Name: Murine Experimental Model van de oorspronkelijke tumor Ontwikkeling en peritoneale metastase via Orthotope Inenting met ovariumcarcinoom Cells (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2016-12-09T12:30:00.000+00:00
Duration: 8 min 17 s
Description: Leer orthotopische inoculatie van ovariumcarcinoomcellen bij muizen om tumorontwikkeling en peritoneale metastase te bestuderen. Dit model biedt inzicht in de mechanismen van kankerprogressie.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

De auteurs danken de leden van de afdeling Obstetrie en Gynaecologie en de biologie van kanker voor hun nuttige discussies en technische bijstand. Deze studie werd ondersteund door een Japan Maatschappij ter Bevordering van de Wetenschap (JSPS) Grant-in-Steun voor Wetenschappelijk Onderzoek (15K15604, om H. Kajiyama).

Het behandelprotocol volgt de richtlijnen voor dierproeven bij Nagoya University aangenomen. 1. Bereiding van celsuspensies <ol><li> Humaan ovarium clear cell carcinoma cellijn. <ol><li> Handhaaf ES-2-cellen in 12 RPMI-1640 medium met 10% foetaal runderserum (FBS) en penicilline / streptomycine (penicilline: 100 eenheden / ml, streptomycine: 0,1 mg / ml). Kweekcellen bij 37 ° C in een 5% CO2 bevochtigde incubator. </li><li> Verzamel cellen in de logaritmische groeifase in 0,05% trypsine / 0,02% EDTA-oplossing (trypsine / EDTA). <ol><li> Verwijder eerst de oude media uit de celkweek vat, dan was de cellen eenmaal met PBS (PBS zonder Ca 2+ / Mg 2+, 3-4 ml per 25 2 cm). </li><li> Voeg vervolgens 1 ml per 25 cm 2 van trypsine / EDTA. Draai de celkweek vaartuig naar de cel monolaag met trypsine / EDTA dekken. Na het verwijderen en weggooien van trypsine / EDTA, de terugkeer van de celcultuur vaartuig naar de incubator voor 3-5 min of tot cellen worden losgemaakt. </li><li> Onderzoek de cellen onder een microscoop te waarborgen de cellen losgemaakt van het oppervlak van het celkweekvat en zwevende. </li><li> Voeg vers serum dat groeimedium aan de trypsine (5 ml per 25 cm 2) te inactiveren, en resuspendeer de cellen. Transfer-geresuspendeerde cellen om een ​​15 ml conische buis. </li><li> Centrifugeer bij 300 xg gedurende 5 minuten. Voer centrifugeren hetzij bij 4 ° C of kamertemperatuur. Verwijder voorzichtig supernatant en resuspendeer cellen met groeimedium (5 ml per 25 cm 2). </li></ol></li><li> Aantal cellen (bijvoorbeeld door trypan-blauw exclusie) dan resuspendeer in groeimedium bij een dichtheid van 2 x 10 8 cellen / ml. Zet de gesuspendeerde cellen op ijs. </li></ol></li><li> Ontdooi bevroren extracellulaire matrix (ECM) -gebaseerde hydrogel hoeveelheden in een ijsbad. </li><li> Voeg de celsuspensie ECM-based hydrogel fracties bij een verhouding van 1: 1 (c eindcelconcentratieoncentration: 1 x 10 5 cellen / ul van medium-ECM-gebaseerde hydrogel) en meng. Plaats de voorbereide celsuspensies in een ijsbad tot gebruik. </li></ol> 2. Orthotope Inenting met celsuspensies LET OP: Chirurgie is niet een dedicated suite nodig. Operatie kan worden uitgevoerd op laboratoriumschaal benchtop in een gebied van de ruimte die is gescheiden en heeft minimale activiteit. Een laminaire afzuigkap kan ook worden gebruikt. Steriele chirurgische instrumenten worden gebruikt en schaar mag niet worden gebruikt om de huid insnijdingen. <ol><li> Gebruik vrouwelijk naakt muizen (BALB / c nu / nu) op leeftijd van 8 weken voor deze orthotope inenting