Name: Ferric-Chloride geïnduceerde trombose Muis Model op halsslagader en Mesenterium Vessel (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2015-06-29T14:00:00.000+00:00
Duration: 7 min 26 s
Description: Leer een trombosemodel met ferrichloride op halsslagader en mesenterium van muizen. Intravital microscopie en Doppler-flowmeting monitoren trombusvorming in real-time voor vasculair onderzoek.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

De auteurs willen graag technische ondersteuning van Joy Yao en Dr. Karen Alt, evenals de financiering van de NHMRC en NHF erkennen.

Alle experimenten met dieren werden goedgekeurd door de Alfred Medical Research en Opleiding Precinct Animal Ethics Committee (E / 1534/2015 / B). Alle chirurgische manipulaties werden uitgevoerd onder volledige narcose en de dieren hebben geen pijn ervaren in elk stadium. Alle experimenten worden beschreven, zijn niet-herstel. 1. Voorbereiding <ol><li> Snijd dunne banden van filter papier (1 mm x 2 mm). </li><li> Vers bereiden 2 oplossingen ferrichloride van 4% (w / v) en 6% (w / v) verdund in gedeïoniseerd water. Bereid rhodamine 6G-oplossing 0,3% in PBS, gefiltreerd door 0,22 urn. </li><li> Snijd een klein stukje (5 mm x 1 cm) van het witte plastic van de spuit wrapper. </li></ol> 2. Mesenterium arteriole Trombusvorming Waargenomen door Intravitale Microscopie <ol><li> Weeg een 10-12 weken oude mannelijke C57BL / 6 wildtype muis en dus verdoven met een mengsel van ketamine (100 mg / kg) en xylazine (10 mg / kg), maar intraperitoneale injectie. Bewaken van de diepte van de anesthesie door respons tot teen, staart en / of de huid knijpen, reactiviteit van het hoornvlies en oogleden knijpen, en de afwezigheid van snorharen beweging. Eventueel Injecteer tweede dosis ketamine (50 mg / kg) verdoving van het dier te handhaven. Breng vet zalf op de ogen tot droog voorkomen terwijl onder narcose. Plaats de muis in een petrischaaltje geplaatst op een verwarmingselement aangepast tot 37 ° C. OPMERKING: Hoewel IP injectie kan pijn veroorzaken voor de dieren, de duur van deze ongemakken minimale (minder dan 3 seconden) zijn. Pijn en ongemak van injecties wordt beperkt door middel van ervaren en bekwaam personeel en geschikte naalden (25 G). Na alle procedures, euthanize alle dieren met behulp van een overdosis van ketamine en xylazine, gevolgd door cervicale dislocatie. </li><li> Voer een abdominale incisie van ongeveer 3 cm in de huid en knip het buikvlies. </li><li> Plaats de muis in de zijkant van het huisdierri schotel voorzichtig exterioriseren de darmen en voorzichtig uit het mesenterium met 2 wattenstaafjes een geschikt vat op het oppervlak van de petrischaal te brengen. Goed droog met een delicate wisser. OPMERKING: Om de beweging van de mesenteriale vaten te beperken, kan Papaverine worden gebruikt om darm peristaltiek remmen. </li><li> Week de staart van de muis in warm water om de vaten verwijden en injecteer 30 gl Rhodamine 6G (0,3%) in de staartader van de muis met een 29 G spuit leukocyten en bloedplaatjes label. </li><li> Plaats de petrischaal onder een omgekeerde microscoop en focus op de gekozen arteriole met de heldere veld kanaal. </li><li> Dompel een band filtreerpapier met 6% (w / v) ijzer (III) chloride en het filterpapier toegepast op de arteriole twee tang; de eerste die de filter papier, de tweede om voorzichtig op het op het gebied van belang vast te houden. Let trombusvorming in de eerste 10 seconden na het afzetten van het filterpapier. LET OP: Het is heel commop het midden microvasculatuur en de precisie van de afzetting van het filterpapier en de zacht druk verwonden Daarom moeten deze kwestie te beperken. </li><li> Observeer trombusvorming door fluorescentiemicroscopie (TRITC channel: piek excitatie 557 nm, piek emissie 576 nm), door het filter papier. Let op de circulerende leukocyten en bloedplaatjes die de Rhodamine 6G en hun aggregatie in de trombus hebben genomen is dus gemakkelijk te identificeren. </li><li> Neem het filterpapier na 1 minuut blootstelling aan ijzer (III) chloride en verder om de vorming van de trombus te controleren. Was het schip met PBS. </li><li> Observeer en noteer de dynamische vorming van de trombus benadrukt met de etikettering van bloedplaatjes en leukocyten met Rhodamine 6G. Leg de beelden en meten van de grootte van de trombus. De hierin gepresenteerde beelden werden verkregen met een omgekeerde intravitale microscoop, maar een objectieve 4X, in de TRITC fluorescentiekanaal. </li><li> Fadat alle procedures, inslapen het dier met behulp van een overdosis van ketamine en xylazine, gevolgd door cervicale dislocatie. </li></ol> 3. halsslagader Trombusvorming Afgaande van Blood Flow snelheidsmeting <ol><li> Weeg een 10-12 weken oude mannelijke C57BL / 6 muis en dienovereenkomstig verdoven met een mengsel van ketamine (100 mg / kg) en xylazine (10 mg / kg) wel intraperitoneale injectie. Breng vet zalf op de ogen tot droog voorkomen terwijl onder narcose. </li><li> Bevestig de muis onder een operationele microscoop met plakband op benen, op een verwarmingselement aangepast tot 37 ° C. </li><li> Maak een kleine kussen uit een ruitenwisser en plak het onder de kop van de muis om het hoofd lichtjes verheffen. Gebruik een draad lus met een tang op de snuit naar beneden trekken (gebruik boventanden). Hierdoor wordt het gebied van de halsslagader blootleggen gemakkelijke toegang. </li><li> Voer een 5 mm diepe snede van de huid direct onder de kaak, tot aan het borstbeen. </li><li> Ontleden de fascia en isoleren van een fragment van de linker of rechter carotis communis boven de bifurcatie. </li><li> Zorgvuldig introduceren pincet in-tussen de slagader en het lef om ze te scheiden. Laat de zenuw loopt dicht bij de slagader niet storen en raak te veel van de halsslagader als het schade aan het schip kan veroorzaakt. Isoleer een doorsnede van ten minste 5 mm van de slagader. </li><li> Droog het gebied van de slagader juist met wissers te voorkomen dat er vloeistof hindert de FeCl3. </li><li> Zet de kleine witte plastic stuk onder het geïsoleerde deel van de gemeenschappelijke carotis zodat de FeCl3 niet genieten in de omliggende weefsels. Hiervoor gebruikt u een tweede tang om het stuk om de eerste langzaam de plastic papier onder de slagader te brengen en schuif. </li><li> Dompel een stuk filtreerpapier met 4% (w / v) en 6% (w / v) ferrichloride en plaats het rondom de slagader. </li><li> Na 3 min blootstelling, haal de filter papier, spoelen met PBS en droog het gebied wet ruitenwissers. </li><li> Plaats de Doppler flow sonde rond het schip in de gewonde gebied en start de opname van de veranderingen in de flow. In de gezonde halsslagader van volwassen muizen, de stroom gewoonlijk ongeveer 1 ml / min. Let op! contact van de probe met ferrichloride wordt de probe beschadigen zodat geen contact kan worden vermeden. De hierin gepresenteerde gegevens werden verkregen met een Transonic System Inc. Flow meter, TS420 perivasculaire module voorzien van een Nano Doppler sonde 0,5 PBS. OPMERKING: De concentratie van ferrichloride kan de kinetiek van trombusvorming resulteert in verschillende occlusie tijd wijzigen. Aldus werd een blootstelling aan 6% (w / v) ferrichloride wordt een sneller occlusie dan blootstelling aan 4% (w / v) ferrichloride. </li><li> Naar aanleiding van alle procedures, euthanaseren alle dieren met behulp van een overdosis van ketamine en xylazine, gevolgd door cervicale dislocatie en zorgvuldig reinigen van de Doppler sonde. </li></ol>

