Name: lengte- In Vivo Imaging van de Cerebrovasculature: Relevantie voor CNS ziekten (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2016-12-06T14:00:00.000+00:00
Duration: 7 min 47 s
Description: Verken longitudinale two-photon microscopie voor cerebrovasculaire remodellering in een muismodel van Alzheimer. Deze minimaal invasieve methode maakt real-time visualisatie van vasculaire veranderingen mogelijk.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

playerTrialDesktop

De auteurs willen graag naar de Ligue Francaise contre l&#39;Epilepsie (tot MA-L), Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale Grant AVENIR R12087FS (tot FJ), toe te kennen aan de universiteit van Montpellier (tot FJ) en subsidie ​​erkennen van Federatie pour la Recherche sur le Cerveau (NM). Wij erkennen de technische bijstand van Chrystel Lafont aan het IPAM in vivo imaging kern platform faciliteit van Montpellier. We danken ook Mary Vernov (Weill Cornell Medical College) voor het corrigeren van het manuscript.

Muizen zijn toegestaan ad libitum toegang tot voedsel, water, en onderhouden op een 12-uur licht-donker cyclus. Alle procedures waarbij proefdieren gelijkvormig aan nationale en Europese wetten en werden goedgekeurd door het Franse Ministerie van Onderwijs en Wetenschappelijk Onderzoek (CEEA-LR-00651-01). Een totaal van 6 transgene 5xFAD en 4 nestzus wildtype (WT) controlemuizen werden voor deze procedure. 1. Pre-operatieve Voorbereiding <ol><li> Intraperitoneaal (IP) geïnjecteerd Methoxy-X04 (10 mg / kg) 48 uur voor de operatie Ap-afzettingen 11 label. </li><li> Bereid steriele kunstmatige cerebrospinale vloeistof (aCSF) (120 mM NaCl, 26,2 mM NaHCO 3, 2,5 mM KCl, 1 mM NaH 2PO 4, 1,3 mM MgCl2, 10 mM glucose, bel met 95% O2 / 5% CO 2 vóór toevoegen van 2,5 mM CaCl2). </li><li> Steriliseren chirurgische instrumenten (scharen, forceps, scheermesje en boor), onder toepassing van een autoclaaf of hete kraal sterilisator voor aseptischechirurgie. </li><li> Reinig de chirurgische bankje en microscoop plaat met 70% ethanol en dek af met een schone absorberende doek. </li><li> Injecteer ketamine / xylazine (75 mg / kg en 10 mg / kg) en de analgetische ketoprofen (2,5 mg / kg) IP. </li><li> Controleer het juiste niveau van de anesthesie met poot of staart knijpt. </li><li> Breng een steriel oogzalf voor de ogen en scheren de vacht (neus naar de oren), terwijl het vermijden van de snorharen. Een ontharingscrème kan worden gebruikt zolang deze wordt gevolgd door voorzichtig spoelen met water om huidirritatie te voorkomen. Scheer de resterende vacht met een scheermesje. Steriliseer de huid met povidonjood antiseptische oplossing. </li><li> Plaats de muis onder de binoculair microscoop en maak een incisie in de huid van de oren aan de neus. Trek de huid zijwaarts aan de schedel bloot te leggen. Incise het periost en herhaaldelijk spoel de schedel met steriele aCSF mogelijke bloeden te stoppen. </li></ol> 2. vaatstelsel Labeling en Verdunde SkullBereiding venster (40 min) <ol><li> Verwijder de oogzalf met een wattenstaafje. Breng een druppel topische oftalmische verdoving (tetracaïne 1%) en voorzichtig druk de huid rond de oogkas tot uitsteeksel bereiken. </li><li> Injecteer fluoresceïne isothiocyanaat (FITC) geconjugeerd met dextraan (70 kDa) (100 mg / kg of 50 ui van een 50 mg / ml oplossing; hypodermische insuline naald) in de retro-orbitale sinus na de door Yardeni en collega 12 procedure. Breng een steriel oogzalf voor de ogen. </li><li> Zorg ervoor dat de huid is teruggetrokken en de schedel is schoon en droog rond het geselecteerde