Name: Subcutane Angiotensine II infusie met behulp van osmotische pompen induceert aorta-aneurysmas in Muizen (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2015-09-28T15:00:00.000+00:00
Duration: 7 min 21 s
Description: Leer hoe u subcutane osmotische pompen implanteert bij muizen om aorta-aneurysma's te induceren met angiotensine II. Deze methode maakt langdurige infusie mogelijk voor cardiovasculair onderzoek.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Het onderzoekswerk gepresenteerd in dit manuscript werd ondersteund door een subsidie (HL107319 aan Alan Daugherty en HL107326 aan Lisa A. Cassis) van de National Institutes of Health van de Verenigde Staten van Amerika. De inhoud in dit manuscript valt uitsluitend onder de verantwoordelijkheid van de auteurs en vertegenwoordigt niet noodzakelijkerwijs de officiële standpunten van de National Institutes of Health. De publicatie van dit manuscript werd gesponsord door DURECT Corporation.

Ethiek Verklaring: Muis studies worden uitgevoerd met toestemming van de Universiteit van Kentucky Institutional Animal Care en gebruik Comite (IACUC protocol nummer: 2006-0009). Muizen worden gedood op beëindiging middels een overdosis cocktail van ketamine (~ 210 mg / kg) en xylazine (~ 30 mg / kg). 1. Berekening van Angll Bedrag Opmerking: Dit protocol maakt gebruik van het voorbeeld van infusie van Angll (1000 ng / kg / min) gedurende 4 weken in 4 male LDL receptor - / - muizen die een verzadigd vet verrijkte dieet. <ol><li> Weeg studeren muizen voordat de berekening van Angll nodig voor infusie. </li><li> Met de sjabloon (Tabel 1) om het Angll massa die nodig is voor het experiment berekenen. Gebruik de &quot;Mean pompsnelheid&quot; vermeld in de instructiehandleiding van pompen als de &quot;pompsnelheid&quot; in stap 4 van de template. In de sjabloon, opnemen stappen 1-5 met de hand, en Stappen 6-10 worden automatisch berekend. <ol><li> In de sjabloon wordt aangenomen datmuizen 1 g lichaamsgewicht tijdens infusie van Angll 1000 ng / kg / min gedurende 4 weken. OPMERKING: Elke muis kan heel verschillend lichaamsgewicht die afhankelijk is van vele variabelen, zoals muizenstam en dieet. We routinematig gebruik van &quot;0&quot; of &quot;1 g&quot; op basis van onze eigen ervaring uit eerdere studies. </li><li> Bereken een 300 ul totaal volume van Angll oplossing voor elke muis aangezien elke pomp is ongeveer 250 ul. </li></ol></li></ol> 2. Ontbinding van Angll <ol><li> WINKEL gevriesdroogd Angll flesjes bij -20 ° C. Evenwicht Angll flacons tot kamertemperatuur vóór opening. </li><li> Weeg de berekende massa Angll (7,3 mg zie tabel 1) in een steriele plastic buis. OPMERKING: Per Merck Index, geen glazen buizen gebruikt voor het oplossen aangezien een waterige oplossing van Angll heeft een sterke affiniteit voor binding aan glas. </li><li> Voeg de berekende volume van steriele zoutoplossing (1200 μl) in de kunststof buis met het gevriesdroogde Angll, kap en meng goed door omkering totdat de oplossing helder is. </li><li> Label muis getallen # 1, # 2, # 3 en # 4 individuele steriele plastic buizen met doppen (0,5 - 1,5 ml). Bereid Angll oplossing onder een laminaire kap voor elke muis basis van het lichaamsgewicht, berekend in stap 1.2 en Tabel 1. <ol><li> Bijvoorbeeld, pipet 3,6 ul steriele zoutoplossing in de buis # 1, dan 296,4 ul Angll oplossing, en meng goed door en neer te pipetteren voorzichtig. </li></ol></li><li> Etiket muis nummers op plastic buizen met doppen (4 ml; steriel). Deze zullen worden gebruikt voor de incubatie pompen zoals beschreven in stap 3.13. </li></ol> 3. osmotische pomp Vullen <ol><li> Verkrijgen pompen in twee afzonderlijke delen: het hoofdlichaam van de pomp en de stromingsmoderator (figuur 1). Elke doos heeft 10 pomp organen en stroom moderators die individueel zijn verpakt. Noteer het lotnummer. NB: Draag altijdHandschoenen omdat olie overgebracht van handen om de buitenmantel van de pomp nadelig beïnvloeden pompfunctie. Gebruik steriele handschoenen, gaas, buizen, het vullen van de naald, en wegen boten om de pompen te bereiden, om het risico van besmetting van het implantaat te voorkomen. </li><li> Open alleen het aantal pomp organen en stroom moderators nodig zijn voor het onderzoek, omdat deze niet kan worden opgeslagen eenmaal geopend. Als er meer dan 10 pompen nodig zijn, ervoor zorgen dat de lotnummers van de pompen zijn dezelfde voor een studie, omdat pompen van verschillende lotnummers hebben verschillende Mean Fill Volume en pompsnelheid. </li><li> Weeg elke pomp (met inbegrip van zowel het belangrijkste lichaam en flow moderator), en noteer het gewicht tot 4 decimalen (bijvoorbeeld 1,1443 g muis # 1). Dit gewicht, aangeduid als &quot;Pump gewicht leeg&quot; in de template (Tabel 1), zullen worden gebruikt om de gevulde verhouding berekenen. </li><li> Bevestig de pomp vullen naald om een ​​1 cc steriele spuit en voorzichtig vul de spuit met Angll oplossing uit de juiste wijzegenummerde plastic buis. Het is belangrijk te voorkomen dat er lucht in de injectiespuit. </li><li> Verwijder alle luchtbellen zorgvuldig uit de spuit, terwijl de naald naar beneden wordt geplaatst. Houd de naald / spuit in deze positie om de introductie van luchtbellen in de pomp te voorkomen. </li><li> Steek voorzichtig de vulling naald in het pomphuis. Schuif de punt van de naald in de pomp. Rust niet de punt van de naald stevig op de bodem van de pomp. </li><li> Duw de zuiger langzaam naar de pomp met Angll oplossing te vullen. Een donkere schaduw in de pomp geeft de vulling niveau. Het vulvolume bedraagt ​​ongeveer 246 ui per instructies. </li><li> Stoppen met het vullen van de pomp en verwijder de naald zodra een kraal van de vloeistof stijgt uit de pomp. </li><li> Plaats stromingsmoderator in de pomp door het gat boven op pomplichaam tot geen ruimte gezien tussen de kop van de stromingsmoderator en de bovenkant van het pomphuis (figuur 1). </li><li> Inbrengen van moderatof in het pomphuis leidt tot enige vloeistof uit de opening van de stromingsmoderator. Vlek alle extra vloeistof die tijdens de plaatsing van de beheerders zouden hebben gelekt zorgvuldig. </li><li> Weeg gevulde pomp. Registreer het gewicht onder &quot;Pump Gewicht gevuld&quot; in de sjabloon. </li><li> Bereken Vullen Ratio (%) = (Pump Gewicht &quot;gevuld&quot; - &quot;lege&quot;) x 1000 / betekenen vullen volume x 100. <ol><li> Bereken vullingsgraad zoals aangegeven in tabel 1. Idealiter vullingsgraad moet gelijk of groter dan 100% bedragen. Vulling pomp als de vullingsgraad is &lt;95% (wat impliceert dat luchtbellen kunnen aanwezig zijn in de pomp zijn). </li></ol></li><li> Plaats de gevulde pomp in de gemerkte 4 ml buis (Stap 2.5) met de moderator hoofd naar boven. Voeg voldoende hoeveelheid steriele zoutoplossing om de pomp dekken. Houd de pomp in de buis van zoutoplossing tot de implantatie. </li><li> Plaats buisjes in een 37 ° C incubator. Incubate pompen O / N (minimaal 12 uur) partiële priming staan ​​en vervolgens implanteren in muizen. Pomping van Angll begint ongeveer 24 uur na implantatie, waardoor muizen herstellen van een operatie vóór eventuele spanning die tijdens Angll infusie. </li></ol> 4. Voorbereiding voor Pump Implantatie <ol><li> Autoclaaf (zwaartekracht modus, droge cyclus, 15 min) gaas, wattenstaafjes en chirurgische instrumenten, waaronder een schaar, hemostat, tang, nietjes en nietmachine ten minste 1 dag voorafgaand aan de operatie. </li><li> In een procedure kamer, voor te bereiden verdamper voor anesthesie met isofluraan. Openstellen steriele doeken in een laminaire stroming kap, en plaats neuskegel voor isofluraananesthesie. Plaats betadine, 70% ethanol, steriel water, kraal sterilisator, antiseptische handrub, wattenstaafjes, gaas, en gevuld pompen in een laminaire kap. </li><li> Don een masker en toga, open vervolgens een buitenste laken in een laminaire kap met schone handen. Trek steriele handschoenen en open de steriele verpakking binnen. </li></ol> 5. Chirurgische Procedure van Pump Implantatie <ol><li> Plaats de muis in een inductie Chamber met instroom isofluraan bij een stroomsnelheid van 1,5 - 2%. Controleer de muis tegen 2 - 3 min na decubitus. Scheren een gebied ter grootte van een kwart, over de linker of rechter schouder. </li><li> Plaats de muis in een laminaire kap, met zijn neus vlak met een kegel verbonden isofluraan uitstroom (Figuur 2A). Plaats het hoofd van de muis in de richting van dominante hand van de chirurg. Gebruik vet zalf op de ogen muis tot droog voorkomen terwijl onder narcose. Controleer of de muis geen respons op stimulatie van de pijn voor chirurgie. Bijvoorbeeld, pedaalrespons is een goede indicator voor pijn. </li><li> Wattenstaafje en veeg geschoren met betadine, gevolgd door drie doekjes met 70% ethanol. Don of wijzigen steriele handschoenen. </li><li> Gebruik een chirurgische scalpel op een ~ 1 cm incisie achter het oor over het schouderblad van de voorpoot te maken. Deze incisie moet loodrecht op de staart. Wees voorzichtig om alleen de huid en niet de onderliggende weefsels te snijden. </li><li> Hold krachteeps één kant open incisie, en met de andere hand een subcutane tunnel te maken onder de huid met een hemostaat (figuur 2B). </li><li> Advance hemostaat tip in de richting van de staart, en een zak voor de pomp. Dit wordt bereikt door voorzichtig openen van de kaken van de hemostaat onder de huid te openen een zakje. Trek de hemostaat van incisie. </li><li> Plaats pomp in de incisie met de moderator kop gepositioneerd aan de achterzijde van de muis (Figuur 2C). Duw de pomp volledig in de zak. Er moet voldoende ruimte om de wond te sluiten zonder spanning of uitrekking van de huid. </li><li> Zodra een pomp is geplaatst, stevig knijpen beide zijden van de incisie, het strekken zodat de randen ontmoeten en plaats 1 of 2 wondklemmen te sluiten (figuur 2D). Inspecteer de incisieplaats te zorgen voor volledige sluiting van de wond, en dat de pomp niet direct drukken op het terrein. </li><li> Solliciteer actuele lidocaïne crème(4% w / w) met een schone katoenen swab.Remove muis uit de neuskegel, en plaats deze op een verwarmingselement tot het weer bij bewustzijn. Na het winnen, wordt de muis teruggebracht naar zijn kooi. </li><li> Plaats chirurgische instrumenten in een kraal sterilisator gedurende 10 seconden tussen de muizen. Sta instrumenten afkoelen voor gebruik. Schone handschoenen met een antiseptische handrub tussen muizen. Monitor alle muizen tot volledig herstel is bereikt. </li><li> Monitor muizen worden kort na de operatie. Injecteren van een bolus van steriele zoutoplossing (0,2-0,3 ml) subcutaan als een muis toont tekenen van angst, uitdroging of schijnbare gewichtsverlies. Observeren muizen ten minste tweemaal per dag gedurende de eerste 10 dagen, en ten minste eenmaal per dag daarna. Voer een autopsie onmiddellijk als een muizen sterven tijdens Angll infusie. Verwijder wondklemmen tussen 7 - 14 dagen na de operatie. </li></ol> 6. Oogsten, reparatie, reiniging en Imaging van de aorta <ol><li> Opengesneden de muis borst- en buikholte ventraal, snijd open rechter atrium, perfuseren met een zoutoplossing door de linker ventrikel van het hart om bloed in de aorta te verwijderen, en dan oogsten van de aorta 27. </li><li> Plaats geoogst aorta in plastic buizen die ten minste 3 ml van 4% paraformaldehyde en 10% neutraal gebufferde formaline gedurende 24 - 48 uur 27. </li><li> Verwijder adventitiale weefsels zorgvuldig. Pin aorta op zwart was met pinnen. Verwerven aorta beelden met dezelfde vergroting. Neem een liniaal in elk voor kalibratie, zie figuur 3. </li></ol> 7. En face Imaging van de aorta <ol><li> Opengesneden aorta lengterichting door de buitenste en binnenste kromming van aortaboog en opengesneden grote takken waaronder innominate, linker halsslagader en linker subclavia. Pin aorta vlak met buitenste adventitiale leggen naast de zwarte was. </li><li> Verwerven en face beeld van het oppervlak van intimale aorta bij dezelfde vergroting. Zoals een heerser in elk beeld voor de kalibratie, zoals getoondn in figuur 4. </li></ol>

