Name: Anionische polymerisatie van een amfifiele copolymeer voor de bereiding van blokcopolymeer micellen gestabiliseerd door π-π stapelen interacties (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2016-10-10T14:00:00.000+00:00
Duration: 10 min 53 s
Description: Leer de anionische polymerisatie van blokcopolymeermicellen voor doxorubicine-afgifte via ringopeningstechnieken. Dit protocol toont synthese met hoge opbrengst en lage dispersiteit voor farmaceutische toepassingen.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

CA erkent een ontdekkingssubsidie van de Natural Sciences and Engineering Research Council of Canada. CA erkent een leerstoel in de farmacie en geneesmiddelafgifte van GSK. De auteurs verklaren geen concurrerende financiële belangen te hebben.

<img alt="Figuur 1" src="/files/ftp_upload/54422/54422fig1.jpg" /> Figuur 1. Schematische voorstelling toont de negen belangrijkste stappen in de voorbereiding van de MPEG-b -PPheGE copolymeer. <a href="http://ecsource.jove.com/files/ftp_upload/54422/54422fig1large.jpg" target="_blank">Klik hier om een grotere versie van deze figuur te bekijken.</a> 1. Voorbereiding van de reagentia onder droge omstandigheden <ol><li> Bereiding van reagentia. <ol><li> Weeg 15 g mPEG-5K (Mn = 5400 g / mol, 1,03 PDI) en plaats bij 50 ° C in een oven onder vacuüm gedurende 48 uur voor gebruik. </li><li> Droge 200 ml dimethylsulfoxide (DMSO) over calciumhydride (CaH2) (~ 1 g), plaats onder vacuum gedurende 30 min, spoelen onder argon en roeren 48 uur vóór gebruik. </li><li> Plaats 50 ml van de PheGE monomeer in een droge en schone fles (100 ml), voeg 1 g CaH2, verbinding onder vacuüm gedurende 15 min op ijs, zuivering onder argonen laat roeren gedurende 24 uur onder argon voor gebruik. </li></ol></li></ol> 2. Voorbereiding van de Kalium Naphthalene <ol><li> Voorzichtig gesneden kleine stukjes natrium (~ 1,5 g) gedroogd met hexaan om de overmaat minerale olie te verwijderen en voeg aan de ronde kolf met de tetrahydrofuran (THF) (v = 500 ml). LET OP: De brokken van natrium mag niet worden blootgesteld aan de lucht voor een lange vanwege het risico op brand. </li><li> benzofenon (~ 5 g), purge toe te voegen met argon en sluit de ronde kolf (2 halzen) met glazen stoppen. </li><li> Na roeren onder argon gedurende 24 uur, sluit de rondbodemkolf een destillatie-inrichting (figuur 2), destilleren donkere oplossing onder argon onder reflux (dwz terugvloeikoeling gedurende ongeveer 2 uur periode na de oplossing wordt blauw). Beginnen om het gewenste volume te verzamelen ~ 150 ml THF door het sluiten van de klep links (in het midden van de destillatie-inrichting). LET OP: Als deze oplossing niet blauw wordt, stop de Distilning, afkoelen bij kamertemperatuur (RT) en voeg meer benzofenon of natrium en de destillatie opnieuw op. Dit is een indicatie dat THF bevat nog steeds water. </li><li> In droge conische kolf gedestilleerd THF (v = 100 ml) en los 3,9 g naftaleen. OPMERKING: Stop de destillatie, afkoelen bij kamertemperatuur en open de rechter klep om het volume van THF dragen. </li><li> Zoals beschreven in punt 2.1, gesneden kleine stukjes van kalium (1,1 g) en toe te voegen aan de oplossing die het naftaleen (eindconcentratie ~ 0,3 mol / l). Verzegel de kolf met een spoeling adapter (T) (aan / uit) met een septum aan de bovenkant en spoelen met argon. </li><li> Na roeren onder argon gedurende 24 uur, observeer de resulterende oplossing van kalium naftaleen base als homogene donkergroene kleur. </li><li> Onder inerte omstandigheden, verwijdert een 5 ml aliquot van de basische oplossing uit de fles met een spuit en voeg aan 10 ml gedestilleerd water. Vervolgens voeg 1-2 druppels fenolftaleïne indicator voor deze oplossing,die blijkt de oplossing een fuchsia kleur. </li><li> Gebruik een buret aan het kalium- naftaleen oplossing met een standaard zoutzuuroplossing (0,1 N) tot de kleur omslaat kleurloze titreren. </li></ol> 3. Materialen en de nodige voorzorgsmaatregelen voor effectieve Living anionische polymerisatie <ol><li> System argon / vacuüm spruitstuk. LET OP: Zoals beschreven in figuur 2, is een dubbele glazen verdeler met isolerend glas kranen gebruikt om te schakelen tussen argon levering en vacuüm omstandigheden in het glaswerk. <ol><li> Sluit de tank van argon (met manometer) tot een droge droogmiddel kolom en het spruitstuk lijn met behulp van inerte rubber slangen. Aan het andere uiteinde van de argon lijn, sluit u een bubbler (minerale olie). </li><li> Om de glazen kranen, sluit flexibele inerte buizen en naalden. Om de andere lijn van het spruitstuk, sluit u een glas val ondergedompeld in een koude Dewar kolf (gevuld met ijs / water of vloeibare stikstof) tot een hoge vacuümpomp. </li&gt; </ol></li><li> Inrichting voor destillatie van monomeer en DMSO. OPMERKING: Een handige (dwz alle in een) inrichting voor hoge vacuümdestillatie wordt toegepast (figuur 2). De droge glaswerk is gemaakt met hoog vacuüm kleppen, en ingebouwde condensors met een inwendige gekoelde kop. <ol><li> Verbinding waterstroming door de inlaat (A) en uitlaat (B) van de koeleenheid (letter). Sluit de andere ingang / uitgang (C) aan de dubbele verdeelstuk argon / vacuüm. Toe te voegen en te verzegelen een septum (metalen draden) aan de levering / extractie-poort en sluit een roestvrij stalen canule voor de overdracht van de lucht gevoelige vloeistoffen (D) (bovenaan / lus). </li><li> Vóór polymerisatie destilleren PheGE en DMSO op hemisferische verwarmingsmantels bij 100 ° C en 70 ° C respectievelijk gedurende 2 uur onder vacuüm roeren. De PheGE monomeer kookpunt is 254 ° C, terwijl het kookpunt van DMSO is 189 ° C (1 atm). </li></ol></li><li> Glaswerk voor anionische polymerization. <ol><li> Naast het destillatiesysteem, alleen hoge vacuümbestendig glaswerk waaronder rondbodemkolven (gecertificeerd door de fabrikant), maatcilinders (voor de overdracht van volumes oplosmiddel, base en monomeren), canules, septa en metaaldraden de septa dichten. OPMERKING: Bij levende polymerisatie, warmte voorzichtig (onder vacuüm) en het glaswerk afkoelen onder argon stroom voor gebruik. Houd het warmtepistool op afstand ~ 10 cm van het glaswerk. </li></ol></li></ol><img alt="Figuur 2" src="/files/ftp_upload/54422/54422fig2.jpg" /> Figuur 2. Montage en key destillatie / overdracht stappen. <a href="http://ecsource.jove.com/files/ftp_upload/54422/54422fig2large.jpg" target="_blank">Klik hier om een grotere versie van deze figuur te bekijken.