Name: Een enzym en Serum-free neurale stamcel Cultuur Model voor EMT Investigation Geschikt voor Drug Discovery (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2016-08-23T13:00:00.000+00:00
Duration: 7 min 43 s
Description: Leer een serumvrije neurale stamcelcultuurmethode voor EMT-onderzoek in kanker. Dit model maakt kwantitatieve en kwalitatieve analyse van celmigratie mogelijk voor drug discovery.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

playerTrialDesktop

De studie werd ondersteund door de Universiteit van Basel Science Foundation en de Zwitserse National Science Foundation door een subsidie ​​aan MHS en AG (SNF IZLIZ3_157230). Wij danken: Dr. Tania Rinaldi Burkat voor royaal verstrekken van infrastructuur; alle leden van de Bettler groep voor discussies en commentaar. Wij danken Gerhard Dorne (Leica Microsystems, Zwitserland) voor de professionele en deskundige installatie van de Full HD MC170 videocamera (Leica Microsystems, Zwitserland).

<ol><li>Nieto, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Epithelial-Mesenchymal+Transitions+in+development+and+disease%3A+old+views+and+new+perspectives%5BTitle%5D)+AND+%22Int+J+Dev+Biol%22%5BJournal%5D)">Epithelial-Mesenchymal Transitions in development and disease: old views and new perspectives.</a> Int J Dev Biol. 53, 1541-1547 (2009).</li>
<li>Sauka-Spengler, T., Bronner-Fraser, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+gene+regulatory+network+orchestrates+neural+crest+formation%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Rev+Mol+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">A gene regulatory network orchestrates neural crest formation.</a> Nat Rev Mol Cell Biol. 9, 557-568 (2008).</li>
<li>Barriere, G., Fici, P., Gallerani, G., Rigaud, M. Mesenchymal Transition: a double-edged sword. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aBarriere%2C+G+%22Clin+Transl+Med%22">Clin Transl Med</a>. 4, 14(2015).</li>
<li>Zawadzka, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((CNS-resident+glial+progenitor%2Fstem+cells+produce+Schwann+cells+as+well+as+oligodendrocytes+during+repair+of+CNS+demyelination%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Stem+Cell%22%5BJournal%5D)">CNS-resident glial progenitor/stem cells produce Schwann cells as well as oligodendrocytes during repair of CNS demyelination.</a> Cell Stem Cell. 6, 578-590 (2010).</li>
<li>Paxinos, G., Ashwell, K. W. S., Törk, I. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aPaxinos%2C+G+%22Atlas+of+the+developing+rat+nervous+system%22">Atlas of the developing rat nervous system</a>. , 2nd edn, Academic Press. (1994).</li>
<li>O'Leary, D. D., Chou, S. J., Sahara, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Area+patterning+of+the+mammalian+cortex%5BTitle%5D)+AND+%22Neuron%22%5BJournal%5D)">Area patterning of the mammalian cortex.</a> Neuron. 56, 252-269 (2007).</li>
<li>O'Leary, D. D., Sahara, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Genetic+regulation+of+arealization+of+the+neocortex%5BTitle%5D)+AND+%22Curr+Opin+Neurobiol%22%5BJournal%5D)">Genetic regulation of arealization of the neocortex.</a> Curr Opin Neurobiol. 18, 90-100 (2008).</li>
<li>Sailer, M. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Non-invasive+neural+stem+cells+become+invasive+in+vitro+by+combined+FGF2+and+BMP4+signaling%5BTitle%5D)+AND+%22J+Cell+Sci%22%5BJournal%5D)">Non-invasive neural stem cells become invasive in vitro by combined FGF2 and BMP4 signaling.</a> J Cell Sci. 126, 3533-3540 (2013).</li>
<li>Sailer, M. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((BMP2+and+FGF2+cooperate+to+induce+neural-crest-like+fates+from+fetal+and+adult+CNS+stem+cells%5BTitle%5D)+AND+%22J+Cell+Sci%22%5BJournal%5D)">BMP2 and FGF2 cooperate to induce neural-crest-like fates from fetal and adult CNS stem cells.</a> J Cell Sci. 118, 5849-5860 (2005).</li>
<li>Sailer, M., Oppitz, M., Drews, U. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Induction+of+cellular+contractions+in+the+human+melanoma+cell+line+SK-mel+28+after+muscarinic+cholinergic+stimulation%5BTitle%5D)+AND+%22Anat+Embryol+%28Berl%29%22%5BJournal%5D)">Induction of cellular contractions in the human melanoma cell line SK-mel 28 after muscarinic cholinergic stimulation.</a> Anat Embryol (Berl). 201, 27-37 (2000).</li>
