Name: De bm12 Induceerbare model van systemische lupus erythematosus (SLE) in C57BL / 6 muizen (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2015-11-01T14:00:00.000+00:00
Duration: 12 min 4 s
Description: Leer het bm12 SLE-model in C57BL/6 muizen met flowcytometrie om T-follikel helpercellen, kiemcentrum B-cellen en plasmacellen te karakteriseren. Deze methode helpt bij het bestuderen van ziekteprogressie en het testen van nieuwe therapieën.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Dit werk werd gedeeltelijk ondersteund door het Lupus Research Institute, NCI-subsidie CA138617, NIDDK-subsidie DK090978, Charlotte Schmidlapp Award (aan E.M.J.) en de Albert J. Ryan Fellowship (aan J.K.). We zijn dankbaar voor de ondersteuning en instrumentatie die werd geleverd door de Research Flow Cytometry Core in de afdeling Reumatologie van het Cincinnati Children’s Hospital Medical Center, gedeeltelijk ondersteund door NIH AR-47363, NIH DK78392 en NIH DK90971.

<ol><li>Helmick, C. G., Felson, D. T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Part+I.+Arthritis+Rheum%5BTitle%5D)+AND+%22Estimates+of+the+prevalence+of+arthritis+and+other+rheumatic+conditions+in+the+United+States%22%5BJournal%5D)">Part I. Arthritis Rheum.</a> Estimates of the prevalence of arthritis and other rheumatic conditions in the United States. 58, 15-25 (2008).</li>
<li>Lupus Foundation of America Web Site. , Available from: 
 <a target="_blank" href="http://www.lupus.org/answers/entry/what-is-lupus">http://www.lupus.org/answers/entry/what-is-lupus</a> (2015).</li>
<li>Somers, E. C., Marder, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Population-based+incidence+and+prevalence+of+systemic+lupus+erythematosus%3A+The+Michigan+lupus+epidemiology+and+surveillance+program%5BTitle%5D)+AND+%22Arthritis+and+Rheumatol%22%5BJournal%5D)">Population-based incidence and prevalence of systemic lupus erythematosus: The Michigan lupus epidemiology and surveillance program.</a> Arthritis and Rheumatol. 66, 369-378 (2014).</li>
<li>Perry, D., Sang, A., Yin, Y., Zheng, Y. -Y., Morel, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Murine+models+of+systemic+lupus+erythematosus%5BTitle%5D)+AND+%22J+Biomed+Biotechnol%22%5BJournal%5D)">Murine models of systemic lupus erythematosus.</a> J Biomed Biotechnol. 2011, 271694(2011).</li>
<li>Lindholm, L., Rydberg, L., Strannegård, O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Development+of+host+plasma+cells+during+graft-versus-host+reactions+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Eur+J+Immunol%22%5BJournal%5D)">Development of host plasma cells during graft-versus-host reactions in mice.</a> Eur J Immunol. 3 (8), 511-515 (1973).</li>
<li>Fialkow, P. J., Gilchrist, C., Allison, A. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Autoimmunity+in+chronic+graft-versus-host+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Clin+Exp+Immunol%22%5BJournal%5D)">Autoimmunity in chronic graft-versus-host disease.</a> Clin Exp Immunol. 13, 479-486 (1973).</li>
<li>Streilein, J. W., Stone, M. J., Duncan, W. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Studies+on+the+Specificity+of+Autoantibodies+Produced+in+Systemic+Graft-vs-Host+Disease%5BTitle%5D)+AND+%22J+Immunol%22%5BJournal%5D)">Studies on the Specificity of Autoantibodies Produced in Systemic Graft-vs-Host Disease.</a> J Immunol. 114 (1), 255-260 (1975).</li>
<li>Gleichmann, E., Gleichmann, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Diseases+caused+by+reactions+of+T+lymphocytes+to+in+compatible+structures+of+the+major+histocompatibility+complex.+I.+Autoimmune+hemolytic+anemia%5BTitle%5D)+AND+%22Eur+J+Immunol%22%5BJournal%5D)">Diseases caused by reactions of T lymphocytes to in compatible structures of the major histocompatibility complex. I. Autoimmune hemolytic anemia.</a> Eur J Immunol. 6 (12), 899(1976).</li>
<li>Morris, S., Cohen, P. L., Eisenberg, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Experimental+induction+of+systemic+lupus+erythematosus+by+recognition+of+foreign+Ia%5BTitle%5D)+AND+%22Clin+Immunol+Immunopathol%22%5BJournal%5D)">Experimental induction of systemic lupus erythematosus by recognition of foreign Ia.</a> Clin Immunol Immunopathol. 57 (2), 263-273 (1990).</li>