<ol><li>Leadley, R. J., Chi, L., Rebello, S. S., Gagnon, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Contribution+of+in+vivo+models+of+thrombosis+to+the+discovery+and+development+of+novel+antithrombotic+agents%5BTitle%5D)+AND+%22J+Pharmacol+Toxicol+Methods%22%5BJournal%5D)">Contribution of in vivo models of thrombosis to the discovery and development of novel antithrombotic agents.</a> J Pharmacol Toxicol Methods. 43 (2), 101-116 (2000).</li>
<li>Johnson, G. J., Griggs, T. R., Badimon, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+utility+of+animal+models+in+the+preclinical+study+of+interventions+to+prevent+human+coronary+artery+restenosis%3A+analysis+and+recommendations.+On+behalf+of+the+Subcommittee+on+Animal%2C+Cellular+and+Molecular+Models+of+Thrombosis+and+Haemostasis+of+the+Scientific+and+Standardization+Committee+of+the+International+Society+on+Thrombosis+and+Haemostasis%5BTitle%5D)+AND+%22Thromb+Haemost%22%5BJournal%5D)">The utility of animal models in the preclinical study of interventions to prevent human coronary artery restenosis: analysis and recommendations. On behalf of the Subcommittee on Animal, Cellular and Molecular Models of Thrombosis and Haemostasis of the Scientific and Standardization Committee of the International Society on Thrombosis and Haemostasis.</a> Thromb Haemost. 81 (5), 835-843 (1999).</li>
<li>Day, S. M., Reeve, J. L., Myers, D. D., Fay, W. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Murine+thrombosis+models%5BTitle%5D)+AND+%22Thromb+Haemost%22%5BJournal%5D)">Murine thrombosis models.</a> Thromb Haemost. 92 (3), 486-494 (2004).</li>
<li>Sachs, U. J. H., Nieswandt, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vivo+thrombus+formation+in+murine+models%5BTitle%5D)+AND+%22Circ+Res%22%5BJournal%5D)">In vivo thrombus formation in murine models.</a> Circ Res. 100 (7), 979-991 (2007).</li>
<li>Furie, B., Furie, B. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mechanisms+of+thrombus+formation%5BTitle%5D)+AND+%22N+Engl+J+Med%22%5BJournal%5D)">Mechanisms of thrombus formation.</a> N Engl J Med. 359 (9), 938-949 (2008).</li>
<li>Pierangeli, S. S., Liu, X. W., Barker, J. H., Anderson, G., Harris, E. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Induction+of+thrombosis+in+a+mouse+model+by+IgG%2C+IgM+and+IgA+immunoglobulins+from+patients+with+the+antiphospholipid+syndrome%5BTitle%5D)+AND+%22Thromb+Haemost%22%5BJournal%5D)">Induction of thrombosis in a mouse model by IgG, IgM and IgA immunoglobulins from patients with the antiphospholipid syndrome.</a> Thromb Haemost. 74 (5), 1361-1367 (1995).</li>
<li>Kikuchi, S., Umemura, K., Kondo, K., Saniabadi, A. R., Nakashima, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Photochemically+induced+endothelial+injury+in+the+mouse+as+a+screening+model+for+inhibitors+of+vascular+intimal+thickening%5BTitle%5D)+AND+%22Arterioscler+Thromb+Vasc+Biol%22%5BJournal%5D)">Photochemically induced endothelial injury in the mouse as a screening model for inhibitors of vascular intimal thickening.</a> Arterioscler Thromb Vasc Biol. 18 (7), 1069-1078 (1998).</li>
<li>Rosen, E. D., Raymond, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Laser-induced+noninvasive+vascular+injury+models+in+mice+generate+platelet-+and+coagulation-dependent+thrombi%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Pathol%22%5BJournal%5D)">Laser-induced noninvasive vascular injury models in mice generate platelet- and coagulation-dependent thrombi.</a> Am J Pathol. 158, 1613-1622 (2001).</li>
<li>Kurz, K. D., Main, B. W., Sandusky, G. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Rat+model+of+arterial+thrombosis+induced+by+ferric+chloride%5BTitle%5D)+AND+%22Thromb+Res%22%5BJournal%5D)">Rat model of arterial thrombosis induced by ferric chloride.</a> Thromb Res. 60 (4), 269-280 (1990).</li>
<li>Eckly, A., Hechler, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mechanisms+underlying+FeCl3-induced+arterial+thrombosis%5BTitle%5D)+AND+%22J+Thromb+Haemost%22%5BJournal%5D)">Mechanisms underlying FeCl3-induced arterial thrombosis.</a> J Thromb Haemost. 9 (4), 779-789 (2011).</li>
<li>Darbousset, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Involvement+of+neutrophils+in+thrombus+formation+in+living+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Pathol+Biol+%28Paris%29%22%5BJournal%5D)">Involvement of neutrophils in thrombus formation in living mice.</a> Pathol Biol (Paris). 62 (1), 1-9 (2014).</li>
<li>Denis, C., Methia, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+mouse+model+of+severe+von+Willebrand+disease%3A+defects+in+hemostasis+and+thrombosis%29%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+Natl+Acad+Sci+U+S+A%22%5BJournal%5D)">A mouse model of severe von Willebrand disease: defects in hemostasis and thrombosis).</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 95 (16), 9524-9529 (1998).</li>