model. </li><li> Eerst verdoven de muis met behulp van inhalatie met isofluraan (2-4%). Controleer narcose diepte door te controleren of het ontbreken van terugtrekking na stevige teen knijpen. Nadat de muis verdoofd, breng dan een neutrale steriele oogzalf om de ogen te voorkomen indien nodig drogen. </li><li> Plaats de verdoofde muis op een operating stadium buik naar beneden. Ontsmet de chirurgische gebied meerdere malen met zowel alcohol en een jodium-gebaseerde of chloorhexidine-gebaseerde scrub. </li><li> Maak een ~ 2 cm incisie verticaal in de buurt van de wervelkolom tussen de rechter ribbenboog en dijbeen. Een steriele chirurgische doek rond de incisie. Bevestig de ingesneden huid oppervlakken met klemmen om de opening te handhaven. Opmerking: oprolmechanismen worden gebruikt in plaats klemmen. </li><li> Maak vervolgens een tweede incisie (ongeveer 1 cm) en de pariëtale peritoneum in de eerste incisie de buikholte geopend. Klem de ingesneden abdominale oppervlakken. Klem het vetweefsel dat de ipsilaterale eierstokken en eileiders omgeeft met een klem aan de eierstok uit de buikholte verwijderen. Plaats de eierstok en eileider op gaas zorgvuldig. Plaats vervolgens de muis buik naar beneden onder de microscoop ontleden. </li><li> Plaats de cel suspensie in een insulinespuit (1/2 cc, 29 G) net voor injectie. injecteren zorgvuldig bereide celsuspensie (1- 2 gl) in de eierstok. Sinds enkele sec, behoudt de naald in de eierstok te geleren van de ECM-gebaseerde hydrogel te garanderen. Na gelering, de geïnjecteerde tumorcellen blijven in de eierstok. </li><li> Voorzichtig het ovarium in het lichaam. Hechtdraad de tweede incisie met steriele medische zijde, en dan sluit de huid met wond clips. </li><li> Na de operatie wordt de muizen een analgesie (bijvoorbeeld meloxicam, intramusculaire (im) of subcutaan (sc), 0,2 mg / kg) voor een eerste periode van 24 uur worden toegediend. </li></ol> 3. Post-chirurgische behandeling <ol><li> Plaats elke muis in een aparte kooi op schoon papier met een hot pack om de muis te warm te houden totdat het voldoende bewustzijn heeft herwonnen om borstligging handhaven. Dan, de terugkeer van de dieren naar hun kooien voor het opfokken en monitoring. Bewaak de muizen dagelijks gedurende 3-7 dagen na chirurgische behandeling. </li><li> Monitoring van postoperatieve muizen <ol><li> In geval van tekenen van pijn, beheren analgeSICS dagelijkse (bijvoorbeeld meloxicam, im of sc, 0,2 mg / kg). </li><li> Als muizen tekenen van infectie (bijvoorbeeld roodheid, zwelling, afscheiding), toedienen dagelijkse injectie met anti-infectieuze reagens (bijvoorbeeld penicilline, im, 100.000 IU / kg). </li></ol></li><li> Verwijder het vel sluiting materialen 10 - 14 dagen na de post-operatieve behandeling. </li></ol> 4. Analyse van tumoren en metastasen OPMERKING: De tumor wordt gevormd aan het geïnjecteerde eierstok 2-3 weken na inoculatie. <ol><li> Offer de muizen door kooldioxide, en dan het verzamelen van de monsters (bijvoorbeeld tumoren, metastasen, organen) 13-15 voor verdere analyse 14,16-20. OPMERKING: Indien een in vivo imaging systeem beschikbaar, cellen die enzymen die bioluminescentie (bijv, luciferase) of fluorescent eiwit (bijvoorbeeld GFP) produceren kunnen worden gebruikt in dit protocol. Deze gewijzigde protocol zal nuttige informatie te verstrekkende dynamiek van de verspreiding van kankercellen van de primaire tumor. </li></ol>