<li>Chen, F., Maldonado, M., Madaio, M., Eisenberg, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+Role+of+Host+%28Endogenous%29+T+Cells+in+Chronic+Graft-Versus-Host+Autoimmune+Disease%5BTitle%5D)+AND+%22J+Immunol%22%5BJournal%5D)">The Role of Host (Endogenous) T Cells in Chronic Graft-Versus-Host Autoimmune Disease.</a> J Immunol. 161 (11), 5880-5885 (1998).</li>
<li>Klarquist, J., Hennies, C. M., Lehn, M. A., Reboulet, R. A., Feau, S., Janssen, E. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((STING-Mediated+DNA+Sensing+Promotes+Antitumor+and+Autoimmune+Responses+to+Dying+Cells%5BTitle%5D)+AND+%22J+Immunol%22%5BJournal%5D)">STING-Mediated DNA Sensing Promotes Antitumor and Autoimmune Responses to Dying Cells.</a> J Immunol. 193, 6124-6134 (2014).</li>
<li>Petri, M., Orbai, A. -M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Derivation+and+validation+of+systemic+lupus+international+collaborating+clinics+classification+criteria+for+systemic+lupus+erythematosus%5BTitle%5D)+AND+%22Arthritis+Rheum%22%5BJournal%5D)">Derivation and validation of systemic lupus international collaborating clinics classification criteria for systemic lupus erythematosus.</a> Arthritis Rheum. 64 (8), 2677-2686 (2012).</li>
<li>Zangala, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Isolation+of+genomic+DNA+from+mouse+tails%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Isolation of genomic DNA from mouse tails.</a> J Vis Exp. (6), e246(2007).</li>
<li>Lorenz, T. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Polymerase+Chain+Reaction%3A+Basic+Protocol+Plus+Troubleshooting+and+Optimization+Strategies%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Polymerase Chain Reaction: Basic Protocol Plus Troubleshooting and Optimization Strategies.</a> J Vis Exp. (63), e3998(2012).</li>
<li>Product information: Thermo Scientific FastDigest PsuI. , Thermo Scientific. Available from: 
 <a target="_blank" href="https://tools.lifetechnologies.com/content/sfs/manuals/MAN0012567_FastDigest_PsuI_UG.pdf">https://tools.lifetechnologies.com/content/sfs/manuals/MAN0012567_FastDigest_PsuI_UG.pdf</a> (2012).</li>
<li>Matheu, M. P., Parker, I., Cahalan, M. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dissection+and+2-photon+imaging+of+peripheral+lymph+nodes+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Dissection and 2-photon imaging of peripheral lymph nodes in mice.</a> J Vis Exp. (7), e265(2007).</li>
<li>Harrell, M. I., Iritani, B. M., Ruddell, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Lymph+node+mapping+in+the+mouse%5BTitle%5D)+AND+%22J+Immunol+Methods%22%5BJournal%5D)">Lymph node mapping in the mouse.</a> J Immunol Methods. 332 (1-2), 170-174 (2008).</li>
<li>Covelli, V. Chapter 3, Internal examination. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aCovelli%2C+V+%22Guide+to+the+necroscopy+of+the+mouse%22">Guide to the necroscopy of the mouse</a>. , Available from:
 <a target="_blank" href="http://eulep.pdn.cam.ac.uk/Necropsy_of_the_Mouse/index.php?file=Chapter_3.html">http://eulep.pdn.cam.ac.uk/Necropsy_of_the_Mouse/index.php?file=Chapter_3.html</a> (2009).</li>
<li>Quah, B. J. C., Parish, C. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+use+of+carboxyfluorescein+diacetate+succinimidyl+ester+%28CFSE%29+to+monitor+lymphocyte+proliferation%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">The use of carboxyfluorescein diacetate succinimidyl ester (CFSE) to monitor lymphocyte proliferation.</a> J Vis Exp. (44), e2259(2010).</li>
<li>Matheu, M. P., Cahalan, M. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Isolation+of+CD4%2B+T+cells+from+mouse+lymph+nodes+using+Miltenyi+MACS+purification%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Isolation of CD4+ T cells from mouse lymph nodes using Miltenyi MACS purification.</a> J Vis Exp. (9), e53319(2007).</li>