<ol><li>Pyo, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Targeted+gene+disruption+of+matrix+metalloproteinase-9+%28gelatinase+B%29+suppresses+development+of+experimental+abdominal+aortic+aneurysms%5BTitle%5D)+AND+%22J+Clin+Invest%22%5BJournal%5D)">Targeted gene disruption of matrix metalloproteinase-9 (gelatinase B) suppresses development of experimental abdominal aortic aneurysms.</a> J Clin Invest. 105 (11), 1641-1649 (2000).</li>
<li>Chiou, A. C., Chiu, B., Pearce, W. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Murine+aortic+aneurysm+produced+by+periarterial+application+of+calcium+chloride%5BTitle%5D)+AND+%22J+Surg+Res%22%5BJournal%5D)">Murine aortic aneurysm produced by periarterial application of calcium chloride.</a> J Surg Res. 99 (2), 371-376 (2001).</li>
<li>Daugherty, A., Cassis, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Chronic+angiotensin+II+infusion+promotes+atherogenesis+in+low+density+lipoprotein+receptor+-%2F-+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Ann+NY+Acad+Sci%22%5BJournal%5D)">Chronic angiotensin II infusion promotes atherogenesis in low density lipoprotein receptor -/- mice.</a> Ann NY Acad Sci. 892 (1), 108-118 (1999).</li>
<li>Daugherty, A., Manning, M. W., Cassis, L. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Angiotensin+II+promotes+atherosclerotic+lesions+and+aneurysms+in+apolipoprotein+E-deficient+mice%5BTitle%5D)+AND+%22J+Clin+Invest%22%5BJournal%5D)">Angiotensin II promotes atherosclerotic lesions and aneurysms in apolipoprotein E-deficient mice.</a> J Clin Invest. 105 (11), 1605-1612 (2000).</li>
<li>Deng, G. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Urokinase-type+plasminogen+activator+plays+a+critical+role+in+angiotensin+II-induced+abdominal+aortic+aneurysm%5BTitle%5D)+AND+%22Circ+Res%22%5BJournal%5D)">Urokinase-type plasminogen activator plays a critical role in angiotensin II-induced abdominal aortic aneurysm.</a> Circ Res. 92 (5), 510-517 (2003).</li>
<li>King, V. L., Trivedi, D., Gitlin, J. M., Loftin, C. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Selective+cyclooxygenase-2+inhibition+with+celecoxib+decreases+angiotensin+II-induced+abdominal+aortic+aneurysm+formation+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Arterioscler+Thromb+Vasc+Biol%22%5BJournal%5D)">Selective cyclooxygenase-2 inhibition with celecoxib decreases angiotensin II-induced abdominal aortic aneurysm formation in mice.</a> Arterioscler Thromb Vasc Biol. 26 (5), 1137-1143 (2006).</li>
<li>Uchida, H. A., Poduri, A., Subramanian, V., Cassis, L. A., Daugherty, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Urokinase-type+plasminogen+activator+deficiency+in+bone+marrow-derived+cells+augments+rupture+of+angiotensin+II-induced+abdominal+aortic+aneurysms%5BTitle%5D)+AND+%22Arterioscler+Thromb+Vasc+Biol%22%5BJournal%5D)">Urokinase-type plasminogen activator deficiency in bone marrow-derived cells augments rupture of angiotensin II-induced abdominal aortic aneurysms.</a> Arterioscler Thromb Vasc Biol. 31 (12), 2845-2852 (2011).</li>
<li>Wang, Y. X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Angiotensin+II+increases+urokinase-type+plasminogen+activator+expression+and+induces+aneurysm+in+the+abdominal+aorta+of+apolipoprotein+E-deficient+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Pathol%22%5BJournal%5D)">Angiotensin II increases urokinase-type plasminogen activator expression and induces aneurysm in the abdominal aorta of apolipoprotein E-deficient mice.</a> Am J Pathol. 159 (4), 1455-1464 (2001).</li>
<li>Bruemmer, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Angiotensin+II-accelerated+atherosclerosis+and+aneurysm+formation+is+attenuated+in+osteopontin-deficient+mice%5BTitle%5D)+AND+%22J+Clin+Invest%22%5BJournal%5D)">Angiotensin II-accelerated atherosclerosis and aneurysm formation is attenuated in osteopontin-deficient mice.</a> J Clin Invest. 112 (9), 1318-1331 (2003).</li>
<li>Gavrila, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Vitamin+E+inhibits+abdominal+aortic+aneurysm+formation+in+angiotensin+II-infused+apolipoprotein+E-deficient+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Arterioscler+Thromb+Vasc+Biol%22%5BJournal%5D)">Vitamin E inhibits abdominal aortic aneurysm formation in angiotensin II-infused apolipoprotein E-deficient mice.</a> Arterioscler Thromb Vasc Biol. 25 (8), 1671-1677 (2005).</li>
<li>Wang, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((IgE+actions+on+CD4%2B+T+cells%2C+mast+cells%2C+and+macrophages+participate+in+the+pathogenesis+of+experimental+abdominal+aortic+aneurysms%5BTitle%5D)+AND+%22EMBO+Mol+Med%22%5BJournal%5D)">IgE actions on CD4+ T cells, mast cells, and macrophages participate in the pathogenesis of experimental abdominal aortic aneurysms.</a> EMBO Mol Med. 6 (7), 952-969 (2014).</li>
<li>Yoshimura, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Regression+of+abdominal+aortic+aneurysm+by+inhibition+of+c-Jun+N-terminal+kinase%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Med%22%5BJournal%5D)">Regression of abdominal aortic aneurysm by inhibition of c-Jun N-terminal kinase.</a> Nat Med. 11 (12), 1330-1338 (2005).</li>
<li>Usui, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Inflammasome+activation+by+mitochondrial+oxidative+stress+in+macrophages+leads+to+the+development+of+angiotensin+II-induced+aortic+aneurysm%5BTitle%5D)+AND+%22Arterioscler+Thromb+Vasc+Biol%22%5BJournal%5D)">Inflammasome activation by mitochondrial oxidative stress in macrophages leads to the development of angiotensin II-induced aortic aneurysm.</a> Arterioscler Thromb Vasc Biol. 35 (1), 127-136 (2015).</li>
<li>Mellak, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Angiotensin+II+mobilizes+spleen+monocytes+to+promote+the+development+of+abdominal+aortic+aneurysm+in+apoe-%2F-+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Arterioscler+Thromb+Vasc+Biol%22%5BJournal%5D)">Angiotensin II mobilizes spleen monocytes to promote the development of abdominal aortic aneurysm in apoe-/- mice.</a> Arterioscler Thromb Vasc Biol. 35 (2), 378-388 (2015).</li>
<li>Krishna, S. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Peptide+antagonist+of+thrombospondin-1+promotes+abdominal+aortic+aneurysm+progression+in+the+angiotensin+II-infused+apolipoprotein-E-deficient+mouse%5BTitle%5D)+AND+%22Arterioscler+Thromb+Vasc+Biol%22%5BJournal%5D)">Peptide antagonist of thrombospondin-1 promotes abdominal aortic aneurysm progression in the angiotensin II-infused apolipoprotein-E-deficient mouse.</a> Arterioscler Thromb Vasc Biol. 35 (2), 389-398 (2015).</li>
