Name: Bereiding en karakterisering van de individuele en multi-geneesmiddel beladen Fysiek Ingesloten Polymeer Micellen (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2015-08-28T13:00:00.000+00:00
Duration: 7 min 32 s
Description: Leer de bereiding en karakterisatie van geneesmiddelbeladen micellen voor effectieve afgifte in farmaceutische toepassingen. Deze methode biedt een reproduceerbare en stabiele oplossing voor slecht wateroplosbare geneesmiddelen.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Deze studie werd ondersteund door een subsidie van het AACP New Pharmacy Faculty Research Award Program, Medical Research Foundation of Oregon New Investigator Grant, Oregon State University-Startup fund en Pacific University, School of Pharmacy Start-up fund.

1. Voorbereiding van de individuele en multi-drug Loaded Micellen door Solvent Casting Methode <ol><li> Weeg DTX 1 mg of EVR 1 mg of beide drugs op 1 mg elk voor de dubbele drug micellen (DDM). </li><li> Weeg 15 mg PEG 2000 - b -PLA 1800 of PEG 4000 - b -PLA 2200 voor individuele of DDM. </li><li> Los de geneesmiddel / drugs en het polymeer in 0,5 ml acetonitril en in een 5 ml rondbodemkolf. </li><li> Vorm een ​​dunne polymeerfilm geneesmiddel verspreid door verdamping van het geneesmiddel (en) -polymeer acetonitril oplossing onder verlaagde druk met een rotatieverdamper. Stel de rotatieverdamper tot 100 rpm, het waterbad temperatuur van 40 ° C en een onderdruk van 260 mbar gedurende 5 min gevolgd door een daling tot 100 mbar gedurende 3 min. </li><li> Hydrateren de drug-polymeerfilm met 0,5 ml gedemineraliseerd water bij 50 o C en schud de kolf met de micellen te vormen. </li><li> Filter het resultaating micellaire oplossing door een 0,2 um nylon filter aan een VN-opgeloste geneesmiddel of verontreinigingen te verwijderen in een 1,5 ml centrifugebuis. </li></ol> 2. Beoordeling van de Drug Laden en Stabiliteit in Micellen behulp van reverse-phase hogedrukvloeistofchromatografie (RP-HPLC) <ol><li> Voer RP-HPLC-analyse met een C8 kolom equilibriated bij 40 ° C in een isocratische modus met een mobiele fase van acetonitril / water (62/38) met 0,1% fosforzuur en 1% methanol bij een stroomsnelheid van 1 ml / min en Een injectievolume van 10 ul. </li><li> Verdun vers bereide micellen (deel 1) 1: 100 in mobiele fase voorafgaand aan analyse door middel van RP-HPLC initiële geneesmiddelbelading bepalen. WINKEL onverdund individuele micellen en DDM bij kamertemperatuur (25 ° C) gedurende 48 uur en vers bereid 1: 100 verdunde monsters in mobiele fase opnieuw te beoordelen door RP-HPLC en bepaald geneesmiddel (en) stabiliteit in micellen in 24 uur. </li><li> Monitor DTX en EVR pieken op 227 en 279 nm respectievelijkmet retentietijden van 1,7 en 5,7 min respectievelijk. Voer alle metingen in drievoud. Huidige gegevens als Mean ± SD drug laden. </li></ol> 3. Beoordeling van micellen deeltjesgrootte door dynamische lichtverstrooiing (DLS) <ol><li> Verdun vers bereid micellen (zoals beschreven in punt 1) in gedeïoniseerd water in een verhouding van 01:20 tot een uiteindelijke polymeerconcentratie van 1,5 mg / ml verkregen. </li><li> Meet de intensiteit van He-Ne laser (633 nm) bij 173 ° verstrooiing te bepalen. Voer alle metingen bij 25 ° C na pre-equilibratie gedurende 2 min. </li><li> Voer alle metingen in drievoud. Aanwezig gegevens als het gemiddelde Z-gemiddelde grootte ± SD met de polydispersiteitsindex (PDI) van de verdeling. </li></ol> 4. Beoordeling van In Vitro geneesmiddelafgifte uit Individuele Micellen en DDM <ol><li> Bereid individuele micellen en DDM zoals beschreven in hoofdstuk 1. Plaats 2,5 ml van de micellen in een 3 ml dialyse cassette meteen molecuulgewicht cut-off (MWCO) van 7000 g / mol. Opmerking: Deze MWCO werd gekozen om het vrije geneesmiddel (en) samen met de niet-gekoppelde polymeermoleculen vrij achterwaarts kunnen diffunderen uit de cassette en aldus zorgen bezinkingsvoorwaarden. </li><li> Plaats de cassettes in 2,5 L 10 mM pH 7,4 fosfaatbuffer (bereid door verdunning van voorraad 200 mm-oplossing) en wijzig de buffer elke 3 uur om ervoor te zorgen gootsteen voorwaarden. Houd de temperatuur van de buffer bij 37 ° C gedurende de duur van het experiment. </li><li> Op 0, 0,5, 1, 2, 3, 6, 9, 12, 24 en 48 uur intrekken 150 ul van de oplossing in de cassettes en vervangen door 150 pl vers buffer. </li><li> Analyseer de monsters met behulp van RP-HPLC zoals vastgesteld in deel 2 van de concentratie van het geneesmiddel te bepalen. Curve-fit de release data drug (s) op basis van een eenvoudige diffusie model met een één fase exponentiële associatie met stastitical software. </li><li> Bereken de tijd die nodig is om 50% van geneesmiddelafgifte te bereiken (t 1/2) van de each geneesmiddel in individuele micellen of DDM basis van de curve fitting. Voer alle metingen in quadruplet. </li></ol>