<li>Machholz, E., Mulder, G., Ruiz, C., Corning, B. F., Pritchett-Corning, K. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Manual+Restraint+and+Common+Compound+Administration+Routes+in+Mice+and+Rats%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Manual Restraint and Common Compound Administration Routes in Mice and Rats.</a> J Vis Exp. (67), e2771(2012).</li>
<li>Hoff, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Methods+of+Blood+Collection+in+the+Mouse%5BTitle%5D)+AND+%22Lab+Animal%22%5BJournal%5D)">Methods of Blood Collection in the Mouse.</a> Lab Animal. 29 (10), 47-53 (2000).</li>
<li>Cohen, M., Varki, N. M., Jankowski, M. D., Gagneux, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Using+Unfixed%2C+Frozen+Tissues+to+Study+Natural+Mucin+Distribution%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Using Unfixed, Frozen Tissues to Study Natural Mucin Distribution.</a> J Vis Exp. (67), e3928(2012).</li>
<li>Cohen, P. L., Maldonado, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Animal+models+for+SLE%5BTitle%5D)+AND+%22Curr+Protoc+Immunol.%22%5BJournal%5D)">Animal models for SLE.</a> Curr Protoc Immunol.. Chapter 15, Unit 15.20(2003).</li>
<li>Seavey, M. M., Lu, L. D., Stump, K. L. Animal models of systemic lupus erythematosus (SLE) and ex vivo assay design for drug discovery. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aSeavey%2C+MM+%22Curr+Protoc+Pharmacol%22">Curr Protoc Pharmacol</a>. Chapter 5, Unit 5(2011).</li>
<li>McKenna, K. C., Vicetti Miguel, R. D., Beatty, K. M., Bilonick, R. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+caveat+for+T+cell+transfer+studies%3A+generation+of+cytotoxic+anti-Thy1.2+antibodies+in+Thy1.1+congenic+mice+given+Thy1.2%2B+tumors+or+T+cells%5BTitle%5D)+AND+%22J+Leukoc+Biol%22%5BJournal%5D)">A caveat for T cell transfer studies: generation of cytotoxic anti-Thy1.2 antibodies in Thy1.1 congenic mice given Thy1.2+ tumors or T cells.</a> J Leukoc Biol. 89 (2), 291-300 (2011).</li>
<li>Scott, D. M., Ehrmann, I. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Identification+of+a+mouse+male-specific+transplantation+antigen+H-Y.%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Identification of a mouse male-specific transplantation antigen H-Y.</a> Nature. 376, 695-698 (1995).</li>
<li>Joly, E., Hudrisier, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((What+is+trogocytosis+and+what+is+its+purpose%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Immunol%22%5BJournal%5D)">What is trogocytosis and what is its purpose.</a> Nat Immunol. 4 (9), 815(2003).</li>
<li>Brown, D. R., Calpe, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cutting+edge%3A+an+NK+cell-independent+role+for+Slamf4+in+controlling+humoral+autoimmunity%5BTitle%5D)+AND+%22J+Immunol%22%5BJournal%5D)">Cutting edge: an NK cell-independent role for Slamf4 in controlling humoral autoimmunity.</a> J Immunol. 187 (1), 21-25 (2011).</li>
<li>Morris, S. C., Cheek, R. L., Cohen, P. L., Eisenberg, R. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Allotype-specific+immunoregulation+of+autoantibody+production+by+host+B+cells+in+chronic+graft-versus+host+disease%5BTitle%5D)+AND+%22J+Immunol%22%5BJournal%5D)">Allotype-specific immunoregulation of autoantibody production by host B cells in chronic graft-versus host disease.</a> J Immunol. 144 (3), 916-922 (1990).</li>
<li>Choudhury, A., Cohen, P. L., Eisenberg, R. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((B+cells+require+%E2%80%9Cnurturing%E2%80%9D+by+CD4+T+cells+during+development+in+order+to+respond+in+chronic+graft-versus-host+model+of+systemic+lupus+erythematosus%5BTitle%5D)+AND+%22Clin+Immunol%22%5BJournal%5D)">B cells require “nurturing” by CD4 T cells during development in order to respond in chronic graft-versus-host model of systemic lupus erythematosus.</a> Clin Immunol. 136 (1), 105-115 (2010).</li>
<li>Slifka, M. K., Antia, R., Whitmire, J. K., Ahmed, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Humoral+immunity+due+to+long-lived+plasma+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Immunity%22%5BJournal%5D)">Humoral immunity due to long-lived plasma cells.</a> Immunity. 8 (3), 363-372 (1998).</li>
</ol>