<li>Norman, P. E., Curci, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Understanding+the+effects+of+tobacco+smoke+on+the+pathogenesis+of+aortic+aneurysm%5BTitle%5D)+AND+%22Arterioscler+Thromb+Vasc+Biol%22%5BJournal%5D)">Understanding the effects of tobacco smoke on the pathogenesis of aortic aneurysm.</a> Arterioscler Thromb Vasc Biol. 33 (7), 1473-1477 (2013).</li>
<li>Daugherty, A., Powell, J. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Recent+highlights+of+ATVB%3A+aneurysms%5BTitle%5D)+AND+%22Arterioscler+Thromb+Vasc+Biol%22%5BJournal%5D)">Recent highlights of ATVB: aneurysms.</a> Arterioscler Thromb Vasc Biol. 34 (4), 691-694 (2014).</li>
<li>Liu, J., Daugherty, A., Lu, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Angiotensin+II+and+abdominal+aortic+aneurysms%3A+an+update%5BTitle%5D)+AND+%22Curr+Pharm+Design%22%5BJournal%5D)">Angiotensin II and abdominal aortic aneurysms: an update.</a> Curr Pharm Design. , (2015).</li>
<li>Rateri, D. L., Howatt, D. A., Moorleghen, J. J., Charnigo, R., Cassis, L. A., Daugherty, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Prolonged+infusion+of+angiotensin+II+in+apoE%28-%2F-%29+mice+promotes+macrophage+recruitment+with+continued+expansion+of+abdominal+aortic+aneurysm%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Pathol%22%5BJournal%5D)">Prolonged infusion of angiotensin II in apoE(-/-) mice promotes macrophage recruitment with continued expansion of abdominal aortic aneurysm.</a> Am J Pathol. 179 (3), 1542-1548 (2011).</li>
<li>Saraff, K., Babamusta, F., Cassis, L. A., Daugherty, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Aortic+dissection+precedes+formation+of+aneurysms+and+atherosclerosis+in+angiotensin+II-infused%2C+apolipoprotein+E-deficient+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Arterioscler+Thromb+Vasc+Biol%22%5BJournal%5D)">Aortic dissection precedes formation of aneurysms and atherosclerosis in angiotensin II-infused, apolipoprotein E-deficient mice.</a> Arterioscler Thromb Vasc Biol. 23 (9), 1621-1626 (2003).</li>
<li>Daugherty, A., Cassis, L. A., Lu, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Complex+pathologies+of+angiotensin+II-induced+abdominal+aortic+aneurysms%5BTitle%5D)+AND+%22J+Zhejiang+Univ+Sci+B%22%5BJournal%5D)">Complex pathologies of angiotensin II-induced abdominal aortic aneurysms.</a> J Zhejiang Univ Sci B. 12 (8), 624-628 (2011).</li>
<li>Daugherty, A., Rateri, D. L., Charo, I. F., Owens, A. P., Howatt, D. A., Cassis, L. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Angiotensin+II+infusion+promotes+ascending+aortic+aneurysms%3A+attenuation+by+CCR2+deficiency+in+apoE-%2F-+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Clin+Sci+%28Lond%29%22%5BJournal%5D)">Angiotensin II infusion promotes ascending aortic aneurysms: attenuation by CCR2 deficiency in apoE-/- mice.</a> Clin Sci (Lond). 118 (11), 681-689 (2010).</li>
<li>Rateri, D. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Endothelial+cell-specific+deficiency+of+Ang+II+type+1a+receptors+attenuates+Ang+II-induced+ascending+aortic+aneurysms+in+LDL+receptor-%2F-+mice%29%5BTitle%5D)+AND+%22Circ+Res%22%5BJournal%5D)">Endothelial cell-specific deficiency of Ang II type 1a receptors attenuates Ang II-induced ascending aortic aneurysms in LDL receptor-/- mice).</a> Circ Res. 108 (5), 574-581 (2011).</li>
<li>Rateri, D. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Depletion+of+endothelial+or+smooth+muscle+cell-specific+angiotensin+II+type+1a+receptors+does+not+influence+aortic+aneurysms+or+atherosclerosis+in+LDL+receptor+deficient+mice%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Depletion of endothelial or smooth muscle cell-specific angiotensin II type 1a receptors does not influence aortic aneurysms or atherosclerosis in LDL receptor deficient mice.</a> PLoS One. 7 (12), 10-1371 (2012).</li>
<li>Rateri, D. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Angiotensin+II+induces+region-specific+medial+disruption+during+evolution+of+ascending+aortic+aneurysms%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Pathol%22%5BJournal%5D)">Angiotensin II induces region-specific medial disruption during evolution of ascending aortic aneurysms.</a> Am J Pathol. 184 (9), 2586-2595 (2014).</li>
<li>Davis, F. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Smooth+muscle+cell+deletion+of+low-density+lipoprotein+receptor-related+protein+1+augments+angiotensin+II-induced+superior+mesenteric+arterial+and+ascending+aortic+aneurysms%5BTitle%5D)+AND+%22Arterioscler+Thromb+Vasc+Biol%22%5BJournal%5D)">Smooth muscle cell deletion of low-density lipoprotein receptor-related protein 1 augments angiotensin II-induced superior mesenteric arterial and ascending aortic aneurysms.</a> Arterioscler Thromb Vasc Biol. 35 (1), 155-162 (2015).</li>
<li>Daugherty, A., Rateri, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Development+of+experimental+designs+for+atherosclerosis+studies+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Methods%22%5BJournal%5D)">Development of experimental designs for atherosclerosis studies in mice.</a> Methods. 36 (2), 129-138 (2005).</li>
<li>Henriques, T. A., Huang, J., D'Souza, S. S., Daugherty, A., Cassis, L. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Orchidectomy%2C+but+not+ovariectomy%2C+regulates+angiotensin+II-induced+vascular+diseases+in+apolipoprotein+E-deficient+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Endocrinology%22%5BJournal%5D)">Orchidectomy, but not ovariectomy, regulates angiotensin II-induced vascular diseases in apolipoprotein E-deficient mice.</a> Endocrinology. 145 (8), 3866-3872 (2004).</li>
<li>Daugherty, A., Manning, M. W., Cassis, L. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Antagonism+of+AT2+receptors+augments+angiotensin+II-induced+abdominal+aortic+aneurysms+and+atherosclerosis%5BTitle%5D)+AND+%22Br+J+Pharmacol%22%5BJournal%5D)">Antagonism of AT2 receptors augments angiotensin II-induced abdominal aortic aneurysms and atherosclerosis.</a> Br J Pharmacol. 134 (4), 865-870 (2001).</li>
<li>Wang, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Deficiency+of+receptor-associated+protein+attenuates+angiotensin+II-induced+atherosclerosis+in+hypercholesterolemic+mice+without+influencing+abdominal+aortic+aneurysms%5BTitle%5D)+AND+%22Atherosclerosis%22%5BJournal%5D)">Deficiency of receptor-associated protein attenuates angiotensin II-induced atherosclerosis in hypercholesterolemic mice without influencing abdominal aortic aneurysms.</a> Atherosclerosis. 220 (2), 375-380 (2011).</li>
<li>Daugherty, A., Rateri, D., Lu, H., Balakrishnan, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Measuring+blood+pressure+in+mice+using+volume+pressure+recording%2C+a+tail-cuff+method%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Measuring blood pressure in mice using volume pressure recording, a tail-cuff method.</a> J Vis Exp. (27), e1291(2009).</li>
</ol>

