Name: Inductie van ischemische beroerte en ischemie-reperfusie in Muizen met behulp van het Midden-slagader occlusie Techniek en Visualisatie van Infarct Area (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2017-02-02T12:30:00.000+00:00
Duration: 9 min 8 s
Description: Leer een chirurgische methode om ischemische beroerte bij muizen te induceren via middenslagaderocclusie, waarbij de externe cerebrale arterie intact blijft voor directe behandeling.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

We willen Dr. Lei Chen (Icahn School of Medicine at Mount Sinai, NY) bedanken die dit model als eerste in ons laboratorium heeft opgezet. Gedeeltelijk ondersteund door HL126559, DA039576, MH098891, MH63022, MH072567, DA027569 en NSC 2015/17/B/NZ7/02985. Dr. Luc Bertrand wordt gedeeltelijk ondersteund door een postdoctorale beurs van de American Heart Association (16POST31170002).

Alle procedures werden goedgekeurd door de Universiteit van Miami Institutional Animal Care en gebruik Comite (IACUC) in overeenstemming met de National Institutes of Health (NIH) richtlijnen. Het gebruik steriele en aseptische technieken vereist. 1. Voorbereiding van de occlusie Suture <ol><li> Gebruik een hechting diameter van 0,21 mm muizen tussen 20 - 25 g en 0,23 mm voor muizen tussen 25 - 35 g lichaamsgewicht. De keuze van het type hechtingen voor de MCAO procedure is gebaseerd op gewicht van het dier. </li><li> Met behulp van een zilveren pen, markeren de hechting op 9 mm vanaf de siliconen gecoate tip. Dit zal dienen als leidraad voor het inbrengen lengte. </li></ol> 2. Voorbereiding voor Heelkunde <ol><li> Verdoven muis met isofluraan gemengd met zuurstof met een klinisch anesthesiesysteem. Gebruik isofluraan bij het instellen van 5 en zuurstoftoevoer bij 2 op de commerciële machine (zie Materials tabel). Breng het dier naar surgery oppervlak en in stand houden anesthesie met behulp van een neuskegel (gebruik isofluraan instellen van 1,5-2,5 en zuurstoftoevoer 2). <ol><li> Zorg ervoor dat de muis ademfrequentie is ongeveer 1-2 ademhaling per seconde zonder hijgen. Daarnaast is ervoor te zorgen dat het dier snorharen stimulatie reactie en pedaal reflex (teen knijpen) vertoont. Monitor ademhaling en inspanning tijdens de operatie, ten minste om de 5 min. </li></ol></li><li> Een druppel oftalmische smeermiddel op elk oog met een steriel wattenstaafje om uitdroging te voorkomen tijdens de procedure. Ook verzoeken oogzalf van het oog door een steriele farmaceutische buis. </li><li> Flip het dier op zijn rug en scheren de incisie gebied. Daarna grondig ontsmet de chirur- gie gebruikt 70% ethanol, gevolgd door Chloorhexidine en de uiteindelijke staafje met 70% ethanol. Leg het dier op een warme chirurgische oppervlak onder een stereomicroscoop. </li></ol> 3. Dissectie van de halsslagader en Internal / External Branching <ol><li> Gebruik chirurgische schaar en forceps Voer een ondiepe middellijn incisie in de nek, van boven het borstbeen tot onder de kaak (ongeveer 3-4 cm). Chirurgische doek worden geplaatst rond de operatie vlak voor instrumenten voorkomen dat ze in contact met niet-steriele oppervlakken. De chirurgische doek werd weggelaten in de huidige video filmen steun. </li><li> Met behulp van pincet voorzichtig gescheiden vet en bindweefsel de luchtpijp bloot. Weefsel moet gemakkelijk en natuurlijk te scheiden voor beide partijen. </li><li> Plaats een kussen (rond voorwerp, ongeveer 0,5 cm diameter) op de achterkant van de nek van de muizen om de hals te verlengen, het gebied voor verdere operatie bloot. </li><li> Open de incisie met behulp van een weefselhaak of haken. </li><li> Aan de linkerkant van de luchtpijp van het dier voorzichtig tweeze behalve het bindweefsel links halsslagader (CCA) bloot. Wees voorzichtig niet aan de zenuwen en de grote aderen gebundeld met de CCA beschadigen. </li><li> Ga door het blootstellen van de CCA, let daarbij goed op los te maken van het onderliggende weefsel, en bloot de top &quot;Y&quot; vertakking van de interne cerebrale slagader (ICA) en externe cerebrale slagader (ECA). Om te helpen bij het losmaken van de CCA, plaatst de gebogen pincet onder de CCA aan het bindweefsel doorboren en dan langzaam hen in staat stellen om te openen. </li></ol> 4. Voorbereiding van de CCA voor de MCAO Suture Insertion <ol><li> Plaats 3 segmenten van nylon hechtdraad van ongeveer 4 cm lang onder de CCA. Zorg ervoor dat de CCA is niet verdraaid omdat dit drastisch het inbrengen van de hechtdraad zou bemoeilijken. </li><li> Op het laagste punt mogelijk, sluit de onderste hechtdraad met een vaste knoop. </li><li> Bind de top hechtdraad net onder de ICA / Rekenkamer vertakking met behulp van een afneembare slip knot. </li><li> Bind het midden hechtdraad met behulp van een afneembare slip knoop, maar hou het wijd open. Het is belangrijk om voldoende ruimte te laten er geen hechtingen inbrengen belemmeren. </li><li> Met behulp van microdissectie voorjaar scissors, het uitvoeren van een incisie in de CCA tussen de onderste en middelste hechtingen. Voer de 0,2 mm incisie nabij de bodem hechtdraad. </li></ol> 5. midden cerebrale slagader Occlusie <ol><li> Met behulp van een tang, plaatst u de MCAO hechtdraad in de CCA incisie, het begeleiden van het aan de top. Voer deze stap snel na stap 4,5 tot stolling en sluiten van de CCA opening te voorkomen. Indien hechtdraad insertie wordt geblokkeerd, gebruik de uiteinden van een tang om de incisie te heropenen. </li><li> Zachtjes vastbinden het midden hechtdraad op de MCAO hechtdraad siliconen voor een deel met behulp van een slip knoop om de bloedstroom te beperken omheen, maar los genoeg in staat te stellen om vrij te bewegen. </li><li> Zorgvuldig ongedaan maken van de top hechtdraad, om ervoor te zorgen dat de MCAO hechtdraad niet glippen. </li><li> Plaats de MCAO hechtdraad in de ICA van enkele millimeters en opnieuw