<ol><li>Yokoyama, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Polymeric+micelles+as+a+new+drug+carrier+system+and+their+required+considerations+for+clinical+trials%5BTitle%5D)+AND+%22Expert+Opin+Drug+Deliv%22%5BJournal%5D)">Polymeric micelles as a new drug carrier system and their required considerations for clinical trials.</a> Expert Opin Drug Deliv. 7, 145-158 (2010).</li>
<li>Shin, H. C., Alani, A. W., Rao, D. A., Rockich, N. C., Kwon, G. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Multi-drug+loaded+polymeric+micelles+for+simultaneous+delivery+of+poorly+soluble+anticancer+drugs%5BTitle%5D)+AND+%22J+Control+Release%22%5BJournal%5D)">Multi-drug loaded polymeric micelles for simultaneous delivery of poorly soluble anticancer drugs.</a> J Control Release. 140, 294-300 (2009).</li>
<li>Adams, M. L., Lavasanifar, A., Kwon, G. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Amphiphilic+block+copolymers+for+drug+delivery%5BTitle%5D)+AND+%22J+Pharm+Sci%22%5BJournal%5D)">Amphiphilic block copolymers for drug delivery.</a> J Pharm Sci. 92, 1343-1355 (2003).</li>
<li>Oerlemans, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Polymeric+micelles+in+anticancer+therapy%3A+targeting%2C+imaging+and+triggered+release%5BTitle%5D)+AND+%22Pharm+Res%22%5BJournal%5D)">Polymeric micelles in anticancer therapy: targeting, imaging and triggered release.</a> Pharm Res. 27, 2569-2589 (2010).</li>
<li>Shin, H. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+3-in-1+polymeric+micelle+nanocontainer+for+poorly+water-soluble+drugs%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Pharm%22%5BJournal%5D)">A 3-in-1 polymeric micelle nanocontainer for poorly water-soluble drugs.</a> Mol Pharm. 8, 1257-1265 (2011).</li>
<li>Hasenstein, J. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Antitumor+activity+of+Triolimus%3A+a+novel+multidrug-loaded+micelle+containing+Paclitaxel+Rapamycin%2C+and+17-AAG%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Cancer+Ther%22%5BJournal%5D)">Antitumor activity of Triolimus: a novel multidrug-loaded micelle containing Paclitaxel Rapamycin, and 17-AAG.</a> Mol Cancer Ther. 11, 2233-2242 (2012).</li>
<li>Mazzaferro, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Bivalent+sequential+binding+of+docetaxel+to+methyl-beta-cyclodextrin%5BTitle%5D)+AND+%22Int+J+Pharm%22%5BJournal%5D)">Bivalent sequential binding of docetaxel to methyl-beta-cyclodextrin.</a> Int J Pharm. 416, 171-180 (2011).</li>
<li>Iwase, Y., Maitani, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Preparation+and+in+vivo+evaluation+of+liposomal+everolimus+for+lung+carcinoma+and+thyroid+carcinoma%5BTitle%5D)+AND+%22Biol+Pharm+Bull%22%5BJournal%5D)">Preparation and in vivo evaluation of liposomal everolimus for lung carcinoma and thyroid carcinoma.</a> Biol Pharm Bull. 35, 975-979 (2012).</li>
<li>Mishra, G. P., Doddapaneni, B. S., Nguyen, D., Alani, A. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Antiangiogenic+effect+of+docetaxel+and+everolimus+as+individual+and+dual-drug-loaded+micellar+nanocarriers%5BTitle%5D)+AND+%22Pharm+Res%22%5BJournal%5D)">Antiangiogenic effect of docetaxel and everolimus as individual and dual-drug-loaded micellar nanocarriers.</a> Pharm Res. 31, 660-669 (2014).</li>
<li>Xu, W., Ling, P., Zhang, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Polymeric+micelles%2C+a+promising+drug+delivery+system+to+enhance+bioavailability+of+poorly+water-soluble+drugs%5BTitle%5D)+AND+%22J+Drug+Deliv%22%5BJournal%5D)">Polymeric micelles, a promising drug delivery system to enhance bioavailability of poorly water-soluble drugs.</a> J Drug Deliv. 2013, 340315(2013).</li>
<li>Lavasanifar, A., Samuel, J., Kwon, G. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Poly%28ethylene+oxide%29-block-poly%28L-amino+acid%29+micelles+for+drug+delivery%5BTitle%5D)+AND+%22Adv+Drug+Deliv+Rev%22%5BJournal%5D)">Poly(ethylene oxide)-block-poly(L-amino acid) micelles for drug delivery.</a> Adv Drug Deliv Rev. 54, 169-190 (2002).</li>
</ol>

