten van het gemengde veneuze en arteriële bloed dat coronaire perfusie naar het transplantaat levert.
Een beperking van dit model is de technische complexiteit. Er is een aanzienlijke leercurve voor nieuwe operators, die idealiter begeleid moeten worden in de techniek. Een chirurgische opleidingsachtergrond is voordelig voor degenen die deze methode willen toepassen. Ondanks de complexiteit, streven we ernaar het model in een duidelijke en gemakkelijk toepasbare vorm te presenteren. Vanwege de fysiologische gelijkenis van dit model met orthotope transplantatie, en zijn brede scala aan studietoepassingen, is de inspanning die in het leren van de techniek wordt gestoken waarschijnlijk de moeite waard.

De HAHLT techniek die hierboven beschreven is zeer technisch en vereist veel aandacht voor detail. Tabel 1 highlights enkele van de belangrijkste factoren die samenhangen met succesvolle versus mislukte procedures, en kan worden gebruikt als leidraad voor het oplossen van technische problemen. Nadat de ontvanger aorta ontspannen is, moet het implantaat coronaire arteriën zichtbaar te vullen met zuurstofrijk bloed. Bijgevolg moet het myocard roze en goed doorbloed worden. In ...

We beschrijven een nieuwe techniek voor heterotope abdominale hart-longtransplantatie (HAHLT) bij ratten. De transplantaatconfiguratie resulteert in een gedeeltelijk belaste graftcirculatie, waardoor een directe functionele beoordeling mogelijk is. Dit model kan worden gebruikt voor acute of chronische studies van de functie en het immunologische status van het getransplanteerde graft.

Rat Heterotope Abdominale Hart / Single-longtransplantatie in een Volume geladen configuratie

Herein, we describe a novel technique for heterotopic abdominal heart-lung transplantation (HAHLT) in rats. The configuration of the transplant graft ...

Het algemene doel van deze procedure is het heterotoop transplanteren van een hart- en enkelvoudig longtransplantaat in een configuratie die volumebelading mogelijk maakt. Dit wordt bereikt door eerst het donorhart-longtransplantaat te oogsten. Vervolgens wordt de ontvanger voorbereid, waarna het donorweefsel wordt geïmplanteerd.Ten slotte wordt het donor-transplantaatweefsel ontlucht en opnieuw geperfuseerd. Uiteindelijk kan een drukvoleumgeleidingskatheter worden gebruikt om de functie van het transplantaat in realtime te beoordelen. Het belangrijkste voordeel van deze techniek ten opzichte van bestaande methoden, zoals heterotope abdominale harttransplantatie, is dat de toevoeging van het longtransplantaat een anterograde bloedstroom via een natuurlijk circuit mogelijk maakt, wat zowel de dynamische volumebelasting van het hart-longtransplantaat als de cardiovasculaire beoordeling na transplantatie faciliteert.Om de vena cava inferior of IVC voor te bereiden voor de daaropvolgende anastomose, begint u met het wegsnijden van het pericavale vet van het donordier, beginnend bij de cavo-atriale overgang en voortgaand in inferieure richting naar het diafragma. Maak vervolgens met een

rat-heterotopic-abdominal-heartsingle-lung-transplantation-volume

Research

JoVE Journal

Medicine

Geneeskunde

De muis heterotope harttransplantatie model is bewezen door vele onderzoekers een belangrijke methode voor het bestuderen van de mechanismen van de afwijzing en immuunrespons worden. Echter, de betrokken technieken zijn nog steeds uitdagend. Door het wijzigen van standaard technieken die we hebben succes gehad met meer dan 1000 transplantaties.

Heterotope harttransplantatie in Muizen

Auxiliary levertransplantatie biedt een tijdelijke ondersteuning in acuut leverfalen, tot de regeneratie van het falende lever. Heterotopisch extra levertransplantatie (HALT) met poortader arterialization (PVA) maakt voldoende leverfunctie. We ontwikkelden een analoge techniek in de rat, de invloed van de poortader arterialization de morfologie en functie van het transplantaat te onderzoeken.

Heterotopische Auxiliary Rat Liver Transplantation Met Flow-gereguleerd poortader Arterialization in acuut leverfalen

Het manuscript beschrijft de stappen die nodig zijn om de heterotopische harttransplantatie uit te voeren in de muis.

Muizen Heterotope Heart Transplant Techniek

We beschrijven een model van heterotopische buikharttransplantatie bij ratten, wat wijzigingen van de huidige strategieën impliceert, die leiden tot een vereenvoudigde chirurgische aanpak. Daarnaast beschrijven we een nieuw afstotingsmodel door in-ear injectie van vitale hartspiercellen, waardoor verdere transplantatie immunologische analyses bij ratten mogelijk zijn.

Een immunologisch model voor heterotopische hart- en hartspierceltransplantatie bij ratten

Een nieuwe techniek voor bloedcircuitreconstructie in een heterotopisch abdominale muisharttransplantatiemodel wordt gedemonstreerd.

Bloedcircuitreconstructie in een abdominale muis harttransplantatiemodel

Dit protocol beschrijft een juveniel varkensmodel van orthotope allotransplantatie van de linkerlong, ontworpen voor gebruik met ESLP-onderzoek. De nadruk ligt op anesthesie- en chirurgische technieken, maar ook op kritieke stappen en het oplossen van problemen.

Orthotope transplantatie van de linkerlong in een juveniel varkensmodel voor ESLP

We presenteren een protocol voor het gebruik van een normotherme ex vivo sanguineuze perfusiesysteem voor de levering van therapeutica aan een volledig cardiaal allograft in een varkens heterotopisch harttransplantatiemodel.

Een porcine heterotopisch harttransplantatieprotocol voor de levering van therapeutica aan een cardiale allograft

Deze studie toont een reproduceerbare heterotope abdominale harttransplantatietechniek bij ratten die beginners kunnen leren en uitvoeren. Bovendien wordt een nieuw aorta-regurgitatiemodel bij ratten gegenereerd door heterotope abdominale harttransplantatie uit te voeren en de aortaklep van de donor te beschadigen met behulp van een geleidedraad na het oogsten.

Gemodificeerde heterotope abdominale harttransplantatie en een nieuw aorta-regurgitatiemodel bij ratten

Dit protocol beschrijft een nieuwe methode voor het effectief reconstrueren van defecten aan de voorwand van de donormanchet tijdens longtransplantatie door de rotatie van de achterste atriumflap van de donor.

Rotatie van de achterste atriumflap van de donor voor reconstructie van de linker atriummanchet bij longtransplantatie

Dit protocol beschrijft een verbeterde techniek voor orthotope linkerlongtransplantatie bij ratten, gericht op het verminderen van operationele problemen en het verbeteren van overlevingskansen.

Orthotope linkerlongtransplantatie bij ratten

Leer heterotopische abdominale hart-longtransplantatie bij ratten met dynamische volumelading. Deze methode maakt real-time cardiovasculaire beoordeling van het transplantaat mogelijk voor transplantatiebiologie.

Rat Heterotope Abdominale Hart / Single-longtransplantatie in een Volume geladen configuratie

Meer video's verkennen