Publicatie van dit artikel wordt gesponsord door Alzet.

Osmotische pompen leveren Angll subcutaan is een routine benadering induceren aorta aneurysma&#39;s in muizen. Op basis van gegevens uit vele laboratoria, zijn er consistente bevindingen dat dit een betrouwbare en reproduceerbare wijze zowel AAAs 3,4 en TAA&#39;s 22-26 in muizen te bestuderen. Daarom wordt dit muismodel als een model dat verschillende kenmerken van de menselijke aorta aneurysma recapituleert en geeft mechanistische inzicht in deze verwoestende ziektes. Hoewel veroudering een risicofactor voor AAAs bij de mens, het is niet systematisch onderzocht voor Angll geïnduceerde AAA bij muizen. Toch lijkt incidentie en ernst van Angll-geïnduceerde AAAs vergelijkbaar in muizen op de leeftijd van 8 - 48 weken 4,5,7. Momenteel zijn er slechts enkele studies rapporteren AngII geïnduceerde TAA&#39;s in muizen op de leeftijd van 8 - 24 weken 22-26, die duidelijk leeftijdsgebonden verschillen op TAA formatie niet vertoonde. Vrouwelijke muizen hebben een veel lagere incidentie van AAA dan mannelijke muizen toegediend met AngII 4,28. Het is vermeldenswaard dat de incidentie van Ang II geïnduceerde AAA veel hoger dan in hyper- normo-cholesterolemic muizen, die meer dan 50% versus minder dan 30%, respectievelijk. Daarnaast aortaruptuur is frequent (ongeveer 10 - 30%) in zowel normo- en hypercholesterolemie muizen tijdens Angll infusie. Infusie van Angll een snelheid van 1000 ng / kg / min in hypercholesterolemische muizen, zoals LDL receptor - / - muizen die een westers dieet of apolipoproteïne (apoE) - / - muizen die een normale of westers dieet heeft maximale effecten op AAA ontwikkeling 3,4,29. Dit infusiesnelheid is optimaal voor een studie waarin het manipuleren van een gen van interesse in hypercholesterolemische muizen verwacht AAA verminderen. Als een manipulatie hypercholesterolemische muizen verwacht vergroten AAA, wordt aanbevolen AngII infusie met een snelheid van 500 ng / kg / min of lager 30. In tegenstelling tot AAAs, is er geen demonstratienstrated associatie tussen mannelijk geslacht of hypercholesterolemie en Angll geïnduceerde TAA&#39;s 25. Echter, net als bij AAAs als manipulatie van een gen van belang wordt verwacht vergroten TAA aanbevolen een lagere infusiesnelheid dan 1000 ng / kg / min gedurende Angll infusie. Het is ook belangrijk te weten dat de incidentie en ernst van Angll-geïnduceerde aorta aneurysma variëren tussen individuele muizen en tussen studies. Als muizen niet aorta aneurysma ontwikkelen één potentiële mogelijkheid is dat Angll mogelijk niet succesvol in muizen opgeleverd. Voor de validatie van een hoge infusiesnelheid van AngII, zoals de 1000 ng / kg / min, het meten van de bloeddruk wordt aanbevolen vóór en tijdens Angll infusie met behulp van een niet-invasieve staart-cuff-methode 31. Angll infuus met een snelheid van 1000 ng / kg / min stijgt systolische bloeddruk bij muizen. Ook kan het plasma renine concentraties gedurende Angll infusie of bij beëindiging sinds Angll heeft een negatieve feedback op r worden gemetenENIN secretie. Daarom Angll infusie leidt tot verlaging van plasma renine concentratie. Als een muis doordrenkt met AngII geen duidelijk aorta pathologieën, geen toename van de bloeddruk, en geen afname van plasma renine concentratie zou aangeven dat Angll is niet efficiënt via geïmplanteerde osmotische minipomp opgeleverd. Wij raden het verwijderen van deze muis uit de studie. Het is ook belangrijk op te merken dat sommige muizen niet ontwikkelen aorta-aneurysma&#39;s ondanks de toegenomen systolische bloeddruk en verminderde plasma renine concentraties. Indien deze muizen in de studie blijven. Samenvattend wordt AngII infuus bereikt door subcutane implantatie via osmotische pompen aorta aneurysma&#39;s bij de muis. Deze methode levert AngII constant bij een bepaalde snelheid van de aangewezen tijdsduren die worden gebruikt om zowel AAAs en TAA&#39;s te bestuderen.