De auteurs hebben niets te onthullen.

Het gebruik van polymere micellen voor geneesmiddelafgifte blijft uitbreiden vanwege hun veelzijdigheid en het vermogen om hydrofobe geneesmiddelen te leveren voor verschillende ziektetoestanden. Daarom zijn de technieken die nodig zijn om deze formuleringen voor te bereiden en te karakteriseren vóór gebruik in celcultuur of dieren een kritische eerste stap om de beste combinatie tussen het geneesmiddel en het polymeer te bepalen. PEG-b-PLA zijn uitstekende amfifiele blokcopolymeren voor geneesmiddelafgiftedoele...

Amfifiele blokcopolymeren met herhalende structuur bestaande uit hydrofiele en hydrofobe domeinen spontaan zelfassemblage driedimensionale macromoleculaire samenstellingen zogenaamde polymere micellen te vormen. Deze structuren hebben een binnenste hydrofobe kern omgeven door een hydrofiele schil. De hydrofobe kern heeft de mogelijkheid om hydrofobe geneesmiddelen nemen door fysieke opsluiting tot hydrofobe interacties of door chemische conjugatie aan het polymeerskelet. 1 vele voordelen bestaan ​​om het gebruik van deze blokcopolymeren te micellen voor geneesmiddelafgifte vormen. Deze omvatten incorporatie van slecht oplosbare geneesmiddelen te verbeteren farmacokinetiek van de gebruikte geneesmiddelen en de biologische verenigbaarheid en / of biologische afbreekbaarheid van de polymeren maakt ze veilig alternatief voor conventionele oplosbaarmakende. 2 Een ander voordeel van het gebruik van polymere micellen hun colloïdale deeltjesgrootte tussen 15- 150 nm 3, waardoor ze aantrekkelijk voor parenteral levering. Daarom is in de afgelopen 20 jaar polymere micellen voren zijn gekomen als levensvatbare drug delivery systemen voor het slecht in water oplosbare geneesmiddelen in het bijzonder voor de behandeling van kanker. 3,4 Momenteel zijn er vijf polymere micellaire formuleringen voor kankertherapie klinische proeven. 4 Vier van de micellen in de klinische studies PEG-gebaseerde diblokcopolymeren terwijl de laatste is een triblokcopolymeer met polyethyleenoxide. De omvang van deze micellen varieerde van 20 nm tot 85 nm. Het voordeel van PEG gebaseerde polymeren is hun biocompatibiliteit en afhankelijk van het tweede blok kan ook biologisch afbreekbaar zijn. Onlangs nieuwe geneesmiddelafgiftesystemen gebaseerd op polyethyleneglycol- blok -polylactic acid (PEG b -PLA) polymere micellen zijn ontwikkeld voor het gelijktijdig leveren van meerdere geneesmiddelen tegen kanker. De PEG-b- PLA micellen zijn zowel biocompatibel en biologisch afbreekbaar. Deze multi-geneesmiddel beladen micellen hebben getoond alsynergistic remming van verschillende kankers modellen in vitro en in vivo 2,5,6 en passen in het huidige paradigma van gebruik van meerdere geneesmiddelen bij chemotherapie