De auteurs hebben niets te onthullen.

De bm12 induceerbare model is een relatief eenvoudige en efficiënte manier om de cellulaire en moleculaire processen van SLE bestuderen. Chronische activatie van de adoptief overgedragen T-cellen CD4 gericht tegen eigen antigenen leidt tot de accumulatie van Tfh, GC B-cellen en plasmacellen die kan worden gemeten door middel van flowcytometrie, zoals hier beschreven. Toekomstige studies met dit model snel en eenvoudig ondervragen de rol van kandidaatgenen en nieuwe therapieën in de auto kiemcentrum processen die die voo...

Systemische lupus erythematosus (SLE) is een auto-immuunziekte complex prototypisch gekenmerkt door anti-nucleaire antilichamen (ANA) productie en glomerulonefritis. Talrijke andere complicaties, waaronder dermale, cardiopulmonale en hepatische laesies zijn geassocieerd met ziekte bij sommige individuen. Prevalentieschattingen in de Verenigde Staten lopen sterk uiteen, van 150,000-1,500,000 1,2, met een bijzonder hoge incidentie bij vrouwen en minderheden 3. Hoewel de etiologie van SLE moeilijk te onderscheiden is, wordt gedacht voortvloeien uit het samenspel van verschillende genetische en omgevingsfactoren, die leiden tot systemische auto-immuniteit. Talrijke diermodellen toegepast om factoren die leiden tot de ziekte ontstaan ​​en de progressie bestuderen. Classic muismodellen van SLE omvatten genetisch gepredisponeerde muizenstammen inclusief NZB x NZW F1 model en NZM derivaten, de MLR / lpr-stam en de BXSB / Yaa-stam en induceerbare systemen, zoals de pristane en chronische graft-versus-host disease (cGVHD) modellen 4. Vroege meldingen van auto-antilichaam productie in GVHD modellen gebruikt verschillende muizenstammen of hamster stammen voor ouders in de F1 transfers 5-8; meer voorkomende methoden gebruikt om lupus-achtige ziekte te bestuderen momenteel de DBA / 2 ouder → (C57BL / 6 x DBA / 2) F1, en de bm12 overdracht model hier beschreven. Elk model heeft zijn eigen kanttekeningen, maar zij over het algemeen delen een gemeenschappelijke set van kenmerken die correleren met klinische kenmerken van de ziekte bij de mens. De vaakst gerapporteerde parameters in muizenmodellen omvatten splenomegalie, lymfadenopathie, nefritis, ANA productie, en op cellulair niveau, de expansie van T folliculaire helpercellen (Tfh), germinal center (GC) B-cellen en plasmacellen. De induceerbare bm12 model wordt bereikt door adoptieve overdracht van lymfocyten van IA bm12 B6 (C) - H2 - Ab 1 bm12 / KhEgJ (bm12) muizen, een stam identical naar C57BL / 6 behalve 3 aminozuursubstituties