sluiten boven hechtdraad, op dezelfde wijze als beschreven in stap 5.2. </li><li> Leid de MCAO hechting aan de occlusie omgeving. Vermelding van succesvolle insertieduidelijk door de lage hoeveelheid bloed terugstroming van de CCA incisie en de zilveren 9 mm markering ligt tussen de CCA incisie en ICA / ECA bifurcatie. Verdere bevestiging van succesvolle afsluiting kan worden verkregen met behulp controlemethoden zoals een laser Doppler bloedstroming controlesysteem 15, 16. OPMERKING: Een daling van 90% van de bloedstroom naar het midden hersengebied aan de afgesloten omgeving kant geeft een succesvolle afsluiting. </li><li> Na een succesvolle afsluiting, vastbinden het midden en de top hechtdraad stevig vast. Als het uitvoeren van sham inbrengen, geen hechtingen weer sluiten, maar in plaats daarvan onmiddellijk verder met stap 7.3. </li></ol> 6. incisie sluiten en postoperatieve zorg <ol><li> Tuck in de hechtingen in de incisie gebied. </li><li> Verwijder retractor of weefsel haken en kussen. </li><li> Clean hechtdraad gebied met behulp van een steriele zoutoplossing en een wattenstaafje. </li><li> Sluit de incisie met behulp van nylon hechtdraad / naald en tang. </li> &lt;li&gt; Beheer anti-inflammatoire (bijv Carprofen 10 mg / kg, sc) en analgetische (bijvoorbeeld buprenorfine 0,1 mg / kg sc, tweemaal daags) drugs postoperatieve pijn verlichten. Plaats de muizen in een kooi geplaatst op een verwarmd kussen om onderkoeling te voorkomen en geeft ad labium toegang tot water en voedsel verzacht. </li><li> Bewaak het herstel van de dieren (5-10 min) en op tekenen van een beroerte. Ze kunnen variëren van mild laterale verlamming en cirkelen tot ernstige inkrimping van de contralaterale flank en rollen. Verschillende evaluatie punten zijn opgenomen in de discussie. Dieren met tekenen van ademnood of ernstige aanvallen moeten worden gedood. </li><li> Afhankelijk ischemie reperfusie protocol laat de MCAO hechtdraad in plaats van 30 min tot 120 min of meer. Het verminderen van occlusie tijd voorkomt sterfte. </li><li> Voor permanente occlusie, laat de MCAO hechtdraad in de plaats voor 24 uur, maar significante sterftecijfer is te verwachten. Na deze time lapse, ga dan naar Ste7 p. <ol><li> Bij gebruik van permanente occlusie model, houden muizen in de kooi tot eindpunt. Op dat moment, verwijder hechtdraad (stappen 7,1-7,8). Deze procedure kan ook worden uitgevoerd na euthanasie. </li></ol></li></ol> 7. reperfusie <ol><li> Verdoven van het dier weer (volg de instructies in 2.1) en verwijder de wond sluiten hechtingen. </li><li> Met behulp van een tang en weefsel afscheiders, re-open de incisie en bloot de CCA. </li><li> Verwijder voorzichtig de bovenste hechtdraad en trek op de MCAO hechtdraad tot de siliconen beklede deel is gelegen in het midden knoop. </li><li> Opnieuw boven knoop op de hechtdraad te voorkomen dat bloed stroomt langs de hechtdraad (het hoeft niet een schuifknoop zijn). </li><li> verwijder voorzichtig de middelste knoop en trek de hechtdraad langs de bovenste knoop, maar houd het in de CCA. </li><li> Nauw sluit de top knoop om slagader de bloedstroom te blokkeren. </li><li> Trek volledig de MCAO hechtdraad en sluit strak de middelste knoop. </li><li> De hechting kan MCAOhergebruikt meerdere malen. Na elk gebruik Reinig de hechtdraad voorzichtig in 70% ethanol om verontreinigingen (bijvoorbeeld bloed of weefsel) met een steriel gaas te verwijderen. Daarna plaatst u de hechtdraad in een sterilisator zakje en steriliseren. </li><li> Herhaal stap 6,1-6,4 en controleren dier herstel. </li></ol> 8. Tissue Analyse <ol><li> Om slagvolume bewaken, ontleden uit de hersenen. <ol><li> Euthanaseren de muis met een tweestapswerkwijze. Enerzijds bloot het dier een overdosis isofluraan tot ademhaling stopt. Voor TTC kleuring, onthoofden de muis onmiddellijk en ga naar de hersenen extractie. Voor de hersenen snijden (bijvoorbeeld voor immunokleuring analyses), het uitvoeren van perfusie via een cardiale punctie voorafgaand aan de onthoofding. </li><li> Afgesneden de kop aan de basis van de schedel en snijd de hoofdhuid van de hals naar de top van de schedel tot tussen de ogen. Met de schedel bloot, snijd het bot langs beide zijden vanaf de schedelbasis openingtot de oogkas. Maak deze snede langs het brede deel van de schedel. Wees voorzichtig niet te diep met een schaar om te voorkomen dat schade aan de hersenen te bereiken. </li><li> Daarna sneed het bot tussen de twee oogkassen. </li></ol></li><li> Behulp van een tang, til de bovenkant van de schedel de hersenen bloot. Er moet slechts een kleine weerstand. Als het niet gemakkelijk optillen kan schedel incisies onvolledig zijn. Wrikken uit de hersenen zachtjes met stompe gebogen pincet. De hersenen kunnen nog worden bevestigd door verschillende zenuwen. Doorgaan langzaam, het verwijderen van attachments langs de weg. </li><li> Leg de verse hersenen in een 1 mm brein matrix, voeg een paar druppels PBS, en snijd langs de matrix met behulp van een scheermesje of cryostaat mes. </li><li> Breng de hersenen om een ​​100 mm schaal en voeg kleuroplossing (2% 2,3,5-trifenyltetrazoliumchloride [TTC] opgelost in PBS) aan de bodem van de schaal te dekken. Met behulp van twee tangen, verwijder alle hersenplakjes (voorkant omlaag) en plaats ze in volgorde op de bodem van de schaal. LET OP: kleuring zal levensvatbaar weefsel rood, met niet-levensvatbare weefsel overgebleven witte zetten. Verwarmen van de oplossing tot 37 ° C zal kleuring versnellen. Symptomen van een beroerte gebied (wit) kunnen zo snel worden gezien als 90 min na een beroerte en blijven toegankelijk voor meer dan 7 dagen. Imaging moet worden gedaan samen met een liniaal om de berekening van het slagvolume mogelijk te maken. </li><li> Werkwijze ontleed hersenen te snijden, immuno-kleuring, eiwitisolatie, of een verscheidenheid aan andere procedures 17, 18, 19. </li></ol>