resistentie of omlaagbrengen toxiciteit. Daarom is er veel belangstelling voor het bereiden en karakteriseren deze micellaire geneesmiddelafgiftesystemen voor gebruik bij kanker en andere ziekten. In het werk dat we hieronder geschetste stap-voor-stap proces waarbij dergelijke micellen kunnen worden bereid en gekarakteriseerd voor evaluatie daarvan bij ziektetoestanden plaats. Voor de toepassing van dit werk twee slecht oplosbare anti-kankermiddelen, docetaxel (DTX) en everolimus (EVR) zijn gekozen. Zowel DTX en EVR zijn slecht in water oplosbare verbindingen met intrinsieke oplosbaarheid in water bij 1,9 en 9,6 ug / ml. 7,8 Twee PEG-b -PLA polymeren met verschillende molecuulgewichten werden gebruikt in dit protocol als de bouwstenen voor de geformuleerde polymere micellen,deze polymeren zijn PEG 2000 - b -PLA 1800 (3800 Da) en PEG 4000 - b -PLA 2200 (6200 Da). PEG-b -PLA micellen kan dus zorgen voor een uniek platform als Nanodrager voor DTX en EVR afzonderlijk en in combinatie. De vereiste reagentia / materialen en apparatuur die nodig is voor te bereiden en te karakteriseren deze micellen worden opgenomen in tabel 1.

<table><tbody><tr><td>PEG2000-b-PLA1800</td><td>Advanced Polymer Materials, Inc</td><td>6-01- PLA/2000</td><td>PLA MW kan worden gespecificeerd bij bestellen</td></tr><tr><td>PEG4000-b-PLA2200</td><td>Advanced Polymer Materials, Inc</td><td>6-01- PLA/4000</td><td>PLA MW kan worden gespecificeerd bij bestellen</td></tr><tr><td>Docetaxel</td><td>LC Laboratories</td><td>D-1000</td><td>100 mg</td></tr><tr><td>Everolimus</td><td>LC Laboratories</td><td>E-4040</td><td>100 mg</td></tr><tr><td>Acetonitrile</td><td>EMD/VWR</td><td>EM-AX0145-1</td><td>HPLC graad; 4 L</td></tr><tr><td>Rondbodemfles&nbsp;</td><td>Glassco/VWR</td><td>89426-496</td><td>5 ml</td></tr><tr><td>RV 10 Control Rotary Evaporators</td><td>IKA Works</td><td>8025001</td><td>Rotoevaporator</td></tr><tr><td>Shimadzhu HPLC met DAD detector</td><td>Shimadzhu</td><td></td><td>RP-HPLC</td></tr><tr><td>Slide-a-lyzer dialyse cassette MWCO 7000</td><td>Thermo Scientific, Inc</td><td>66370</td><td>3 ml</td></tr><tr><td>Fosfaatbuffer pH 7.4, 200 mM</td><td>VWR</td><td>100190-870</td><td>500 ml</td></tr><tr><td>Malvern NanoZS</td><td>Malvern Instruments, UK</td><td></td><td>DLS</td></tr><tr><td>Nylon filter</td><td>Acrodisc/VWR</td><td>28143-242</td><td>13 mm; 0.2&micro;M</td></tr><tr><td>Fosforzuur, NF</td><td>Spectrum Chemical/VWR</td><td>700000-626</td><td>100 ml</td></tr><tr><td>GraphPad Prism</td><td><a href="http://www.graphpad.com/">www.graphpad.com</a></td><td></td><td>Analysesoftware</td></tr><tr><td>Zorbax SB-C8 Rapid Resolution cartridge&nbsp;</td><td>Agilent Technologies</td><td>866953-906</td><td>4.6 &times;75 mm, 3.5 &#956;m</td></tr></tbody></table>