<li>Wicki, A., Christofori, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+potential+role+of+podoplanin+in+tumour+invasion%5BTitle%5D)+AND+%22Br+J+Cancer%22%5BJournal%5D)">The potential role of podoplanin in tumour invasion.</a> Br J Cancer. 96, 1-5 (2007).</li>
<li>Wicki, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tumor+invasion+in+the+absence+of+epithelial-mesenchymal+transition%3A+podoplanin-mediated+remodeling+of+the+actin+cytoskeleton%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Cell%22%5BJournal%5D)">Tumor invasion in the absence of epithelial-mesenchymal transition: podoplanin-mediated remodeling of the actin cytoskeleton.</a> Cancer Cell. 9, 261-272 (2006).</li>
<li>Mishima, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Increased+expression+of+podoplanin+in+malignant+astrocytic+tumors+as+a+novel+molecular+marker+of+malignant+progression%5BTitle%5D)+AND+%22Acta+Neuropathol%22%5BJournal%5D)">Increased expression of podoplanin in malignant astrocytic tumors as a novel molecular marker of malignant progression.</a> Acta Neuropathol. 111, 483-488 (2006).</li>
<li>Motomura, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Immunohistochemical+analysis-based+proteomic+subclassification+of+newly+diagnosed+glioblastomas%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Science%22%5BJournal%5D)">Immunohistochemical analysis-based proteomic subclassification of newly diagnosed glioblastomas.</a> Cancer Science. 103, 1871-1879 (2012).</li>
<li>Kono, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Immunohistochemical+detection+of+the+lymphatic+marker+podoplanin+in+diverse+types+of+human+cancer+cells+using+a+novel+antibody%5BTitle%5D)+AND+%22Int+J+Oncol%22%5BJournal%5D)">Immunohistochemical detection of the lymphatic marker podoplanin in diverse types of human cancer cells using a novel antibody.</a> Int J Oncol. 31, 501-508 (2007).</li>
<li>Raica, M., Cimpean, A. M., Ribatti, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+role+of+podoplanin+in+tumor+progression+and+metastasis%5BTitle%5D)+AND+%22Anticancer+Res%22%5BJournal%5D)">The role of podoplanin in tumor progression and metastasis.</a> Anticancer Res. 28, 2997-3006 (2008).</li>
<li>Panchision, D. M., McKay, R. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+control+of+neural+stem+cells+by+morphogenic+signals%5BTitle%5D)+AND+%22Curr+Opin+Genet+Dev%22%5BJournal%5D)">The control of neural stem cells by morphogenic signals.</a> Curr Opin Genet Dev. 12, 478-487 (2002).</li>
<li>Lamouille, S., Xu, J., Derynck, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Molecular+mechanisms+of+epithelial-mesenchymal+transition%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Rev+Mol+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">Molecular mechanisms of epithelial-mesenchymal transition.</a> Nat Rev Mol Cell Biol. 15, 178-196 (2014).</li>
<li>Gonzalez-Perez, O., Alvarez-Buylla, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Oligodendrogenesis+in+the+subventricular+zone+and+the+role+of+epidermal+growth+factor%5BTitle%5D)+AND+%22Brain+Res+Rev%22%5BJournal%5D)">Oligodendrogenesis in the subventricular zone and the role of epidermal growth factor.</a> Brain Res Rev. 67, 147-156 (2011).</li>
<li>Hu, J. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((PDGF-AA+mediates+B104CM-induced+oligodendrocyte+precursor+cell+differentiation+of+embryonic+neural+stem+cells+through+Erk%2C+PI3K%2C+and+p38+signaling%5BTitle%5D)+AND+%22J+Mol+Neurosci%22%5BJournal%5D)">PDGF-AA mediates B104CM-induced oligodendrocyte precursor cell differentiation of embryonic neural stem cells through Erk, PI3K, and p38 signaling.</a> J Mol Neurosci. 46, 644-653 (2012).</li>
<li>Galvao, R. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Transformation+of+quiescent+adult+oligodendrocyte+precursor+cells+into+malignant+glioma+through+a+multistep+reactivation+process%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+Natl+Acad+Sci+U+S+A%22%5BJournal%5D)">Transformation of quiescent adult oligodendrocyte precursor cells into malignant glioma through a multistep reactivation process.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 111, E4214-E4223 (2014).</li>