<ol><li>Cuomo, O., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Antithrombin+reduces+ischemic+volume%2C+ameliorates+neurologic+deficits%2C+and+prolongs+animal+survival+in+both+transient+and+permanent+focal+ischemia%5BTitle%5D)+AND+%22Stroke%22%5BJournal%5D)">Antithrombin reduces ischemic volume, ameliorates neurologic deficits, and prolongs animal survival in both transient and permanent focal ischemia.</a> Stroke. 38 (12), 3272-3279 (2007).</li>
<li>Wauquier, A., Melis, W., Janssen, P. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Long-term+neurological+assessment+of+the+post-resuscitative+effects+of+flunarizine%2C+verapamil+and+nimodipine+in+a+new+model+of+global+complete+ischaemia%5BTitle%5D)+AND+%22Neuropharmacology%22%5BJournal%5D)">Long-term neurological assessment of the post-resuscitative effects of flunarizine, verapamil and nimodipine in a new model of global complete ischaemia.</a> Neuropharmacology. 28 (8), 837-846 (1989).</li>
<li>Liu, F., McCullough, L. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Middle+cerebral+artery+occlusion+model+in+rodents%3A+methods+and+potential+pitfalls%5BTitle%5D)+AND+%22J+Biomed+Biotechnol%22%5BJournal%5D)">Middle cerebral artery occlusion model in rodents: methods and potential pitfalls.</a> J Biomed Biotechnol. 2011, 464701(2011).</li>
<li>Chiu, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intravenous+tissue+plasminogen+activator+for+acute+ischemic+stroke%3A+feasibility%2C+safety%2C+and+efficacy+in+the+first+year+of+clinical+practice%5BTitle%5D)+AND+%22Stroke%22%5BJournal%5D)">Intravenous tissue plasminogen activator for acute ischemic stroke: feasibility, safety, and efficacy in the first year of clinical practice.</a> Stroke. 29 (1), 18-22 (1998).</li>
<li>Longa, E. Z., Weinstein, P. R., Carlson, S., Cummins, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Reversible+middle+cerebral+artery+occlusion+without+craniectomy+in+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Stroke%22%5BJournal%5D)">Reversible middle cerebral artery occlusion without craniectomy in rats.</a> Stroke. 20 (1), 84-91 (1989).</li>
<li>Koizumi, J., Yoshida, Y., Nakazawa, T., Ooneda, G. <a target="_blank" href="https://www.jstage.jst.go.jp/article/jstroke1979/8/1/8_1_1/_article">Experimental studies of ischemic brain edema, I: a new experimental model of cerebral embolism in rats in which recirculation can be introduced in the ischemic area.</a> Jpn J Stroke. 8, 1-8 (1986).</li>
<li>Liu, F., Schafer, D. P., McCullough, L. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((TTC%2C+fluoro-Jade+B+and+NeuN+staining+confirm+evolving+phases+of+infarction+induced+by+middle+cerebral+artery+occlusion%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurosci+Methods%22%5BJournal%5D)">TTC, fluoro-Jade B and NeuN staining confirm evolving phases of infarction induced by middle cerebral artery occlusion.</a> J Neurosci Methods. 179 (1), 1-8 (2009).</li>
<li>Liu, F., Yuan, R., Benashski, S. E., McCullough, L. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Changes+in+experimental+stroke+outcome+across+the+life+span%5BTitle%5D)+AND+%22J+Cereb+Blood+Flow+Metab%22%5BJournal%5D)">Changes in experimental stroke outcome across the life span.</a> J Cereb Blood Flow Metab. 29 (4), 792-802 (2009).</li>
<li>Wang, R. Y., Wang, P. S., Yang, Y. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effect+of+age+in+rats+following+middle+cerebral+artery+occlusion%5BTitle%5D)+AND+%22Gerontology%22%5BJournal%5D)">Effect of age in rats following middle cerebral artery occlusion.</a> Gerontology. 49 (1), 27-32 (2003).</li>
<li>Baskerville, T. A., Macrae, I. M., Holmes, W. M., McCabe, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+influence+of+gender+on+%27tissue+at+risk%27+in+acute+stroke%3A+A+diffusion-weighted+magnetic+resonance+imaging+study+in+a+rat+model+of+focal+cerebral+ischaemia%5BTitle%5D)+AND+%22J+Cereb+Blood+Flow+Metab%22%5BJournal%5D)">The influence of gender on 'tissue at risk' in acute stroke: A diffusion-weighted magnetic resonance imaging study in a rat model of focal cerebral ischaemia.</a> J Cereb Blood Flow Metab. 36 (2), 381-386 (2016).</li>
<li>Cai, Q., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Co-transplantation+of+hippocampal+neural+stem+cells+and+astrocytes+and+microvascular+endothelial+cells+improve+the+memory+in+ischemic+stroke+rat%5BTitle%5D)+AND+%22Int+J+Clin+Exp+Med%22%5BJournal%5D)">Co-transplantation of hippocampal neural stem cells and astrocytes and microvascular endothelial cells improve the memory in ischemic stroke rat.</a> Int J Clin Exp Med. 8 (8), 13109-13117 (2015).</li>
<li>Cheng, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intravenously+delivered+neural+stem+cells+migrate+into+ischemic+brain%2C+differentiate+and+improve+functional+recovery+after+transient+ischemic+stroke+in+adult+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Int+J+Clin+Exp+Pathol%22%5BJournal%5D)">Intravenously delivered neural stem cells migrate into ischemic brain, differentiate and improve functional recovery after transient ischemic stroke in adult rats.</a> Int J Clin Exp Pathol. 8 (3), 2928-2936 (2015).</li>