<li>Wang, X., Hagemeyer, C. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Novel+single-chain+antibody-targeted+microbubbles+for+molecular+ultrasound+imaging+of+thrombosis%3A+validation+of+a+unique+noninvasive+method+for+rapid+and+sensitive+detection+of+thrombi+and+monitoring+of+success+or+failure+of+thrombolysis+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Circulation%22%5BJournal%5D)">Novel single-chain antibody-targeted microbubbles for molecular ultrasound imaging of thrombosis: validation of a unique noninvasive method for rapid and sensitive detection of thrombi and monitoring of success or failure of thrombolysis in mice.</a> Circulation. 125 (25), 3117-3126 (2012).</li>
<li>Wang, X., Smith, P. L., Hsu, M. -Y., Ogletree, M. L., Schumacher, W. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Murine+model+of+ferric+chloride-induced+vena+cava+thrombosis%3A+evidence+for+effect+of+potato+carboxypeptidase+inhibitor%5BTitle%5D)+AND+%22J+Thromb+Haemost%22%5BJournal%5D)">Murine model of ferric chloride-induced vena cava thrombosis: evidence for effect of potato carboxypeptidase inhibitor.</a> J Thromb Haemost. 4 (2), 403-410 (2006).</li>
<li>Karatas, H., Erdener, S. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Thrombotic+distal+middle+cerebral+artery+occlusion+produced+by+topical+FeCl%283%29+application%3A+a+novel+model+suitable+for+intravital+microscopy+and+thrombolysis+studies%5BTitle%5D)+AND+%22J+Cereb+Blood+Flow+Metab%22%5BJournal%5D)">Thrombotic distal middle cerebral artery occlusion produced by topical FeCl(3) application: a novel model suitable for intravital microscopy and thrombolysis studies.</a> J Cereb Blood Flow Metab. 31 (6), 1452-1460 (2011).</li>
<li>Jirousková, M., Chereshnev, I., Väänänen, H., Degen, J. L., Coller, B. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Antibody+blockade+or+mutation+of+the+fibrinogen+gamma-chain+C-terminus+is+more+effective+in+inhibiting+murine+arterial+thrombus+formation+than+complete+absence+of+fibrinogen%5BTitle%5D)+AND+%22Blood%22%5BJournal%5D)">Antibody blockade or mutation of the fibrinogen gamma-chain C-terminus is more effective in inhibiting murine arterial thrombus formation than complete absence of fibrinogen.</a> Blood. 103 (6), 1995-2002 (2004).</li>
<li>Dubois, C., Panicot-Dubois, L., Merrill-Skoloff, G., Furie, B., Furie, B. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Glycoprotein+VI-dependent+and+-independent+pathways+of+thrombus+formation+in+vivo%5BTitle%5D)+AND+%22Blood%22%5BJournal%5D)">Glycoprotein VI-dependent and -independent pathways of thrombus formation in vivo.</a> Blood. 107 (10), 3902-3906 (2006).</li>
<li>Navarrete, A. -M., Casari, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+murine+model+to+characterize+the+antithrombotic+effect+of+molecules+targeting+human+von+Willebrand+factor%5BTitle%5D)+AND+%22Blood%22%5BJournal%5D)">A murine model to characterize the antithrombotic effect of molecules targeting human von Willebrand factor.</a> Blood. 120 (13), 2723-2732 (2012).</li>
<li>Rayes, J., Hollestelle, M. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mutation+and+ADAMTS13-dependent+modulation+of+disease+severity+in+a+mouse+model+for+von+Willebrand+disease+type+2B%5BTitle%5D)+AND+%22Blood%22%5BJournal%5D)">Mutation and ADAMTS13-dependent modulation of disease severity in a mouse model for von Willebrand disease type 2B.</a> Blood. 115 (23), 4870-4877 (2010).</li>
<li>Lamrani, L., Lacout, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hemostatic+disorders+in+a+JAK2V617F-driven+mouse+model+of+myeloproliferative+neoplasm%5BTitle%5D)+AND+%22Blood%22%5BJournal%5D)">Hemostatic disorders in a JAK2V617F-driven mouse model of myeloproliferative neoplasm.</a> Blood. 124 (7), 1136-1145 (2014).</li>
<li>Zhang, Y., Ye, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Increased+platelet+activation+and+thrombosis+in+transgenic+mice+expressing+constitutively+active+P2Y12%5BTitle%5D)+AND+%22J+Thromb+Haemost%22%5BJournal%5D)">Increased platelet activation and thrombosis in transgenic mice expressing constitutively active P2Y12.</a> J Thromb Haemost. 10 (10), 2149-2157 (2012).</li>
<li>Schäfer, K., Konstantinides, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Different+mechanisms+of+increased+luminal+stenosis+after+arterial+injury+in+mice+deficient+for+urokinase-+or+tissue-type+plasminogen+activator%5BTitle%5D)+AND+%22Circulation%22%5BJournal%5D)">Different mechanisms of increased luminal stenosis after arterial injury in mice deficient for urokinase- or tissue-type plasminogen activator.</a> Circulation. 106 (14), 1847-1852 (2002).</li>
<li>Wang, X., Palasubramaniam, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Towards+effective+and+safe+thrombolysis+and+thromboprophylaxis%3A+preclinical+testing+of+a+novel+antibody-targeted+recombinant+plasminogen+activator+directed+against+activated+platelets%5BTitle%5D)+AND+%22Circ+Res%22%5BJournal%5D)">Towards effective and safe thrombolysis and thromboprophylaxis: preclinical testing of a novel antibody-targeted recombinant plasminogen activator directed against activated platelets.</a> Circ Res. 114 (7), 1083-1093 (2014).</li>