bereiding en karakterisering van de individuele en multi-geneesmiddel beladen fysiek ingesloten polymeer micellen

Preparation and Characterization of Individual and Multi-drug Loaded Physically Entrapped Polymeric Micelles

Amfifiele blok-copolymeren als polyethyleneglycol- blok -polylactic zuur (PEG-b- PLA) kunnen zichzelf assembleren in micellen boven hun kritische micellaire concentratie vormen hydrofobe kernen omringd door hydrofiele schelpen in waterige omgevingen. De kern van deze micellen kunnen worden gebruikt om hydrofobe, slecht wateroplosbare geneesmiddelen laden zoals docetaxel (DTX) en everolimus (EVR). Systematische karakterisering van de micellen structuur en geneesmiddelbelading mogelijkheden zijn belangrijk voor in vitro en in vivo studies worden uitgevoerd. Het doel van de hierin beschreven protocol is de nodige maatregelen karakterisering gestandaardiseerde micellaire producten inderdaad bereiken. DTX en EVR intrinsieke oplosbaarheid van 1,9 en 9,6 ug / ml bereiding van deze micellen kunnen worden bereikt door oplosmiddelgieten die de oplosbaarheid van DTX en EVR stijgt tot 1,86 en 1,85 mg / ml, respectievelijk. Stabiliteit drug in micellen evaluated bij kamertemperatuur gedurende 48 uur aan dat 97% of meer van de geneesmiddelen worden vastgehouden in oplossing. Micel grootte werd bepaald met dynamische lichtverstrooiing en bleek dat de omvang van deze micellen was dan 50 nm en afhankelijk van het molecuulgewicht van het polymeer. Geneesmiddelafgifte uit de micellen werd beoordeeld met behulp van dialyse onder de gootsteen omstandigheden bij een pH van 7,4 bij 37 ° C gedurende 48 uur. Curve fitting resultaten geven aan dat geneesmiddelafgifte wordt aangedreven door een eerste orde proces aangeeft dat het diffusie aangedreven.

Individuele DTX of EVR micellen en DTX en EVR DDM in PEG-b -PLA micellen succesvol zijn geformuleerd hetzij PEG 4000 - b -PLA 2200 of PEG 2000 - b -PLA 1800 (figuur 1). DTX, EVR en de DDM toonde vergelijkbare stabiliteit van PEG 4000 - b -PLA 2200 of PEG 2000 - 1800 b -PLA dan 48 uur (Figuur 2). Aanvankelijke drug laden van EVR...

Het doel van dit protocol is om de bereiding en karakterisering van fysiek opgesloten, slecht oplosbare geneesmiddelen in micellaire geneesmiddelafgiftesystemen, samengesteld uit amfifiele blokcopolymeren, te beschrijven.

Bereiding en karakterisering van de individuele en multi-geneesmiddel beladen Fysiek Ingesloten Polymeer Micellen

Amphiphilic block copolymers like polyethyleneglycol-block-polylactic acid (PEG-b-PLA) can self-assemble into micelles above their critical micellar ...