<li>Nagai, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intravenous+Administration+of+Cilostazol+Nanoparticles+Ameliorates+Acute+Ischemic+Stroke+in+a+Cerebral+Ischemia%2FReperfusion-Induced+Injury+Model%5BTitle%5D)+AND+%22Int+J+Mol+Sci%22%5BJournal%5D)">Intravenous Administration of Cilostazol Nanoparticles Ameliorates Acute Ischemic Stroke in a Cerebral Ischemia/Reperfusion-Induced Injury Model.</a> Int J Mol Sci. 16 (12), 29329-29344 (2015).</li>
<li>Liu, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intravenous+PEP-1-GDNF+is+protective+after+focal+cerebral+ischemia+in+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Neurosci+Lett%22%5BJournal%5D)">Intravenous PEP-1-GDNF is protective after focal cerebral ischemia in rats.</a> Neurosci Lett. 617, 150-155 (2016).</li>
<li>Hedna, V. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Validity+of+Laser+Doppler+Flowmetry+in+Predicting+Outcome+in+Murine+Intraluminal+Middle+Cerebral+Artery+Occlusion+Stroke%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vasc+Interv+Neurol%22%5BJournal%5D)">Validity of Laser Doppler Flowmetry in Predicting Outcome in Murine Intraluminal Middle Cerebral Artery Occlusion Stroke.</a> J Vasc Interv Neurol. 8 (3), 74-82 (2015).</li>
<li>Tajima, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Reproducibility+of+measuring+cerebral+blood+flow+by+laser-Doppler+flowmetry+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Biosci+%28Elite+Ed%29%22%5BJournal%5D)">Reproducibility of measuring cerebral blood flow by laser-Doppler flowmetry in mice.</a> Front Biosci (Elite Ed). 6, 62-68 (2014).</li>
<li>Fang, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Scutellarin+regulates+microglia-mediated+TNC1+astrocytic+reaction+and+astrogliosis+in+cerebral+ischemia+in+the+adult+rats%5BTitle%5D)+AND+%22BMC+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Scutellarin regulates microglia-mediated TNC1 astrocytic reaction and astrogliosis in cerebral ischemia in the adult rats.</a> BMC Neurosci. 16, 84(2015).</li>
<li>Evilsizor, M. N., Ray-Jones, H. F., Lifshitz, J., Ziebell, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Primer+for+immunohistochemistry+on+cryosectioned+rat+brain+tissue%3A+example+staining+for+microglia+and+neurons%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Primer for immunohistochemistry on cryosectioned rat brain tissue: example staining for microglia and neurons.</a> J Vis Exp. (99), e52293(2015).</li>
<li>Kramer, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((TTC+staining+of+damaged+brain+areas+after+MCA+occlusion+in+the+rat+does+not+constrict+quantitative+gene+and+protein+analyses%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurosci+Methods%22%5BJournal%5D)">TTC staining of damaged brain areas after MCA occlusion in the rat does not constrict quantitative gene and protein analyses.</a> J Neurosci Methods. 187 (1), 84-89 (2010).</li>
<li>Wu, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Keep+warm+and+get+success%3A+the+role+of+postischemic+temperature+in+the+mouse+middle+cerebral+artery+occlusion+model%5BTitle%5D)+AND+%22Brain+Res+Bull%22%5BJournal%5D)">Keep warm and get success: the role of postischemic temperature in the mouse middle cerebral artery occlusion model.</a> Brain Res Bull. 101, 12-17 (2014).</li>
<li>Liu, S., Zhen, G., Meloni, B. P., Campbell, K., Winn, H. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Rodent+Stroke+Model+Guidelines+for+Preclinical+Stroke+Trials+%281st+Edition%29%5BTitle%5D)+AND+%22J+Exp+Stroke+Transl+Med%22%5BJournal%5D)">Rodent Stroke Model Guidelines for Preclinical Stroke Trials (1st Edition).</a> J Exp Stroke Transl Med. 2 (2), 2-27 (2009).</li>
<li>Tsuchiya, D., Hong, S., Kayama, T., Panter, S. S., Weinstein, P. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effect+of+suture+size+and+carotid+clip+application+upon+blood+flow+and+infarct+volume+after+permanent+and+temporary+middle+cerebral+artery+occlusion+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Brain+Res%22%5BJournal%5D)">Effect of suture size and carotid clip application upon blood flow and infarct volume after permanent and temporary middle cerebral artery occlusion in mice.</a> Brain Res. 970 (1-2), 131-139 (2003).</li>
<li>Wolff, G., Davidson, S. J., Wrobel, J. K., Toborek, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Exercise+maintains+blood-brain+barrier+integrity+during+early+stages+of+brain+metastasis+formation%5BTitle%5D)+AND+%22Biochem+Biophys+Res+Commun%22%5BJournal%5D)">Exercise maintains blood-brain barrier integrity during early stages of brain metastasis formation.</a> Biochem Biophys Res Commun. 463 (4), 811-817 (2015).</li>
<li>Wrobel, J. K., Wolff, G., Xiao, R., Power, R. F., Toborek, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dietary+Selenium+Supplementation+Modulates+Growth+of+Brain+Metastatic+Tumors+and+Changes+the+Expression+of+Adhesion+Molecules+in+Brain+Microvessels%5BTitle%5D)+AND+%22Biol+Trace+Elem+Res%22%5BJournal%5D)">Dietary Selenium Supplementation Modulates Growth of Brain Metastatic Tumors and Changes the Expression of Adhesion Molecules in Brain Microvessels.</a> Biol Trace Elem Res. , (2015).</li>
<li>Chen, L., Swartz, K. R., Toborek, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Vessel+microport+technique+for+applications+in+cerebrovascular+research%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurosci+Res%22%5BJournal%5D)">Vessel microport technique for applications in cerebrovascular research.</a> J Neurosci Res. 87 (7), 1718-1727 (2009).</li>
</ol>