<li>Liu, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mosaic+analysis+with+double+markers+reveals+tumor+cell+of+origin+in+glioma%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">Mosaic analysis with double markers reveals tumor cell of origin in glioma.</a> Cell. 146, 209-221 (2011).</li>
<li>Das, S., Srikanth, M., Kessler, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cancer+stem+cells+and+glioma%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Clin+Pract+Neurol%22%5BJournal%5D)">Cancer stem cells and glioma.</a> Nat Clin Pract Neurol. 4, 427-435 (2008).</li>
<li>Modrek, A. S., Bayin, N. S., Placantonakis, D. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Brain+stem+cells+as+the+cell+of+origin+in+glioma%5BTitle%5D)+AND+%22World+J+Stem+Cells%22%5BJournal%5D)">Brain stem cells as the cell of origin in glioma.</a> World J Stem Cells. 6, 43-52 (2014).</li>
<li>Sampetrean, O., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Invasion+precedes+tumor+mass+formation+in+a+malignant+brain+tumor+model+of+genetically+modified+neural+stem+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Neoplasia%22%5BJournal%5D)">Invasion precedes tumor mass formation in a malignant brain tumor model of genetically modified neural stem cells.</a> Neoplasia. 13, 784-791 (2011).</li>
<li>McNeill, R. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Modeling+astrocytoma+pathogenesis+in+vitro+and+in+vivo+using+cortical+astrocytes+or+neural+stem+cells+from+conditional%2C+genetically+engineered+mice%5BTitle%5D)+AND+%22JoVE%22%5BJournal%5D)">Modeling astrocytoma pathogenesis in vitro and in vivo using cortical astrocytes or neural stem cells from conditional, genetically engineered mice.</a> JoVE. , e51763(2014).</li>
<li>Lara-Padilla, E., Caceres-Cortes, J. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((On+the+nature+of+the+tumor-initiating+cell%5BTitle%5D)+AND+%22Curr+Stem+Cell+Res+Ther%22%5BJournal%5D)">On the nature of the tumor-initiating cell.</a> Curr Stem Cell Res Ther. 7, 26-35 (2012).</li>
<li>Busch, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((BMP-2-dependent+integration+of+adult+mouse+subventricular+stem+cells+into+the+neural+crest+of+chick+and+quail+embryos%5BTitle%5D)+AND+%22J+Cell+Sci%22%5BJournal%5D)">BMP-2-dependent integration of adult mouse subventricular stem cells into the neural crest of chick and quail embryos.</a> J Cell Sci. 119, 4467-4474 (2006).</li>
<li>Thiery, J. P., Acloque, H., Huang, R. Y., Nieto, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Epithelial-mesenchymal+transitions+in+development+and+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">Epithelial-mesenchymal transitions in development and disease.</a> Cell. 139, 871-890 (2009).</li>
<li>McDonald, O. G., Wu, H., Timp, W., Doi, A., Feinberg, A. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Genome-scale+epigenetic+reprogramming+during+epithelial-to-mesenchymal+transition%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Struct+Mol+Biol%22%5BJournal%5D)">Genome-scale epigenetic reprogramming during epithelial-to-mesenchymal transition.</a> Nat Struct Mol Biol. 18, 867-874 (2011).</li>
<li>Rahimi, R. A., Leof, E. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((TGF-beta+signaling%3A+a+tale+of+two+responses%5BTitle%5D)+AND+%22J+Cell+Biochem%22%5BJournal%5D)">TGF-beta signaling: a tale of two responses.</a> J Cell Biochem. 102, 593-608 (2007).</li>
<li>Xu, J., Lamouille, S., Derynck, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((TGF-beta-induced+epithelial+to+mesenchymal+transition%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Res%22%5BJournal%5D)">TGF-beta-induced epithelial to mesenchymal transition.</a> Cell Res. 19, 156-172 (2009).</li>
<li>Suva, M. L., Riggi, N., Bernstein, B. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Epigenetic+reprogramming+in+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Epigenetic reprogramming in cancer.</a> Science. 339, 1567-1570 (2013).</li>
<li>Sullivan, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+possible+new+focus+for+stroke+treatment+-+migrating+stem+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Expert+Opin+Biol+Ther%22%5BJournal%5D)">A possible new focus for stroke treatment - migrating stem cells.</a> Expert Opin Biol Ther. , 1-10 (2015).</li>
</ol>