<li>Decrem, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ir-CPI%2C+a+coagulation+contact+phase+inhibitor+from+the+tick+Ixodes+ricinus%2C+inhibits+thrombus+formation+without+impairing+hemostasis%5BTitle%5D)+AND+%22J+Exp+Med%22%5BJournal%5D)">Ir-CPI, a coagulation contact phase inhibitor from the tick Ixodes ricinus, inhibits thrombus formation without impairing hemostasis.</a> J Exp Med. 206 (11), 2381-2395 (2009).</li>
<li>Ma, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Desmolaris%2C+a+novel+factor+XIa+anticoagulant+from+the+salivary+gland+of+the+vampire+bat+%28Desmodus+rotundus%29+inhibits+inflammation+and+thrombosis+in+vivo%5BTitle%5D)+AND+%22Blood%22%5BJournal%5D)">Desmolaris, a novel factor XIa anticoagulant from the salivary gland of the vampire bat (Desmodus rotundus) inhibits inflammation and thrombosis in vivo.</a> Blood. 122 (25), 4094-4106 (2013).</li>
<li>Lei, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Anfibatide%2C+a+novel+GPIb+complex+antagonist%2C+inhibits+platelet+adhesion+and+thrombus+formation+in+vitro+and+in+vivo+in+murine+models+of+thrombosis%5BTitle%5D)+AND+%22Thromb+Haemost%22%5BJournal%5D)">Anfibatide, a novel GPIb complex antagonist, inhibits platelet adhesion and thrombus formation in vitro and in vivo in murine models of thrombosis.</a> Thromb Haemost. 111 (2), 279-289 (2014).</li>
<li>Waisberg, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Plasmodium+falciparum+infection+induces+expression+of+a+mosquito+salivary+protein+%28Agaphelin%29+that+targets+neutrophil+function+and+inhibits+thrombosis+without+impairing+hemostasis%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+Pathog%22%5BJournal%5D)">Plasmodium falciparum infection induces expression of a mosquito salivary protein (Agaphelin) that targets neutrophil function and inhibits thrombosis without impairing hemostasis.</a> PLoS Pathog. 10 (9), e1004338(2014).</li>
<li>Owens, A. P., Lu, Y., Whinna, H. C., Gachet, C., Fay, W. P., Mackman, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Towards+a+standardization+of+the+murine+ferric+chloride-induced+carotid+arterial+thrombosis+model%5BTitle%5D)+AND+%22J+Thromb+Haemost%22%5BJournal%5D)">Towards a standardization of the murine ferric chloride-induced carotid arterial thrombosis model.</a> J Thromb Haemost. 9 (9), 1862-1863 (2011).</li>
<li>Wang, X., Xu, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+optimized+murine+model+of+ferric+chloride-induced+arterial+thrombosis+for+thrombosis+research%5BTitle%5D)+AND+%22Thromb+Res%22%5BJournal%5D)">An optimized murine model of ferric chloride-induced arterial thrombosis for thrombosis research.</a> Thromb Res. 115 (1-2), 95-100 (2005).</li>
<li>Tseng, M. T., Dozier, A., Haribabu, B., Graham, U. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Transendothelial+migration+of+ferric+ion+in+FeCl3+injured+murine+common+carotid+artery%5BTitle%5D)+AND+%22Thromb+Res%22%5BJournal%5D)">Transendothelial migration of ferric ion in FeCl3 injured murine common carotid artery.</a> Thromb Res. 118 (2), 275-280 (2006).</li>
<li>Bonnard, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Leukocyte+mimetic+polysaccharide+microparticles+tracked+in+vivo+on+activated+endothelium+and+in+abdominal+aortic+aneurysm%5BTitle%5D)+AND+%22Acta+Biomater%22%5BJournal%5D)">Leukocyte mimetic polysaccharide microparticles tracked in vivo on activated endothelium and in abdominal aortic aneurysm.</a> Acta Biomater. 10 (8), 3535-3545 (2014).</li>
<li>Boulaftali, Y., Lamrani, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+mouse+dorsal+skinfold+chamber+as+a+model+for+the+study+of+thrombolysis+by+intravital+microscopy%5BTitle%5D)+AND+%22Thromb+Haemost%22%5BJournal%5D)">The mouse dorsal skinfold chamber as a model for the study of thrombolysis by intravital microscopy.</a> Thromb Haemost. 107 (5), 962-971 (2012).</li>
<li>Konstantinides, S., Schäfer, K., Thinnes, T., Loskutoff, D. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Plasminogen+activator+inhibitor-1+and+its+cofactor+vitronectin+stabilize+arterial+thrombi+after+vascular+injury+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Circulation%22%5BJournal%5D)">Plasminogen activator inhibitor-1 and its cofactor vitronectin stabilize arterial thrombi after vascular injury in mice.</a> Circulation. 103 (4), 576-583 (2001).</li>
<li>Li, W., McIntyre, T. M., Silverstein, R. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ferric+chloride-induced+murine+carotid+arterial+injury%3A+A+model+of+redox+pathology%5BTitle%5D)+AND+%22Redox+Biol%22%5BJournal%5D)">Ferric chloride-induced murine carotid arterial injury: A model of redox pathology.</a> Redox Biol. 1 (1), 50-55 (2013).</li>
</ol>