Auteurs hebben geen concurrerende of belangenconflicten.

Het succesvolle gebruik van de beschreven MCAO werkwijze is sterk afhankelijk van inzicht in cerebrale bloedstroom anatomie. Aangezien de correcte plaatsing van de hechtdraad is moeilijk te onderscheiden door het ontbreken van directe visuele aanwijzingen, herhaalde oefening is belangrijk de procedure beheersen alvorens het voor onderzoekende studies. Slagvolume moet worden geanalyseerd om te zorgen voor een consistente resultaten. De toevoeging van een laser Doppler systeem kan helpen om de succesvolle afsluiting van d...

Het onderzoek van cardiovasculaire aandoeningen, zoals beroerte, gebaseerd op het gebruik van in vivo modellen. Om de mogelijke gevolgen van ischemie, geneesmiddeltoxiciteit, en / of behandeling begrijpen, is er behoefte aan een geschikte, gestandaardiseerde, betrouwbaar en reproduceerbaar model van de ziekte, die vergelijkende studies mogelijk maakt tussen behandelingsgroepen gebruiken. In dit manuscript, maken we gebruik van muizen, gezien de beschikbaarheid van een groot aantal van de transgene muizen en gestandaardiseerde assessment modellen. Harken scores om motorische en het gedrag volgende experimentele ischemische beroerte en de daaropvolgende herstel te beoordelen zijn ontwikkeld 1, 2. Verschillende ischemische beroerte modellen zijn beschikbaar, zoals complete globale cerebrale ischemie, globale ischemie onvolledig, multifocale cerebrale ischemie en focale cerebrale ischemie. Deze laatste groep is de categorie van beroerte meest voor bij patiënten. De meerderheid van de vooravondgen worden geïnitieerd door de vorming van een trombotische of embolische occlusie bij of nabij de middelste cerebrale arterie (MCA). Gezien deze parameters, het model nauw gepresenteerde bootst ziekte etiologie van menselijke beroerte en maakt resultaten zeer relevant 3. Toch is de vertaling ontdekkingen van diermodellen tot behandeling van ziekten bij de mens heeft bewezen uitdagend. Tot nu toe is alleen het gebruik van trombolytische weefselplasminogeenactivator goedgekeurd voor de behandeling van acute ischemische beroerte 4. Onder de modellen van focale cerebrale ischemie in de muis, posterieure cerebrale circulatie beroerte model en cerebrale veneuze trombose model zijn zeer invasieve, afnemende hun toepasbaarheid en het beperken van het bereik van de analyses die kunnen worden uitgevoerd. Echter, andere technieken, zoals het embolische model, photothrombosis model, endotheline-1 geïnduceerde slagmodel en intraluminale hechtdraad middelste cerebrale arterie occlusie (MCAO) model, zijn beschikbaar voor gebruik zonder dergelijke beperkingen. De MCAO model is een techniek beschreven in dit protocol. Het biedt een betrouwbare werkwijze voor het induceren focale cerebrale ischemie die gemakkelijk kunnen worden uitgevoerd en reperfusie in een high-throughput manier. Er zijn twee manieren om dit model, namelijk de Zea-Longa en Koizumi methoden. Ze verschillen enigszins weg occlusie hechting wordt in het vaatstelsel ingebracht. In de Zea-Longa techniek wordt de hechting via de externe halsslagader 5 geplaatst. De techniek die hier wordt gewijzigd vanaf het Koizumi werkwijze waarbij de afsluitende hechting via de carotis slagader 6 wordt ingebracht. De MCAO model is met succes toegepast op verschillende gebeurtenissen tijdens ischemische beroerte evalueren. Na reperfusie, hersenoedeem kan worden waargenomen met de afbraak van de bloed-hersenbarrière. Extra neuronale dood meestal waargenomen bij 24 uur; echter rewendt zich tot de uitgangswaarden na 7 dagen 7. Bij mensen, geslacht en leeftijd zijn belangrijke variabelen bij het bepalen stroke antwoord wordt dit ook waargenomen in muizen en ratten 8, 9, 10. Verschillende publicaties hebben de MCAO model dat wordt gebruikt om de behandeling efficiëntie 11, 12, 13, 14 aan te tonen.