</a> 4. Beschrijving van de belangrijkste stappen van de levens- anionische polymerisatie: destillatie en Transfer <ol><li> Weeg mPEG-5K (2 mmol, 10 g) in een droge fLask / Schlenk (oven) met een roerstaaf en sluit de blozen adapter (T) (aan / uit) met een septum aan de top. </li><li> Verbind de kolf met het spruitstuk en zuiveren de kolf gedurende 2-3 min met argon flushes. Draai de klep om het vacuüm positie om de kolf te spoelen. </li><li> handmatig Draai de kolf en droog het reactievat homogeen met een föhn (warmte kanon) tot mPEG-5K smelt. LET OP: Houd de warmte kanon op een afstand ~ 10 cm uit de kolf. </li><li> Na 1 min, breek het vacuüm door de klep op het verdeelstuk naar de positie argon meerdere snelle drukknopen. OPMERKING: Een continue stroom argon heeft in de bubbler in acht te nemen. Wanneer de stroom continu de klep blijft het argon positie. Herhaal verwarming en koeling stappen tweemaal om alle sporen van vocht te verwijderen. </li><li> Houd de polymere macro-initiator onder vacuüm ~ 2 uur en onder argon voordat de reactie begint. </li><li> Mount twee high vacuümdestillatie apparaten onder de motorkap (Figure 2); een voor de destillatie van DMSO en een voor de destillatie van het monomeer (PheGE). </li><li> Sluit de afzonderlijke kolven met de DMSO en monomeer tot de twee inrichtingen en plaats elk op een hemisferisch verwarmingsmantel (of in een oliebad). Verbinding koud water naar de top van de inrichting (in / uit) en het verdeelstuk (argon / vacuüm). </li><li> Zorg ervoor dat elk apparaat is veilig en goed afgesloten. Schakel het vacuüm via de klep. Opmerking. Zoals beschreven in stap 3,3, herhalen verwarming en koeling stappen tweemaal om alle sporen van vocht te verwijderen. </li><li> Zet de verwarming via een temperatuurregelaar en start roeren van de oplossing. Na 2 h circulatie / destillatie van DMSO, sluiten de hoge vacuümklep (in het midden van het destillatietoestel) tot ongeveer 20 ml oplossing te verzamelen (aan de binnenkant van de inrichting te wassen). Laat dan de fractie in de kolf en herhaal de handeling nog een keer om de zuiverheid van de gewenste fractie die c ervoor te zorgenlater ollected. </li><li> Verhit de kolf met de MPEG-5K (onder vacuüm) met de hitte pistool totdat het polymeer (MPEG-5K) smelt. Spoel opnieuw met argon. Opmerking: De procedure kan de ontbinding na de overdracht van de DMSO. </li><li> Na 2 uur, sluiten de hoge vacuümklep en verzamel de hoeveelheid oplosmiddel (DMSO = V ~ 100 ml). Stop dan het verwarmen en breek het vacuüm van het spruitstuk. Vrij argon (met drukknopen) in de kamer zoals hierboven beschreven. </li><li> Onder een positieve druk van argon, sluit één zijde van de canule (hold op de plugkraan van het apparaat) naar een maatcilinder of rechtstreeks aan de kolf die de mPEG-5K (indien het destillatietoestel heeft graduatie) en dompel het andere uiteinde voorzichtig in de vers gedestilleerde fractie. </li><li> Met argon druk, drijven de DMSO via de canule in de reactiekolf. Sluit een extra bubbler aan de kolf (of cilinder als dat nodig is voor de meting) en sluit het kraantje glas verbonden aan The bubbler aan de andere kant van het verdeelstuk. LET OP: Wanneer de ene kant van een canule wordt verwijderd voor de overdracht, zorg ervoor dat de positieve argon druk wordt uitgeoefend. </li><li> Om ongelukken door argondruk vermijden, opent de afsluiter voor het glas 1-2 seconden en hersluiten om de stroom van DMSO (0,5 keer herhaald per minuut) totdat de volledige overdracht is voltooid. Open de kraan als u klaar bent. OPMERKING: Dezelfde procedure moet nu worden gevolgd voor distillatie en het verzamelen van het monomeer. Het oplosmiddel en monomeer niet kan worden uitgevoerd op hetzelfde moment. </li><li> Transfer 5 ml van 0,3 M naftaleen kalium via infusen in een maatcilinder afgesloten door een septum met canule (loop). OPMERKING: Dezelfde voorzorg zoals beschreven in toelichting 4.13. Positieve argondruk eerst uit naftaleen kalium kolf aan cilinder en vervolgens onderhouden van de cilinder aan de reactiekolf lucht / water voorkomen. </li><li> Plaats een andere naald uit de manifold in de cilinder (argon). Verwijder de canule verbonden met het destillatiesysteem voorzichtig en plaats snel in de reactiekolf. OPMERKING: Gebruik deze techniek voor de overdracht van de basis en het monomeer. </li><li> Voeg de basis druppelsgewijs tot de oplossing donker. Naar aanleiding van de langzame verdwijning van kleur, voeg een ander deel tot de donkere kleur weer verschijnt, en herhaal tot de volledige overdracht. </li><li> Breng de gewenste hoeveelheid monomeer (V PheGE = 5 ml) met een polymerisatiegraad van PPheGE ~ n = 18-20 bereiken. </li><li> Laat de reactie gedurende 48 uur bij 80 ° C onder argonatmosfeer onder constant roeren om volledige polymerisatie te waarborgen. </li><li> Schrik de reactie af door toevoegen van druppels HCl 1 N in methanol (gemeten met lakmoespapier (neutrale pH)) en geobserveerd door een kleur verdwijnen. </li><li> Pak het naftaleen uit de DMSO-oplossing met hexaan (3 x 50 ml). Verwijder de DMSO door destillatie onder vacuüm ~ 70 ml (dezelfde apparatuur). kirrenl langs de slurry-oplossing en voeg 50 ml van THF. </li><li> Verwijder het zout uit de suspensieoplossing door centrifugeren bij 5000 xg gedurende 10 min. Breng de supernatant en voeg druppelsgewijs aan 500 ml koude diethylether. </li><li> Verzamel het neerslag door filtratie of centrifugatie (tweemaal herhalen) en droog onder vacuüm bij 30 ° C gedurende 24-48 uur (opbrengst 85%). OPMERKING: De copolymeer is nu klaar voor karakterisering. </li></ol> 5. Karakterisering van copolymeren <ol><li> Weeg 5-10 mg van copolymeer (dossier van de werkelijke massa) in een aluminium monster pan en sluit hermetisch met de aluminium deksel. Load sample pan en referentie-pan (leeg) in de differentiële scanning calorimeter. </li><li> Programma werkwijze ( &quot;verwarmen / koelen / verwarmen&quot;) cyclus: 1) verwarmen van 40 ° C tot 100 ° C bij 10 ° C / min, 2) afkoelen tot -70 ° C bij 10 ° C / min, 3) warmte tot 100 ° C bij 10 ° C / min. Herhaal 2) en 3) twee keer. Bepalen smeltpunt (Tm), crystallization (Tc) en glasovergangstemperaturen (Tg), en smeltwarmte (AH f) vanaf het thermische sporen uit de derde cyclus (indien van toepassing). </li><li> Los de polymeren in THF (2 mg / ml) en filtreer door een 0,2 urn PTFE-filter. Het monster wordt in een gelpermeatiechromatografie (50 ui) en gebruik de retentietijd van het monster en een kalibratiecurve geproduceerd met verschillende polystyreen standaarden voor het molecuulgewicht van het polymeer te bepalen. 19 </li><li> Los het (co) polymeren (15 mg / ml) in d6 DMSO voor 1H NMR spectroscopie analyse. 19 </li><li> Bepaal de kritische micel concentratie (CMC) van het copolymeer gebruikt 1,6-difenyl-1,3,5-hexatrieen (DPH) als probe fluorescentie. 9 <ol><li> Bereid een DPH voorraadoplossing in THF (2,32 mg / l) in het donker en voeg 100 ul van deze voorraadoplossing aan elk van een reeks flesjes. </li><li> PrepaBent een copolymeer voorraadoplossing in THF en porties van gelijke hoeveelheid (2 ml) toe te voegen aan de reeks flesjes (elk een portie van de voorraadoplossing DPH) verkregen copolymeer in finale concentraties die variëren van 0,01 tot 1000 g copolymeer / ml. </li><li> Vervolgens vortex het copolymeer-DPH oplossingen en druppelsgewijs toe te voegen aan 10 ml dubbel gedestilleerd water onder roeren bar. De oplossingen moeten vervolgens krachtig in het donker wordt geroerd gedurende 48 uur onder een stroom stikstof teneinde langzame verdamping van THF toe. De eindconcentratie van DPH in elke oplossing is 0,232 mg / l. </li><li> Meet de fluorescentie-emissie van de monsters bij 430 nm (λ ex = 350 nm) met een dual-scanning microplaat spectrofluorometer en plot fluorescentie tegen log [polymeer]. Het snijpunt tussen de twee lineaire hellingen biedt de CMC waarde voor de copolymeer. </li></ol></li></ol> 6. Procedure voor Laden doxorubicine in BCMS <ol><li> Los op 12 mg van DOX in 1 ml acetonitrile, voeg 10 ul van triëthylamine en laat de oplossing opschudding in het donker gedurende 2 uur. </li><li> Los het copolymeer (45 mg) in 1 ml THF en roer gedurende dezelfde periode. Voeg de oplossing van het copolymeer DOX en spoel de flacon met resterende copolymeer met een extra volume van THF (0,5 ml). </li><li> Voeg de copolymeer-geneesmiddelmengsel (2,5 ml) druppelsgewijs toegevoegd aan een flesje (20 ml) met 15 ml fysiologische zoutoplossing 0,9% (NaCl) onder roeren. </li><li> Breng de oplossing voor een dialyse zak (3,5 kDa afgesneden) en dialyseren tegen zoutoplossing 0,9% (500 ml). OPMERKING: Verander de externe zoutoplossing na 6 uur en laat de dialyse voortgezet gedurende 24 uur onder roeren in het donker bij kamertemperatuur. </li><li> Breng het dialysaat naar een 50 ml buis en centrifugeer bij 5000 xg gedurende 15 min. </li><li> Breng de supernatant aan een ultrafiltratie (met een 10 ml) dat een dialysemembraan (cut off 10 kDa) bevat. Zet de roeren adapter in de ultrafiltratie-systeem, sluit het deksel en open alstream stikstof. </li><li> Concentreer de BCM oplossing tot een volume van 4 ml en voeg 6 ml vers zoutoplossing en herhaal de procedure tweemaal. </li><li> Concentreer de oplossing BCM 4 ml, spoel de kamer met 0,5 ml zoutoplossing en voeg aan de oplossing. Bewaren in bruine flesjes bij kamertemperatuur in het donker voorafgaand aan verder gebruik. </li></ol> 7. Evaluatie van doxorubicine Laden in DOX-BCMS <ol><li> Oplossen DOX-BCM in dimethylformamide (100 ul in 400 ul) aan de micellen verstoren en verdund in waterige HCl-oplossing (0,1 N) voorafgaand aan evaluatie (100 ul in 900 ul 0,1 N HCl). </li><li> Meet drug lading bij 490 nm met behulp van een benchtop microplaat spectrofotometrisch systeem. Gebruik de volgende vergelijkingen om de drug laadvermogen (DLC) en drugs laden efficiency (DLE) te bepalen: DLC (wt%) = (gewicht van het geneesmiddel beladen / totaal gewicht van BCMS) x 100% DLE (%) = (gewicht van met geneesmiddel beladen / gewicht geneesmiddel in voeder) x 100% </li></ol> 8. Evaluatievan In vitro afgifte van DOX van DOX-BCMS <ol><li> Onderzoek de afgifte van DOX van BCMS bij 37 ° C in 0,1 M fosfaat gebufferde zoutoplossing (PBS, pH 7,4) tegen PBS pH 7,4 bevattende 0,1% (w / v) Tween 80, BCMS + BSA (50 mg / ml) tegen PBS pH 7,4 en 0,1 M acetaat-buffer bij pH = 5,5. 20,21 </li><li> Verdun de BCM-DOX preparaat (700 ui) in de geselecteerde buffer (2,3 ml), hetgeen resulteerde in een totale hoeveelheid van 0,6-0,7 mg ≈ DOX in de dialysezak. </li><li> Plaats de oplossing in de dialysezak afdichting met klemmen en dompel de zak in 200 ml van de respectieve externe media. </li><li> Verwijder 2 ml van de oplossing buiten het dialysezak op voorafbepaalde tijdstippen en vervangen door hetzelfde volume verse buffer. </li><li> Bewaar de monsters verwijderd bij -20 ° C voorafgaand aan analyse door UV-Vis spectrofotometrie (Abs 490 nm). Het cumulatieve percentage afgegeven geneesmiddel (E r) kan worden berekend met de volgende vergelijking: <img alt= &quot;Equation1&quot; src = &quot;/ files / ftp_upload / 54422 / 54422eq1.jpg&quot; /&gt; OPMERKING: Indien m DOX is het bedrag van DOX in de BCMS, V 0 het totale volume van de afgiftemedia (200 ml), Vt = het volume van de vervangen media (Vt = 2 ml), Ci de concentratie voor correctie en C n de concentratie DOX in het monster. </li></ol>