beeldgebied. Breng een kleine hoeveelheid cyanoacrylische lijm rond het raam van de kop te monteren inrichting (bestaande uit gestapelde scheermesjes, zie figuur 1), en lijm rond het doelgebied toepassing van zachte druk gedurende enkele seconden 10. </li><li> Trek aan de uiteinden van de huid aan de rand van het venster van het hoofd te monteren apparaat, zorg ervoor dat het gebied isdroog. Bevestig de huid en de rand van het venster met een kleine hoeveelheid veterinaire rang cyanoacryl lijm en wacht tot het droog is (figuur 1). </li><li> Zet het dier in het stadium met behulp van de head-mount apparaat. Spoelen met steriele aCSF en ervoor te zorgen dat het goed tussen de huid en het hoofd-mount apparaat perfect verzegeld. Wikkel de muis in een survival deken om normothermia handhaven. </li><li> Voer verdunning van de schedel in aCSF oplossing zoals eerder beschreven 10. Merk op dat de hoofdhuid niet volledig verwijderd. Veranderen regelmatig de aCSF aan het bot puin te wissen en om weefsel oververhitting te voorkomen. Eventuele resterende bot vuil kan worden verwijderd met een korte lucht trekjes. De aCSF oplossing dempt ook trillingen die door het boren. OPMERKING: De muis schedel dikte varieert van 80 tot 150 urn, afhankelijk van de leeftijd van het dier en het gebied van belang. </li><li> Met behulp van een tandheelkundige boor (bij gemiddelde snelheid en een 0,7 mm braam) start verdunnen van de schedel oppervlak in een gebied 1.0 mm in diameter met een gewone verticale beweging parallel aan de schedel en verwijder het grootste deel van het sponsachtige bot (eerste 40-70 pm). Vergeet niet om vervanging van aCSF elke 20-30 sec en beperken ononderbroken boren tot 3-4 sec. Merk op dat het bot in de buurt van hechtingen is sterk doorbloed. Solliciteer aCSF voorgeweekt gelfoam tot uiteindelijke bloeden te stoppen. </li><li> Gebruik een scherp wegwerp oogheelkundige microchirurgische mes door te gaan met het dunner worden van de schedel, zorg dat overmatige druk niet toe te passen. Het laatste gebied is van ongeveer 0,5 mm in diameter en met een dikte van 20-35 urn. LET OP: Door het bot hergroei en littekens, is het noodzakelijk om verder te verdunnen het venster bij elke opnamesessie. </li></ol> 3. Twee-foton microscopie (45 min) <ol><li> Zonodig injecteren met 19 mg / kg ketamine adequate anesthesie te handhaven. </li><li> Breng de muis (de headmount stadium vast) onder de twee-foton laser microscoop. Met behulp van een 20X water immersie objecterend met een numerieke apertuur van 1,0, vind verdunde craniale venster in het midden van het optische behulp van het epi-fluorescentielamp. Zorg ervoor dat de doelstelling altijd aCSF wordt ondergedompeld. </li><li> Begin laser scanning met een modus vergrendelde gepulste laser (Ti-Sapphire 680-1040nm). Stel excitatie golflengte bij 750 nm en de geëmitteerde fluorescentie van de methoxy-XO4 en FITC-dextran in het blauwe en groene kanalen respectievelijk detecteren. LET OP: De microscoop heeft twee beam splitters bij 506 nm en 555 nm. Blauw licht wordt opgevangen door een NDD detector uitgerust met een 470 ± 12 nm filter. Groen licht wordt opgevangen door een hoge gevoeligheid GaAsP detector uitgerust met een 525 ± 25 nm filter. Het maximale laservermogen uitgezonden door het doel niet meer dan 10 mW tot laser geïnduceerde weefselbeschadiging te voorkomen. </li><li> Het verwerven van een lage vergroting stapel (500 urn x 500 urn, 512 x 512 pixels; 2 pm stap) op een 0,7X numerieke zoom om een ​​3D-kaart voor de precieze herlokalisatie van de ROI te creërenop latere tijdstippen. </li><li> Het