<table><tbody><tr><td>MCAO suture 0.23 mm</td><td>Doccol</td><td>702345PK5Re</td><td></td></tr><tr><td>MCAO suture 0.21 mm</td><td>Doccol</td><td>702145PK5Re</td><td></td></tr><tr><td>Silver pen</td><td>staples</td><td>503205</td><td></td></tr><tr><td>Anesthesia machine</td><td>Vetequip</td><td>901806</td><td></td></tr><tr><td>Surgical scissors</td><td>Fine science tool</td><td>14558-09</td><td></td></tr><tr><td>Surgical forceps straight tip</td><td>Fine science tool</td><td>00108-11</td><td></td></tr><tr><td>Surgical forceps angled tip</td><td>Fine science tool</td><td>00109-11</td><td></td></tr><tr><td>Spring scissors</td><td>Fine science tool</td><td>15000-08</td><td></td></tr><tr><td>Nylon suture</td><td>Braintree scintific</td><td>SUT-S 104</td><td></td></tr><tr><td>Closing suture</td><td>VWR</td><td>95057-036</td><td></td></tr><tr><td>Isoflurane</td><td>Piramal</td><td></td><td></td></tr><tr><td>2,3,5-Triphenyltetrazolium chloride</td><td>FisherSci</td><td>50-121-8005</td><td></td></tr><tr><td>Brain block</td><td>Braintree scintific</td><td>BS-A 5000C</td><td></td></tr><tr><td>Cryostat blade</td><td>VWR</td><td>89202-606</td><td></td></tr><tr><td>Optioneel:</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Periflux Laser doppler system</td><td>Perimed</td><td>Periflux 5000</td><td></td></tr><tr><td>Monitoring unit</td><td>Perimed</td><td>PF 5010 - LDPM</td><td></td></tr></tbody></table>

inductie van ischemische beroerte en ischemie-reperfusie in muizen met behulp van het midden-slagader occlusie techniek en visualisatie van infarct area

Induction of Ischemic Stroke and Ischemia-reperfusion in Mice Using the Middle Artery Occlusion Technique and Visualization of Infarct Area

Cerebrovasculaire ziekte is zeer wijdverbreid in de wereldbevolking en omvat verschillende soorten aandoeningen, waaronder beroerte. Om de impact van beroerte op weefselbeschadiging te bestuderen en de effectiviteit van therapeutische interventies te evalueren, werden verschillende experimentele modellen bij verschillende diersoorten ontwikkeld. Ze omvatten complete globale cerebrale ischemie, onvolledige globale ischemie, focale cerebrale ischemie en multifocale cerebrale ischemie. Het model dat in dit protocol wordt beschreven, is gebaseerd op de occlusie van de middelste hersenslagader (MCAO) en valt onder de categorie focale ischemie. Deze techniek produceert consistente focale ischemie in een strikt gedefinieerd gebied van de hersenhelft en is minder invasief dan andere methoden. De beschreven procedure wordt uitgevoerd op muizen, gezien de beschikbaarheid van verschillende genetische varianten en het hoge aantal tests dat is gestandaardiseerd voor muizen om te helpen bij de evaluatie van gedrag en neurodeficit.

De invoeging route voor de occlusie hechtdraad is getoond in figuur 1. De MCAO hechtdraad wordt gerouteerd naar de occlusie gebied bifurcating in de ICA. Succesvolle occlusie van de MCA zal leiden tot weefselbeschadiging, zichtbaar door TTC kleuring. Figuur 2 toont beelden van kleuring van sham behandeld dier (Figuur 2A) en een 60 min MCAO ischemie-reperfusie dier (kleuring op 90 min of 24 uur na occlusie, Figuur 2B). Om...

We beschrijven een muismodel van een beroerte veroorzaakt door de occlusie van de middelste hersenslagader met behulp van een met siliconen omhulde naald. Het protocol kan worden toegepast om een permanente occlusie of een tijdelijke ischemie te induceren, gevolgd door reperfusion.

Inductie van ischemische beroerte en ischemie-reperfusie in Muizen met behulp van het Midden-slagader occlusie Techniek en Visualisatie van Infarct Area

Cerebrovascular disease is highly prevalent in the global population and encompasses several types of conditions, including stroke. To study the impact of ...