op MHC klasse II, in IA b C57BL / 6 (B6) muizen. Alloactivatie donor CD4 T-cellen door de ontvanger APC leidt tot cGVHD met symptomen die sterk lijkt op SLE. Specifiek omvatten deze uitbreiding van donor afgeleide Tfh, uitbreiding van de ontvanger afgeleide GC B-cellen en plasmacellen en productie van ANA waaronder anti-dsDNA, anti-ssDNA, anti-chromatine en anti-RBC antilichamen 9. Mettertijd ontvangende muizen ontwikkelen glomerulonefritis in verband met IgG in de glomerulaire afzettingen, interstitiële en vasculaire gebieden van de 10 nieren. We hebben onlangs aangetoond dat, vergelijkbaar met humane ziekten, is er ook een cruciale rol van type I IFN in dit model 11. Met name de bepalende criteria voor menselijke SLE omvatten de ontwikkeling van nefritis compatibel met SLE bij aanwezigheid van anti-dsDNA-antilichamen 12, die beide zijn opvallende kenmerken van deze muismodel. Er zijn seVeral voordelen van de bm12 model over de spontane modellen. Klassieke modellen die SLE-achtige symptomen ontwikkelen spontaan vertrouwen op beide hybride muizenstammen, inteelt muizenstammen niet op de achtergrond B6 of grote genetische loci op de achtergrond B6, waardoor kruising knock-out of andere genetisch gemodificeerde muizen moeilijk en tijdrovend. Met bm12 induceerbare model kunnen genetisch gemodificeerde muizen dienen als ofwel de donor of ontvanger, waarmee snellere identificatie van het cellulaire compartiment waarin bepaalde genen betrokken ziekte kunnen zijn. Bovendien zieketontwikkeling in het bm12 model is veel sneller, die slechts 2 weken tot het verschijnen van ANAS vergelijking tot enkele maanden meest spontane modellen. Bovendien, in tegenstelling tot de spontane modellen die ziekte op verschillende tijdstippen te ontwikkelen, de ziekte ontstaan ​​en de progressie in de bm12 → B6 model is sterk gesynchroniseerd. Dit maakt het genereren van geschikte grootte cohorten die be gebruikt voor interventionele of therapeutische strategieën in elk stadium van de ontwikkeling van de ziekte. Wat volgt is een gedetailleerd protocol voor het initiëren van SLE-achtige auto-immuniteit door adoptieve overdracht van bm12 lymfocyten in C57BL / 6-muizen of genetische varianten op de B6 achtergrond. Verder beschrijven we een flowcytometrische kleuring protocol opsommen Tfh, GC B-cellen en plasmacellen-celtypen geassocieerd met humane ziekte. Belangrijk, deze protocollen kunnen ook worden gebruikt om de ziekte in de meeste muismodellen van SLE karakteriseren en identificeren Tfh, GC B-cellen en plasmacellen in andere ziektemodellen.