verwerven van een mozaïek van 4 hoge digitale vergroting beelden met een 2X numerieke zoom (200 urn x 200 urn, 512 x 512 pixels; 1 micrometer stap). Met behulp van de imaging software te bewegen het raam in 200 micrometer stappen om alle regio&#39;s vast te leggen. Diepte van stapels is typisch 250 pm, vanaf de pial oppervlak in elk beeld van het mozaïek. </li><li> Voordat u de muis van de microscoop, een foto of een handgetekende 2D-kaart van de pial vaatstelsel voor toekomstige herlokalisatie van het veld imaging. </li></ol> 4. Herstel en Re-imaging <ol><li> Verwijder de head-mount apparaat door het toepassen van tractie terwijl de schedel eronder. Als er lijm op de schedel of de huid blijft vastzitten, schraap het voorzichtig af met fijne tang. Suture de hoofdhuid en plaatst u de muis in een verwarmde kooi om het herstel van de anesthesie te controleren alvorens terug te keren naar de kooi. Toepassen topische antibiotische crème op de hechtdraad en injecteer ketoprofen (2,5 mg / kg) IP de volgende 2 dagen. </li><li> Herhaal stap 1,1-2,5 voor repeterend afbeelden sessies. Scheer zo nodig het bot met een microchirurgische mes optimale beeldkwaliteit te garanderen. LET OP: Extra verdunnen met de tandheelkundige boor kan nodig zijn wanneer het interval tussen de beeldvorming sessies langer is dan één maand. </li><li> Plaats de muis onder de microscoop met epifluorescerende licht volgens de kaart van de pial vaatstelsel genomen van de vorige sessie (stap 3.6) 2D. </li><li> Start twee-foton laser scanning en pas microscoop podium om afstemming te bereiken op de micrometer schaal met behulp van de 3D-kaart verkregen in stap 3.4. Ga verder met gedetailleerde beeldvorming zoals beschreven in stap 3.5. </li></ol> 5. Post-acquisitie Driedimensionale Wederopbouw en beeldanalyse <ol><li> Het verkrijgen van driedimensionale reconstructies van het vaatstelsel en de amyloïde afzettingen met behulp van de 3D-beeld analyse software zoals Imaris (gebruikte versie 8.0 en 7.7.2). </li&gt; <li> Gebruik het normaliseren Layer plugin op het menu, beeldverwerking en contrast submenu wijziging ideaal contrast van de twee kanalen in de gehele diepte van het beeld stack te krijgen. </li><li> Open de beelden van hetzelfde gebied op alle tijdstippen tegelijkertijd altijd verwerken in parallel om de verschillende tijdstippen te vergelijken. </li><li> Trace vaartuigen die de gloeidraad tracer module. <ol><li> Klik op het icoon filament om een ​​nieuwe draad te maken, slaat u de automatische tracer en kies de methode auto-pad. </li><li> Zorg ervoor dat het geselecteerde kanaal komt overeen met de vasculaire afbeelding en met behulp van de select functie van de wijzer, klikt u op een schip vertakking dat is geconserveerd over de beeldvorming sessies terwijl u de shift + bedieningstoetsen om een ​​beginpunt te bepalen. Gebruik de select functie van de aanwijzer en klik terwijl u de Shift-toets om de eindpunten van de filamenten te selecteren. LET OP: Vergelijking van de obtained skeletten zullen structurele veranderingen van het vaatstelsel te tonen. </li></ol></li><li> Voer het vliegtuig met het vliegtuig analyse om nieuwe plaques volgen. Toepassen oppervlaktemodule voor het blauwe kanaal voor het volgen van de groei van Ap plaques. Klik op het icoon oppervlak om een ​​nieuw oppervlak te creëren en verder te gaan met de geautomatiseerde oppervlak schepping. Gebruik de drempelwaarde methode in te stellen en af ​​te trekken op de achtergrond signaal. De statistiekenmenu geeft gegevens met betrekking tot het oppervlak van individuele amyloïde afzettingen. </li></ol>