<ol><li>Dickerson, T. J., Reed, N. N., Janda, K. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Soluble+Polymers+as+Scaffolds+for+Recoverable+Catalysts+and+Reagents%5BTitle%5D)+AND+%22Chemical+Reviews%22%5BJournal%5D)">Soluble Polymers as Scaffolds for Recoverable Catalysts and Reagents.</a> Chemical Reviews. 102, 3325-3344 (2002).</li>
<li>van Heerbeek, R., Kamer, P. C. J., van Leeuwen, P. W. N. M., Reek, J. N. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dendrimers+as+Support+for+Recoverable+Catalysts+and+Reagents%5BTitle%5D)+AND+%22Chemical+Reviews%22%5BJournal%5D)">Dendrimers as Support for Recoverable Catalysts and Reagents.</a> Chemical Reviews. 102 (10), 3717-3756 (2002).</li>
<li>Knop, K., Hoogenboom, R., Fischer, D., Schubert, U. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Poly%28ethylene+glycol%29+in+Drug+Delivery%3A+Pros+and+Cons+as+Well+as+Potential+Alternatives%5BTitle%5D)+AND+%22Angewandte+Chemie+International+Edition%22%5BJournal%5D)">Poly(ethylene glycol) in Drug Delivery: Pros and Cons as Well as Potential Alternatives.</a> Angewandte Chemie International Edition. 49 (36), 6288-6308 (2010).</li>
<li>Eetezadi, S., Ekdawi, S. N., Allen, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+challenges+facing+block+copolymer+micelles+for+cancer+therapy%3A+In+vivo+barriers+and+clinical+translation%5BTitle%5D)+AND+%22Advanced+Drug+Delivery+Reviews%22%5BJournal%5D)">The challenges facing block copolymer micelles for cancer therapy: In vivo barriers and clinical translation.</a> Advanced Drug Delivery Reviews. 91, 7-22 (2015).</li>
<li>Attwood, D., Booth, C., Yeates, S. G., Chaibundit, C., Ricardo, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Block+copolymers+for+drug+solubilisation%3A+Relative+hydrophobicities+of+polyether+and+polyester+micelle-core-forming+blocks%5BTitle%5D)+AND+%22International+Journal+of+Pharmaceutics%22%5BJournal%5D)">Block copolymers for drug solubilisation: Relative hydrophobicities of polyether and polyester micelle-core-forming blocks.</a> International Journal of Pharmaceutics. 345 (1-2), 35-41 (2007).</li>
<li>Matsumura, Y., Kataoka, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Preclinical+and+clinical+studies+of+anticancer+agent-incorporating+polymer+micelles%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Science%22%5BJournal%5D)">Preclinical and clinical studies of anticancer agent-incorporating polymer micelles.</a> Cancer Science. 100 (4), 572-579 (2009).</li>
<li>Chan, A. S., Chen, C. H., Huang, C. M., Hsieh, M. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Regulation+of+particle+morphology+of+pH-dependent+poly%28epsilon-caprolactone%29-poly%28gamma-glutamic+acid%29+micellar+nanoparticles+to+combat+breast+cancer+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Nanoscience+and+Nanotechnology%22%5BJournal%5D)">Regulation of particle morphology of pH-dependent poly(epsilon-caprolactone)-poly(gamma-glutamic acid) micellar nanoparticles to combat breast cancer cells.</a> Journal of Nanoscience and Nanotechnology. 10 (10), 6283-6297 (2010).</li>
<li>Diao, Y. Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Doxorubicin-loaded+PEG-PCL+copolymer+micelles+enhance+cytotoxicity+and+intracellular+accumulation+of+doxorubicin+in+adriamycin-resistant+tumor+cells%5BTitle%5D)+AND+%22International+Journal+of+Nanomedicine%22%5BJournal%5D)">Doxorubicin-loaded PEG-PCL copolymer micelles enhance cytotoxicity and intracellular accumulation of doxorubicin in adriamycin-resistant tumor cells.</a> International Journal of Nanomedicine. 6, 1955-1962 (2011).</li>
<li>Mikhail, A. S., Allen, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Poly%28ethylene+glycol%29-b-poly%28%CE%B5-caprolactone%29+Micelles+Containing+Chemically+Conjugated+and+Physically+Entrapped+Docetaxel%3A+Synthesis%2C+Characterization%2C+and+the+Influence+of+the+Drug+on+Micelle+Morphology%5BTitle%5D)+AND+%22Biomacromolecules%22%5BJournal%5D)">Poly(ethylene glycol)-b-poly(ε-caprolactone) Micelles Containing Chemically Conjugated and Physically Entrapped Docetaxel: Synthesis, Characterization, and the Influence of the Drug on Micelle Morphology.</a> Biomacromolecules. 11 (5), 1273-1280 (2010).</li>
<li>Kataoka, K., Harada, A., Nagasaki, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Block+copolymer+micelles+for+drug+delivery%3A+design%2C+characterization+and+biological+significance%5BTitle%5D)+AND+%22Advanced+Drug+Delivery+Reviews%22%5BJournal%5D)">Block copolymer micelles for drug delivery: design, characterization and biological significance.</a> Advanced Drug Delivery Reviews. 47 (1), 113-131 (2001).</li>
<li>Nakanishi, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Development+of+the+polymer+micelle+carrier+system+for+doxorubicin%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Controlled+Release%22%5BJournal%5D)">Development of the polymer micelle carrier system for doxorubicin.</a> Journal of Controlled Release. 74 (1-3), 295-302 (2001).</li>
<li>Liu, J., Xiao, Y., Allen, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Polymer-drug+compatibility%3A+A+guide+to+the+development+of+delivery+systems+for+the+anticancer+agent%2C+ellipticine%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Pharmaceutical+Sciences%22%5BJournal%5D)">Polymer-drug compatibility: A guide to the development of delivery systems for the anticancer agent, ellipticine.</a> Journal of Pharmaceutical Sciences. 93 (1), 132-143 (2004).</li>
<li>Flory, P. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Molecular+Size+Distribution+in+Ethylene+Oxide+Polymers%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+the+American+Chemical+Society%22%5BJournal%5D)">Molecular Size Distribution in Ethylene Oxide Polymers.</a> Journal of the American Chemical Society. 62 (6), 1561-1565 (1940).</li>
<li>Kazanskii, K. S., Solovyanov, A. A., Entelis, S. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Polymerization+of+ethylene+oxide+by+alkali+metal-naphthalene+complexes+in+tetrahydrofuran%5BTitle%5D)+AND+%22European+Polymer+Journal%22%5BJournal%5D)">Polymerization of ethylene oxide by alkali metal-naphthalene complexes in tetrahydrofuran.</a> European Polymer Journal. 7 (10), 1421-1433 (1971).</li>
<li>Crothers, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Micellization+and+Gelation+of+Diblock+Copolymers+of+Ethylene+Oxide+and+Styrene+Oxide+in+Aqueous+Solution%5BTitle%5D)+AND+%22Langmuir%22%5BJournal%5D)">Micellization and Gelation of Diblock Copolymers of Ethylene Oxide and Styrene Oxide in Aqueous Solution.</a> Langmuir. 18 (22), 8685-8691 (2002).</li>
<li>Taboada, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Block+Copolymers+of+Ethylene+Oxide+and+Phenyl+Glycidyl+Ether%3A+Micellization%2C+Gelation%2C+and+Drug+Solubilization%5BTitle%5D)+AND+%22Langmuir%22%5BJournal%5D)">Block Copolymers of Ethylene Oxide and Phenyl Glycidyl Ether: Micellization, Gelation, and Drug Solubilization.</a> Langmuir. 21 (12), 5263-5271 (2005).</li>
<li>Taboada, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Micellization+and+Drug+Solubilization+in+Aqueous+Solutions+of+a+Diblock+Copolymer+of+Ethylene+Oxide+and+Phenyl+Glycidyl+Ether%5BTitle%5D)+AND+%22Langmuir%22%5BJournal%5D)">Micellization and Drug Solubilization in Aqueous Solutions of a Diblock Copolymer of Ethylene Oxide and Phenyl Glycidyl Ether.</a> Langmuir. 22 (18), 7465-7470 (2006).</li>
<li>Attwood, D., Booth, C. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aAttwood%2C+D+%22Colloid+Stability%22">Colloid Stability</a>. , Wiley-VCH Verlag GmbH & Co. KGaA. 61-78 (2010).</li>
<li>Le Devedec, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Postalkylation+of+a+Common+mPEG-b-PAGE+Precursor+to+Produce+Tunable+Morphologies+of+Spheres%2C+Filomicelles%2C+Disks%2C+and+Polymersomes%5BTitle%5D)+AND+%22ACS+Macro+Letters%22%5BJournal%5D)">Postalkylation of a Common mPEG-b-PAGE Precursor to Produce Tunable Morphologies of Spheres, Filomicelles, Disks, and Polymersomes.</a> ACS Macro Letters. 5 (1), 128-133 (2016).</li>
<li>Chtryt, V., Ulbrich, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Conjugate+of+Doxorubicin+with+a+Thermosensitive+Polymer+Drug+Carrier%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Bioactive+and+Compatible+Polymers%22%5BJournal%5D)">Conjugate of Doxorubicin with a Thermosensitive Polymer Drug Carrier.</a> Journal of Bioactive and Compatible Polymers. 16 (6), 427-440 (2001).</li>