<table><tbody><tr><td>B6.SJL-Ptprca Pepcb/BoyJ</td><td>The Jackson Laboratory</td><td>001162</td><td>CD45.1+ BoyJ muisensoort</td></tr><tr><td>B6(C)-H2-Ab1bm12/KhEgJ</td><td>The Jackson Laboratory</td><td>001162</td><td>Bm12 muisensoort</td></tr><tr><td>FastDigest PsuI</td><td>Life Technologies</td><td>FD1554</td><td>Beperkingsdigestie-enzym voor genotypering</td></tr><tr><td>1X RBC Lysis Buffer</td><td>eBioscience</td><td>00-4333-57</td><td></td></tr><tr><td>IMDM</td><td>GE Healthcare</td><td>SH30228.01</td><td></td></tr><tr><td>Plasma Separation Tube (PST)</td><td>BD</td><td>365974</td><td>Bloedopnamebuis met Dipotassium EDTA</td></tr><tr><td>Serum Separation Tube (SST)</td><td>BD</td><td>365967</td><td>Bloedopnamebuis met stollingsactivator / SST Gel</td></tr><tr><td>Ficoll</td><td>GE Healthcare</td><td>17-1440-02&nbsp;</td><td>Hogedichtheidscelscheidingsoplossing</td></tr><tr><td>Lympholyte-M</td><td>Cedarlane</td><td>CL5030</td><td>Hogedichtheidscelscheidingsoplossing</td></tr><tr><td>GL-7-biotin</td><td>eBioscience</td><td>13-5902-82&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>Streptavidin-BUV395</td><td>BD</td><td>564176</td><td></td></tr><tr><td>CD138-BV421</td><td>BioLegend</td><td>142508</td><td></td></tr><tr><td>CD4-BV510</td><td>BioLegend</td><td>100559</td><td></td></tr><tr><td>TCR&beta;-BV605</td><td>BD</td><td>562840</td><td></td></tr><tr><td>CD45.1-BV711</td><td>BioLegend</td><td>110739</td><td></td></tr><tr><td>CD45.2-FITC</td><td>BioLegend</td><td>109806</td><td></td></tr><tr><td>PD-1-PE</td><td>BioLegend</td><td>135206</td><td></td></tr><tr><td>CD19-PerCP</td><td>BioLegend</td><td>115532</td><td></td></tr><tr><td>Fas-PE-Cy7</td><td>BD</td><td>557653</td><td></td></tr><tr><td>CXCR5-APC</td><td>BioLegend</td><td>145506</td><td></td></tr><tr><td>Fixable Viability Dye ef780</td><td>eBioscience</td><td>65-0865-18</td><td></td></tr><tr><td>CD4-BV421</td><td>BioLegend</td><td>100443</td><td></td></tr><tr><td>1.2 ml FACS tube inserts, racked</td><td>USA Scientific</td><td>1412-1400</td><td></td></tr><tr><td>BD Falcon&trade; Round-Bottom Tubes</td><td>BD</td><td>352017</td><td></td></tr></tbody></table>

de bm12 induceerbare model van systemische lupus erythematosus (sle) in c57bl / 6 muizen

The bm12 Inducible Model of Systemic Lupus Erythematosus (SLE) in C57BL/6 Mice

Systemische lupus erythematodes (SLE) is een auto-immuunziekte met diverse klinische en immunologische manifestaties. Verschillende spontane en induceerbare diermodellen weerspiegelen veel voorkomende componenten van de menselijke ziekte, waaronder het bm12-overdrachtsmodel. Na overdracht van bm12-splenocyten of gezuiverde CD4 T-cellen, ontwikkelen C57BL/6-muizen snel grote frequenties van T-folliculaire helpercellen (Tfh), kiemcentrum (GC) B-cellen en plasmacellen, gevolgd door hoge niveaus van circulerende anti-nucleaire antilichamen. Aangezien dit model muizen op een pure C57BL/6-achtergrond gebruikt, kunnen onderzoekers snel en gemakkelijk de ziekteprogressie in transgene of knockout-muisstammen bestuderen in een relatief korte periode van tijd. Hier beschrijven we protocollen voor de inductie van het model en de kwantificering van Tfh, GC B-cellen en plasmacellen door middel van multi-kleurig flowcytometrie. Belangrijk is dat deze protocollen ook kunnen worden gebruikt om de ziekte te karakteriseren in de meeste muismodellen van SLE en Tfh, GC B-cellen en plasmacellen te identificeren in andere ziektemodellen.