<ol><li>Jemal, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Global+cancer+statistics%5BTitle%5D)+AND+%22CA+Cancer+J+Clin%22%5BJournal%5D)">Global cancer statistics.</a> CA Cancer J Clin. 61 (2), 69-90 (2011).</li>
<li>Kajiyama, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Long-term+clinical+outcome+of+patients+with+recurrent+epithelial+ovarian+carcinoma%3A+is+it+the+same+for+each+histological+type%5BTitle%5D)+AND+%22Int+J+Gynecol+Cancer%22%5BJournal%5D)">Long-term clinical outcome of patients with recurrent epithelial ovarian carcinoma: is it the same for each histological type.</a> Int J Gynecol Cancer. 22 (3), 394-399 (2012).</li>
<li>Kikkawa, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Advances+in+treatment+of+epithelial+ovarian+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Nagoya+J+Med+Sci%22%5BJournal%5D)">Advances in treatment of epithelial ovarian cancer.</a> Nagoya J Med Sci. 68 (1-2), 19-26 (2006).</li>
<li>Yoshikawa, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Clinicopathologic+features+of+epithelial+ovarian+carcinoma+in+younger+vs.+older+patients%3A+analysis+in+Japanese+women%5BTitle%5D)+AND+%22J+Gynecol+Oncol%22%5BJournal%5D)">Clinicopathologic features of epithelial ovarian carcinoma in younger vs. older patients: analysis in Japanese women.</a> J Gynecol Oncol. 25 (2), 118-123 (2014).</li>
<li>Kajiyama, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Involvement+of+SDF-1alpha%2FCXCR4+axis+in+the+enhanced+peritoneal+metastasis+of+epithelial+ovarian+carcinoma%5BTitle%5D)+AND+%22Int+J+Cancer%22%5BJournal%5D)">Involvement of SDF-1alpha/CXCR4 axis in the enhanced peritoneal metastasis of epithelial ovarian carcinoma.</a> Int J Cancer. 122 (1), 91-99 (2008).</li>
<li>Terauchi, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Possible+involvement+of+TWIST+in+enhanced+peritoneal+metastasis+of+epithelial+ovarian+carcinoma%5BTitle%5D)+AND+%22Clin+Exp+Metastasis%22%5BJournal%5D)">Possible involvement of TWIST in enhanced peritoneal metastasis of epithelial ovarian carcinoma.</a> Clin Exp Metastasis. 24 (5), 329-339 (2007).</li>
<li>Bronstein, L., Zechner, C., Koeppl, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Bayesian+inference+of+reaction+kinetics+from+single-cell+recordings+across+a+heterogeneous+cell+population%5BTitle%5D)+AND+%22Methods%22%5BJournal%5D)">Bayesian inference of reaction kinetics from single-cell recordings across a heterogeneous cell population.</a> Methods. 85, 22-35 (2015).</li>
<li>Guo, W., Zhang, S., Liu, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Establishment+of+a+novel+orthotopic+model+of+breast+cancer+metastasis+to+the+lung%5BTitle%5D)+AND+%22Oncol+Rep%22%5BJournal%5D)">Establishment of a novel orthotopic model of breast cancer metastasis to the lung.</a> Oncol Rep. 33 (6), 2992-2998 (2015).</li>
<li>Lewis-Tuffin, L. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Src+family+kinases+differentially+influence+glioma+growth+and+motility%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Oncol%22%5BJournal%5D)">Src family kinases differentially influence glioma growth and motility.</a> Mol Oncol. , (2015).</li>
<li>Saar, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Orthotopic+tumorgrafts+in+nude+mice%3A+A+new+method+to+study+human+prostate+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Prostate%22%5BJournal%5D)">Orthotopic tumorgrafts in nude mice: A new method to study human prostate cancer.</a> Prostate. 75 (14), 1526-1537 (2015).</li>
<li>Zou, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((miR-29c+suppresses+pancreatic+cancer+liver+metastasis+in+an+orthotopic+implantation+model+in+nude+mice+and+affects+survival+in+pancreatic+cancer+patients%5BTitle%5D)+AND+%22Carcinogenesis%22%5BJournal%5D)">miR-29c suppresses pancreatic cancer liver metastasis in an orthotopic implantation model in nude mice and affects survival in pancreatic cancer patients.</a> Carcinogenesis. 36 (6), 676-684 (2015).</li>