<ol><li>Harb, R., Whiteus, C., Freitas, C., Grutzendler, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vivo+imaging+of+cerebral+microvascular+plasticity+from+birth+to+death%5BTitle%5D)+AND+%22J+Cereb+Blood+Flow+Metab%22%5BJournal%5D)">In vivo imaging of cerebral microvascular plasticity from birth to death.</a> J Cereb Blood Flow Metab. 33 (1), 146-156 (2013).</li>
<li>Whiteus, C., Freitas, C., Grutzendler, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Perturbed+neural+activity+disrupts+cerebral+angiogenesis+during+a+postnatal+critical+period%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Perturbed neural activity disrupts cerebral angiogenesis during a postnatal critical period.</a> Nature. 505 (7483), 407-411 (2014).</li>
<li>Masamoto, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Microvascular+sprouting%2C+extension%2C+and+creation+of+new+capillary+connections+with+adaptation+of+the+neighboring+astrocytes+in+adult+mouse+cortex+under+chronic+hypoxia%5BTitle%5D)+AND+%22J+Cereb+Blood+Flow+Metab%22%5BJournal%5D)">Microvascular sprouting, extension, and creation of new capillary connections with adaptation of the neighboring astrocytes in adult mouse cortex under chronic hypoxia.</a> J Cereb Blood Flow Metab. 34 (2), 325-331 (2014).</li>
<li>Marchi, N., Lerner-Natoli, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cerebrovascular+remodeling+and+epilepsy%5BTitle%5D)+AND+%22Neuroscientist%22%5BJournal%5D)">Cerebrovascular remodeling and epilepsy.</a> Neuroscientist. 19 (3), 304-312 (2013).</li>
<li>Giannoni, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cerebrovascular+pathology+during+the+progression+of+experimental+Alzheimer%27s+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Neurobiol+Dis%22%5BJournal%5D)">Cerebrovascular pathology during the progression of experimental Alzheimer's disease.</a> Neurobiol Dis. 88, 107-117 (2016).</li>
<li>Kimbrough, I. F., Robel, S., Roberson, E. D., Sontheimer, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Vascular+amyloidosis+impairs+the+gliovascular+unit+in+a+mouse+model+of+Alzheimer%27s+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Brain%22%5BJournal%5D)">Vascular amyloidosis impairs the gliovascular unit in a mouse model of Alzheimer's disease.</a> Brain. 138 (Pt 12), 3716-3733 (2015).</li>
<li>Herzig, M. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Abeta+is+targeted+to+the+vasculature+in+a+mouse+model+of+hereditary+cerebral+hemorrhage+with+amyloidosis%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Abeta is targeted to the vasculature in a mouse model of hereditary cerebral hemorrhage with amyloidosis.</a> Nat Neurosci. 7 (9), 954-960 (2004).</li>
<li>Oakley, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intraneuronal+beta-amyloid+aggregates%2C+neurodegeneration%2C+and+neuron+loss+in+transgenic+mice+with+five+familial+Alzheimer%27s+disease+mutations%3A+potential+factors+in+amyloid+plaque+formation%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Intraneuronal beta-amyloid aggregates, neurodegeneration, and neuron loss in transgenic mice with five familial Alzheimer's disease mutations: potential factors in amyloid plaque formation.</a> J Neurosci. 26 (40), 10129-10140 (2006).</li>
<li>Liston, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Circadian+glucocorticoid+oscillations+promote+learning-dependent+synapse+formation+and+maintenance%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Circadian glucocorticoid oscillations promote learning-dependent synapse formation and maintenance.</a> Nat Neurosci. 16 (6), 698-705 (2013).</li>
<li>Yang, G., Pan, F., Parkhurst, C. N., Grutzendler, J., Gan, W. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Thinned-skull+cranial+window+technique+for+long-term+imaging+of+the+cortex+in+live+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Protoc%22%5BJournal%5D)">Thinned-skull cranial window technique for long-term imaging of the cortex in live mice.</a> Nat Protoc. 5 (2), 201-208 (2010).</li>
<li>Klunk, W. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Imaging+Abeta+plaques+in+living+transgenic+mice+with+multiphoton+microscopy+and+methoxy-X04%2C+a+systemically+administered+Congo+red+derivative%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neuropathol+Exp+Neurol%22%5BJournal%5D)">Imaging Abeta plaques in living transgenic mice with multiphoton microscopy and methoxy-X04, a systemically administered Congo red derivative.</a> J Neuropathol Exp Neurol. 61 (9), 797-805 (2002).</li>
<li>Yardeni, T., Eckhaus, M., Morris, H. D., Huizing, M., Hoogstraten-Miller, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Retro-orbital+injections+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Lab+Anim+%28NY%29%22%5BJournal%5D)">Retro-orbital injections in mice.</a> Lab Anim (NY). 40 (5), 155-160 (2011).</li>
<li>Cao, V. Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vivo+two-photon+imaging+of+experience-dependent+molecular+changes+in+cortical+neurons%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">In vivo two-photon imaging of experience-dependent molecular changes in cortical neurons.</a> J Vis Exp. (71), (2013).</li>
<li>Holtmaat, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Long+term%2C+high-resolution+imaging+in+the+mouse+neocortex+through+a+chronic+cranial+window%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Protoc%22%5BJournal%5D)">Long term, high-resolution imaging in the mouse neocortex through a chronic cranial window.</a> Nat Protoc. 4 (8), 1128-1144 (2009).</li>
<li>Heppner, F. L., Ransohoff, R. M., Becher, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Immune+attack%3A+the+role+of+inflammation+in+Alzheimer+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Rev+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Immune attack: the role of inflammation in Alzheimer disease.</a> Nat Rev Neurosci. 16 (6), 358-372 (2015).</li>
<li>Marker, D. F., Tremblay, M. E., Lu, S. M., Majewska, A. K., Gelbard, H. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+thin-skull+window+technique+for+chronic+two-photon+in+vivo+imaging+of+murine+microglia+in+models+of+neuroinflammation%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">A thin-skull window technique for chronic two-photon in vivo imaging of murine microglia in models of neuroinflammation.</a> J Vis Exp. (43), (2010).</li>
<li>Joseph-Mathurin, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Amyloid+beta+immunization+worsens+iron+deposits+in+the+choroid+plexus+and+cerebral+microbleeds%5BTitle%5D)+AND+%22Neurobiol+Aging%22%5BJournal%5D)">Amyloid beta immunization worsens iron deposits in the choroid plexus and cerebral microbleeds.</a> Neurobiol Aging. 34 (11), 2613-2622 (2013).</li>
<li>Sadowski, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Targeting+prion+amyloid+deposits+in+vivo%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neuropathol+Exp+Neurol%22%5BJournal%5D)">Targeting prion amyloid deposits in vivo.</a> J Neuropathol Exp Neurol. 63 (7), 775-784 (2004).</li>
</ol>