Het algemene doel van het volgende experiment is om een stapsgewijs proces te schetsen voor het prepareren en karakteriseren van met geneesmiddelen geladen my-cellen voordat deze worden geëvalueerd in relevante ziektestadia. Dit wordt bereikt door de my-cellen te prepareren via de solvent casting-methode om reproduceerbare my-cellen voor de studie te genereren. Als tweede stap worden de ladingsstabiliteit en de grootte van de my-cellen beoordeeld, wat de capaciteit van de my-cellen bepaalt om klinisch relevante concentraties te laden en vast te houden.Vervolgens wordt de snelheid van de drugvrijgave uit de My-cellen bepaald om te garanderen dat mijn cellen geschikte in vitro vrijgavekenmerken hebben voordat de in vivo stabiliteit wordt beoordeeld. De resultaten tonen aan dat reproduceerbaar gegenereerde stabiele My-cellen een platform kunnen bieden voor drugdelivery bij diverse ziektebeelden, op basis van de hier gepresenteerde beoordelingstechnieken. Het belangrijkste voordeel van deze techniek ten opzichte van bestaande methoden, zoals equilibrium loading of dialysemethoden, is dat de myosinen veel sneller kunnen worden geprepareerd met een reproduceerbare drugloading en grootte.De implicaties van deze techniek strekken zich uit tot de therapie of diagnose van diverse ziektebeelden, aangezien nanomedicijnen mogelijkheden bieden die verder gaan dan conventionele vormen. Over het algemeen kunnen beginners moeite hebben met deze technieken, ook al zijn ze eenvoudig, omdat men nog steeds vrijlatingsstudies moet uitvoeren om het burst-effect echt te kunnen evalueren. Deze procedure zal worden gedemonstreerd door Shaman Duke, mijn promovendus, en Deepa, mijn collaborator. Weeg eerst 1 mg DTX, 1 mg EVR en 15 mg Peg 4,000 block PLA 2200 af voor de dual drug micelles of DDM. Los na het afwegen de medicijnen en het polymeer op in 0,5 mL acetonitril en breng de oplossing vervolgens over naar een rondbodemkolf van 5 mL. Vorm een dunne, drug-gedistribueerde polymeerfilm door de drug-polymeer-acetonoplossing onder reduceerde druk te verdampen met behulp van een rotatieverdamper.Rehydrate vervolgens de polymeerfilm van het geneesmiddel met 0,5 ml gedeïoniseerd water dat is voorverwarmd tot 50 °C en schud de kolf voorzichtig in een waterbad van 50 °C om de micellen te vormen. Voeg de oplossing toe aan een centrifugebuis en centrifugeer deze 3 minuten lang bij 7.200 ×g. Trek de oplossing op met een naald en filter de resulterende miceloplossing door een nylon filter van 0,2 µm in een nieuwe centrifugebuis van 1,5 ml om eventuele onopgeloste geneesmiddelen of verontreinigingen te verwijderen. Voer op dit punt een reverse-phase HPLC-analyse uit met een C8-kolom geëquilibreerd bij 40 °C in een isocratische modus met een mobiele fase van acetonitril en water. Verdun de vers bereide micellen in acetonitril in een verhouding van 1:100 voordat ze via reverse-phase HPLC worden geanalyseerd om de initiële drug loading te bepalen.Nadat de onverdunde cellen 48 uur bij kamertemperatuur zijn bewaard, worden verse verdunde monsters klaargemaakt om deze opnieuw te analyseren via reverse phase HPLC en de stabiliteit van het geneesmiddel in de cellen over 48 uur te bepalen. Monitor de