De auteurs verklaren dat ze geen concurrerende financiële belangen hebben.

In deze studie gestandaardiseerd systeem voor EMT analyse gebruik NSC is beschreven (samengevat in aanvullende figuur 3). De reproduceerbaarheid Standaardisatie (Tabel 1 en 2). De NSCs zijn afgeleid van de ontwikkeling cortex, een weefsel dat normaliter EMT niet ondergaat. Dit is van voordeel voor de analyse van de eerste stappen in EMT. Eerste stappen in EMT kan niet voldoende worden bestudeerd in tumorcellen die genetische veranderingen hebben opgebouwd en kunnen al EMT kenmerken vast...

Gedurende verschillende stadia van embryonale ontwikkeling, epitheelcellen verliezen hun sterke hechting aan elkaar (bijv tight junctions) en het verwerven van een trekkende fenotype in een proces genaamd epitheliale naar mesenchymale transitie (EMT) 1. EMT is nodig voor de vorming van andere celtypen, zoals mesenchymale neurale cellen, een populatie die scheidt van de neuroepithelium 2. EMT is niet alleen essentieel tijdens embryonale stadia maar ook vereist in latere volwassen leven fysiologische processen in het volwassen organisme, zoals wondgenezing 3 en centraal zenuwstelsel (CNS) regeneratie handhaven demyeliniserende laesies 4. Epitheliale tumoren is bekend dat EMT reactiveren als een initiatie stap voor de migratie, invasie en metastase, wat uiteindelijk leidt tot de progressie van kanker 1,3. EMT inderdaad centraal gekoppeld aan een sterke migratie 1,3. De cellulaire stappen conditioning, initiëren, ondergaan en onderhouden van EMT niet volledig begrepen en moet verder onderzoek. Hier wordt een gestandaardiseerde in vitro modelsysteem EMT basis van NSC, met gedefinieerde groeifactoren en media (geen serum en geen enzym gebruik) gepresenteerd. Dit model systeem van belang is voor wetenschappers die werken aan EMT. De Slak, Zeb en Twist eiwit families is aangetoond van cruciaal belang voor EMT, zowel in ontwikkeling en ziekte 1 te zijn. De Slak, Zeb en Twist families zijn ook betrokken bij de gepresenteerde systeem. Het systeem is gebaseerd op een bepaalde regio van de voorhersenen die normaal ondergaat EMT verschaffen van een bijzonder voordeel voor de studie van begingebeurtenissen gedurende EMT inductie. Het modelsysteem zou kunnen worden toegepast op EMT in epithelia buiten het CZS te bestuderen, aangezien belangrijke EMT inductoren, zoals de slak, en Zeb Twist eiwitten, zijn gedurende EMT in weefsel dat zich buiten het CZS. Dit model system laat de gestandaardiseerde isolatie van NSCs uit de ontwikkelingslanden cortex om stamcellen functies in het algemeen en EMT in het bijzonder te bestuderen. Met dit systeem geïsoleerde we NSC geïnduceerde EMT en bestudeerden de daaropvolgende migratie onder invloed van FGF2 en BMP4. We zagen dat FGF- en BMP-signalering interageert met TGFp-signalering naar cel migratie te bevorderen, waardoor de validatie van het model systeem.