<li>Lau, D. H., Lewis, A. D., Ehsan, M. N., Sikic, B. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Multifactorial+mechanisms+associated+with+broad+cross-resistance+of+ovarian+carcinoma+cells+selected+by+cyanomorpholino+doxorubicin%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Res%22%5BJournal%5D)">Multifactorial mechanisms associated with broad cross-resistance of ovarian carcinoma cells selected by cyanomorpholino doxorubicin.</a> Cancer Res. 51 (19), 5181-5187 (1991).</li>
<li>Bao, L., Matsumura, Y., Baban, D., Sun, Y., Tarin, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effects+of+inoculation+site+and+Matrigel+on+growth+and+metastasis+of+human+breast+cancer+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Br+J+Cancer%22%5BJournal%5D)">Effects of inoculation site and Matrigel on growth and metastasis of human breast cancer cells.</a> Br J Cancer. 70 (2), 228-232 (1994).</li>
<li>Huang, M. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Epidemiological+investigation+on+major+depressive+disorder+in+the+most+heavily+damaged+areas+from+Wenchuan+earthquake+in+2008%5BTitle%5D)+AND+%22Zhonghua+Liu+Xing+Bing+Xue+Za+Zhi%22%5BJournal%5D)">Epidemiological investigation on major depressive disorder in the most heavily damaged areas from Wenchuan earthquake in 2008.</a> Zhonghua Liu Xing Bing Xue Za Zhi. 31 (2), 167-170 (2010).</li>
<li>Ma, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mortality+of+neonatal+respiratory+failure+related+to+socioeconomic+factors+in+Hebei+province+of+China%5BTitle%5D)+AND+%22Neonatology%22%5BJournal%5D)">Mortality of neonatal respiratory failure related to socioeconomic factors in Hebei province of China.</a> Neonatology. 100 (1), 14-22 (2011).</li>
<li>Lin, Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Serum+levels+of+FGF-21+are+increased+in+coronary+heart+disease+patients+and+are+independently+associated+with+adverse+lipid+profile%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Serum levels of FGF-21 are increased in coronary heart disease patients and are independently associated with adverse lipid profile.</a> PLoS One. 5 (12), e15534(2010).</li>
<li>Liu, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Lumbar+interspinous+non-fusion+techniques%3A+comparison+between+Coflex+and+Wallis%5BTitle%5D)+AND+%22Nan+Fang+Yi+Ke+Da+Xue+Xue+Bao%22%5BJournal%5D)">Lumbar interspinous non-fusion techniques: comparison between Coflex and Wallis.</a> Nan Fang Yi Ke Da Xue Xue Bao. 30 (11), 2455-2458 (2010).</li>
<li>Zhang, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Wave+intensity+analysis+of+carotid+artery%3A+a+noninvasive+technique+for+assessing+hemodynamic+changes+of+hyperthyroid+patients%5BTitle%5D)+AND+%22J+Huazhong+Univ+Sci+Technolog+Med+Sci%22%5BJournal%5D)">Wave intensity analysis of carotid artery: a noninvasive technique for assessing hemodynamic changes of hyperthyroid patients.</a> J Huazhong Univ Sci Technolog Med Sci. 30 (5), 672-677 (2010).</li>
<li>Song, G. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comparative+transcriptional+profiling+and+preliminary+study+on+heterosis+mechanism+of+super-hybrid+rice%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Plant%22%5BJournal%5D)">Comparative transcriptional profiling and preliminary study on heterosis mechanism of super-hybrid rice.</a> Mol Plant. 3 (6), 1012-1025 (2010).</li>
<li>Wan, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+analysis+of+variation+of+Han+female+adolescent+bone+development+in+Henan+and+Zhejiang+province%5BTitle%5D)+AND+%22Fa+Yi+Xue+Za+Zhi%22%5BJournal%5D)">The analysis of variation of Han female adolescent bone development in Henan and Zhejiang province.</a> Fa Yi Xue Za Zhi. 26 (2), 97-99 (2010).</li>
<li>Wang, H. B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Excitation-emission+fluorescence+characterization+study+of+the+three+phenolic+compounds%5BTitle%5D)+AND+%22Guang+Pu+Xue+Yu+Guang+Pu+Fen+Xi%22%5BJournal%5D)">Excitation-emission fluorescence characterization study of the three phenolic compounds.</a> Guang Pu Xue Yu Guang Pu Fen Xi. 30 (5), 1271-1274 (2010).</li>
</ol>