Zieke muizen ontwikkelen miltvergroting in slechts 14 dagen, vertonen milten 2-3 maal groter gezonde muizen in termen van massa en cellulariteit (figuur 2). Splenocyten achtereenvolgens gated op lichtverstrooiing (FSC-SSC A-A), eliminatie van doubletten (FSC-W of -H FSC-A), levensvatbare cellen (lage kleuring van levensvatbaarheid kleurstof) en CD4 + TcR + (Fig 3A). Donorcellen zijn onderscheiden van de ontvanger cellen op basis van CD4...

De overdracht van bm12-lymfocyten naar een C57BL/6-ontvanger is een gevestigd model van systemische lupus erythematosus. Hier beschrijven we hoe de ziekte kan worden geïnitieerd met behulp van dit model en hoe T-folliculaire helpercellen, germinale centrum B-cellen en plasmacellen kunnen worden gekenmerkt door middel van flowcytometrie.

De bm12 Induceerbare model van systemische lupus erythematosus (SLE) in C57BL / 6 muizen

Systemic lupus erythematosus (SLE) is an autoimmune disease with diverse clinical and immunological manifestations. Several spontaneous and inducible ...

Het algemene doel van deze procedure is om de expansie van T-folliculaire helpercellen, kiemcentrum-B-cellen en plasmacellen te karakteriseren via flowcytometrie in het BM 12-model voor systemische lupus erythematosus, of SLE. Deze methode kan helpen bij het beantwoorden van cruciale vragen binnen het lupus-onderzoek, zoals de vraag of het gericht beïnvloeden van specifieke moleculaire pathways met therapeutica de progressie van de ziekte kan stoppen of vertragen. Het belangrijkste voordeel van dit SLE-model is dat het gebruikmaakt van muizen op een zuivere C57BL/6-achtergrond, waardoor onderzoekers de ziekteprogressie in transgene of knockout-muizenstammen snel en eenvoudig kunnen bestuderen binnen een relatief kort tijdsbestek.Nadat de BM 12 donorcellen zijn geïsoleerd en in muizen zijn geïnjecteerd, de graft-efficiëntie is bepaald en de muizen zijn geëuthanaseerd volgens het tekstprotocol, besproei de buik van de muis lichtjes met 70% ethanol om deze te bevochtigen. Maak met een chirurgische schaar een kleine oppervlakkige incisie ongeveer één centimeter boven de genitaliën en trek de huid van de buik richting het borstbeen terwijl de peritoneale fascie intact blijft. Voorzie ee

the-bm12-inducible-model-systemic-lupus-erythematosus-sle-c57bl6

Research

JoVE Journal

Medicine

Geneeskunde

Deze video laat zien hoe u auto-immune hypophysitis induceren in SJL muizen en hoe u de ernst ervan te beoordelen door de histopathologie.

Inductie van experimentele auto-immune Hypophysitis in SJL Muizen

The video demonstrates the induction of experimental autoimmune encephalomyelitis in a mouse model by injecting a combination of myelin oligodendrocyte glycoproteins and inactivated Mycobacterium tuberculosis. The model enables researchers to study disease mechanisms and test therapeutic interventions.

Induction of Experimental Autoimmune Encephalomyelitis in a Mouse Model

In this video, a mouse model of multiple sclerosis is established using experimental autoimmune encephalomyelitis (EAE). The mouse is injected with an emulsion containing a neuronal peptide and an adjuvant, triggering an immune response that activates autoreactive T cells. This is followed by an injection of pertussis toxin (PTX) to increase blood-brain barrier permeability, allowing the autoreactive T-cells to infiltrate the brain. This infiltration initiates a signaling cascade that...

Experimentele autoimmuun encefalomyelitis (EAE) is een gevestigde diermodel voor multiple sclerose. C57BL / 6 muizen worden geïmmuniseerd met myeline oligodendrocyt glycoproteïne (MOG) peptide 35-55 (MOG 35-55), wat resulteert in een oplopende zwakke verlamming veroorzaakt door autoreactieve immuuncellen in het centrale zenuwstelsel. Protocollen voor de ziekte van inductie en toezicht zal worden besproken.