Auteurs hebben geen concurrerende financiële belangen.

De open schedel techniek voor in vivo twee-foton microscopie biedt het voordeel van onbeperkte beeldvorming sessies grote beeldvormende gebieden 13,14. Deze techniek produceert ontsteking in het interessegebied 14, vaak niet te beïnvloeden of neurovasculaire uitlezingen 15. Integendeel gaat de verdunde schedel transcraniële techniek niet tot neuro-inflammatie, teneinde een betrouwbare weergave van de structuren en cerebrovasculaire plakophoping 10,14. Een tweede voord...

De hersenen vasculatuur is een meercellige structuur, die anatomisch en functioneel is gekoppeld aan neuronen. Een dynamische remodelleren van vaten optreedt tijdens hersenontwikkeling en tijdens de progressie van aandoeningen van het centrale zenuwstelsel (CNS) 1,2. Het is algemeen aanvaard dat cerebrovasculaire schade is een kenmerk van verschillende CNS ziektes, waaronder epilepsie, de ziekte van Alzheimer (AD), traumatisch hersenletsel en encefalitis 3,4. Daarom volgen cerebrovasculaire veranderingen in vivo significant wordt bij het modelleren CNS ziekten, van begin en in chronische fase. Zoals cerebrovasculaire wijzigingen komen vaak gelijktijdig met neuronale schade of plasticiteit, beeldvorming van de neuro-vaatstelsel is een belangrijke toegangspoort tot CNS ziekte pathofysiologie ontcijferen. Dit protocol beschrijft een longitudinale twee-foton gebaseerde procedure om de hermodellering van het cerebrovasculature volgen in een muismodelAD, een progressieve pathologie gekenmerkt door cerebrovasculaire afwijkingen op grote en kleine kaliber schepen te wijten aan amyloidogenic plaqueneerslag 5-7. Deze procedure maakt de visualisatie van amyloïde afzettingen en het volgen van hun positie en groei ten opzichte neurovasculaire remodeling in de loop van de ziekte. Vital fluorescerende kleurstoffen worden geïnjecteerd voor elke opnamesessie voor de visualisatie van de cerebrovasculature en amyloïde plaques in AD transgene muizen 8. Herhaalde beeldvorming sessies van een ROI door middel van een verdunde schedel transcraniële window is niet-invasief en de methode van keuze om neurovasculaire remodeling beoordelen in de levende muis hersenen 2,5,9,10. De onderstaande procedure beschrijft de chirurgische protocol, het capturen en verwerken. De vroege progressie van cerebrale amyloïde angiopathie (CAA) meestal op grote leptomeningiale en indringende arteriolen wordt gekenmerkt.