Aorta-aneurysma&#39;s vertonen permanente luminal uitbreiding van de aorta die breuk voorspelt en meestal leidt tot de dood. Deze ziekte komt zowel abdominale en thoracale aorta&#39;s, die worden aangeduid als abdominale aorta aneurysma (AAA) en thoracale aorta aneurysma&#39;s (TAA&#39;s), respectievelijk. Als gevolg van een onvolledig begrijpen van de moleculaire mechanismen en pathofysiologische processen, is er geen bewezen medische therapie die uitzetting of breuk van elk type aorta aneurysma kan voorkomen. Omdat het moeilijk is om patiëntenmonsters verwerven en experimenten bij mensen direct onderzoek gericht op het definiëren van mechanismen van AAA is herhaaldelijk geëxtrapoleerd uit diermodellen. Een veelgebruikt diermodel subcutaan infuus van angiotensine II (Ang II) in muizen. In vergelijking met andere chirurgische benaderingen voor het induceren AAAs bij muizen, zoals intra-aorta elastase perfusie of peri-aorta toepassing van calciumchloride die vereisen laparotomie 1,2 Deze method niet binnenkomst in de lichaamsholte vereist en vereist een minimale chirurgische deskundigheid 3,4. Subcutane infusie van Angll osmotische pompen AAAs induceren eerste instantie in low density lipoproteïne (LDL) receptor - / - muizen die een verzadigd vet verrijkte dieet 3 en vervolgens in apoE - / - muizen die normaal laboratorium voeding 4. Veel recente studies hebben ook aangetoond dat AngII induceert AAAs in normolipidemische muizen 5-7. De aanpak van infusie AngII is toegepast op AAAs induceren en staand moleculaire mechanismen en voor de ontwikkeling van mogelijke therapeutische strategieën (bijvoorbeeld 5-15) aangezien dit model recapituleert veel functies waargenomen in menselijke AAA. Bijvoorbeeld, de risicofactoren van menselijke AAAs zoals roken, veroudering, en mannelijk geslacht ook vergroten Angll geïnduceerde AAAs in muizen 16,17. De associatie van hypercholesterolemie met AAAs bij de mens vraagt ​​verduidelijking. Het heeft echter zijnen logisch dat hypercholesterolemie verhoogt AngII geïnduceerde AAAs bij muizen 18. Pathologieën van Angll geïnduceerde AAAs in muizen zijn zeer heterogeen en worden gekenmerkt door diepe macrofaag infiltratie, collageenafbraak, trombotische vorming en de resolutie, en neovascularisatie 19-21. In tegenstelling tot de meest voorkomende infrarenale aorta locatie van AAAs bij de mens, AngII geïnduceerde AAAs bij muizen voorkomen in het suprarenale aorta regio. Een ander kenmerk van Angll alomtegenwoordig geïnduceerde AAA is de transmurale mediale breken, wat leidt tot transmurale trombose. Het is onduidelijk of transmuraal elastine breuk optreedt bij de mens sinds pathologische ontwikkeling van AAAs bij mensen is niet uitsluitend onderzocht door een gebrek aan aneurysma weefsel van eerdere stadia. Angll infusie in muizen leidt tot diepgaande expansie van de thoracale aorta gebied, dat voornamelijk beperkt is tot de omhooggaande aorta, de meest voorkomende regio TAA bij de mens <sup&gt; 19,22-26. Vergelijkbaar met Angll geïnduceerde AAAs, TAA veroorzaakte tijdens Angll infusie ook recapituleren vele functies van het menselijk TAA&#39;s 25. Echter, in tegenstelling tot AngII geïnduceerde AAAs, AngII geïnduceerde TAA&#39;s zijn niet geassocieerd met hypercholesterolemie en hebben genderverschillen hebben. De algemene doelstelling van subcutane Angll infusie in muizen is om pathologische kenmerken en moleculaire mechanismen van AAA en TAA&#39;s te bestuderen.