<li>Kataoka, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Doxorubicin-loaded+poly%28ethylene+glycol%29-poly%28%CE%B2-benzyl-l-aspartate%29+copolymer+micelles%3A+their+pharmaceutical+characteristics+and+biological+significance%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Controlled+Release%22%5BJournal%5D)">Doxorubicin-loaded poly(ethylene glycol)-poly(β-benzyl-l-aspartate) copolymer micelles: their pharmaceutical characteristics and biological significance.</a> Journal of Controlled Release. 64 (1-3), 143-153 (2000).</li>
<li>Cammas, S., Matsumoto, T., Okano, T., Sakurai, Y., Kataoka, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Design+of+functional+polymeric+micelles+as+site-specific+drug+vehicles+based+on+poly+%28%CE%B1-hydroxy+ethylene+oxide-co-%CE%B2-benzyl+l-aspartate%29+block+copolymers%5BTitle%5D)+AND+%22Materials+Science+and+Engineering%3A+C%22%5BJournal%5D)">Design of functional polymeric micelles as site-specific drug vehicles based on poly (α-hydroxy ethylene oxide-co-β-benzyl l-aspartate) block copolymers.</a> Materials Science and Engineering: C. 4 (4), 241-247 (1997).</li>
<li>Lv, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Doxorubicin-loaded+amphiphilic+polypeptide-based+nanoparticles+as+an+efficient+drug+delivery+system+for+cancer+therapy%5BTitle%5D)+AND+%22Acta+Biomaterialia%22%5BJournal%5D)">Doxorubicin-loaded amphiphilic polypeptide-based nanoparticles as an efficient drug delivery system for cancer therapy.</a> Acta Biomaterialia. 9 (12), 9330-9342 (2013).</li>
<li>Kim, J. O., Oberoi, H. S., Desale, S., Kabanov, A. V., Bronich, T. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Polypeptide+nanogels+with+hydrophobic+moieties+in+the+cross-linked+ionic+cores%3A+synthesis%2C+characterization+and+implications+for+anticancer+drug+delivery%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Drug+Targeting%22%5BJournal%5D)">Polypeptide nanogels with hydrophobic moieties in the cross-linked ionic cores: synthesis, characterization and implications for anticancer drug delivery.</a> Journal of Drug Targeting. 21 (10), 981-993 (2013).</li>
<li>Zhao, C. L., Winnik, M. A., Riess, G., Croucher, M. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fluorescence+probe+techniques+used+to+study+micelle+formation+in+water-soluble+block+copolymers%5BTitle%5D)+AND+%22Langmuir%22%5BJournal%5D)">Fluorescence probe techniques used to study micelle formation in water-soluble block copolymers.</a> Langmuir. 6 (2), 514-516 (1990).</li>
<li>Wilhelm, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Poly%28styrene-ethylene+oxide%29+block+copolymer+micelle+formation+in+water%3A+a+fluorescence+probe+study%5BTitle%5D)+AND+%22Macromolecules%22%5BJournal%5D)">Poly(styrene-ethylene oxide) block copolymer micelle formation in water: a fluorescence probe study.</a> Macromolecules. 24 (5), 1033-1040 (1991).</li>
<li>Cammas, S., Kataoka, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Functional+poly%5B%28ethylene+oxide%29-co-%28%CE%B2-benzyl-L-aspartate%29%5D+polymeric+micelles%3A+block+copolymer+synthesis+and+micelles+formation%5BTitle%5D)+AND+%22Macromolecular+Chemistry+and+Physics%22%5BJournal%5D)">Functional poly[(ethylene oxide)-co-(β-benzyl-L-aspartate)] polymeric micelles: block copolymer synthesis and micelles formation.</a> Macromolecular Chemistry and Physics. 196 (6), 1899-1905 (1995).</li>
<li>Kwon, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Micelles+based+on+AB+block+copolymers+of+poly%28ethylene+oxide%29+and+poly%28.beta.-benzyl+L-aspartate%29%5BTitle%5D)+AND+%22Langmuir%22%5BJournal%5D)">Micelles based on AB block copolymers of poly(ethylene oxide) and poly(.beta.-benzyl L-aspartate).</a> Langmuir. 9 (4), 945-949 (1993).</li>
<li>Ahmed, F., Discher, D. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Self-porating+polymersomes+of+PEG-PLA+and+PEG-PCL%3A+hydrolysis-triggered+controlled+release+vesicles%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Controlled+Release%22%5BJournal%5D)">Self-porating polymersomes of PEG-PLA and PEG-PCL: hydrolysis-triggered controlled release vesicles.</a> Journal of Controlled Release. 96 (1), 37-53 (2004).</li>
<li>Uhrig, D., Mays, J. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Experimental+techniques+in+high-vacuum+anionic+polymerization%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Polymer+Science+Part+A%3A+Polymer+Chemistry%22%5BJournal%5D)">Experimental techniques in high-vacuum anionic polymerization.</a> Journal of Polymer Science Part A: Polymer Chemistry. 43 (24), 6179-6222 (2005).</li>
<li>Parker, A. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+effects+of+solvation+on+the+properties+of+anions+in+dipolar+aprotic+solvents%5BTitle%5D)+AND+%22Quarterly+Reviews%2C+Chemical+Society%22%5BJournal%5D)">The effects of solvation on the properties of anions in dipolar aprotic solvents.</a> Quarterly Reviews, Chemical Society. 16 (2), 163-187 (1962).</li>
<li>Cram, D. J. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aCram%2C+DJ+%22Fundamentals+o%5D+Carbanion+Chemistry%22">Fundamentals o] Carbanion Chemistry</a>. , (1965).</li>
<li>Szwarc, M. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aSzwarc%2C+M+%22ACS+Symposium+Series%22">ACS Symposium Series</a>. 166, American chemistry society. 1-15 (1981).</li>
<li>Cho, Y. W., Lee, J., Lee, S. C., Huh, K. M., Park, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hydrotropic+agents+for+study+of+in+vitro+paclitaxel+release+from+polymeric+micelles%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Controlled+Release%22%5BJournal%5D)">Hydrotropic agents for study of in vitro paclitaxel release from polymeric micelles.</a> Journal of Controlled Release. 97, 249-257 (2004).</li>
<li>Dewhurst, P. F., Lovell, M. R., Jones, J. L., Richards, R. W., Webster, J. R. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Organization+of+Dispersions+of+a+Linear+Diblock+Copolymer+of+Polystyrene+and+Poly%28ethylene+oxide%29+at+the+Air%E2%88%92Water+Interface%5BTitle%5D)+AND+%22Macromolecules%22%5BJournal%5D)">Organization of Dispersions of a Linear Diblock Copolymer of Polystyrene and Poly(ethylene oxide) at the Air−Water Interface.</a> Macromolecules. 31 (22), 7851-7864 (1998).</li>
<li>Opanasopit, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Block+Copolymer+Design+for+Camptothecin+Incorporation+into+Polymeric+Micelles+for+Passive+Tumor+Targeting%5BTitle%5D)+AND+%22Pharmaceutical+Research%22%5BJournal%5D)">Block Copolymer Design for Camptothecin Incorporation into Polymeric Micelles for Passive Tumor Targeting.</a> Pharmaceutical Research. 21 (11), 2001-2008 (2004).</li>
<li>Allen, G., Booth, C., Price, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((VI-The+physical+properties+of+poly%28epoxides%29%5BTitle%5D)+AND+%22Polymer%22%5BJournal%5D)">VI-The physical properties of poly(epoxides).</a> Polymer. 8, 414-418 (1967).</li>
<li>Jada, A., Hurtrez, G., Siffert, B., Riess, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Structure+of+polystyrene-block-poly%28ethylene+oxide%29+diblock+copolymer+micelles+in+water%5BTitle%5D)+AND+%22Macromolecular+Chemistry+and+Physics%22%5BJournal%5D)">Structure of polystyrene-block-poly(ethylene oxide) diblock copolymer micelles in water.</a> Macromolecular Chemistry and Physics. 197 (11), 3697-3710 (1996).</li>
<li>Attwood, D., Florence, A. T. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aAttwood%2C+D+%22Surfactant+systems+%3A+their+chemistry%2C+pharmacy%2C+and+biology%22">Surfactant systems : their chemistry, pharmacy, and biology</a>. , Chapman and Hall. (1983).</li>
<li>Rekatas, C. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+effect+of+hydrophobe+chemical+structure+and+chain+length+on+the+solubilization+of+griseofulvin+in+aqueous+micellar+solutions+of+block+copoly%28oxyalkylene%29s%5BTitle%5D)+AND+%22Physical+Chemistry+Chemical+Physics%22%5BJournal%5D)">The effect of hydrophobe chemical structure and chain length on the solubilization of griseofulvin in aqueous micellar solutions of block copoly(oxyalkylene)s.</a> Physical Chemistry Chemical Physics. 3 (21), 4769-4773 (2001).</li>
<li>Encyclopædia Britannica Online. , 
 <a target="_blank" href="http://www.britannica.com/EBchecked/topic/479680/protein/72559/Proteins-of-the-blood-serum">http://www.britannica.com/EBchecked/topic/479680/protein/72559/Proteins-of-the-blood-serum</a> (2015).</li>
</ol>