<table><tbody><tr><td>methoxy-X04</td><td>tocris</td><td>4920</td><td>gebruik 10 mg/kg</td></tr><tr><td>FITC-Dextran 70 Kda</td><td>sigma</td><td>46945</td><td>gebruik 100 mg/kg</td></tr><tr><td>gelfoam/Bloxang</td><td>Bausch and Lomb</td><td></td><td></td></tr><tr><td>micorsurgical blade</td><td>surgistar</td><td>6900</td><td>moet scherp zijn en niet vervormd</td></tr><tr><td>povidone-jodium</td><td>betadine</td><td></td><td>antiseptische oplossing</td></tr><tr><td>binoculaire stereomicroscoop</td><td>olympus</td><td>SX10</td><td>optimale beeldcontrast is cruciaal voor deze procedure</td></tr><tr><td>2-foton microscoop</td><td>zeiss</td><td></td><td>Zeiss LSM 710mp</td></tr><tr><td>fijne schaar-toughcut</td><td>Fine science tools</td><td>14058-09</td><td>deze schaar zijn geoptimaliseerd voor het snijden van huid en zacht weefsel</td></tr></tbody></table>

lengte-<em&gt; in vivo</em&gt; imaging van de cerebrovasculature: relevantie voor cns ziekten

Longitudinal In Vivo Imaging of the Cerebrovasculature: Relevance to CNS Diseases

Herinrichting van de hersenen vasculatuur is een gemeenschappelijk kenmerk van hersenen pathologieën. In vivo beeldvormende technieken zijn fundamenteel voor het detecteren cerebrovasculaire plasticiteit of schade ontstaat overwerk en in relatie tot neuronale activiteit of doorbloeding. In vivo twee-foton microscopie maakt het onderzoek mogelijk van de structurele en functionele plasticiteit van grote cellulaire eenheden in de levende hersenen. Met name de uitgedunde schedel venster preparaat maakt de visualisatie van corticale gebieden van belang (ROI) en zonder het significant hersenontsteking. Herhaalde beeldvorming sessies corticale ROI haalbaar, waardoor de karakterisering van ziekte kenmerken in de tijd tijdens de progressie van een groot aantal centrale zenuwstelsel. Deze techniek toegang tot pial structuren binnen 250 urn van de hersenen gebaseerd op de detectie van fluorescerende probes gecodeerd door genetische cellulaire merkers en / of vitale kleurstoffen. Zijn (bijvoorbeeld, fluorescerende dextranen) worden gebruikt om de kaart te luminal compartiment van cerebrovasculaire structuren. Relevant voor de hierin beschreven protocol is het gebruik van een in vivo marker van amyloïde afzettingen, Methoxy-O4, de ziekte van Alzheimer (AD) progressie beoordelen. We beschrijven ook de post-acquisitie beeldverwerking gebruikt om vasculaire veranderingen en amyloïde afzettingen te volgen. Terwijl momenteel gericht op een model van AD, de beschreven protocol andere CZS stoornissen waarbij cerebrovasculaire pathologische veranderingen voordoen relevant.