Myeline Oligodendrocyte glycoproteïne (MOG<sub&gt; 35-55</sub&gt;) Geïnduceerde experimentele autoimmuun encefalomyelitis (EAE) in C57BL / 6 muizen

Dit manuscript beschrijft de methoden voor inductie en scoren van het experimentele auto-immuunencefalomyelitis (EAE) model, samen met de beoordeling van immuunceldistributie en mRNA-cytokineniveaus in lymfeklieren, milt, bloed en ruggenmerg met behulp van flowcytometrie en kwantitatieve PCR, respectievelijk, in verschillende fasen van de ziekte.

Inductie van experimentele auto-immune Encefalomyelitis in Muizen en evaluatie van de ziekte-afhankelijke Verdeling van immuuncellen in verschillende weefsels

Dit protocol beschrijft hoe te bepalen of farmacologische behandelingen voor experimentele auto-immuun encefalomyelitis CNS-bescherming vertonen als gevolg van het onderdrukken van immuuncel-infiltratie of neuroprotectief zijn tijdens de aanval van immuuncel-infiltratie.

Het bepalen van onderdrukking van het immuunsysteem versus CNS Bescherming voor farmacologische interventies bij auto-Demyelinisatie

Dit verslag schetst een eenvoudige benadering om succesvol experimentele autoimmune neuritis (EAN) met behulp van de myeline proteïne nul peptide180-199 (P0) in combinatie met de Freund compleet adjuvans en kinkhoest toxine. We presenteren een verfijnde paradigma staat nauwkeurig de beoordeling van de omvang van functionele tekorten en Neuropathologie die zich voordoen in deze EAN.

Een eenvoudige benadering voor het opwekken van experimentele Autoimmune Neuritis in C57BL/6 muizen voor functionele en neuropathologische evaluaties

Hier presenteren we een effectieve methode voor het onderzoeken van de antifibrotische activiteit van intraveneus geïnfundeerde humane mesenchymale stromale cellen verkregen uit de gehele navelstreng na de inductie van long letsel door een Endotracheale injectie van bleomycine in C57BL /6 muizen. Dit protocol kan eenvoudig worden uitgebreid tot de preklinische testen van andere therapieën.

Inductie van muis long letsel door Endotracheale injectie van bleomycine

Het huidige protocol beschrijft een methode om lupusprogressie bij muizen te volgen. Twee aanvullende procedures worden gepresenteerd om lupus nefritis te karakteriseren op basis van celinfiltratie en eiwitafzetting in de nieren.

Analyses van proteïnurie, renale infiltratie van leukocyten en renale afzetting van eiwitten bij lupusgevoelige MRL / lpr-muizen

Experimentele auto-immuun encefalomyelitis is een van de meest gebruikte muizenmodellen van multiple sclerose. In het huidige protocol worden C57BL/6J-muizen van beide geslachten geïmmuniseerd met myeline-oligodendrocytglycoproteïnepeptide, wat voornamelijk resulteert in oplopende parese van de staart en ledematen. Hier bespreken we het protocol van EAE-inductie en -evaluatie.

Modellering van multiple sclerose bij de twee geslachten: MOG35-55-geïnduceerde experimentele auto-immuun encefalomyelitis

Hier rapporteren we een protocol dat een muismodel voor reumatoïde artritis (RA) tot stand brengt door adoptieve overdracht van CD4+ T-cellen van SKG-muizen, wat een snel en betrouwbaar experimenteel hulpmiddel biedt voor het onderzoeken van de immunologische mechanismen, pathologische progressie en ontwikkeling van nieuwe behandelingen voor RA.

Een adoptief overdrachtsmodel van reumatoïde artritis bij muizen

Leer het bm12 SLE-model in C57BL/6 muizen met flowcytometrie om T-follikel helpercellen, kiemcentrum B-cellen en plasmacellen te karakteriseren. Deze methode helpt bij het bestuderen van ziekteprogressie en het testen van nieuwe therapieën.

De bm12 Induceerbare model van systemische lupus erythematosus (SLE) in C57BL / 6 muizen

Meer video's verkennen