De auteurs hebben niets te onthullen.

Door de goede controle die anionische polymerisatie verschaft via molecuulgewicht is een van de meest toegepaste werkwijzen in de industrie voor de bereiding van polymeren op basis van oxiraan monomeren (PEG en PPG). Optimale en stringente omstandigheden worden gebruikt voor een succesvolle polymerisatie te bereiken. Strenge zuivering van reagentia en geschikte apparatuur nodig voor het levende karakter van de synthese. Beperkingen van de huidige opstelling worden meestal geassocieerd met de overdracht techniek die is g...

In waterige media, amfifiele blokcopolymeren assembleren nanoformaat blokcopolymeer micellen (BCMS) die bestaan ​​uit een hydrofobe kern omgeven door een hydrofiele schil of corona vormen. De micel kern kan dienen als reservoir voor het opnemen van hydrofobe geneesmiddelen; terwijl de hydrofiele corona biedt een interface tussen de kern en het externe medium. Poly (ethyleenglycol) (PEG) en zijn derivaten zijn een van de belangrijkste klassen van polymeren en één van de meest gebruikte geneesmiddelformulering. 1-3 BCMS hebben bewezen een waardige medicijnafgifteplatform met verschillende samenstellingen te vertrouwen op dit punt technologie nu in een vergevorderd stadium van klinische ontwikkeling. 4 meestal het hydrofobe blok van het copolymeer bestaat uit polycaprolacton, poly (D, L-lactide), poly (propyleenoxide) en poly (β-benzyl-L-aspartaat). 5 -9 Kataoka de groep onderzochte bolvormige micellen gevormd uit PEO- b </em&gt; -PBLA En poly (ethyleenoxide) - b -. (Polyasparaginezuur-geconjugeerd doxorubicine) voor afgifte van doxorubicine (DOX) 10,11 In hun verslagen Zij stelden dat π-π interacties tussen het polymeer-geconjugeerde geneesmiddel of PBLA en vrij DOX handelen om de micel kern leidde tot een verhoging geneesmiddelbelading en retentie stabiliseren. Er is vastgesteld dat de verenigbaarheid of interacties tussen een geneesmiddel en de kern vormblok zijn determinanten van key performance parameters. 12 Naast DOX, een aantal kanker therapeutica omvatten aromatische ringen in hun kernstructuur (bijvoorbeeld methotrexaat, olaparib, SN -38). Daardoor is er aanzienlijke belangstelling voor de synthese van copolymeren die benzyl ringen in hun kern vormende blokken. Anionische ringopeningspolymerisatie van PEG en zijn derivaten mogelijk controle over het molecuulgewicht en resulteren in materialen van lage polydispersiteit in goede opbrengst. 13,14 Ethylene oxide met fenylglycidylether (PheGE) of styreen oxide (SO) kan worden (co) polymeriseren tot blokcopolymeren die micellen vormen voor het oplossen van hydrofobe geneesmiddelen vormen. 15-18 Het huidige rapport beschrijft de nodige stappen voor het leven anionische polymerisatie van fenyl glycidyl ether monomeer op mPEG-OH als macro-initiator (figuur 1). Het verkregen blokcopolymeer en aggregaten worden vervolgens gekarakteriseerd met betrekking tot eigenschappen die relevant zijn voor gebruik in geneesmiddelafgifte.

<table><tbody><tr><td>DMEM/HAMF12</td><td>Gibco, Life Technologies</td><td>12500</td><td>Aangevuld met 10% FBS. Opwarmen in 37 &deg;C waterbad.</td></tr><tr><td>Trypsin-EDTA (0.25%)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>T4049</td><td>Opwarmen in 37 &deg;C waterbad</td></tr><tr><td>Fetaal bovien serum (FBS)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>F1051</td><td>Canada-oorsprong</td></tr><tr><td>MDA-MB-468 cel lijn</td><td>ATCC</td><td>HTB-132</td><td></td></tr><tr><td>MTS tetrazolioum reagens</td><td>PROMEGA</td><td>G111B</td><td></td></tr><tr><td>Phenazine ethosulphaat (PES)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>P4544</td><td>>95%</td></tr><tr><td>mPEG5K (Mn 5.400 g/mol)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>81323</td><td>PDI=1.02</td></tr><tr><td>Dimethylsolfoxide (DMSO)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>D4540</td><td>>99.5%</td></tr><tr><td>Naftaleen</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>147141</td><td>>99%</td></tr><tr><td>Fenyl glycidyl ether</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>A32608</td><td>>85%</td></tr><tr><td>Benzofenon</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>427551</td><td>>99%</td></tr><tr><td>Kalium</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>451096</td><td>>98%</td></tr><tr><td>Tetrahydrofuran</td><td>Caledon Laboratory Chemicals</td><td>8900 1</td><td>ACS</td></tr><tr><td>Hexaan</td><td>Caledon Laboratory Chemicals</td><td>5500 1</td><td>ACS</td></tr><tr><td>Calciumhydride (CaH2)</td><td>ACP</td><td>C-0460</td><td>>99.5%</td></tr><tr><td>Diethyl Ether</td><td>Caledon Laboratory Chemicals</td><td>1/10/4800</td><td>ACS</td></tr><tr><td>Microplate reader</td><td>BioTek Instruments</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Differentiële scancalorimetrie (DSC)</td><td>TA Instruments Inc</td><td>DSC Q100</td><td></td></tr><tr><td>Gel permeatie chromatografie (GPC)</td><td>Waters</td><td>2695 scheidingsmodule / 2414 detector&nbsp;</td><td>2 kolommen: Agilent Plgel 5 &micro;m Mixed-D</td></tr><tr><td>NMR-spectroscopie</td><td>Varian Mercury 400MHz</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Chloroform-d</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>151858</td><td>99.96%</td></tr><tr><td>DMSO-d</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>156914</td><td>99.96%</td></tr><tr><td>Vaccumpomp</td><td>Gardner Denver Welch Vacuum Tech, Inc.</td><td></td><td>Ultimate druk 1x10-4 torr</td></tr><tr><td>Drierit met indicator, 8 mesh</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>238988</td><td>Geregenereerd bij 230&nbsp;&deg;C gedurende 2 uur</td></tr></tbody></table>

anionische polymerisatie van een amfifiele copolymeer voor de bereiding van blokcopolymeer micellen gestabiliseerd door π-π stapelen interacties

Anionic Polymerization of an Amphiphilic Copolymer for Preparation of Block Copolymer Micelles Stabilized by &#960;-&#960; Stacking Interactions

In deze studie, een amfifiel copolymeer met een kernvormende blok met fenylgroepen bevat werd gesynthetiseerd door levende anionische polymerisatie fenylglycidylether (PheGE) met methoxy-polyethyleenglycol (MPEG- b -PPheGE). Karakterisering van het copolymeer toonde een nauwe molecuulgewichtsverdeling (PDI &lt;1,03) en bevestigd de polymerisatiegraad van mPEG 122 - b - (PheGE) 15. De kritische micel concentratie van het copolymeer werd geëvalueerd via een vastgestelde fluorescentiemethode het aggregatiegedrag geëvalueerd door dynamische lichtverstrooiing en transmissie elektronische microscopie. Het potentieel van het copolymeer voor toepassing bij geneesmiddelafgifte aanvragen geëvalueerd voorbereidingen getroffen zoals in vitro biocompatibiliteit, belading en afgifte van het hydrofobe geneesmiddel tegen kanker doxorubicine (DOX). Een stabiele micellen formulering van DOX werd bereid met geneesmiddelbelading concentraties tot 14% (gew%), geneesmiddelbelading efficiranten&gt; 60% (w / w) en aanhoudende afgifte van geneesmiddel gedurende 4 dagen onder fysiologisch relevante omstandigheden (zure en neutrale pH, aanwezigheid van albumine). Het hoge drug beladingsgraad en vertraagde afgifte wordt toegeschreven aan het stabiliseren van π-π interacties tussen DOX en de kern vormen blok van de micellen.

<img alt="figuur 3" src="/files/ftp_upload/54422/54422fig3.jpg" /> Figuur 3. Illustratie van de anionische polymerisatie van fenylglycidylether op mPEG macro-initiator aan MPEG b produceren - (PheGE) 15 voor de bereiding van blokcopolymeren micellen voor het laden van doxorubicine Het schema illustreert de deprotonering van de hydroxylgroep van mPEG gebruik naftaleen kal...

De belangrijkste stappen van levende anionische polymerisatie van fenylglycidylether (PheGE) met methoxy-polyethyleenglycol (MPEG- -PPheGE b) worden beschreven. Het verkregen blokcopolymeer micellen (BCMS) werden beladen met doxorubicine 14% (gew%) en aanhoudende afgifte van geneesmiddel gedurende 4 dagen onder fysiologisch relevante omstandigheden werd verkregen.

