Modificatie van een Colliculo-thalamocorticale Mouse Brain Slice, Integratie 3-D printen van Chamber Components en multi-scale Optische beeldvorming

Het algemene doel van deze procedure is om de Calot Thal-corticale plak voor te bereiden met vier belangrijke auditieve structuren, de inferieure colus, de auditieve thalamus, de auditieve portie van de thalamische reticulaire kern en de auditieve cortex. Dit wordt bereikt door eerst de hersenen van de muis te verwijderen. De tweede stap is om de hersenen te blokkeren ter voorbereiding op het snijden.

Vervolgens snijdt u de hersenen om plakken te verkrijgen die de Calot thal-corticale verbinding bevatten. De laatste stap is om flavoproteïnebeeldvorming te gebruiken om de connectiviteit te beoordelen. Uiteindelijk kan de hersensnede die de carotale corticale verbinding bevat, worden gebruikt voor verschillende experimenten om de informatieverwerking in de auditieve gebieden van het midden en de vier hersenen beter te begrijpen. Visuele demonstratie van deze methode is cruciaal omdat de stappen om de hersenen te blokkeren vóór het snijden moeilijk te leren zijn omdat het een complexe dubbele hoekige snede vereist, die essentieel is voor het verkrijgen van intacte projecties.

De techniek zal worden gedemonstreerd door BJ Slater, een afgestudeerde student in mijn laboratorium. Om de snedevoorbereiding voor het snijden voor te bereiden, snijdt u een klein stukje van 3% auger van ongeveer één kubieke centimeter om als achterstop voor de hersenen te worden gebruikt, en een ander stukje van 1,5 centimeter bij 1,5 millimeter bij drie millimeter om als uitsteekje te worden gebruikt om de inferieure colliculus te ondersteunen. Lijm vervolgens de achterstop op de trap met cyanoacrylaatkleefstof en lijm vervolgens het uitsteekje aan de rechterkant van de achterstop zodat ze een hoek van 80 graden vormen op een dia gemarkeerd met twee lijnen op 90 graden en een diagonale lijn op 17 graden van linksboven naar rechtsonder. Plaats de hersenen met de dorsale kant omhoog op het snijpunt van de twee lijnen. Gebruik een scheermes om twee tot vier millimeter van het rostrale uiteinde van de hersenen te verwijderen om een vlakke oppervlakte te creëren.

Plaats vervolgens de hersenen met de coddle-kant omhoog op het nieuw gecreëerde vlakke oppervlak. Lijn de dorsale oppervlakte van de hersenen uit met een horizontale lijn en de middenlijn van de hersenen met een verticale lijn gemarkeerd op de dia. Richt vervolgens het scheermes uit met een lijn van 17 graden.

Kanteel het scheermes in een hoek van 30 graden en verwijder ongeveer drie millimeter van de rechtercortex in een dubbele diagonale snede om de hersenen op de vibrato-trap te monteren. Plaats een klein stukje filterpapier op de ventrale kant van de hersenen zodat de lange dimensie loodrecht op de middenlijn staat. Breng voorzichtig een kleine hoeveelheid cyanoacrylaatkleefstof aan op het gebied voor de achterstop en links van het uitsteekje.

Plaats vervolgens de dubbel diagonaal gesneden hersenenkant op de lijm zodat het coddle-gedeelte van de hersenen en de achterhersenen op het uitsteekje worden ondersteund en de rechterkant van de hersenen tegen de achterstop. In deze procedure plaatst u snel de snijtrap in de vibrato, bouwt u een trap met snijoplossing. Richt vervolgens het mes uit met de bovenkant van de hersenen.

Verwijder een tot 1,5 millimeter van de bovenkant van de hersenen. Snijd vervolgens en verwijder meer plakken van 300 tot 500 micrometer terwijl u dieper gaat. Wanneer de inferieure colliculus, de mediale ate-lichaam en de laterale ICT-kern allemaal zichtbaar zijn, zou de dentate gyrus er als een C-vorm uit moeten zien en de structuur zou in lijn moeten zijn.

Verkrijg ongeveer twee plakken van 600 micrometer. Dit zijn de carotale corticale plakken. Breng ze daarna over naar de houderkamer van 32 graden Celsius.

Om de Flavoproteïne Autofluorescentiebeeld te verkrijgen, verzamelt u de beelden bij vier hertz gedurende 105 seconden. Verlicht het weefsel met blauw licht van 470 tot 490 nanometer en leg boven de 515 nanometer vast om ervoor te zorgen dat het beeld niet te donker of te helder is. Gebruik vervolgens elektrische stimulatie om het weefsel te activeren om een calciumbeeld te verkrijgen.

Verzamel beelden bij 10 hertz gedurende 25 seconden. Verlicht het weefsel met 365 nanometer licht en leg fluorescentie boven 510 nanometer vast. Zorg er opnieuw voor dat het beeld niet te donker of te helder is.

Gebruik vervolgens elektrische stimulatie om de cellen te activeren. Dit beeld toont de bevestiging van de carotale corticale verbinding in de hersensnede door Flavoproteïne Autofluorescentie. Elektrische stimulatie gegeven op 0,05 hertz naar de inferieure colus werd afgebeeld bij vier hertz en vier verwerkt om de kracht bij die stimulatie te tonen.

Frequentie, de auditieve thalamus, thalamisch, reticulair, kern en auditieve cortex worden synaptisch geactiveerd. Hier is een onverbonden plak. Elektrische stimulatie van de inferieure colus met activering werd alleen gezien in de auditieve thalamus.

De hele route werd waarschijnlijk niet vastgelegd vanwege een van de sneden die iets uit het vlak was. Met Alam corticale projecties. Dit beeld toont atypische activering van de auditieve cortex.

Elektrische stimulatie van de inferieure colus activeerde de auditieve cortex zonder zichtbaar signaal. In de auditieve thalamus is het waarschijnlijk dat de thalamus nog steeds werd geactiveerd, maar het was niet op het beeldoppervlak. Na het bekijken van deze video zou u een goed begrip moeten hebben van hoe u een AAL-thalamische corticale plak kunt verkrijgen en de connectiviteit ervan kunt beoordelen.