<table><tbody><tr><td>BMP4, rhBMP4</td><td>RnD Systems&nbsp;</td><td>314-BP-01M</td><td></td></tr><tr><td>Bovine pancreas insulin</td><td>Sigma&nbsp;</td><td>I1882</td><td></td></tr><tr><td>Boyden chamber, CytoSelect cell invasion assay</td><td>Cell Biolabs</td><td>CBA-110</td><td>24 well plate systeem</td></tr><tr><td>Cell culture dish with grid</td><td>Ibidi 500 mm dish, 35 mm</td><td>80156</td><td></td></tr><tr><td>CellMask Orange</td><td>Life Technologies</td><td>C10045</td><td>Plasma membraandkleurmiddel, gebruik op 1:1.000.</td></tr><tr><td>DAPI</td><td>LifeTechnologies</td><td>D1306</td><td>Voorraad bij 5 mg/ml. Gebruik op 1:10.000. Kankerverwekkend. Passende bescherming (handschoenen, jas, veiligheidsbril) vereist.</td></tr><tr><td>DMEM/F12 1:1 medium bottle</td><td>Gibco Invitrogen</td><td>21331-020</td><td></td></tr><tr><td>FGF2, rhFGF2</td><td>RnD Systems</td><td>233-FB-01M</td><td></td></tr><tr><td>Fibronectine, bovine</td><td>Sigma&nbsp;</td><td>F4759</td><td></td></tr><tr><td>Glutamax supplement&nbsp;</td><td>Gibco Invitrogen&nbsp;</td><td>35050-061</td><td></td></tr><tr><td>Graphics software with pixel measurement feature</td><td>Fiji</td><td>fiji.sc/Fiji</td><td>versie 2.0.0-rc-30/1.49s</td></tr><tr><td>HBSS media</td><td>Sigma&nbsp;</td><td>H9394</td><td></td></tr><tr><td>Human apo-Transferrin</td><td>Sigma</td><td>T1147</td><td>Mogelijk longirriterend. Inademing vermijden. Gebruik geschikte bescherming.</td></tr><tr><td>L-glutamine</td><td>Gibco Invitrogen&nbsp;</td><td>25030-024</td><td></td></tr><tr><td>Nestin, Mouse anti Nestin antibody</td><td>Genetex</td><td>GTX26142</td><td>Gebruik op 1:100, 4% PFA fixatie, Triton X100 bij 0,1%</td></tr><tr><td>Olig2, Rabbit anti Olig2 antibody</td><td>Verstrekt door Hirohide Takebayash</td><td>Persoonlijke voorraad</td><td>Gebruik op 1:2.000, 4% PFA fixatie, Triton X100 bij 0,1%</td></tr><tr><td>Penicillin/Streptomycin/Fungizone</td><td>Gibco Invitrogen&nbsp;</td><td>15240-062</td><td></td></tr><tr><td>Podoplanin, Mouse anti Podoplanin antibody</td><td>Acris</td><td>DM3614P</td><td>Gebruik op 1:250, 4% PFA fixatie, vermijd Triton X100</td></tr><tr><td>Poly-L-ornithine</td><td>Sigma&nbsp;</td><td>P3655</td><td></td></tr><tr><td>Putrescine</td><td>Sigma&nbsp;</td><td>P5780</td><td>Huid- en oogirriterend. Passende bescherming vereist.</td></tr><tr><td>Sodium selenite</td><td>Sigma&nbsp;</td><td>S5261</td><td></td></tr><tr><td>Sox10, Rabbit anti Sox10 antibody</td><td>Millipore Chemicon</td><td>AB5774</td><td>Gebruik op 1:200, 4% PFA fixatie, Triton X100 bij 0,1%</td></tr><tr><td>TGFb1, rhTGFb1</td><td>RnD Systems</td><td>240-B-010</td><td></td></tr><tr><td>Uncoated Petri dishes</td><td>Falcon Corning</td><td>351029</td><td></td></tr></tbody></table>