De auteurs hebben niets te onthullen.

De ijzerchloride geïnduceerde trombose model is een uitstekend research tool. Zoals getoond in deze studie, is het uiterst eenvoudig te implementeren en bij gebruik in combinatie met intravitale microscopie of Doppler flowmeter, biedt een goede real-time monitoring van trombusvorming. De belichtingstijd en de concentratie van FeCl3 aanpassen, maar biedt ook de mogelijkheid om hetzij niet-occlusief of occlusieve trombi produceren. Deze werkwijze heeft ook een aantal beperkingen. In...

Het onderzoek van de bij de ontwikkeling van trombose en de evaluatie van de effectiviteit van anti-trombotische geneesmiddelen mechanismen vereist gevestigde experimentele diermodellen. Grote diermodellen waren de eersten die worden gebruikt als zij grote schepen meer op mensen dan knaagdieren 1. Echter, hoge kosten, de grotere vereiste voorzieningen en de moeilijkheid genetisch manipuleren zijn belangrijke nadelen aan het gebruik en grote dieren zijn thans beperkt tot late preklinische studies eenmaal voorproeven op knaagdieren eindresultaten 2 gegeven. Met brede beschikbaarheid van transgene en knockout stammen en hun kleine grootte die de hoeveelheid antitrombotische geneesmiddelen nodig voor in vivo onderzoek minimaliseert worden muizen voornamelijk gebruikt voor trombose onderzoek. Daarom zijn verscheidene modellen van trombotische aandoeningen ontwikkeld bij muizen 3. Vele gevestigde trombose modellen verstoren de intimeen laag van de vaatwand, gevolgd door blootstelling van de sub endotheliale extracellulaire matrix om de bloedstroom induceren van de vorming van bloedstolsels 4. De trombi kan van blootstelling van collageen waarvan bloedplaatjes activering triggers of / en de blootstelling van weefselfactor waarvan de stollingscascade 5 activeert. Verschillende technieken worden vervolgens gebruikt om de oorspronkelijke vaatschade bereiken. Pierangeli et al. Ontwikkelden een mechanische verstoring model met een microchirurgie tool op de dijader 6. Kikushi et al. Beschreef een model dat bestaat uit de toediening van een foto reactieve verbinding (Rose Bengal) dat zich ophoopt in de lipide bilaag van endotheliale cellen gevolgd door de specifieke excitatie van de vaatwand plaats met groen licht (540 nm) 7. De schade kan ook veroorzaakt worden door een korte hoge intensiteit pulse laser belichting 8. Een andere techniek allereerst vastgesteld aan de halsslagader van rattenbestaat in de topicale toepassing van ferrichloride (FeCl3) 9. In dit geval, het vaartuig erosie resultaten uit die door FeCl3 vrije radicalen die lipideperoxidatie en vernietiging van endotheelcellen 10 veroorzaakt. De schade induceert de expressie van verschillende adhesiemoleculen triggering bloedplaatjesadhesie en aggregatie en leukocyten rekrutering. Het is aangetoond dat leucocyten, met name neutrofielen, spelen een cruciale rol bij de activatie van de bloedcoagulatie cascade die leidt tot trombose 11. Deze methode is bijzonder geschikt voor de stollingscascade te reproduceren; onderzoekers moeten in gedachten houden dat, in dit muismodel, trombose wordt meestal veroorzaakt bij gezonde vaten terwijl trombose bij mensen voornamelijk plaatsvindt in zieke bv houden. atherosclerotische vaten. Aangezien dit model is zeer eenvoudig te implementeren en is ook effectief bij muizen, is nu de meest gebruikte trombose model voor kleine dieren in vivo studies. Bovendien biedt deze techniek de mogelijkheid om de vorming van trombi in diverse vaten veroorzaken. Target schepen kunnen slagaders of aders van grote diameter (carotis, dijbeen, vena cava) of kleine diameter (mesenterium, cremaster) 12-14. Meer recent werd ook gebruikt op het proximale cerebralis media een model van beroerte 15 ontwikkelen. De trombose formatie kan direct worden waargenomen door het opklaren na fluorescerende etikettering van bloedplaatjes en leukocyten of gevolgd door het meten van de bloedstroom daling met een temperatuur sonde of een Doppler sonde 12,16,17. Diverse parameters zoals de occlusietijd, trombusvorming tijd of trombus grootte kan vervolgens worden onderzocht. De fysiologische verschillen tussen de vaten onderzochte resulteren in aanzienlijke verschillen in de trombi verkregen. Daarom onderzoekers selecteert gewoonlijk het doelvat volgens de parameters die ze willen measure en / of de ziekte instelling die ze willen onderzoeken. Kenmerkend het model de halsslagader relevanter voor onderzoek naar atherotrombose betrekking tot myocardinfarct of beroerte, terwijl studies naar de vena cava relevanter voor onderzoek naar diepe veneuze trombose. De toegankelijkheid van de verschillende vaten bepaalt ook de methode voor groei trombus te meten. Bijvoorbeeld, de mesenteriale vaten eenvoudig kunnen worden geopend waardoor dit model geschikt voor intravitale microscopische observatie en het bestuderen van de dynamica van trombusvorming. De halsslagader is minder toegankelijk, maar groter waardoor de bloedstroom metingen en bieden een uitstekend model om occlusieve trombose te bestuderen. Het ferrichloride geïnduceerde trombose model heeft enorme vooruitgang die in het begrijpen van deze pathologie. Het is gebruikt in veel studies gericht op de rol van de von Willebrand factor in trombosevorming 18,19. Gecombineerd met genetische modicatie technieken heeft het mogelijk gemaakt een groot aantal specifieke gen betrokken bij trombotische aandoeningen. Lamrani et al. bijvoorbeeld gebleken dat een knock-in van het JAK2 V617F gen is gekoppeld aan een versnellende vorming van instabiele stolsel 20. Zhang et al. Hebben de fysiologische gevolgen van de bloedplaatjes P2Y12 receptor onderzocht en aangetoond dat transgene muizen overexpressie specifiek deze receptor in bloedplaatjes alleen weergegeven een snelle en stabiele trombusvorming in mesenterica verwond met FeCl3 21. De cruciale rol van weefsel-type plasminogeen activator (tPA) en urokinase-type plasminogeen activator (uPA) in fibrine degradatie leidt is onderzocht bij deze methode 22. Verder biedt dit model ook een eenvoudige en nauwkeurige manier testen van de fibrinolytische capaciteit van vele nieuwe geneesmiddelen in vivo. Zo hebben Wang et al. Dit model th tweedehandse preklinische validatie van een nieuw recombinant plasminogeenactivator gericht tegen geactiveerde plaatjes 23. Deze methode staat ook de validatie van therapeutische eiwitten geïsoleerd uit het speeksel van teken, vampier vleermuizen en muggen of uit het gif van slangen met een specifieke identificatie van de doelgroep 24-27. Deze voorbeelden demonstreren de veelzijdigheid van het ferrichloride model. In dit artikel richten we ons op twee methoden en studie ijzerchloride geïnduceerde trombose op twee verschillende type drukvat; mesenterische vat en halsslagader.