<table><tbody><tr><td>Angiotensin II</td><td>Bachem</td><td>H-1705</td><td>verbinding gebruikt om aortische aneurysma's te induceren</td></tr><tr><td>Alzet Osmotic Pumps</td><td>DURECT Corporation</td><td>Alzet Model 2004</td><td>haalbaar voor 28-daagse infusie bij muizen met een gewicht > 20 g</td></tr><tr><td>Verzadigd vet verrijkt dieet</td><td>Harlan Teklad</td><td>TD.88137</td><td>42% calorieën/calorieën om hypercholesterolemie te stimuleren in LDL-receptor -/- muizen</td></tr></tbody></table>

subcutane angiotensine ii infusie met behulp van osmotische pompen induceert aorta-aneurysma&#39;s in muizen

Subcutaneous Angiotensin II Infusion using Osmotic Pumps Induces Aortic Aneurysms in Mice

Osmotische pompen leveren continu verbindingen met een constante snelheid af in kleine dieren. Dit artikel introduceert een standaardprotocol dat wordt gebruikt om aorta-aneurysmata te induceren via subcutane infusie van angiotensine II (AngII) vanuit geïmplanteerde osmotische pompen. Dit protocol omvat berekening van de hoeveelheid AngII en oplossing, het vullen van osmotische pompen, het subcutaan implanteren van osmotische pompen, observatie na pompimplantatie en het oogsten van aorta's om aorta-aneurysmata bij muizen te visualiseren. Subcutane infusie van AngII via osmotische pompen volgens dit protocol is een betrouwbare en reproduceerbare techniek om zowel abdominale als thoracale aorta-aneurysmata bij muizen te induceren. De infusieduur varieert van enkele dagen tot enkele maanden, afhankelijk van het doel van het onderzoek. AngII van 1.000 ng/kg/min is voldoende om maximale effecten op de vorming van abdominale aorta-aneurysmata te bieden bij mannelijke hypercholesterolemische muismodellen, zoals apolipoproteïne E-deficiënte of lagedichtheidslipoproteïnereceptor-deficiënte muizen. De incidentie van abdominale aorta-aneurysmata geïnduceerd door AngII-infusie via osmotische pompen is 5 - 10 keer lager bij vrouwelijke hypercholesterolemische muizen en ook lager bij beide geslachten van normocholesterolemische muizen. In tegenstelling daarmee zijn AngII-geïnduceerde thoracale aorta-aneurysmata bij muizen niet afhankelijk van hypercholesterolemie of geslacht. Belangrijk is dat meerdere kenmerken van dit muismodel die van humane aorta-aneurysmata nabootsen.

De 4 male LDL receptor - / - muizen in het protocol beschreven werden gedood na 4 weken van Angll infusie. Aorta&#39;s werden geoogst, schoongemaakt, en afgebeeld aan de aorta dilations visualiseren. Zoals getoond in figuur 3, aorta&#39;s hebben verschillende kenmerken, zoals uitbreiding van de suprarenale gebied (AAA Figuur 3A), uitbreiding van de opgaande gebied (TAA Figuur 3B) of expansie van beide gebieden (aanwezigheid van zowel AAAs en TAA Figuur 3C), terwijl de morfologie in één muis was schromelijk normaal (Figuur 3D). Verwijding van de abdominale aorta wordt gekwantificeerd door de ex vivo maximale breedte van de suprarenale regio, zoals blijkt uit de rode lijn in figuur 3A. Meten stijgende aorta dilatatie werden aorta opengesneden en vastgezet zoals weergegeven in figuur 4. Intimale oppervlaktegebied werd gemeten in de opgaande aorta gebied (gebied omringd door the rode lijnen in Figuur 4A) kwantificeerbaar TAA&#39;s. Een liniaal was in elk beeld om metingen te standaardiseren, zoals weergegeven in beide figuren 3 en 4. <img alt="Figuur 1" src="/files/ftp_upload/53191/53191fig1.jpg" /> . Figuur 1. representatief beeld van gevulde osmotische pomp Elke pomp bestaat uit twee afzonderlijke delen: een hoofdlichaam en een stroom moderator. Na het vullen van het pomphuis met AngII, wordt de stromingsmoderator ingebracht om de pomp af te dichten. <img alt="Figuur 2" src="/files/ftp_upload/53191/53191fig2.jpg" /> Figuur 2. Proces pomp implantatiechirurgie (A) Mouse wordt in een laminaire kap met een neuskegel die ze continue isofluraan en zuurstof.; (B) Een rechte hemostaat wordt in de huid incisie met een subcutane tunnel maken ingebracht; (C) Pomp wordt door de ingebracht<html> huidincisie zachtjes; (D) De huid incisie wordt geniet na de pomp inbrengen. <img alt="Figuur 3" src="/files/ftp_upload/53191/53191fig3.jpg" /> Figuur 3. Aorta afbeeldingen (ex vivo) van muizen toegediend met AngII AngII 1000 ng / kg / min werd toegediend bij mannelijke LDL receptor -. / - Muizen gedurende 28 dagen. (A) AAAs vergezeld trombose; Rode lijn (2,05 mm) geeft de meting van de maximale breedte van de aorta in de bijnieren regio. (B) oplopend aorta dilatatie (TAA) met grove normale abdominale aorta; (C) Profound verwijdingen in zowel de opgaande en suprarenale aorta regio&#39;s (TAA&#39;s en AAA); (D) grove normale aorta zonder duidelijke verwijding van oplopende of suprarenale aorta regio. 4.jpg &quot;/&gt; Figuur 4. En gezichtsbeelden van thoracale aorta&#39;s van muizen toegediend met AngII AngII 1000 ng / kg / min werd toegediend bij mannelijke LDL receptor -. / - Muizen gedurende 28 dagen. Oppervlakte met een rode lijn geschetst representeert de oplopende aorta-regio, inclusief een deel van de aortaboog. <table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0"><tbody><tr><td> 1 </td><td colspan="2"> Dosis nodig </td><td></td><td> 1000 </td><td colspan="2"> ng / kg / min </td><td></td></tr><tr><td> 2 </td><td colspan="3"> Start lichaamsgewicht (grootste muis) </td><td> 24.8 </td><td> g </td><td></td><td></td></tr><tr><td> 3 </td><td colspan="3"> Totale geschatte gewichtstoename </td><td> 1 </td><td> g </td><td></td><td></td></tr><tr><td> 4 </td><td> Pompsnelheid </td><td></td><td></td><td> 0.25 </td><td> gl / hr </td><td></td><td></td></tr><tr><td> 5 </td><td colspan="2"> Number muizen </td><td></td><td> 4 </td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td> 6 </td><td colspan="2"> Dosis per uur voor dierlijke </td><td></td><td> 1518 </td><td> ng </td><td></td><td></td></tr><tr><td> 7 </td><td> Conc nodig </td><td></td><td></td><td> 6072 </td><td> ng / ul </td><td></td><td></td></tr><tr><td> 8 </td><td colspan="2"> Voor 300 ul oplossing </td><td></td><td> 1.82 </td><td colspan="2"> mg / 300 gl </td><td></td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td></td><td colspan="2"> OPLOSSING NODIG </td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td> 9 </td><td colspan="2"> Totaal Angll (mg) </td><td></td><td> 7.3 </td><td> mg </td><td></td><td></td></tr><tr><td> 10 </td><td colspan="2"> Opgelost in een zoutoplossing &amp;# 160; </td><td></td><td> 1200 </td><td> pi </td><td></td><td></td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td colspan="2"></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td> Muis </td><td> Lichaamsgewicht </td><td> Verdunningsfactor </td><td colspan="2"> Volume (pl) </td><td colspan="2"> Pomp Gewicht (g) </td><td> Gevuld Ratio </td></tr><tr><td> # </td><td> (g) </td><td></td><td> Angll </td><td> Zoutoplossing </td><td> Leeg </td><td> Gevulde </td><td> (%) </td></tr><tr><td> 1 </td><td> 24.5 </td><td> 1.0 </td><td> 296,4 </td><td> 3.6 </td><td> 1,1443 </td><td> 1,3877 </td><td> 99 </td></tr><tr><td> 2 </td><td> 23.0 </td><td> 0.9 </td><td> 278,2 </td><td> 21.8 </td><td> 1,1677 </td><td> 1,4145 </td><td> 100 </td></tr><tr><td> 3 </td><td> 24.8 </td><td> 1.0 </td><td> 300,0 </td><td> 0.0 </td><td> 1,1438 </td><td> 1,3904 </td><td> 100 </td></tr><tr><td> 4 </td><td> 21.8 </td><td> 0.9 </td><td> 263,7 </td><td> 36.3 </td><td> 1,1438 </td><td> 1,3904 </td><td> 100 </td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td colspan="7"> Verdunningsfactor = lichaamsgewicht van de muis / lichaamsgewicht van de grootste muis </td><td></td></tr></tbody></table><table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0"><tbody><tr><td> Muis </td><td> Lichaamsgewicht </td><td> Verdunningsfactor </td><td colspan="2"> Volume (pl) </td><td colspan="2"> Pomp Gewicht (g) </td><td> Gevuld Ratio </td></tr><tr><td> # </td><td> (g) </td><td></td><td> Angll </td><td> Zoutoplossing </td><td> Leeg </td><td> Gevulde </td><td> (%) </td></tr><tr><td> 1 </td><td> 24.5 </td><td> 1.0 </td><td> 296,4 </td><td> 3.6 </td><td> 1,1443 </td><td> 1,3877 </td><td> 99 </td></tr><tr><td> 2 </td><td> 23.0 </td><td> 0.9 </td><td> 278,2 </td><td> 21.8 </td><td> 1,1677 </td><td> 1,4145 </td><td> 100 </td></tr><tr><td> 3 </td><td> 24.8 </td><td> 1.0 </td><td> 300,0 </td><td> 0.0 </td><td> 1,1438 </td><td> 1,3904 </td><td> 100 </td></tr><tr><td> 4 </td><td> 21.8 </td><td> 0.9 </td><td> 263,7 </td><td> 36.3 </td><td> 1,1438 </td><td> 1,3904 </td><td> 100 </td></tr></tbody></table> Tabel 1: Berekening voor 28-daagse infusie via osmotische pompen.