Anionische polymerisatie van een amfifiele copolymeer voor de bereiding van blokcopolymeer micellen gestabiliseerd door π-π stapelen interacties

In this study, an amphiphilic copolymer that includes a core-forming block with phenyl groups was synthesized by living anionic polymerization of phenyl ...

Het algemene doel van dit werk is om de kritische stappen aan te tonen die nodig zijn voor de synthese van blokcopolymeermaterialen via anionische ringopeningspolymerisatie, en om de vereiste opeenvolging van studies te laten zien voor de formulering van blokcopolymeermicellen van een hydrofoob geneesmiddel. Dit protocol demonstreert de juiste uitvoering van de noodzakelijke stappen en procedures voor de synthese van blokcopolymeren via anionische polymerisatie. Het grote voordeel van anionische ringopeningspolymerisatie is de synthese van materialen met een goede opbrengst en een lage polydispersiteit.Evenals de schaalbaarheid van het proces. Dit is een spannende tijd voor polymere geneesmiddelentoediening, aangezien een aantal geneesmiddelen die afhankelijk zijn van formulering en blokcopolymeer-micellen zich nu in een laat stadium van preklinische of klinische ontwikkeling bevinden.Bereid de reagentia en de materialen voor de overdracht voor zoals beschreven in het tekstprotocol. Weeg methoxypolyethyleenglycol met een moleculair gewicht van 5.000 af. Voeg de mPEG toe aan een gedroogde kolf met een roerkolf en sluit de spoeladapter aan de bovenzijde af met een septum.Sluit de kolf aan op het manifold en spoel de kolf gedurende twee tot drie minuten met Argon. Zet de klep in de vacuümpositie om de kolf te drogen. Roteer de kolf handmatig en droog het reactievat homogeen met een föhn of hittepistool totdat de mPEG smelt.Breek na één minuut het vacuüm door het ventiel op de manifold met enkele snelle bewegingen naar de Argon-positie te draaien om de kolf af te koelen. Houd de polymere macroinitiator ongeveer twee uur onder vacuüm en vervolgens onder Argon voordat de reactie begint. Monteer daarna twee hoogvacuümdestillatie-opstellingen die vooraf in een oven onder de zuigkap zijn gedroogd.Eén apparaat is bedoeld voor de distillatie van DMSO, en één apparaat is bedoeld voor de distillatie van het monomeer, fenylglycolylether. Sluit de afzonderlijke kolven aan op de twee apparaten en plaats deze elk op een halfronde verwarmingsmantel of in een oliebad. Sluit koud water aan op de bovenkant van elk apparaat en op de verdeelstukken.Zorg ervoor dat elk apparaat stevig is bevestigd en goed is afgesloten. Schakel het vacuüm in via de klep. Stel de verwarming in via een temperatuurregelaar en begin met het roeren van de oplossingen.Na twee uur circulatiedestillatie van DMSO wordt de hogevacuümklep gesloten om ongeveer 20 milliliter oplossing op te vangen. Laat vervolgens deze fractie in de kolf lopen en herhaal deze handeling nogmaals om de zuiverheid van de fractie die later wordt opgevangen, te garanderen. Verwarm de kolf met mPEG onder vacuüm met de hittekanon totdat het polymeer smelt en spoel daarna opnieuw met argon.Sluit na twee uur de hogevacuümkraan en verzamel het volume oplosmiddel. Stop het verwarmen en verbreek het vacuüm van de manifold. Laat Argon in de kamer stromen, zoals eerder beschreven.Sluit onder een positieve druk van argon één zijde van de canule aan op een maatkolf, of rechtstreeks op de kolf die de mPEG bevat, eveneens onder argon, en dompel het andere uiteinde voorzichtig in de vers gedistilleerde fractie. Sluit een extra bubbelglas aan op de kolf, sluit de argonstroom af en gebruik alleen de argondruk van het destillatieapparaat. Om ongevallen door argondruk te voorkomen, opent u de glazen stopkraan gedurende één tot twee seconden en sluit u deze vervolgens weer om de stroom DMSO voort te zetten totdat de overdracht volledig is voltooid.Sluit vervolgens, onder argon, één zijde van de canule van de gedroogde maatcilinder, die is afgesloten met een septum, aan op een stamoplossing van 0,3 molair naftaleenkalium. Voeg daarna een extra borrelsteentje toe aan de maatcilinder, sluit de argonstroom naar de cilinder af en breng, onder positieve argondruk, vijf milliliter 0,3 molair naftaleenkalium via canulatie over van de stamoplossing naar de maatcilinder. Steek een andere naald vanuit het manifold in de cilinder en verwijder het extra borrelsteentje.Verwijder voorzichtig de canule die is verbonden met de stamoplossing, voeg deze snel toe aan de reactiekolf en sluit een extra borrelsteentje aan. Voeg vervolgens, zoals eerder beschreven, de base druppelgewijs toe tot de oplossing donker wordt. Nadat de kleur langzaam is verdwenen, voegt u opnieuw een portie toe tot de donkere kleur weer verschijnt, en herhaal dit proces tot de volledige overdracht is voltooid.Zoals eerder beschreven, brengt u het gewenste volume monomeer over naar de reactie om een polymerisatiegraad van polyphenolglycolether van ongeveer 18 tot 20 eenheden te bereiken. Laat de reactie 48 uur lang bij 80 °C rusten, onder een argonatmosfeer met constant roeren, om volledige polymerisatie te waarborgen. Stop de reactie door toevoeging van druppels 1 N zoutzuur en methanol, totdat de kleur is verdwenen.Extraheer het naftaleen uit de DMSO-oplossing met hexaan. Verwijder ongeveer 70 milliliters DMSO door middel van vacuümdestillatie. Koel de slurry-oplossing af en voeg 15 milliliters THF toe.Verwijder het zout uit de slurry-oplossing door centrifugatie bij 5.000 ×g gedurende tien minuten. Verplaats het supernatant en voeg dit druppelgewijs toe aan 500 milliliters koude diethylether. Verzamel het precipitaat door filtratie of centrifugatie.Na het tweemaal herhalen van de precipitatie wordt het precipitaat een nacht bij kamertemperatuur onder de zuigkast gedroogd, en vervolgens 24 tot 48 uur onder vacuüm bij 30 °C, voor een opbrengst van 85%. Het copolymeer is nu klaar voor karakterisering, zoals beschreven in het tekstprotocol. Los 12 mg doxorubicine op in 1 mL acetonitril. Voeg 10 µL triethylamine toe en laat de oplossing twee uur in het donker roeren.Los 45 milligram copolymeer op in één milliliter THF en roer gedurende dezelfde periode. Voeg de copolymeeroplossing toe aan de doxorubicine-oplossing en spoel het flesje met resterend copolymeer met een extra volume THF. Voeg vervolgens het copolymeer-geneesmiddelmengsel druppelgewijs toe aan een flesje van 20 milliliter met 15 milliliter 0,9% saline onder roeren.Breng de oplossing over naar een dialysezak en dialyseer deze tegen 500 milliliters 0,9% zoutoplossing. Breng het dialysaat over naar een 15 milliliter buis en centrifugeer dit bij 5.000 ×g gedurende 15 minuten. Breng vervolgens het supernatant over naar een ultrafiltratiesysteem dat een dialysemembraan bevat.Plaats de roeradapter in het ultrafiltratiesysteem, sluit het deksel en open dit voor een stroom stikstof. Concentreer de blokcopolymeermicellen-oplossing tot een volume van vier milliliters en voeg zes milliliters verse zoutoplossing toe. Concentreer de blokcopolymeermicellen-oplossing vervolgens opnieuw tot 4 milliliters, spoel de kamer met 0,5 milliliters zoutoplossing en voeg dit toe aan de oplossing.Bewaar de resulterende oplossing in bruine flesjes bij kamertemperatuur in het donker, voorafgaand aan verder gebruik. De anionische ringopeningspolymerisatie van fenylglycerolether op de mPEG-macroinitiator werd gebruikt om het amfifiele diblokcopolymeer te bereiden door diepe protonering van de hydroxylgroep van mPEG. Hierbij werd naftaleenkalium als radicaalanion gebruikt, gevolgd door de polymerisatie van het fenylglycerolethermonomeer.De karakterisering van het blokcopolymeer door middel van gelpermeatiechromatografie en proton-NMR-spectroscopie bevestigde een smalle molecuulgewichtsverdeling met een polymerisatiegraad van fenylglycorether van 15 eenheden. In waterige media assembleren de amfifiele blokcopolymeren tot micellen die bestaan uit een hydrofobe kern omringd door een hydrofiele schil. Transmissie-elektronenmicroscopie bevestigde een sferische morfologie en dynamische lichtverstrooiing wees op een hydrodynamische diameter van 25 nano meters.Doxorubicine werd succesvol ingekapseld in de blokcopolymeermicellen. In vergelijking met het vrije geprotoneerde geneesmiddel in oplossing, bevestigde zelf-quenching van de doxorubicine, waargenomen via fluorescentiespectroscopie, de incorporatie van het geneesmiddel in de polymere micellen, met een drug loading capacity tot 14%. Het afgifteprofiel van doxorubicine vanuit de blokcopolymeermicellen wees op een goede stabiliteit van deze formulering bij een neutrale pH en een vertraagde afgifte van het geneesmiddel over vier dagen onder fysiologisch relevante omstandigheden.Zodra deze techniek is beheerst, kan deze trainees in de farmaceutische wetenschappen helpen bij het voorbereiden van de synthese van diblokcopolymeren voor toepassingen in drugdelivery. De hier beschreven procedure kan worden toegepast voor de synthese van een breed scala aan copolymeren met PEG als initiator. Hierbij is de nadruk gelegd op het waarborgen van goede laboratoriumpraktijken, die zorgen voor anhydrische condities en resulteren in materialen van hoge kwaliteit.Na het bekijken van deze video zou ik een goed begrip moeten hebben van hoe ik onder anhydrische omstandigheden moet werken en in staat moeten zijn om deze stappen toe te passen voor de synthese van PEG-polyester of PEG-polestermaterialen. Bij het uitvoeren van elk van de beschreven onderzoeken is het essentieel om te onthouden dat u onder gecontroleerde omstandigheden werkt, met potentieel gevaarlijke organische oplosmiddelen en andere reagentia. Bovendien zijn alle geneesmiddelen toxisch en moeten ze met de nodige voorzorgsmaatregelen worden gehanteerd.Zoals het dragen van handschoenen, een laboratoriumjas, gesloten schoenen, en het dragen van een masker wanneer u de geneesmiddelen wilt afwegen.