De auteurs hebben niets te onthullen.

Dierlijke modellen zijn van essentieel belang om de mechanismen van de ontwikkeling van tumoren, progressie, metastase en werkzaamheid van het geneesmiddel te analyseren tegen kankercellen. Muizen die humaan ovarium kankercellen eveneens zijn gebruikt als diermodel. Hier beschrijven we een minder invasieve procedure voor het beheer van de ovariële tumor cellen op een orthotope website. Deze procedure, enting in de eierstokken door een retroperitoneale benadering van de dorsale flank biedt aanzienlijke voordelen boven an...

Epitheliale ovariumcarcinoom (EOC) is goed voor het hoogste tarief van kanker-gerelateerde sterfte onder gynaecologische maligniteiten 1. EOC is geassocieerd met een slechte prognose, voornamelijk vanwege de late symptomen en wordt vaak geassocieerd met meerdere intraperitoneale verspreidingen en metastasen 2-4. Peritoneale verspreiding is een multi-step proces. Allereerst tumorcellen losmaken van de primaire letsels en migreren naar de buikholte. Wanneer de tumorcellen hechten aan de peritoneale mesothelium, beginnen ze weefsel binnen te dringen door de mesothelium 5,6. Om beter te begrijpen van de tumor biologie (bv, de progressie van kanker en therapeutische respons), muis modellen bieden een schat aan informatie. Een xenograft met menselijke kankercellen wordt veel gebruikt voor muismodellen waarin menselijke kankercellen subcutaan geïnoculeerd, intraperitoneaal, intraveneus en orthotopically. Een dier model met een orthotopically grafted tumor kan efficiënter en nauwkeuriger resultaten op ten de tumoromgeving bij mensen geven ten opzichte van een diermodel met een geïmplanteerde tumor heterotoop. Daarom is voor vele menselijke tumoren, orthotope transplantatie modellen zijn vastgesteld 7-11. Hier beschrijven we de orthotope enting van humane cellen EOC door een retroperitoneale benadering van de dorsale flank, die beperkte invasiviteit opzichte ventrale inoculatie. Deze techniek kan een verscheidenheid aan bruikbare informatie over EOC, vooral het mechanisme van intraperitoneale verspreiding verschaffen.

<table><tbody><tr><td>Matrigel matrix&nbsp;</td><td>BD</td><td>354234</td><td>ECM-gebaseerde hydrogel</td></tr><tr><td>Insuline-spuit</td><td>TERUMO</td><td>SS-05M2913</td><td>1/2 cc, 29 G x 1/2"</td></tr><tr><td>Naainaald met hechtdraad</td><td></td><td></td><td>11 mm, 3/8, Nylon6-0</td></tr><tr><td>Reflex 7 mm wondclipapplicateur</td><td>CellPoint Scientific</td><td>204-1000</td><td></td></tr><tr><td>&nbsp;Reflex 7 mm wondclips</td><td>CellPoint Scientific</td><td>203-1000</td><td></td></tr></tbody></table>

murine experimental model van de oorspronkelijke tumor ontwikkeling en peritoneale metastase<em&gt; via</em&gt; orthotope inenting met ovariumcarcinoom cells

Murine Experimental Model of Original Tumor Development and Peritoneal Metastasis via Orthotopic Inoculation with Ovarian Carcinoma Cells