een enzym en serum-free neurale stamcel cultuur model voor emt investigation geschikt voor drug discovery

An Enzyme- and Serum-free Neural Stem Cell Culture Model for EMT Investigation Suited for Drug Discovery

Epitheliale naar mesenchymale transitie (EMT) beschrijft het proces van epitheel transdifferentiating in mesenchym. EMT is een fundamenteel proces tijdens de embryonale ontwikkeling die ook voorkomt bij glioblastoma, de meest voorkomende kwaadaardige hersentumor. EMT is ook waargenomen in meerdere carcinomen buiten de hersenen waaronder borstkanker, longkanker, darmkanker, maagkanker. EMT is centraal verbonden met maligniteit door het bevorderen migratie, invasie en metastasering. De mechanismen van EMT inductie zijn niet volledig begrepen. Hier beschrijven we een in vitro systeem voor gestandaardiseerde corticale isoleren van neurale stamcellen (NSC&#39;s) en daaropvolgende EMT-inductie. Dit biedt de flexibiliteit om hetzij enkele cellen of explantaatkweek gebruiken. In dit systeem, rat of muis embryonale voorhersenen NSC&#39;s gekweekt in een gedefinieerd medium zonder serum en enzymen. De NSCs uitgedrukt Olig2 en Sox10, twee transcriptiefactoren waargenomen in oligodendrocYTE precursorcellen (OPC). Met behulp van dit systeem, interacties tussen FGF-, BMP en TGF-signalering waarbij Zeb1, Zeb2 en Twist2 waargenomen, waar TGF-activering aanzienlijk verbeterd cel migratie, hetgeen duidt op een synergetische BMP / TGF-interactie. De resultaten wijzen op een netwerk van FGF-, BMP en TGF-signalering te worden betrokken bij EMT inductie en onderhoud. Dit modelsysteem is relevant EMT in vitro. Het is kostenefficiënt en geeft hoge reproduceerbaarheid. Het staat ook voor de vergelijking van verschillende verbindingen met betrekking tot hun migratie reacties (kwantitatief afstandsmeting) en high-throughput screening van verbindingen voor het remmen of verbeteren EMT (kwalitatieve meting). Het model is dan ook zeer geschikt voor drug bibliotheken testen voor stoffen van invloed zijn EMT.

Dit EMT model is gebaseerd op de gestandaardiseerde isolatie van NSC zowel als enkele cellen of als explantaten van een specifiek gebied van de ontwikkeling van neurale buis, de centrale cortex (figuren 1 en 2). Voor kwantitatieve beoordeling werden explantaten geënt exact in het midden van een 500 urn rooster kweekschaal (figuur 3). Explantaten van de centrale cortex werden eerst blootgesteld aan FGF2 twee dagen, gevolgd door twee extra...