<table><tbody><tr><td>Whatman-chromatografiepapier</td><td>GE Healthcare</td><td>3030917</td><td></td></tr><tr><td>IJzer (III) chloride 40% (w/v)</td><td>VWR</td><td>24212.298</td><td></td></tr><tr><td>Rhodamine 6G</td><td>Sigma</td><td>R4127</td><td></td></tr><tr><td>Omgekeerd microscoop&nbsp;</td><td>Olympus</td><td>IX81</td><td></td></tr><tr><td>Digitale zwart-witcamera&nbsp;</td><td>Olympus</td><td>XM10</td><td></td></tr><tr><td>Doppler-flowmeter</td><td>Transonic</td><td>TS420</td><td></td></tr><tr><td>Nano-doppler flow sonde</td><td>Transonic</td><td>0.5 PBS</td><td></td></tr><tr><td>Ketamine</td><td>Hospira&nbsp;</td><td>0409-2051-05</td><td></td></tr><tr><td>Xylazin (Rampun)</td><td>Bayer</td><td>75313&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>Petrischaal</td><td>Sarstedt</td><td>82.1472</td><td></td></tr><tr><td>Insulinspuit (29 G)</td><td>BD Ultra-Fine</td><td>326103</td><td></td></tr><tr><td>Wattenstaafjes</td><td>BSN medical</td><td>211827A</td><td></td></tr><tr><td>Dynek dysilk hechtdraad</td><td>Dynek Pty Ltd</td><td>CS30100</td><td></td></tr><tr><td>Dulbecco's fosfaatbufferoplossing (PBS)</td><td>Gibco life technologies</td><td>21600-069</td><td></td></tr><tr><td>Verwarmingskussen</td><td>Kirchner</td><td>T60</td><td></td></tr></tbody></table>

ferric-chloride geïnduceerde trombose muis model op halsslagader en mesenterium vessel

Ferric Chloride-induced Thrombosis Mouse Model on Carotid Artery and Mesentery Vessel

Ernstige trombose en de daaruit voortvloeiende ischemische gevolgen zoals myocardinfarct, longembolie en beroerte zijn wereldwijd grote gezondheidsproblemen. De ferrichloride-blessure is nu een goed gevestigde techniek om snel en nauwkeurig de vorming van trombi te induceren in blootgestelde aders of slagaders van kleine en grote diameter. Dit model heeft een sleutelrol gespeeld in de studie van de pathofysiologie van trombose, in de ontdekking en validatie van nieuwe antitrombotische geneesmiddelen en in het begrijpen van de werkingsmechanismen van deze nieuwe middelen. Hier wordt de implementatie van deze techniek op een mesenteriaal vat en halsslagader bij muizen gepresenteerd. De methode beschrijft hoe circulerende leukocyten en bloedplaatjes kunnen worden gelabeld met een fluorescerende kleurstof en hoe deze, door middel van intravitale microscopie op het blootgestelde mesenterium, hun accumulatie kunnen worden waargenomen aan de beschadigde vaatwand, wat leidt tot de vorming van een trombus. Op de halsslagader wordt de occlusie veroorzaakt door de stolselvorming gemeten door de bloedstroom te monitoren met een Doppler-sonde.