DTX- en DVR-pieken bij 227 en 279 nanometer met retentietijden van respectievelijk 1,7 en 5,7 minuten. Presenteer de gegevens als het gemiddelde plus of minus de standaarddeviatie van de drug loading.Verdun vervolgens de vers bereide my cells en gedeïoniseerd water in een verhouding van 1:20 tot een uiteindelijke polymeerconcentratie van 1,5 mg/mL. Breng de oplossing over naar een cuvet voor dynamische lichtverstrooiingsmeting. Meet de intensiteit van de heliumneonlaser bij 173 graden om de verstrooiing te bepalen.Presenteer de gegevens als de gemiddelde Z-gemiddelde grootte plus of min de standaarddeviatie, samen met de polydispersiteitsindex of PDI van de distributie. Nadat DDM is voorbereid zoals eerder beschreven, worden 2,5 milliliter van de cellen geladen in een dialysecassette van drie milliliter met een molecuulgewichtafsnijding (molecular weight cutoff) van 7.000 gram per mol. Plaats de cassette in 2,5 liter 10 millimolaire pH 7,4 fosfaatbuffer gedurende de volgende intervallen.Verwijder 150 µL van de oplossing en vervang deze door 150 µL verse buffer. Verschoon de buffer elke drie uur om de synchronisatiecondities te waarborgen. Analyseer de monsters met reverse phase HPLC om de drugconcentratiecurve te bepalen.Pas de gegevens van de geneesmiddelafgifte aan op basis van een eenvoudig diffusiemodel met een eenfasige exponentiële associatie met behulp van de statistische software D-T-X-E-V-R, waarbij het DDM een vergelijkbare stabiliteit vertoonde in PEG 2000 block PLA 1800 of PEG 2000 block PLA 2200 gedurende 48 uur. In alle gevallen behielden mijn cellen 97% of meer van de initiële lading na 48 uur bij kamertemperatuur. Op basis van de resultaten van de dynamische lichtverstrooiing vertoonden al mijn cellen een unimodale distributie met PDI-waarden van minder dan 0,2.Op basis van de gegevens was de DTX-vrijgave uit individuele mycelcellen en DDM ongeveer 60% over 48 uur. De EVR-vrijgave uit individuele mycelcellen en DDM was respectievelijk 60% en 50%. De tijd die nodig is voor 50% drugvrijgave uit individuele mycelcellen en DDM, evenals de data voor de goodness of fit, worden hier gepresenteerd.De kwaliteit van de curve-fitting voor al mijn cellen, behalve voor de individuele EVR, is hoger dan 0,950, wat betekent dat de aanname van een eerste-orde afgifte een goede benadering is om de geneesmiddelafgifte uit individuele cellen en DDM te verklaren. Zodra deze technieken onder de knie zijn, kunnen ze routinematig worden toegepast op een bibliotheek van geneesmiddelen en polymeren, zoals mijn cellen, in een tijdsbestek van enkele uren tot een week. Bij het uitvoeren van deze procedure is het belangrijk om te onthouden de cellen volledig te karakteriseren voordat men overgaat tot de celkweek of de diermodellen na deze procedures. Andere afgiftesystemen, zoals liposomale afgiftesystemen, kunnen ebenfalls worden geëvalueerd of gekarakteriseerd om de vraag te beantwoorden over de rol van het geneesmiddelafgiftesysteem in de effectiviteit van de behandeling.Na het bekijken van deze video zou u een goed begrip moeten hebben van hoe u cellen met geladen geneesmiddelen moet voorbereiden en karakteriseren voordat u deze evalueert in een ziektebeeld van belang.

