Bereiding en karakterisering van de individuele en multi-geneesmiddel beladen Fysiek Ingesloten Polymeer Micellen

Het algemene doel van het volgende experiment is om een stapsgewijs proces te schetsen voor het bereiden en karakteriseren van geneesmiddel-geladen my-cellen voordat ze worden geëvalueerd in ziekten van belang. Dit wordt bereikt door de My-cellen te bereiden door middel van een oplosmiddelgietmethode om reproduceerbare my-cellen voor het onderzoek te genereren. Als tweede stap worden de stabiliteit en grootte van de my-celbelasting beoordeeld, wat de mogelijkheid van de my-cellen bepaalt om klinisch relevante concentraties te laden en vast te houden.

Vervolgens wordt de snelheid van geneesmiddelafgifte uit de My-cellen bepaald om ervoor te zorgen dat de my-cellen geschikte in vitro-afgifte-eigenschappen hebben voordat de in vivo-stabiliteit wordt beoordeeld. De resultaten tonen aan dat reproduceerbaar gegenereerde stabiele my-cellen een platform kunnen bieden om geneesmiddelafgifte in verschillende ziektetoestanden na te streven op basis van de hier gepresenteerde beoordelingstechnieken. Het belangrijkste voordeel van deze techniek of bestaande methoden zoals evenwichtsbelasting of dialysemethoden, is dat de myosinen veel sneller kunnen worden bereid met reproduceerbare geneesmiddelbelasting en grootte.

De implicaties van deze techniek strekken zich uit naar therapie of diagnose van verschillende ziektetoestanden omdat nanoschaalgeneesmiddelen mogelijkheden bieden die verder gaan dan conventionele vormen, Over het algemeen kunnen individuen die net beginnen, worstelen met deze technieken, ook al zijn ze eenvoudig, omdat je nog steeds releasestudies kunt doen, je kunt het bursteffect niet echt evalueren. Het demonstreren van deze procedure zal Shaman Duke, mijn afgestudeerde student, en Deepa mijn medewerker zijn. Weeg eerst één milligram DTX, één milligram EVR en 15 milligram Peg 4, 000 block PLA 2200 af voor de dual drug my-cellen of DDM. Na het afwegen, lost u de geneesmiddelen en het polymeer op in 0,5 milliliter aceto nitrile en brengt u de oplossing over in een vijf milliliter ronde bodemkolf om een ​​dunne gedistribueerde polymeerfilm van het geneesmiddel te vormen door de geneesmiddelpolymeer aceto-oplossing te evaporeren onder verlaagde druk met behulp van een rotatievevaporator.

Volgend rehydreer de geneesmiddelpolymeerfilm met 0,5 milliliter gedeïoniseerd water voorverwarmd op 50 graden Celsius en schud de kolf voorzichtig in een 50 graden Celsius waterbad om de mice cellen te vormen. Voeg de oplossing toe aan een centrifugeerbuis en draai 7.200 keer G gedurende drie minuten. Trek de oplossing op met een naald en filter de resulterende Micella-oplossing in een nieuwe 1,5 milliliter centrifugeerbuis met behulp van een 0,2 micron nylonfilter om onopgeloste geneesmiddelen of verontreinigingen te verwijderen Op dit punt voert u een reverse-phase HPLC-analyse uit met een C acht-kolom geëquilibreerd op 40 graden Celsius in een is-Socratische modus met een mobiele fase van acetyl I-trial en water verdunt de vers bereide mycellen in ace-eye-trial met een verhouding van 1 tot 100 voordat u analyseert door middel van reverse-phase HPLC om de initiële geneesmiddelbelasting te bepalen.

Nadat u onverdunde my-cellen gedurende 48 uur op kamertemperatuur heeft bewaard, bereidt u verse verdunde monsters voor om opnieuw te beoordelen door middel van reverse-phase HPLC en bepaalt u de geneesmiddelstabiliteit in my-cellen gedurende 48 uur. Monitor de DTX en DVR pieken bij 227 en 279 nanometer met retentietijd van respectievelijk 1,7 en 5,7 minuten. presenteer de gegevens als het gemiddelde plus of min standaardafwijking van de geneesmiddelbelasting.

Verdun vervolgens de vers bereide my-cellen en gedeïoniseerd water in een verhouding van één tot 20 tot een uiteindelijke polymeerconcentratie van 1,5 milligram per milliliter. Breng de oplossing over naar een vet voor dynamische lichtverstrooiingsmeting. Meet de intensiteit van helium neon laser op 173 graden om de verstrooiing te bepalen.

Presenteer de gegevens als het gemiddelde Z-gemiddelde formaat plus of min standaardafwijking samen met de polydispersiteitsindex of PDI van de verdeling. Na het bereiden van DDM zoals eerder beschreven, laadt u 2,5 milliliter van de my-cellen in een drie milliliter dialyse cassette met een molecuulgewicht cut-off van 7.000 gram per mol. Plaats de cassette in 2,5 liter 10 millimolair pH 7,4 fosfaatbuffer gedurende de volgende intervallen.

Trek 150 microliter van de oplossing terug en vervang met 150 microliter vers buffer. Verander de buffer elke drie uur om sync-condities te garanderen. Analyseer de monsters met behulp van reverse-phase HPLC om de geneesmiddelconcentratiecurve te bepalen.

Pas de geneesmiddelafgiftegegevens aan op basis van een eenvoudig diffusiemodel met een eenfasige exponentiële associatie met behulp van statistische software D-T-X-E-V-R en de DDM vertoonde vergelijkbare stabiliteit in PEG 2000 block PLA 1800 of PEG 2000 block PLA 2200 gedurende 48 uur. Alle my-cellen behielden 97% of meer van de initiële belasting na 48 uur bij kamertemperatuur. Op basis van de dynamische lichtverstrooiingsresultaten vertoonden alle my-cellen een unimodale verdeling met PDI-waarden van minder dan 0,2.

Op basis van de gegevens was DTX-afgifte van individuele mycellen en DDM ongeveer 60% gedurende 48 uur. EVR-afgifte van individuele my-cellen en DDM was respectievelijk 60% en 50%. De tijd die nodig was voor 50% geneesmiddelafgifte uit individuele my-cellen en DDM en de goedheid van pasgegevens worden hier gepresenteerd.

De goedheid van de curveaanpassing voor alle my-cellen behalve EVR individueel, my-cellen is boven 0,950, wat betekent dat de aanname van eerste orde afgifte een goede benadering is om de geneesmiddelafgifte uit individuele my-cellen en DDM te verklaren. Eenmaal beheerst, kunnen deze technieken routinematig worden uitgevoerd op een bibliotheek van geneesmiddelen en polymeren als my-cellen in een kwestie van uren tot weken. Tijdens het bijwonen van deze procedure is het belangrijk om te onthouden de my-cellen volledig te karakteriseren voordat u toegang krijgt tot de celcult