Dit protocol beschrijft een methode voor het visualiseren van de cerebrovasculature en amyloïde afzettingen overuren. Fluorescerende kleurstoffen werden geïnjecteerd met amyloïde afzettingen (methoxy-XO4) 11 labelen en de cerebrovasculaire lumen (FITC-Dextran) 1 vullen. 3D-beeld analyse software modules werden gebruikt om 3D-beelden van een constant gezichtsveld vastgelegd op opeenvolgende tijdstippen te creëren. Afbeeldingen slechts verkregen in de somatosensorisch...

Dit manuscript beschrijft een procedure om de herinrichting van de cerebrovasculature volgen tijdens amyloïde plaque accumulatie in vivo met behulp van longitudinale twee-foton microscopie. Een uitgedunde schedel bereiden voor de visualisatie van fluorescente kleurstoffen om de progressie van cerebrovasculaire schade te beoordelen in een muizenmodel van de ziekte van Alzheimer.

lengte-<em&gt; In Vivo</em&gt; Imaging van de Cerebrovasculature: Relevantie voor CNS ziekten

Remodeling of the brain vasculature is a common trait of brain pathologies. In vivo imaging techniques are fundamental to detect cerebrovascular ...

Het algemene doel van deze procedure is om de remodellering van de vasculatuur in de hersenen van de muis te volgen tijdens de progressie van een chronische ziekte over langere perioden. Deze methode kan helpen bij het beantwoorden van kernvragen in het veld van de neurowetenschappen, zoals de rol van cerebrale vasculatuur-remodellering bij ziekten van het centrale zenuwstelsel. Het belangrijkste voordeel van deze techniek is dat deze minimaal invasief is en geen neurale ontsteking veroorzaakt, waardoor het ideaal is voor het bestuderen van pathologieën waarbij ontsteking daadwerkelijk betrokken is.Deze techniek maakt de visualisatie van piale en penetrerende corticale vaten mogelijk, wat complementair is aan histologische technieken die gericht zijn op de visualisatie van microcapillairen in het parenchym van de bloed-hersenbarrière. De procedure wordt gedemonstreerd door Margarita Arango-Lievano. Zij is een postdoc uit mijn laboratorium.Om deze procedure te starten, reinigt u de operatietafel en de microscoopplaat met 70% ethanol en bedekt u deze met een schone, absorberende doek. Controleer vervolgens of het anesthesieniveau passend is door in de poot of staart te knijpen. Breng

longitudinal-vivo-imaging-cerebrovasculature-relevance-to-cns

Research

JoVE Journal

Medicine

Geneeskunde

Source: Arango-Lievano, M. et. al., Longitudinal In Vivo Imaging of the Cerebrovasculature: Relevance to CNS Diseases. J. Vis. Exp. (2016)This video demonstrates in vivo two-photon imaging to visualize fluorescently labeled amyloid plaques and cerebral vasculature. Blue fluorescence marks plaques, while green fluorescence highlights the cerebral blood vessels. A 3D map of the region of interest and high-resolution mosaic imaging reveal detailed interactions of amyloid plaques with cerebral...

In Vivo Imaging of Cerebral Vessels and Amyloid Plaques in an Alzheimer’s Disease Mouse Model

Dit document beschrijft een methode waarmee de vasculaire architectuur in de hersenen kan worden gekwantificeerd met behulp van in vivo en ex vivo twee-foton microscopie.

Kwantificering van cerebrale vasculaire architectuur met behulp van twee-foton microscopie in een muismodel van de HIV-geïnduceerde Neuroinflammation

Dit protocol beschrijft de toepassing van gecombineerde nabij-infrarood fluorescerende (NIRF) beeldvorming en micro-computertomografie (microCT) voor het visualiseren van cerebrale thromboemboli. Deze techniek maakt de kwantificering van trombus last en evolutie. De NIRF beeldvormende techniek visualiseert fluorescent gelabelde trombus in weggesneden hersenen, terwijl de microCT techniek visualiseert trombus in levende dieren met behulp van goud-nanodeeltjes.

Gecombineerde nabij-infrarood Fluorescent Imaging en Micro-computertomografie voor het direct visualiseren Cerebral Thromboemboli

We beschrijven een muismodel van experimentele cerebrale malaria en laten zien hoe inflammatoire en microvasculaire pathologie in vivo kunnen worden gevolgd met behulp van magnetische resonantie beeldvorming.