Onderhuidse implantatie van osmotische pompen biedt een handige aanpak voor langdurige en consistente levering van verbindingen. Deze benadering is uitgebreid gebruikt voor zowel abdominale en thoracale aorta aneurysma&#39;s in muizen te bestuderen.

Subcutane Angiotensine II infusie met behulp van osmotische pompen induceert aorta-aneurysma&#39;s in Muizen

Osmotic pumps continuously deliver compounds at a constant rate into small animals.  This article introduces a standard protocol used to induce aortic ...

Het algemene doel van deze procedure is om de pathologische kenmerken en moleculaire mechanismen van aortaneurysma's bij muizen te bestuderen. Dit wordt bereikt door eerst een osmotische pomp voor te bereiden met een angiotensin two-oplossing. Vervolgens wordt er een zakje in de huid van de rug van het dier gemaakt waarin de pomp wordt geplaatst.Uiteindelijk kan de dilatatie van de aorta in de thoracische en abdominale aortagebieden worden beoordeeld via ex vivo beeldvorming. We hebben deze techniek eerst geïmplementeerd omdat we de rol van de bloeddruk wilden definiëren tijdens de infusie van angiotensine om de ontwikkeling van atherosclerose te bevorderen. De procedure zal worden gedemonstreerd door Deborah Hart en Angio banan, beiden leden van het Soha Cardiovascular Research Center, om de osmotische pompen te vullen.Begin met het noteren van het lotnummer van de pompen en stroommodulatoren die bij de hoofdeenheid van de pomp en de stroommodulator zijn geleverd. Draag handschoenen om te voorkomen dat er huidvet op de buitenbehuizing van de pomp terechtkomt. Open vervolgens alleen het aantal pompen en stroommodulatoren dat nodig is voor de studie.Weeg vervolgens elke pomp, inclusief zowel het hoofdlichaam als de stroommoderator, en noteer het gewicht tot vier decimalen. Dit gewicht, in het sjabloon aangeduid als het pompgewicht leeg, zal worden gebruikt om de vulratio te berekenen wanneer alle pompen zijn gewogen. Bevestig de naald voor het vullen van de pomp aan een steriele spuit van 1 cc en vul de spuit voorzichtig met vers bereide angiotensin twee-oplossing uit de plastic buis met het juiste nummer.Verwijder zorgvuldig alle luchtbellen uit de spuit terwijl de naald naar beneden is gericht. Houd de spuit vervolgens in deze positie om te voorkomen dat er luchtbellen in de pomp terechtkomen. Steek de vulnaald voorzichtig in het pomphuis.Zodra de naald op zijn plaats zit, schuift u de punt in de pomp totdat deze net de bodem van de pomp raakt. Druk vervolgens langzaam de zuiger in om ongeveer 246 microliters van de oplossing te dispenseren. De donkere schaduw binnenin de pomp kan worden gebruikt om het vulniveau te bewaken.De pomp is vol. Wanneer er een druppel vloeistof uit de pomp omhoog komt, verwijdert u voorzichtig de naald en plaatst u de stroomregelaar in de pomp via het gat aan de bovenzijde van het pomphuis, totdat er geen opening meer zichtbaar is tussen de kop van de stroomregelaar en de bovenkant van het pomphuis. Dep eventuele extra vloeistoflekkage die door de plaatsing is ontstaan voorzichtig weg.Weeg vervolgens de gevulde pomp en noteer het gewicht in de betreffende cel 'weight filled' van de pomp in het sjabloon. De vullingsgraad kan vervolgens met behulp van de formule worden berekend, waarna deze gegevens in de cel 'filled ratio' in het sjabloon kunnen worden ingevoerd. Idealiter moet de vullingsgraad gelijk aan of groter dan 95% zijn. Wanneer de pomp is gevuld, plaatst u deze met de moderatorhead naar boven in een bijbehorende steriele plastic buis van 4 ml en voegt u voldoende steriele zoutoplossing toe om de pomp te bedekken.Wanneer alle pompen zijn opgeslagen, worden de buisjes gedurende ten minste 12 uur in een incubator van 37 °C geplaatst voor een gedeeltelijke priming van de pompen op de dag van de implantatie. Draag een jas, masker en handschoenen, scheer een gebied ter grootte van een kwartje boven de schouder van een geanestheseerde muis en breng het dier over naar een laminaire flowkast. Breng zalf aan op de ogen van het dier en bevestig de afwezigheid van een reactie op een knijpbeweging in de teen; dep en veeg het geschoren gebied vervolgens af met Betadine, gevolgd door drie beurten met 70% ethanol.Gebruik vervolgens een in de autoclaaf gesteriliseerd chirurgisch scalpel om een incisie van één centimeter in de huid te maken, loodrecht op de staart en achter het oor boven het schouderblad van het voorbeen. Open vervolgens de incisie met een hemostat, terwijl u met de andere hand een pincet vasthoudt. Maak met de andere hand een subcutane tunnel onder de huid door de tip van de hemostat in de richting van de staart te bewegen.Open de kaken van de hemostaat voorzichtig om een ruimte voor de pomp te creëren. Vervang vervolgens de hemostaat door de overeenkomstige pomp, waarbij de modulatorkop naar de achterzijde van de muis is gericht, en duw de pomp voorzichtig volledig in de pocket. Er moet voldoende vrije ruimte zijn om de wond te sluiten zonder dat de huid onder spanning komt te staan of wordt uitgerekt.Zodra de pomp op zijn plaats is, knijpt u beide zijden van de incisie stevig samen en strijkt u deze glad zodat de randen elkaar raken, waarna u de huid sluit met één tot twee wondclips. Inspecteer de incisieplaats om er zeker van te zijn dat de wond volledig is gesloten en dat de pomp niet direct op de incisie drukt. Breng vervolgens met een schoon wattenstaafje een lokale lidocaïnecrème aan op het gebied.Plaats de muis tot slot op een warmtemat tot hij weer bij bewustzijn is en breng het dier vervolgens terug naar zijn kooi. In dit experiment werden, na vier weken infusie van angiotensine II via de zojuist gedemonstreerde geïmplanteerde pompen, deze aorta's geoogst van low density lipoprotein receptor knockout muizen om de aortadilataties te visualiseren. Zoals in de beelden te zien is, vertoonden de aorta's verschillende kenmerken, waaronder expansie van de suprarenale regio, expansie van de asciderende regio, of expansie van beide regio's, waarbij één muis een grotendeels normale morfologie vertoonde.De dilatatie van de abdominale aorta werd vervolgens gekwantificeerd door de ex vivo maximale breedte van de senale regio te meten, zoals geïllustreerd door de rode lijn ter meting van de dilatatie van de aorta ascendens. De aorta werd vervolgens geopend en vastgepind zoals getoond. Het oppervlak van de intima werd gemeten in de regio van de aorta ascendens; de linialen in elk van deze en de volgende afbeeldingen zijn opgenomen om de standaardisatie van de metingen te waarborgen zodra de techniek onder de knie is.Deze procedure zou niet meer dan vijf minuten per massa in beslag moeten nemen.