Epitheliële naar mesenchymale overgang (EMT) maakt het mogelijk dat kankers invasief worden. Om EMT te onderzoeken, wordt een op neurale stamcellen (NSC) gebaseerd in vitro model beschreven dat vrij is van serum en enzymen. Dit gestandaardiseerde systeem maakt een kwantitatieve en kwalitatieve beoordeling van celmigratie, gen- en eiwitexpressie mogelijk. Het model is geschikt voor geneesmiddelontdekking.

Een enzym en Serum-free neurale stamcel Cultuur Model voor EMT Investigation Geschikt voor Drug Discovery

Epithelial to mesenchymal transition (EMT) describes the process of epithelium transdifferentiating into mesenchyme. EMT is a fundamental process during ...

Het algemene doel van deze procedure is om migratie op te wekken in cellen die doorgaans niet migreren, om zo specifieke verbindingen te identificeren die migratie activeren of blokkeren. Deze methode kan helpen bij het beantwoorden van kernvragen op het gebied van celmigratie en invasie, en kan van bijzonder belang zijn voor wetenschappers die werken met neurale stamcellen. Het belangrijkste voordeel van deze techniek is dat niet-migrerende en niet-invasieve cellen geanalyseerd kunnen worden tijdens het proces waarin zij migrerend en invasief worden.De implicaties van deze techniek strekken zich uit tot de identificatie van nieuwe verbindingen die de epitheliale-mesenchymale transitie, of EMT, blokkeren, welke optreedt in menselijke glioma's van een hoge graad die naar men gelooft afkomstig zijn van neurale stamcellen. Hoewel deze methode inzicht kan verschaffen in EMT en neurale stamcellen, kan ze ook worden gebruikt om andere epitheliale kankers te bestuderen, zoals borst-, long- of dikkedarmkanker. Bevestig op embryonale dag 14,5 de juiste leeftijd van de ratembryo's aan de hand van de beginnende vinger- en teenvorming in een voorpoot van de rat.Breng vervolgens de embryo's ove

an-enzyme-serum-free-neural-stem-cell-culture-model-for-emt

Research

JoVE Journal

Developmental Biology

Ontwikkelingsbiologie

Deze video beschrijft de methode die wordt gebruikt voor het isoleren van neuroprecursors uit de ontwikkelingslanden cortex van embryonale muizen. De procedure voor het verwijderen van embryo's uit de baarmoeder, het ontleden van de corticale weefsel, en verteren de geïsoleerde cerebrale cortex wordt weergegeven.

Cultuur van Mouse Neurale Stem Cell Voorlopers

Deze video toont protocol de toepassing van de neurosphere test voor de isolatie en de uitbreiding van neurale stamcellen van het ganglionisch eminenties van embryonale dag 14-hersenen van muizen.

Tot vaststelling van Embryonale Mouse Neural Stem Cell Culture Met behulp van de Neurosphere Assay

Een eenvoudige en betrouwbare methode op isolatie en de cultuur van neurale stamcellen uit afgedankte menselijke foetale corticale weefsel wordt beschreven. Culturen zijn afgeleid van bekende menselijke neurologische aandoeningen kunnen worden gebruikt voor de karakterisering van pathologische cellulaire en moleculaire processen, maar ook als een platform om de farmacologische werkzaamheid beoordelen.

Generatie van neurale stamcellen uit afgedankte menselijke foetale Cortical weefsel

Neurale stamcellen geoogst uit de volwassen hersenen worden steeds gebruikt in toepassingen, variërend van het fundamenteel onderzoek van de ontwikkeling van het zenuwstelsel aan het verkennen van potentiële klinische toepassingen in de regeneratieve geneeskunde. Dit maakt strenge controle op de isolatie en kweekomstandigheden gebruikt om deze cellen cruciaal voor experimentele resultaten goed groeien.