De fluorescentie microscopie intravitale observatie van het mesenterium wordt de accumulatie van Rhodamine 6G tonen gelabelde bloedplaatjes en leukocyten langs de vatwand verwond door FeCl3. De geleidelijke vorming van een gedeeltelijk thrombus wordt bewaakt in een 200 urn mesenterium vat (Figuur 1). Een trombus langzaam weergegeven en is duidelijk herkenbaar na de eerste minuut van blootstelling aan FeCl3 (figuur 1, t = 60 sec). 40 sec na verwijdering van het filt...

Het hierin beschreven model voor FeCl3 geïnduceerde trombose bij muizen wordt hier beschreven. Er wordt een methode gepresenteerd om trombusgroei te bewaken door middel van intravitale microscopieobservatie op een mesenterisch vat en door bloedstroommeting in de halsslagader.

Ferric-Chloride geïnduceerde trombose Muis Model op halsslagader en Mesenterium Vessel

Severe thrombosis and its ischemic consequences such as myocardial infarction, pulmonary embolism and stroke are major worldwide health issues. The ferric ...

Het algemene doel van deze procedure is het monitoren van de vorming van een geïnduceerde trombose in een blootgesteld vat van een muis. Dit wordt bereikt door eerst het betreffende vat bloot te leggen. Vervolgens wordt een klein stukje filterpapier, gedrenkt in ferric chloride, op het vat geplaatst om de trombus op het mesenteriale vat te induceren.De aggregatie van de trombusvormende cellen wordt gemonitord via in-vial microscopie op de arteria carotis. De veranderingen in de bloedstroom veroorzaakt door de trombus worden gemeten met een doppler-flowmeter. Het gebruik van chloride om een trombose in de CED-slagader van ratten op te wekken, werd voor het eerst vastgesteld in 1990 door professor Coz en collega's.Sindsdien is deze methode aangepast voor muizen en is ze gebruikt om vele verschillende vaten te bestuderen. Deze methode is momenteel het meest gebruikte trombosemodel in ons onderzoeksveld en heeft geholpen bij het beantwoorden van kernvragen, zoals de wand van kwetsbare factoren en de toepassing van de P2Y12-bloedplaatjesreceptor bij trombo-deformatie. Knip vóór aanvang van de procedure stroken filterpapier van 1 bij 2 mm en een klein stukje wit plastic van 3 bij 5 mm uit een spuitenverpakking.Bevestig vervolgens het uitblijven van een reactie op de knijptest en breng daarna een vetaugument op de ogen van elk dier aan. Om vervolgens een mesenteriale arteriële trombus op te wekken, plaatst u de muis in een kleine Petrischaal op een warmteplaat van 37 °C en opent u het abdomen met een incisie van drie centimeter, gevolgd door een zorgvuldige incisie van het peritoneum. Positioneer de muis aan de zijkant van de Petrischaal en exterioriseer voorzichtig de darmen.Spreid vervolgens met twee wattenstaafjes voorzichtig het mesenterium om een geschikt vat naar het oppervlak van de schaal te brengen en droog het weefsel voorzichtig af met een delicate wiper. Dilateer daarna de vaten in de staart door ze in warm water te weken, gevolgd door een intraveneuze injectie van 30 µL vers bereid Domine six G om de circulerende leukocyten en bloedplaatjes te labelen. Plaats de Petrischaal vervolgens onder een omgekeerde microscoop en gebruik het Brightfield-kanaal om de gekozen arterie te lokaliseren.Week nu een strip filterpapier in vers bereid 6% ferric chloride, en gebruik één pincet om het papier op te pakken en dit voorzichtig alleen op de arterie van belang te drukken. Observeer de vorming van de trombus door middel van intravitale geïnverteerde fluorescentiemicroscopie door het filterpapier heen. Binnen de eerste 10 seconden na de applicatie zal de aggregatie van de circulerende domine six G gelabelde leukocyten en bloedplaatjes een eenvoudige identificatie van de trombus mogelijk maken.Verwijder na één minuut blootstelling het filterpapier. Was vervolgens het vat met PBS terwijl de trombusvorming wordt gemonitord, en leg de dynamische vorming van de trombus vast, zoals geaccentueerd door de gelabelde bloedcellen. Er kunnen ook stilstaande beelden van de trombus worden gemaakt om de meting van de occlusie van het vat in de loop van de tijd te vergemakkelijken.Om de vorming van een trombus in de halsslagader te beoordelen, worden de poten van een geanestheseerde muis met plakband vastgezet op een verwarmingsmat van 37 °C die onder een operatiemicroscoop is geplaatst. Plak vervolgens een klein kussentje, gemaakt van een ruiterdoek, onder de kop van het dier en gebruik een lus van draad met een pincet om de snuit via de boventanden naar beneden te trekken. Wanneer het gebied van de halsslagader is blootgelegd, wordt er een kleine incisie in de huid gemaakt, direct onder de kaak tot aan het borstbeen.Disseceer vervolgens de fascia en isoleer een fragment van de linker of rechter arteria carotis communis boven de bifurcatie. Introduceer daarna voorzichtig een pincet tussen de slagader en de zenuw om deze van elkaar te scheiden, waarbij u er zorg voor draagt de zenuw niet te beschadigen. Gebruik vervolgens één pincet om het kleine stukje wit plastic op te pakken en een tweede om dit langzaam onder het geïsoleerde gedeelte van het bloedvat te schuiven, zodat het ijzerchloride het omliggende weefsel niet doordrenkt.Droog de slagader zorgvuldig af met wipes. Week nu een strook filterpapier in vier of 6% ijzer(III)chloride en plaats de strook rond de slagader. Verwijder na drie minuten het filterpapier, spoel het vat af met PBS en droog het weefsel af met wipes.Plaats vervolgens een doppler-flowprobe rond het vat bij het beschadigde gebied en registreer de veranderingen in de doorstroming. Hier werd de progressieve vorming van een partiële trombus in een mesenteriële bloedvat van 200 micrometer gemonitord middels intravitale fluorescentiemicroscopie. In dit experiment werd de trombus duidelijk identificeerbaar na de eerste minuut van blootstelling aan ferric chloride.40 seconden na het verwijderen van het filterpapier vorderde de trombose snel, waarbij uiteindelijk een volledige trombus werd waargenomen op de wand van het gehele vaatsegment. Zoals deze gegevens aantonen, is een algehele constante bloedstroom van ongeveer 1,1 milliliters per minuut typerend voor een niet-beschadigde halsslagader. Na drie minuten blootstelling aan 4% ferric chloride.In dit experiment werd een occlusieve trombus verkregen met een occlusietijd van 13 minuten en 30 seconden. Bij blootstelling aan 6% ferric chloride nam de occlusietijd met volle vier minuten af.Intravitale microscopie biedt een eenvoudige en nauwkeurige methode om de lytische capaciteit van diverse nieuwe geneesmiddelen in vivo te testen door de degradatie van de trombus te visualiseren. Flowmonitoring in de arteria carotis is een nuttig instrument gebleken voor het bestuderen van de efficiëntie van antitrombotische middelen en voor het evalueren of deze middelen occlusie kunnen voorkomen of vertragen.