preparation-characterization-individual-multi-drug-loaded-physically

Research

JoVE Journal

Chemistry

Scheikunde

Dit artikel beschrijft een methode om nanoprecipitation op basis van polymeren nanodeeltjes door middel van diblok co-polymeren te synthetiseren. Bespreken we de synthese van diblok co-polymeren, de nanoprecipitation techniek en mogelijke toepassingen.

Formulering van diblok polymere nanodeeltjes door middel van Nanoprecipitation Techniek

Een protocol voor de bereiding en karakterisering van lipofiele doxorubicine pro-geneesmiddel beladen 1,2-distearoyl- sn glycero-3-phosphoethanolamine- N - [amino (polyethyleenglycol) -2000] (DSPE-PEG) micellen wordt beschreven.

Bereiding en karakterisering van lipofiele doxorubicine Pro-drug micellen

De belangrijkste stappen van levende anionische polymerisatie van fenylglycidylether (PheGE) met methoxy-polyethyleenglycol (MPEG- -PPheGE b) worden beschreven. Het verkregen blokcopolymeer micellen (BCMS) werden beladen met doxorubicine 14% (gew%) en aanhoudende afgifte van geneesmiddel gedurende 4 dagen onder fysiologisch relevante omstandigheden werd verkregen.

Anionische polymerisatie van een amfifiele copolymeer voor de bereiding van blokcopolymeer micellen gestabiliseerd door π-π stapelen interacties

Om kankermedicijnen met hoge specificiteit en verminderde bijwerkingen naar tumorlocaties te brengen, zijn nieuwe methoden op basis van nanodeeltjes vereist. Hier beschrijven we disulfide-gekruiste micellen die gemakkelijk kunnen worden bereid door waterstofperoxide-gemedieerde oxidatie en die zich efficiënt kunnen dissociëren in een reducerende tumoromgeving om ladingen vrij te geven.

Een Facile en efficiënte aanpak voor de productie van omkeerbare Disulfide Cross-linked micellen

Deze studie beschrijft klassieke hydratatie met behulp van de dunne lipide-film methode voor de bereiding van nanoliposome gevolgd door nanodeeltjes karakterisatie. Een 47 kDa-hydrofiele en bolvormige proteïne, Tarin, is met succes ingekapseld als een strategie om de stabiliteit te verbeteren, snelle klaring te voorkomen en gecontroleerde afgifte te bevorderen. De methode kan worden aangepast aan hydrofobe moleculen inkaping.

Voorbereiding en karakterisering van Nanoliposomes voor de Entrapment van bioactieve hydrofiele bolvormige eiwitten

We bieden protocollen en representatieve gegevens voor het ontwerpen, assembleren en karakteriseren van polyelektrolyt complexe micelles, core-shell nanodeeltjes gevormd door polyelektrolyten en hydrofielgeladen-niet-geladen blokcopolymeren.

Montage en karakterisering van Polyelectrolyte Complex Micelles

Peptide tertiaire amides (PTA) zijn een superfamilie van peptidomimetica die omvatten maar zijn niet beperkt tot, peptiden, peptoïden en N-gemethyleerd peptiden. Hier beschrijven we een synthetische methode die zowel split-en-zwembad en sub-monomeer strategieën combineert tot een kraal een-verbinding bibliotheek van PTA synthetiseren.

Split-en-zwembad Synthese en karakterisatie van peptide Tertiaire amide Bibliotheek

Synthese, activering, en karakterisering van opzettelijk ontworpen metaal-organische raamwerk materialen is een uitdaging, vooral als bouwstenen onverenigbaar zijn of ongewenste polymorfe zijn thermodynamisch bevoordeeld ten opzichte van de gewenste vormen. We beschrijven hoe toepassingen van oplosmiddelhoudende bijgestaan ​​linker uitwisseling, poeder röntgendiffractie in haarvaten en activering via superkritische CO 2 drogen, kan een aantal van deze uitdagingen aan te pakken.

Synthese en karakterisering van gefunctionaliseerde metaal-organische roosters

Het doel van dit protocol is om SDF-1α, een stamcel-home-factor, te integreren in dextransulfaat-chitosan nanodeeltjes.  De resulterende deeltjes worden gemeten op hun grootte en zetapotentiaal, evenals de inhoud, activiteit en in vitro afgiftesnelheid van SDF-1α uit de nanodeeltjes.

Bereiding en karakterisering van SDF-1α-Chitosan-Dextransulfaat Nanodeeltjes

Een protocol voor de synthese en karakterisering van colloïden bekleed met supramoleculaire delen wordt beschreven. Deze supramoleculaire colloïden ondergaan zelf-assemblage bij de activering van de waterstofbruggen tussen de aan het oppervlak verankerde moleculen door UV-licht.

Synthese en karakterisering van Supramoleculaire colloïden

Leer de bereiding en karakterisatie van geneesmiddelbeladen micellen voor effectieve afgifte in farmaceutische toepassingen. Deze methode biedt een reproduceerbare en stabiele oplossing voor slecht wateroplosbare geneesmiddelen.

Bereiding en karakterisering van de individuele en multi-geneesmiddel beladen Fysiek Ingesloten Polymeer Micellen

Meer video's verkennen