Groeiende neurale stamcellen uit Conventionele en Niet-conventionele Regio&#39;s van de Adult knaagdierhersenen

De protocollen beschrijven twee in vitro ontwikkelingstoxiciteit testsystemen (UKK en UKN1) op basis van menselijke embryonale stamcellen en transcriptoom studies. De testsystemen voorspellen mens ontwikkelingsstoornissen giftigheidsgevaar, en kunnen bijdragen aan dierproeven, de kosten en de tijd die nodig is voor de chemische veiligheid testen te verminderen.

Pluripotente menselijke stamcellen Gebaseerd Ontwikkelingstoxiciteit Testen voor Chemical Safety Screening and Systems Biology gegevens Generation

Een aangepast protocol wordt beschreven om muis ES-cellen te differentiëren in gedefinieerde populaties van zeer zuivere neuronen die functionerende synapsen en opkomend netwerkgedrag vertonen. Elektrofysiologische analyse toont het verlies van synaptische transmissie aan na blootstelling aan botulinum neurotoxine serotypen /A-/G en tetanus neurotoxine.

Functionele Evaluatie van Biologische Neurotoxines in Networked Cultures van stamcel-afgeleide centrale zenuwstelsel Neuronen

Met het doel om veranderingen in miRNA's in gedifferentieerde menselijke neurale stamcellen (hNSC's) te karakteriseren, beschrijven we hNSC-differentiatie op een driedimensionaal systeem, de evaluatie van veranderingen in microRNA-expressie door miRNA PCR-array en computationele analyse voor miRNA-doelwitvoorspelling en de validatie ervan door middel van een dual luciferase-assay.

Differentiatie van een menselijke neurale stamcellen Line op Three Dimensional Culturen, Analyse van MicroRNA en vermeende doelwit-genen

Dit protocol beschrijft in detail de methode voor het genereren van neurale progenitoren uit embryonale stamcellen met behulp van een serumvrije monolaagmethode. Deze progenitoren kunnen worden gebruikt om rijpe neurale celtypen te verkrijgen of om het proces van neurale specificatie te bestuderen en is geschikt voor schaalvergroting in multiwell-formaat voor compound screening.

Neurale differentiatie van muis embryonale stamcellen in serum-vrije monolaagkweek

Hier rapporteren we een protocol voor het ontwikkelen van een driedimensionaal (3-D) systeem van humane geïnduceerde pluripotente stamcellen (hiPSCs), het serumvrije embryoïde lichaam (SFEB) genoemd. Dit 3-D model kan gebruikt worden als een organotypische plakcultuur om menselijke corticale ontwikkeling te modelleren en voor de fysiologische ondervraging van neurale ontwikkelingen.

Ontwikkeling van HiPSC-afgeleide serumvrije embryoïde lichamen voor de ondervraging van 3-D stamcelculturen met behulp van fysiologisch relevante analyses

Hier gepresenteerd is een protocol voor het genereren van een eencellige cultuur van menselijke embryonale stamcellen en hun daaropvolgende differentiatie in neurale voorlopercellen. Het protocol is eenvoudig, robuust, schaalbaar en geschikt voor geneesmiddelen screening en toepassingen voor regeneratieve geneeskunde.

Efficiënte Neurale differentiatie met behulp van eencellige cultuur van menselijke embryonale stamcellen

Hier hebben we een goedkope en eenvoudig te bedienen methode opgezet die een snelle en efficiënte differentiatie van embryonale stamcellen naar neuronen stuurt. Deze methode is geschikt voor popularisering onder laboratoria en kan een nuttig hulpmiddel zijn voor neurologisch onderzoek.

Neuronale differentiatie van embryonale stamcellen van muizen in vitro

Leer een serumvrije neurale stamcelcultuurmethode voor EMT-onderzoek in kanker. Dit model maakt kwantitatieve en kwalitatieve analyse van celmigratie mogelijk voor drug discovery.

Een enzym en Serum-free neurale stamcel Cultuur Model voor EMT Investigation Geschikt voor Drug Discovery

Meer video's verkennen