Epitheliaal ovariumcarcinoom (EOC) is geassocieerd met een slechte prognose omdat het peritoneale verspreiding toont. De prognose te verbeteren, is het belangrijk om peritoneale verspreiding beheersen. Het is echter nog onduidelijk hoe tumorcellen losmaken van primaire letsels en hechten aan de mesothelium. De oprichting van een geschikt diermodel is nodig om een goed begrip van het mechanisme van peritoneale verspreiding in vivo te krijgen. In de huidige studie introduceren we de werkwijze van de lokale injectie van EOC cellen in de muizen ovariële oppervlak om de ontwikkeling van metastasen, waaronder het peritoneum en gelegen organen. Vrouwelijk naakt muizen (BALB / c nu / nu) en 8 weken oud werden gebruikt. Onder een microscopisch gezichtsveld, EOC cellen (1 x 10 5 cellen / gl medium extracellulaire matrix (ECM) -gebaseerde hydrogel / eenzijdige ovarium / muis) werden in muizen eierstokken geïnjecteerd door een retroperitoneale benadering van de dorsale flank. De voorgestelde methode is een less invasieve procedure voor de muis en minimaliseert beschadiging van de eierstok. Hier beschrijven we de methodologische stappen in de ontwikkeling van het origineel en metastatische tumorvorming van EOC.

<html> Zes naakt muizen hadden hun eierstokken ingeënt met het menselijk clear cell carcinoma cellijn ES-2, zoals beschreven in dit protocol. Zoals getoond in figuur 1A, na 2 weken, 5 van de 6 muizen hadden een tumor in de eierstok geïnoculeerd met ES-2-cellen, maar er was geen tumor in de contralaterale ovarium zonder enting (als controle). Bovendien, 2 van de 5 muizen vertoonden meerdere peritoneale uitzaaiingen met ascites. Metastaseren naar de lever (Figuur 1B...

Het meerstaps proces van peritoneale verspreiding van ovariumcarcinoom verduidelijken de huidige studie beschrijft een murine experimenteel model van originele tumorontwikkeling en metastase via orthotope peritoneale inoculatie met deze tumorcellen.

Murine Experimental Model van de oorspronkelijke tumor Ontwikkeling en peritoneale metastase<em&gt; via</em&gt; Orthotope Inenting met ovariumcarcinoom Cells

Epithelial ovarian carcinoma (EOC) is associated with a poor prognosis because it shows peritoneal dissemination. To improve the prognosis, it is ...

Het algemene doel van deze procedure is het observeren van de ontwikkeling van primaire en metastatische tumorvorming bij epitheliaal ovariumcarcinoom. Deze methode kan helpen bij het beantwoorden van kernvragen binnen het gynaecologisch oncologisch veld, zoals het begrijpen van de tumorbiologie of peritoneale disseminatie. Het belangrijkste voordeel van deze techniek is dat orthotopische inoculatie van menselijk epitheliaal ovariumcarcinoom, of EOC-cellen, wordt uitgevoerd via een retroperitoneale benadering in de dorsale flank. Om een humane ovarium heldere celcarcinoom-cellijn voor te bereiden, worden ES2-cellen uitgeplaat en onderhouden in RPMI-1640 medium met 10% FBS en PenStrep bij 37 °C en 5% CO2. In de logaritmische groeifase wordt het oude medium uit de cultuur verwijderd en worden de cellen één keer gewassen met drie tot vier milliliter PBS. Voeg vervolgens één milliliter trypsine/EDTA toe en schud het vat om de gehele monolaag te bedekken. Verwijder de trypsine-oplossing en plaats de cellen gedurende drie tot vijf minuten terug in de incubator. Nadat de cellen onder een microscoop zijn gecontroleerd om te bevestigen dat ze zijn losgekomen en zweven, worden vijf milliliter vers serumhoudend groeimedium toegevoegd om de trypsine te inactiveren en de cellen te resuspenderen voordat ze worden overgebracht naar een 15-milliliter conische buis. Centrifugeer de suspensie bij 300 ×g en kamertemperatuur

murine-experimental-model-original-tumor-development-peritoneal

Research

JoVE Journal

Cancer Research

Kankeronderzoek

Orthotope diermodellen van kanker van de eierstokken te repliceren beter mens-en vaatziekten en daardoor meer inzicht in de progressie van kanker en tumor respons op therapie. Een muis model krijgt een intrabursale injectie van luciferase-expressie ovarium tumorcellen. De behandeling wordt toegediend via orale sondevoeding. Tumorgroei wordt bewaakt...