subcutaneous-angiotensin-ii-infusion-using-osmotic-pumps-induces

Research

JoVE Journal

Medicine

Geneeskunde

Echografie imaging is geworden een gemeenschappelijke modaliteit te bepalen de luminal afmetingen van borst- en buikholte aorta aneurysma in muizen. Dit protocol beschrijft de procedure om het verkrijgen van betrouwbare en reproduceerbare tweedimensionale ultrasound beelden van de oplopende en abdominale aorta in muizen.

Echografie beeldvorming van de borst- en buikholte Aorta bij muizen om te bepalen van de afmetingen van het aneurysma

We beschrijven een chirurgisch protocol voor het consequent induceren van robuuste aflopend thoracische aorta aneurysma bij muizen. De procedure omvat linker Thoracotomie, thoracische aorta blootstelling, en plaatsing van een spons gedrenkt in varkens alvleesklier elastase op de aorta wand.

Murine chirurgische model van actuele elastase geïnduceerde dalende thoracale aorta aneurysma

Dit nieuwe model creëert robuuste infrarenal abdominale aneurysmata in varkens met behulp van een combinatie van ballon angioplastiek, elastase/Collagenase perfusie, actuele elastase toepassing, en mondelinge samengestelde β-aminopropionitrile administratie, die interfereert met de cross-linking van collageen.

Varkens model van Infrarenal abdominaal aorta aneurysma

Het huidige protocol beschrijft een gestandaardiseerde chirurgische methode voor het elastase-geïnduceerde AAA-model door de directe toepassing van elastase op de adventitia van infrarode abdominale aorta bij muizen.

Muis Abdominale Aorta Aneurysma Model Geïnduceerd door Perivasculaire Toepassing van Elastase

Dit protocol beschrijft de opeenvolgende implantatie van een osmotische pomp om abdominaal aorta-aneurysma te induceren door angiotensine II-afgifte in apolipoproteïne E (ApoE) deficiënte muizen en van een vasculaire toegangspoort met een halsaderkatheter voor herhaalde medicamenteuze behandeling. Monitoring van de ontwikkeling van aneurysma's door middel van 3D-echografie wordt effectief uitgevoerd ondanks dorsale implantaten.

Medicamenteuze behandeling door centrale veneuze katheter in een muismodel van angiotensine II geïnduceerd abdominaal aorta-aneurysma en monitoring door 3D-echografie

Dit protocol beschrijft een calciumfosfaat-geïnduceerd abdominaal aorta-aneurysma (AAA) muismodel om de pathologische kenmerken en moleculaire mechanismen van AAAs te bestuderen.

Een calciumfosfaat-geïnduceerd muis abdominaal aorta-aneurysma model

Dit manuscript presenteert een protocol voor het opstellen van een abdominaal aorta-aneurysmamodel van muizen met behulp van calciumchloride en elastase, waarbij de voordelen van eerdere modelleringsmethoden worden gecombineerd. Dit model kan worden gebruikt om de pathofysiologische mechanismen te onderzoeken die ten grondslag liggen aan abdominale aorta-aneurysma's.

Een abdominaal aorta-aneurysmamodel van muizen door periadventitiële infiltratie van calciumchloride en elastase

Dit protocol beschrijft een methodische chirurgische benadering voor het modelleren van geavanceerde abdominale aorta-aneurysma's bij muizen door een combinatie van het rechtstreeks aanbrengen van elastase op de infrarenale aorta en het toedienen van ß-aminopropionitril via drinkwater.

Geavanceerde modellering van abdominale aorta-aneurysma's bij muizen door combinatie van topisch elastase en oraal ß-aminopropionitril

Dit protocol biedt een gedetailleerde, stapsgewijze procedure voor de inductie van thoracale aortadissectie bij muizen. Concreet omvat het de nauwkeurige berekening van de vereiste doses β-aminopropionitril en angiotensine II, de procedure voor het vullen van de osmotische pomp en de implantatietechniek van de osmotische pomp.

Muizenmodel van thoracale aortadissectie geïnduceerd door orale β-aminopropionitril en subcutane angiotensine II-infusie

Dit protocol biedt een herhaalbare en betrouwbare methode om abdominale aorta-aneurysma's (AAA's) in C57BL/6-muizen op te wekken met behulp van elastine-sensitisatie en perivasculaire elastase-toepassing, als een AAA-model dat een immuunsensitisatiecomponent bevat.

Betrouwbare creatie van een model voor muriene abdominale aorta-aneurysma met behulp van elastine-sensitisatie en perivasculaire elastase

Leer hoe u subcutane osmotische pompen implanteert bij muizen om aorta-aneurysma's te induceren met angiotensine II. Deze methode maakt langdurige infusie mogelijk voor cardiovasculair onderzoek.

Subcutane Angiotensine II infusie met behulp van osmotische pompen induceert aorta-aneurysma's in Muizen

Meer video's verkennen