anionic-polymerization-an-amphiphilic-copolymer-for-preparation-block

Research

JoVE Journal

Chemistry

Scheikunde

Dit artikel beschrijft een methode om nanoprecipitation op basis van polymeren nanodeeltjes door middel van diblok co-polymeren te synthetiseren. Bespreken we de synthese van diblok co-polymeren, de nanoprecipitation techniek en mogelijke toepassingen.

Formulering van diblok polymere nanodeeltjes door middel van Nanoprecipitation Techniek

We rapporteren protocollen voor het “polymeriseren” van verschillende soorten polymeer-ingekapselde metaal-nanodeeltjes tot lange ketens van “homo-“ en “co-polymeren”.

Met behulp van polystyreen<em&gt; Block</em&gt; Poly (acrylzuur) -gecoate Metal Nanodeeltjes als monomeren voor hun homo- en co-polymerisatie

Het doel van dit protocol is om de bereiding en karakterisering van fysiek opgesloten, slecht oplosbare geneesmiddelen in micellaire geneesmiddelafgiftesystemen, samengesteld uit amfifiele blokcopolymeren, te beschrijven.

Bereiding en karakterisering van de individuele en multi-geneesmiddel beladen Fysiek Ingesloten Polymeer Micellen

Nanoschalige zee-eilandoppervlakken, samengesteld uit thermoresponsieve blokcopolymeren, werden vervaardigd door de Langmuir-Schaefer-methode voor het controleren van spontane celhechting en loslating. Zowel de bereiding van het oppervlak als de hechting en loslating van cellen op het oppervlak werden gevisualiseerd.

Voorbereiding van de thermoresponsieve nanogestructureerde oppervlakken voor Tissue Engineering

Dit artikel beschrijft een proces voor het produceren van zelfgeassembleerde polymere nanodeeltjes met behulp van zichtbare licht gemedieerde dispersiepolymerisatie. Het gebruik van zichtbaar licht met lage energie om de polymerisatie te controleren, maakt de reproduceerbare vorming van zelfgeassembleerde worm-achtige micelles mogelijk bij een hoog vast stofgehalte.

Facile Synthese van Worm-micellen door het zichtbare licht Mediated Dispersion polymerisatie onder toepassing van Photoredox Catalyst

Om kankermedicijnen met hoge specificiteit en verminderde bijwerkingen naar tumorlocaties te brengen, zijn nieuwe methoden op basis van nanodeeltjes vereist. Hier beschrijven we disulfide-gekruiste micellen die gemakkelijk kunnen worden bereid door waterstofperoxide-gemedieerde oxidatie en die zich efficiënt kunnen dissociëren in een reducerende tumoromgeving om ladingen vrij te geven.

Een Facile en efficiënte aanpak voor de productie van omkeerbare Disulfide Cross-linked micellen

Hier presenteren we een protocol voor te bereiden en te visualiseren secundaire structuren (bijvoorbeeld vezels, toroïdale architecturen en nano- bolletjes) verkregen uit schroeflijnvormige polycarbodiimides. De morfologie gekenmerkt door zowel atomaire kracht microscopie (AFM) en scanning elektronenmicroscopie (SEM) bleek afhankelijk moleculaire structuur, de concentratie en het oplosmiddel van keuze.

Zelf monteren van morfologieën Verkregen uit rechte polycarbodiimide copolymeren en hun triazoolderivaten

Dit document stelt een methode waarbij de synthese en de karakterisering van monocyt-targeting peptide Amfifiel micellen en de corresponderende testen om te testen voor biocompatibiliteit en het vermogen van de micel binden aan monocyten.

Synthese van monocyt-targeting Peptide Amfifiel micellen voor beeldvorming van atherosclerose

Kristallisatie-gedreven zelf-assemblage (CDSA) toont de unieke capaciteit om cilindrische nanostructures van smalle lengte distributies te fabriceren. De organocatalyzed ring-opening polymerisatie van Epsilon-caprolacton en de daaropvolgende keten uitbreidingen van methyl methylmethacrylaat en n, n-dimethyl acrylamide worden aangetoond. Een levende CDSA protocol dat produceert monodispers cilinders tot 500 nm in lengte is geschetst.

Synthese van monodispers cilindrische nanodeeltjes via kristallisatie-gedreven zelf-assemblage van biologisch afbreekbaar blok copolymeren

We bieden protocollen en representatieve gegevens voor het ontwerpen, assembleren en karakteriseren van polyelektrolyt complexe micelles, core-shell nanodeeltjes gevormd door polyelektrolyten en hydrofielgeladen-niet-geladen blokcopolymeren.

Montage en karakterisering van Polyelectrolyte Complex Micelles

Leer de anionische polymerisatie van blokcopolymeermicellen voor doxorubicine-afgifte via ringopeningstechnieken. Dit protocol toont synthese met hoge opbrengst en lage dispersiteit voor farmaceutische toepassingen.

Anionische polymerisatie van een amfifiele copolymeer voor de bereiding van blokcopolymeer micellen gestabiliseerd door π-π stapelen interacties (Video) | JoVE Journal

Anionische polymerisatie van een amfifiele copolymeer voor de bereiding van blokcopolymeer micellen gestabiliseerd door π-π stapelen interacties

Meer video's verkennen