In vivo beeldvorming en therapeutische behandelingen in een orthotope Muis Model van eierstokkanker

Een orthotope Model van sereuze eierstokkanker in immunocompetente muizen voor In vivo Tumor Imaging en Bewaking van de Tumor Immuunrespons

In this video, we demonstrate the development of  an in vitro  three-dimensional model of the lining of the peritoneal cavity. This organotypic culture can help to investigate ovarian cancer cell adhesion, invasion, and proliferation.

Modeling Ovarian Cancer Metastasis in Peritoneal Cavity Lining: A Method To Establish an In Vitro 3D Model of the Peritoneal Lining

In this video, we demonstrate intra-uterine injection of ovarian cancer cells in a mouse model. This orthotopic murine model helps us to non-invasively monitor tumor growth and evaluate the efficacy of new therapies for the prevention and treatment of recurrent ovarian cancer.

Intra-uterine Cancer Cell Injection: A Technique to Deliver Cancer Cells for Establishing Intra-peritoneal Ovarian Cancer Mouse Model

This video describes the protocol for creating a murine experimental model to study tumor development and peritoneal metastasis. This ovarian cancer model is generated by the orthotopic inoculation of human epithelial ovarian cancer cells into the ovaries of a female mouse.

Orthotopic Inoculation of Ovarian Cancer Cells into Murine Ovary: A Procedure to Establish an Ovarian Cancer Mouse Model to Study Peritoneal Dissemination of Cells

We beschrijven een niet-invasieve dierlijke beeldvormingsplatform die de detectie, kwantificering en monitoring van de groei en recidief van ovariumkanker mogelijk maakt. Dit intra-peritoneale xenograftmodel bootst het klinische profiel van patiënten met ovariumkanker na.

Muizenmodel voor Non-invasieve beeldvorming te detecteren en Monitor Eierstokkanker Herhaling

Eierstokkankermetastase wordt gekenmerkt door talrijke diffuse intra-peritoneale laesies, waardoor nauwkeurige visuele kwantificering van de tumorbelasting een uitdaging is. Hierin beschrijven we een methode voor in situ en ex vivo kwantificering van de metastatische tumorbelasting met behulp van rood fluorescerend proteïne (RFP)-gelabelde tumorcellen en optische beeldvorming.

Kwantificering van Intra-peritoneale eierstokkanker Metastase

Het huidige protocol beschrijft intratibia osteosarcoom celinjectie om muismodellen te genereren met orthotopisch osteosarcoom en pulmonale metastase laesies.

Intratibiale osteosarcoomcelinjectie om orthotopisch osteosarcoom en longmetastase muismodellen te genereren

Dit protocol beschrijft de opstelling van een driedimensionaal (3D) ex vivo model van de interactie tussen kankercellen en omtentum. Het model biedt een platform voor het ophelderen van pro-tumormechanismen binnen de vetniche en voor het testen van nieuwe therapieën.

Een ex vivo-model van peritoneale metastase van eierstokkanker met behulp van humaan omentum

Dit manuscript beschrijft de ontwikkeling van een diermodel dat directe testen van de effecten van tumorhypoxie op metastase en het ontcijferen van de werkingsmechanismen mogelijk maakt. Hoewel de hier beschreven experimenten zich richten op Ewing-sarcoom, kan een vergelijkbare aanpak worden toegepast op andere tumortypen.

In vivo model voor het testen Effect van hypoxie op tumormetastase

Leer orthotopische inoculatie van ovariumcarcinoomcellen bij muizen om tumorontwikkeling en peritoneale metastase te bestuderen. Dit model biedt inzicht in de mechanismen van kankerprogressie.

Murine Experimental Model van de oorspronkelijke tumor Ontwikkeling en peritoneale metastase via Orthotope Inenting met ovariumcarcinoom Cells (Video) | JoVE Journal

Murine Experimental Model van de oorspronkelijke tumor Ontwikkeling en peritoneale metastase

Meer video's verkennen