In vivo Tracking van Oedema Ontwikkeling En Microvasculaire Patologie In Een Model Van Experimentele Cerebrale Malaria Met Magnetic Resonance Imaging

De gelijktijdige evaluatie van cerebrale hemodynamica en de lichtverstrooiende eigenschappen van in vivo rattenhersenweefsel wordt aangetoond met conventionele multispectrale diffuse reflectie-afbeeldingssysteem.

Gelijktijdige Evaluatie van Cerebrale hemodynamiek en Light Scattering Eigenschappen van de<em&gt; In Vivo</em&gt; Rat Brain behulp Multispectral Diffuse reflectie Imaging

Terwijl multifotonenbeeldvorming alleen effectief is op beperkte diepten van het weefseloppervlak, is het mogelijk om via pCLE op elke diepte beeldvorming met een resolutie van 3 μm te bereiken. Hier presenteren we een protocol om pCLE-beeldvorming uit te voeren om de microvasculaire dynamiek in de hippocampus van ictale en wildtype muizen te meten.

In vivo vezelgekoppelde preklinische confocale laserscanning-endomicroscopie (pCLE) van hippocampuscapillairen bij wakkere muizen

Transcraniële optische beeldvorming maakt het mogelijk om het transport van cerebrospinale vloeistof in de cortex van levende muizen door middel van een intacte schedel te Imaging.

In vivo beeldvorming van cerebrospinale vloeistof transport door de intact Mouse schedel met behulp van fluorescentie Macroscopie

Dit protocol beschrijft een chronische craniale venster implantatie techniek die kan worden gebruikt voor longitudinale beeldvorming van neuro-glio-vasculaire structuren, interacties, en functie in zowel gezonde als zieke omstandigheden. Het dient als een aanvullend alternatief voor de transcraniële beeldvormingsbenadering die, hoewel vaak de voorkeur, een aantal kritische beperkingen bezit.

Nauwkeurige brain mapping om repetitieve in vivo beeldvorming van neuro-immuundynamica in muizen uit te voeren

Dit protocol presenteert stappen om fluorescerende calciumbeelden van hersenverwarmende pericyten en bloedstroomgegevens van nabijgelegen bloedvaten in verdoofde muizen te verkrijgen en te analyseren. Deze technieken zijn nuttig voor studies van de fysiologie van muurschilderingscellen en kunnen worden aangepast om calciumtransiënten in elk celtype te onderzoeken.

Pericytencalcium en hemodynamische beeldvorming in de hersenen bij transgene muizen in vivo

Gestimuleerde Raman-verstrooiing (SRS) microscopie maakt labelvrije beeldvorming van biomoleculen mogelijk op basis van hun intrinsieke vibratie van specifieke chemische bindingen. In dit protocol wordt de instrumentele opstelling van een geïntegreerde SRS- en twee-fotonenfluorescentiemicroscoop beschreven om cellulaire structuren in het ruggenmerg van levende muizen te visualiseren.

In vivo Beeldvorming van biologische weefsels met gecombineerde twee-fotonenfluorescentie en gestimuleerde Raman-verstrooiingsmicroscopie

Om de cerebrale bloedstroomregulatie in vivo te bestuderen, zijn traditionele farmacologische methoden invasief en beschadigen ze vaak de schedel, dura en leptomeninges. In dit werk hebben we een minimaal invasieve techniek ontwikkeld die nano-injectorgeleide intracisternale magna (ICM) injectie combineert met beeldvorming met laserspikkelcontrast, waardoor de integriteit van de schedel en leptomeninges behouden blijft.

Gepaarde Cisterna Magna-nano-injectie en laserspikkelcontrastbeeldvormingstest om cerebrale bloedstroomregulatie in vivo te bestuderen

Verken longitudinale two-photon microscopie voor cerebrovasculaire remodellering in een muismodel van Alzheimer. Deze minimaal invasieve methode maakt real-time visualisatie van vasculaire veranderingen mogelijk.

lengte-

Meer video's verkennen