Het algemene doel van deze chirurgische ingreep is om officieel en betrouwbaar een ischemische beroerte teweeg te brengen, terwijl de externe cerebrale slagader intact blijft. Deze methode kan helpen om belangrijke vragen in het gebied van beroerteonderzoek te beantwoorden, zoals de impact van behandeling op de ernst van een beroerte. Het grote voordeel van deze techniek is dat na inductie van de beroerte de externe cerebrale slagader beschikbaar blijft om behandeling rechtstreeks in het getroffen halfrond te infunderen.Plaats een muis die is verdoofd met isofluraangeluidelijk op het voorbereide operatieoppervlak en plaats een neuskoker om isofluraangemengd met zuurstof toe te dienen. Zorg ervoor dat de ademhalingssnelheid ongeveer een tot twee ademhalingen per seconde is zonder naar adem te happen. Zorg er ook voor dat het dier geen reactie vertoont op snorharenstimulatie of de pedale reflex.Plaats een druppel ooftlube op elk oog, met behulp van een steriel wattenstaafje om te voorkomen dat ze uitdrogen tijdens de procedure. Na het scheren van het incisiegebied, desinfecteer het operatiegebied grondig met 70%ethanol en een op chloorhexidine gebaseerde oplossing. Houd het dier op een warm chirurgisch oppervlak onder een stereomicroscoop.Gebruik vervolgens chirurgische schaar en pincetten om een ondiepe middenlijnsnede in de nek uit te voeren van boven het borstbeen tot onder de kaak. Gebruik pincetten om vet- en bindweefsels voorzichtig te scheiden om de luchtpijp bloot te leggen. De weefsels moeten gemakkelijk en natuurlijk naar beide kanten scheiden.Plaats vervolgens een kussen of ander rond object van ongeveer 0,5 centimeter in diameter onder de achterkant van de nek om de nek uit te strekken en het gebied verder bloot te leggen voor de operatie. Open de incisie met behulp van een weefselterrector of haken. Trek vervolgens aan de linkerkant van de luchtpijp voorzichtig het bindweefsel uit elkaar om de linkergemeenschappelijke halsslagader bloot te leggen zonder nabijgelegen zenuwen en grote aderen te beschadigen.Breng vervolgens de gebogen pincetten onder de CCA aan om het bindweefsel te doorboren en laat ze vervolgens langzaam openen om de CCA los te laten. Maak de CCA los van het onderliggende weefsel en blootleg de bovenste Y-vertakking van de interne en externe cerebrale slagader. Zodra de CCA is blootgelegd, breng drie segmenten van nylondraad onder de CCA aan.Zorg ervoor dat de CCA niet gedraaid is, omdat dit het inbrengen van de naald drastisch zou bemoeilijken. Sluit vervolgens de onderste naald zo dicht mogelijk bij het laagste punt met een permanente knoop. Bind de bovenste naald net onder de vertakking van de ICA en ECA met een verwijderbare glijbaan.Bind vervolgens de middelste naald met een verwijderbare glijbaan, maar houd deze wijd open. Maak vervolgens met micro dissectiesprongen een opening van 0,2 millimeter in de CCA tussen de onderste en middelste naald, dichter bij de onderste naald. Breng met behulp van pincetten de MCAO-naald in de CCA-incisie aan en leid deze naar de bovenste naald.Trek vervolgens voorzichtig de glijbaan van de middelste naald op de CCA aan zodat deze de bloedstroom rond de MCAO-naald beperkt, maar los genoeg is om de MCAO-naald vrij te laten bewegen. Maak nu voorzichtig de bovenste naald los en zorg ervoor dat de MCAO-naald niet uitglijdt. Breng de MCAO-naald een paar millimeter in de ICA in en sluit de bovenste naald opnieuw met een glijbaan zoals eerder.Leid vervolgens de MCAO-naald naar het occlusiegebied, eerst door deze in de ICA langs de ECA te leiden, en zorg er vervolgens voor dat de naald in de ICA blijft en de pterygopalatine-slagader omzeilt. De inbrenging is succesvol als er weinig bloed terugvloeit uit de CCA-incisie en als de zilveren negen millimeter markering zich tussen de CCA-incisie en de vertakking van de ICA en ECA bevindt. Na succesvolle occlusie, bind de middelste en bovenste naald stevig vast en stop de naalden in het incisiegebied.Na het verwijderen van de retractor of weefselhaken en het kussen, reinig het naadgebied met steriel zoutoplossing op een wattenstaafje. Sluit vervolgens de huid met nylondraad. Plaats de muis in een schone kooi op een verwarmde pad om hypothermie te voorkomen en zorg voor vrije toegang tot water en verzacht voedsel.Bewaak het dier gedurende ten minste vijf tot tien minuten op tekenen van een beroerte. Afhankelijk van het ischemie-reperfusieprotocol, laat de MCAO-naald gedurende 30 tot 120 minuten of langer op zijn plaats. Nadat het dier opnieuw is verdoofd en de wondsluitnaden zijn verwijderd, gebruik pincetten en weefselscheiders om de incisie te heropenen en de CCA bloot te leggen.Verwijder vervolgens voorzichtig de bovenste naald en trek voorzichtig aan de MCAO-naald totdat het met siliconen beklede gedeelte zich op de middelste knoop bevindt. Herhaal de bovenste knoop om te voorkomen dat bloed langs de MCAO-naald stroomt. Maak vervolgens voorzichtig de middelste knoop los en trek de MCAO-naald voorbij de bovenste knoop, waarbij deze in de CCA blijft.Trek de bovenste knoop stevig dicht om de bloedstroom van de slagader te blokkeren. Trek vervolgens de MCAO-naald volledig uit en sluit de middelste knoop stevig. Sluit de wond en voer na de operatie zorg uit zoals eerder.Dit schema toont het occlusiegebied dat resulteert uit de procedure die in deze video wordt gedemonstreerd in blauw. Het operatiegebied bevindt zich onderaan de figuur, aangegeven door de ovale vorm, en de naaldplaatsing wordt aangegeven door zwarte lijnen. De volgende afbeeldingen tonen TTC-kleuring van hersensecties.Deze afbeelding vertegenwoordigt typische kleuring na schijninbreng. De afbeelding is representatief voor de weefselschade veroorzaakt door een 60 minuten MCAO, gevolgd door 90 minuten reperfusie. Meer weefselschade is te zien na 2