ferric-chloride-induced-thrombosis-mouse-model-on-carotid-artery

Research

JoVE Journal

Medicine

Geneeskunde

Wij rapporteren een verfijnde procedure van de ijzerchloride (FeCl3) geïnduceerde trombose modellen op de halsslagader en mesenterica evenals ader, efficiënt gekarakteriseerd met behulp van intravitale microscopie tot tijd om trombi vorming occlusief bewaken.

IJzer-Chloride geïnduceerde Murine Trombose Models

Hier presenteren we de wijzigingen die noodzakelijk zijn naar een goed gekarakteriseerd en gebruikte kleine ferrichloride-geïnduceerde (FeCl3) halsslagader letsel diermodel voor gebruik in een grote dierlijke vasculaire verwonding-model. De resulterende model kan worden gebruikt voor pre-klinische proef beoordeling van zowel preventieve als thrombolytic farmacologische en mechanische interventies.

Canine halsslagader ferrichloride-geïnduceerde trombose: Een grote diermodel van vasculaire verwonding

Het huidige protocol beschrijft hoe een FeCl 3-gemedieerd letsel kan worden gebruikt om arteriële trombose te induceren en hoe arteriële letselmonsters in verschillende stadia van trombose kunnen worden verzameld en voorbereid voor elektronenmicroscopieanalyse.

IJzerchloride-geïnduceerde arteriële trombose en monsterverzameling voor 3D-elektronenmicroscopieanalyse

Deze studie presenteert een protocol voor het opzetten van een reproduceerbaar, minimaal invasief rattenmodel van superieure sagittale sinustrombose, geïnduceerd door ferrichloride, waarbij een zijde-hechtingsmethode wordt gebruikt in combinatie met laserspeckle-contrastbeeldvorming en hoogresolutie-echografie voor evaluatie.

Vestiging van een gemodificeerde door ferrichloride geïnduceerde superior sagittale sinus-trombose

Dit beschrijft een gedeeltelijke carotis ligatie chirurgie, die verstoord stromingscondities en verdere ontwikkeling van atherosclerose (in twee weken) oorzaken met plaque neo-vascularisatie (in vier weken) in de muis gemeenschappelijke halsslagader. We beschrijven ook een nieuwe methode van RNA isolatie van de halsslagader intima, het verstrekken van hoge zuiverheid endotheliale RNA.

Een model van Disturbed Flow-geïnduceerde atherosclerose in Muis halsslagader op een gedeelte van ligatie en een eenvoudige methode van RNA isolatie van carotis Endotheel

De muis volledige stase model van de vena cava inferior trombose levert kwantificeerbare hoeveelheden aderwand weefsel en trombus. Het is nuttig gebleken voor het evalueren van interacties tussen de ader muur en de occlusieve trombus en bij de beoordeling van de progressie van acute naar chronische ontsteking.

Muis Compleet Stasis Model van Inferior Vena Cava trombose

We zien in de video een methode voor het produceren van een midden cerebrale slagader occlusie bij volwassen muizen met behulp van een intraluminale monofilament. We laten ook zien hoe de omvang van herseninfarct beoordelen door 2,3,5-triphenyltetrazolium chloride (TTC) kleuring.

Muis model van de midden cerebrale slagader Occlusion

Een model van stent implantatie in muizen halsslagader wordt beschreven. In vergelijking met andere, soortgelijke middelen, deze procedure is zeer snel, eenvoudig en toegankelijk, het aanbieden van de mogelijkheid om te studeren in een handige manier de vaatwand reactie op verschillende drug-eluting stents en de moleculaire mechanismen van restenose.

Een Muizenmodel van Stent Implantatie in de halsslagader voor de Studie van Restenose

We beschrijven een methode waarbij een betrouwbaar model van cerebrale veneuze hypertensie bij volwassen muizen. Dit model wordt algemeen beschreven en getest in de rat. Deze nieuwe tegenhanger in de muizen opent de mogelijkheid om genetische gemodificeerde dieren en daardoor verbreedt de toepassing van het model.

Volwassen muis Veneuze Hypertensie Model: halsslagader op externe halsader Anastomosis.

Deze methode is ontwikkeld met als doel het leveren van een constante geneesmiddeloplossing via de halsslagader, de farmacokinetiek van nieuwe geneesmiddelen evalueren muismodellen.

Halsslagader Infusions voor farmacokinetische en farmacodynamische analyse van Taxanen in Muizen

Leer een trombosemodel met ferrichloride op halsslagader en mesenterium van muizen. Intravital microscopie en Doppler-flowmeting monitoren trombusvorming in real-time voor vasculair onderzoek.

Ferric-Chloride geïnduceerde trombose Muis Model op halsslagader en Mesenterium Vessel

Meer video's verkennen