induction-ischemic-stroke-ischemia-reperfusion-mice-using-middle

Research

JoVE Journal

Medicine

Geneeskunde

Chirurgische inductie van ischemische hersenschade in de rat is een veel gebruikt model voor een beroerte onderzoek. Hier laten we zien de inductie van focale cerebrale ischemie door occlusie van de midden cerebrale slagader. Visualisatie van de resulterende infarct door histologische kleuring en magnetische resonantie beeldvorming wordt ook getoond.

Focus cerebrale ischemie Model door Endovasculaire Suture Occlusie van de midden cerebrale slagader in de Rat

Filamenteuze occlusie van het Midden-cerebrale slagader is een gemeenschappelijk model voor het bestuderen van ischemische beroerte in muizen.

Modellering Stroke in Muizen - midden cerebrale slagader occlusie met de gloeidraad Model

We zien in de video een methode voor het produceren van een midden cerebrale slagader occlusie bij volwassen muizen met behulp van een intraluminale monofilament. We laten ook zien hoe de omvang van herseninfarct beoordelen door 2,3,5-triphenyltetrazolium chloride (TTC) kleuring.

Muis model van de midden cerebrale slagader Occlusion

De intraluminale midden cerebrale slagader occlusie (MCAO) model is de meest frequente gebruikte model onder experimentele ischemische beroerte modellen. Hier zullen we demonstreren het gehele model in detail met de gids van Laser Doppler flowmetry, en zijn vertegenwoordiger resultaten.

Intraluminale midden cerebrale slagader Occlusie (MCAO) Model voor ischemische beroerte met Laser Doppler Flowmetry Begeleiding in Muizen

De intraluminale cerebralis occlusie bij muizen wordt hierin gepresenteerd. De omvang van herseninfarct wordt beoordeeld door een neurologische score en cresyl violet kleuring, een kleuring met TTC alternatief biedt het grote voordeel te testen in parallel veel belang markers.

Muis Model van Intraluminale mCaO: herseninfarct Evaluatie door cresyl Violet Staining

Om de pathofysiologie van beroerte te begrijpen, is het belangrijk betrouwbare modellen. Dit document zal een van de meest gebruikte takt modellen beschrijven in muizen, genaamd de middelste cerebrale slagader occlusie (MCAo) model (ook aangeduid als de intraluminale filament of hechtdraad model) met reperfusie.

Chirurgische Aanpak voor midden cerebrale slagader occlusie en reperfusie Induced Stroke in Muizen

Intraluminale gloeidraad occlusie van de middelste cerebrale slagader is het meest gebruikte in vivo model van experimentele beroerte in knaagdieren. Een alternatieve chirurgische benadering om gemeenschappelijke halsslagader reparatie gebeurt hier, waardoor de reperfusie van de gemeenschappelijke halsslagader en een volledige reperfusie naar het grondgebied van de middelste cerebrale slagader.

Occlusie van de middelste cerebrale slagader waardoor reperfusie via gemeenschappelijke halsslagader reparatie in muizen

Een muismodel van cerebrale ischemie-reperfusie is gevestigd te onderzoeken de pathofysiologie van een beroerte. We distally de rechts midden cerebrale slagader en rechts gemeenschappelijke halsslagader afbinden en bloedstroom herstellen na 10 of 40 min van ischemie.

Muismodel van twee-schip occlusie van cerebrale ischemie-reperfusie

Hier beschrijven we een eenvoudige en reproduceerbare methode die myocardinfarct of myocardischemie-reperfusieletsel bij muizen kan induceren door precisieligatie van de linker voorste dalende kransslagader door middel van micromanipulatie.

Inductie van myocardinfarct en myocardischemie-reperfusieletsel bij muizen

Dit protocol beschrijft het model van voorbijgaande focale cerebrale ischemie bij muizen door intraluminale occlusie van de middelste hersenslagader. Daarnaast worden voorbeelden van uitkomstbeoordeling getoond met behulp van magnetische resonantiebeeldvorming en gedragstests.

Voorbijgaand occlusiemodel van de middelste cerebrale slagader van een beroerte

Hier presenteren we een protocol om een distaal occlusiemodel van de middelste hersenslagader (dMCAO) op te stellen door middel van transcraniële elektrocoagulatie bij C57BL/6J-muizen en evalueren we het daaropvolgende neurologische gedrag en histopathologische kenmerken.

Inductie van acute ischemische beroerte bij muizen met behulp van de distale occlusietechniek van de middelste slagader

Leer een chirurgische methode om ischemische beroerte bij muizen te induceren via middenslagaderocclusie, waarbij de externe cerebrale arterie intact blijft voor directe behandeling.

Inductie van ischemische beroerte en ischemie-reperfusie in Muizen met behulp van het Midden-slagader occlusie Techniek en Visualisatie van Infarct Area (Video) | JoVE Journal

Inductie van ischemische beroerte en ischemie-reperfusie in Muizen met behulp van het Midden-slagader occlusie Techniek en Visualisatie van Infarct Area

Meer video's verkennen